Мікробіологічна характеристика мікрофлори мигдаликів, Corynebacterium diphtheriae та особливості міжбактеріальних взаємовідносин за аеробних і мікроаерофільних умов

1. Мікробіологічні особливості біоценозів слизових оболонок та тканин мигдаликів у хворих на хронічний тонзиліт характеризуються в переважній більшості збігом складу асоціацій відносно домінуючих представників S.aureus (68±6,6)%, S.pyogenes (60±6,9)%, Enterococcus spp (42,0±7,0)%.

2. Мікробні угрупування лімфоїдних тканин відзначаються в 1,3 рази вищим ступенем мікробного заселення, більшою видовою щільністю асоціацій та в 2,4-2,8 разів частішим вилученням Lactobacillus spp, N.sicca та Fusobacterium spp порівняно зі спільнотами слизових оболонок. У поодиноких випадках лише з тканин мигдаликів вилучаються P.aeruginosa, Peptostreptococcus spp та Bacteroides spp, тільки зі слизових оболонок - Corynebacterium spp та S.mucilaginosus.

3. Біологічні властивості домінуючих представників мікрофлори мигдаликів залежать від біотопу персистенції. Вилучені з екстирпованих лімфоїдних тканин штами стафілококів та стрептококів проявляють в 1,3-1,6 разів вищі адгезивні властивості порівняно з ізолятами зазначених бактерій слизових оболонок мигдаликів. Встановлено, що швидкість продукції лецитинази (фосфоліпази) достовірно вища у «тканинних» ізолятів золотавих стафілококів.

4. Штами S.aureus та S.pyogenes, вилучені з лімфоїдних тканин, також характеризуються меншою чутливістю до антибіотиків груп аміноглікозидів, макролідів, а стафілококи ще й до препаратів пеніцилінового та цефалоспоринового ряду. Натомість, в-гемолітичні стрептококи, вилучені з поверхні мигдаликів більш резистентні до представників хінолонів та пеніцилінів.

5. Відтворення мікроаерофільних умов культивування в експериментах призводить після п'ятого-восьмого пасажів до підвищення в 1,2-1,6 разів адгезивних властивостей музейних і циркулюючих штамів коринебактерій та викликає різнонаправлені зміни здатності референс-штамів S.aureus та E.coli прикріплюватися до клітин крові людини.

6. Вирощування тест-штамів за умов низької концентрації кисню призводить до підвищення абсолютної й відносної швидкостей росту впродовж експоненціальної фази в 1,2-1,6 разів у музейних і циркулюючих коринебактерій та гальмуванню вказаних процесів в 1,2-3,6 разів у культур C.d.gravis tox+ PW-8 v. Massachusetts і S.aureus ATCC 25923.

7. Антикомплементарна активність тест-культур C.diphtheriae при культивуванні за умов мікроаерації знижується в 1,4 рази після першого пасажу, вказане пригнічення змінюється стимуляцією ознаки в 1,3 рази в порівнянні з контролем після другого та третього пасажів і в 1,7-1,9 разів після подальших пересівів.

8. Мікроаерофільні умови культивування впливають на антибіотикочутливість патогенних коринебактерій у бік підвищення резистентності - 42,6% та 46,8% штамів набувають помірної стійкості до пеніциліну та цефалоспоринів відповідно, а мінімальні інгібуючі концентрації гатіфлоксацину, окремих представників макролідів (еритроміцин) та анзаміцинів (рифампіцин) збільшуються в 1,1-2,9 разів.

9. Мікроаерофільне газове середовище впливає на інтенсивність антагоністичних властивостей стафілококів та лактобактерій по відношенню до збудників дифтерії: перші з них збільшують зони затримки росту тест-культур в 1,5-2,3 рази, а другі - в 1,4-2,7 разів.

СПИСОК ОПУБЛІКОВАНИХ ПРАЦЬ ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦІЇ

1. Рижкова Т. А. Мікробіологічні аспекти персистенції коринебактерій дифтерії [Електронний ресурс] / Т. А. Рижкова // Анали Мечниківського Інституту. 2006. № 3. С. 45-55. Режим доступу до журналу:

http://www.imiamn.org/journ/06rtaocd.pdf.

2. Рижкова Т. А. Антикомплементарна активність коринебактерій за аеробних і мікроаерофільних умов їх культивування / Т. А. Рижкова // Буковинський медичний вісник. 2008. Т. 12, № 2. С. 86-90.

3. Рижкова Т. А. Вплив мікроаерофільних умов культивування на чутливість Corynebacterium diphtheriae до антибактеріальних препаратів / Т. А. Рижкова // Вісник проблем біології і медицини. 2008. № 3. С. 101-107.

4. Рижкова Т. А. Адгезивна активність збудників дифтерії за мікроаерофільних умов культивування / Т. А. Рижкова // Вісник Харківського національного університету ім. В. Н. Каразіна. Серія: Медицина. 2008. № 831, вип. 16. С. 21-26.

5. Рижкова Т. А. Особливості мікробіоценозів слизових оболонок та тканин мигдаликів у хворих на хронічний тонзиліт / Т. А. Рижкова, В. О. Хворостяна, Ю. М. Калашник // Медицина сьогодні і завтра. 2007. № 2. С. 42-46. (Здобувач дослідив мікробіоценози мигдаликів, статистично обрахував та проаналізував результати, підготував матеріали до друку).

6. Рижкова Т. А. Антикомплементарна активність циркулюючих у різні роки коринебактерій / Т. А. Рижкова, Є. М. Бабич, С. В. Калініченко // Вісник проблем біології і медицини. 2007. № 4. С. 146-150. (Здобувач визначив антикомплементарну активність штамів коринебактерій).

7. Прояв антагоністичних властивостей мікроорганізмів при аеробних та мікроаерофільних умовах їх культивування / Т. А. Рижкова, Є. М. Бабич, С. В. Калініченко, Н. І. Скляр, Н. Ю. Шкодовська, Л. М. Дубова, С. С. Даниліна, Д. М. Матюніна // Експериментальна та клінічна медицина. 2009. № 1. С. 47-52. (Здобувач охарактеризував вплив мікроаерофільних умов культивування на антагоністичні властивості бактерій, підготував матеріали до друку).

8. Приготування суспензій мікроорганізмів із визначеною концентрацією мікробних клітин / Є. М. Бабич, С. В. Калініченко, Н. І. Скляр, Л. Г. Мироненко, О. Г. Перетятко, Т. А. Рижкова // Лабораторна діагностика. 2007. № 3. С. 58-61. (Здобувач визначив кількісний вміст коринебактерій у різних за оптичною щільністю суспензіях).

9. Пат. 27167 Україна МПК⁶ C12N 13/00. Спосіб відновлення втрачених біологічних властивостей у коринебактерій / С. В. Калініченко, Є. М. Бабич, Ф. В. Ківва, Ю. Л. Волянський, Н. І. Скляр, Т. А. Рижкова, С. Л. Крестецька, Т. І. Іщенко, Ю. В. Шатіло; заявник і патентовласник ДУ «ІМІ ім. І. І. Мечникова АМНУ». № u200704262; заявл. 17.04.2007; опубл. 25.10.2007, Бюл. № 17. (Здобувач визначив біологічні властивості коринебактерій).

10. Пат. 36224 Україна, МПК⁶ C12N 1/20. Поживне середовище для одночасного виявлення гемолітичної та лецитиназної активностей мікроорганізмів / Т. А. Рижкова, Н. І. Скляр, Є. М. Бабич, Ю. Л. Волянський, С. В. Калініченко, В. О. Хворостяна, В. В. Мізін, С. Л. Крестецька; заявник і патентовласник ДУ «ІМІ ім. І. І. Мечникова АМНУ». № u200711212; заявл. 10.10.2007; опубл. 27.10.2008, Бюл. № 20. (Здобувач апробував заявлене середовище, визначив його придатність для використання).

11. Методи визначення токсигенних властивостей коринебактерій: метод. рек. / уклад.: Є. М. Бабич, Т. А. Рижкова, С. В. Калініченко, Н. І. Скляр, н. м. герасюта. К.: Знання України, 2008. 22 с. (Здобувач зібрав та проаналізував літературні джерела, підготував матеріали до друку).

12. Перспективні методи ідентифікації патогенних та умовно-патогенних коринебактерій: метод. рек. / уклад.: Є. М. Бабич, С. В. Калініченко, Т. А. Рижкова, Н. І. Скляр, І. В. Єлісеєва, В. І. Білозерський, Л. А. Ждамарова. К.: Знання України, 2008. 21 с. (Здобувач узагальнив та підготував матеріали для публікації).

13. Рыжкова Т. А. Изменение антикомплементарной активности коринебактерий под влиянием микроаэрофильных условий / Т. А. Рыжкова // Вестник РГМУ. 2008. № 2 (61). С. 329-330.

14. Рижкова Т. А. Антагоністична активність конкурентів Corynebacterium diphtheriae / Т. А. Рижкова // Хист. 2008. вип. 10. С. 227.

15. Рыжкова Т. А. Поверхностная и глубинная микрофлора миндалин у больных хроническим декомпенсированным тонзиллитом / Т. А. Рыжкова, Ю. М. Калашник // Вклад молодих вчених в розвиток медичної науки і практики: всеукраїнська науково-практична конференція (з міжнародною участю), 12 квітня 2006 р.: матеріали конф. Харків, 2006. С. 97. (Здобувач визначив склад мікробних асоціацій у хворих на тонзиліт, підготував матеріали до друку).

16. Рижкова Т. А. Антибіотикочутливість тонзилярної стафілококової та стрептококової мікрофлори у хворих на хронічний тонзиліт / Т. А. Рижкова, Ю. М. Калашник // Сучасні досягнення молодих вчених на допомогу практичній медицині: всеукраїнська науково-практична конференція (з міжнародною участю), 20 жовтня 2006 р.: матеріали конф. Харків, 2006. С. 92. (Здобувач визначив чутливість мікрофлори мигдаликів до антибактеріальних препаратів, оформив доповідь).

17. Рижкова Т. А. Адгезивні властивості мікроорганізмів, що вилучені зі слизових оболонок та з прошарків лімфоїдної тканини мигдаликів / Т. А. Рижкова, В. О. Хворостяна, Ю. М. Калашник // Пошук та розробка нових профілактичних і лікувальних протимікробних засобів, антисептиків, дезінфектантів та пробіотиків: науково-практична конференція з міжнародною участю, 20-21 листопада 2006 р.: тези доповідей. Харків, 2006. С. 158-159. (Здобувач дослідив адгезивний потенціал мікроорганізмів, підготував матеріали до публікації).

18. Рижкова Т. А. Продукція екзотоксину патогенними коринебактеріями в мікроаерофільних умовах / Т. А. Рижкова // Медицина третього тисячоліття: міжвузівська конференція молодих вчених, 16-18 січня 2007 р.: тези доповідей. Харків, 2007. С. 112-113.

19. Рижкова Т. А. Вплив мікроаерофільних умов на адгезивні властивості токсиноутворюючих коринебактерій / Т. А. Рижкова, Є. М. Бабич // Епідеміологія, сучасні методи діагностики та профілактики гострих інфекцій дихальних шляхів: науково-практична конференція, 7-8 лютого 2007 р.: матеріали конф. К., 2007. С. 134-135. (Здобувач визначив адгезивні властивості коринебактерій, підготував матеріали до друку).

20. Рижкова Т. А. Порівняльна характеристика мікробіоценозів слизових оболонок та тканин мигдаликів при хронічному тонзиліті / Т. А. Рижкова, В. О. Хворостяна, Ю. М. Калашник // Експериментальна та клінічна ендокринологія від теорії до практики (Шості Данилевські читання): науково-практична конференція з міжнародною участю, 22-23 лютого 2007 р.: матеріали конф. Харків, 2007. С. 133-134. (Здобувач визначив склад та антибіотикочутливість мікрофлори мигдаликів, виступив з доповіддю).

21. Ступінь прояву факторів патогенності тонзилярних стафілококів / Т. А. Рижкова, В. О. Хворостяна, М. Б. Баганча, О. М. Куцина // Вклад молодих вчених в розвиток медичної науки і практики: науково-практична конференція, 13 листопада 2007 р.: матеріали конф. Харків, 2007. С. 84-85. (Здобувач охарактеризував фактори патогенності стафілококів, підготував матеріали до друку).

22. Здатність токсигенних коринебактерій до інактивації комплементу / Т. А. Рижкова, Т. В. Хірна, Т. М. Сербиненко, О. М. Пульнева, Л. П. Турецька // Эпидемиология, екология и гигиена: 10-я итоговая региональная научно-практическая конференция, 2007 г.: сборник материалов конф. Харьков, 2007. Ч. 1. С. 132. (Здобувач визначив антикомплементарну активність циркулюючих коринебактерій, підготував матеріали до публікації).

23. Рижкова Т. А. Порівняльне вивчення антагоністичних міжмікробних взаємовідносин в аеробних та мікроаерофільних умовах культивування / Т. А. Рижкова // Медицина третього тисячоліття: міжвузівська конференція молодих вчених, 16-18 січня 2008 р.: тези доповідей. Х., 2008. С. 110.

24. Рыжкова Т. А. Микроаэрофильные условия как фактор, влияющий на антибиотикочувствительность коринебактерий / Т. А. Рыжкова // Биология - наука XXI века: 12-я международная Пущинская школа-конференция молодых ученых, 10-14 ноября 2008 г.: сборник тезисов. Пущино, 2008. С. 274.

25. Особливості впливу мікроаерофільних умов культивування на кінетику росту мікроорганізмів / Т. А. Рижкова, Т. В. Хірна, А. Г. Кадерова, О. М. Пульнева, О. П. Шкредова // Актуальні проблеми сучасної медицини: Вісник Української медичної стоматологічної академії. 2008. Т. 8, вип. 4 (24), Ч. 2. С. 174-175. (Здобувач визначив кінетику росту бактерій у різних за концентрацією кисню умовах культивування, провів статистичну обробку результатів, підготував матеріали до друку).

АНОТАЦІЯ

Рижкова Т.А. Мікробіологічна характеристика мікрофлори мигдаликів, Corynebacterium diphtheriae та особливості міжбактеріальних взаємовідносин за аеробних і мікроаерофільних умов. - Рукопис.

Дисертація на здобуття вченого ступеня кандидата медичних наук за спеціальністю 03.00.07 - мікробіологія. - ДУ «Інститут мікробіології та імунології ім. І. І. Мечникова АМН України», Харків, 2009.

Дисертація присвячена питанням встановлення мікробіологічних особливостей біоценозів слизових оболонок і глибоких прошарків тканин мигдаликів та експериментальному вивченню впливу мікроаерофільних умов культивування на кінетику росту, адгезивні властивості, антикомплементарну активність, чутливість до антибіотиків та міжмікробні взаємовідносини штамів Corynebacterium diphtheriae й окремих представників умовно-патогенних бактерій, що заселяють різні прошарки тканин мигдаликів.

Ключові слова: коринебактерії, мікрофлора мигдаликів, аеробні та мікроаерофільні умови культивування, кінетика росту, адгезивні властивості, антикомплементарна активність, антибіотикочутливість, антагоністичні міжмікробні взаємовідносини.

АННОТАЦИЯ

Рыжкова Т.А. Микробиологическая характеристика микрофлоры миндалин, Corynebacterium diphtheriae и особенности межбактериальных взаимоотношений в аэробных и микроаэрофильных условиях. - Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по специальности 03.00.07 - микробиология. - ГУ «Институт микробиологии и иммунологии им. И. И. Мечникова АМН Украины», Харьков, 2009.

Диссертация посвящена вопросам установления особенностей микробиоценозов разных слоев миндалин у больных хроническим тонзиллитом и исследованию влияния микроаэрофильных условий культивирования на биологические свойства микроорганизмов, прежде всего коринебактерий.

Представлены результаты микробиологических исследований слизистых оболочек и тканей экстирпированных миндалин 50 больных хроническим тонзиллитом. Выявлены различия видового состава, концентрации различных представителей микрофлоры, их антибиотикочувствительности и биологических свойств в зависимости от биотопа персистенции. Доминирующие представители микробиоценозов миндалин одинаково часто выделяются со слизистых оболочек и из лимфоидных тканей (S.aureus (68±6,6)%, S.pyogenes (60±6,9)%), а высеваемость лактобактерий из биоптатов в 2,8 раз превышает показатели слизистых оболочек. Установлено, что «тканевые» микробные сообщества характеризуются бомльшим количеством и концентрацией ассоциантов, при этом степень проявления факторов патогенности, а также резистентность к некоторым антибактериальным препаратам у указанных представителей выше чем у «поверхностных» изолятов.

Изучены биологические свойства микроорганизмов (адгезивная активность, кинетика роста, антикомплементарная активность, чувствительность к антибактериальным препаратам) и межмикробные взаимодействия в аэробных и микроаэрофильных условиях их культивирования. Экспериментальное воссоздание условий микроаэрации приводит к стимуляции адгезивных свойств коринебактерий в 1,2-1,6 раз после пятого-шестого пассажей и вызывает как повышение так и снижение способности эталонных штаммов S.aureus ATCC 25923 и E.coli ATCC №25922 прикрепляться к клеткам крови человека. Выращивание тест-культур в малонасыщенной кислородом среде способствовало стимуляции абсолютной и осносительной скоростей роста на протяжении экспоненциальной фазы в 1,2-1,6 раз по сравнению с контролем у музейних и циркулирующих коринебактерий, а также угнетению указанных процессов в 1,2-3,6 раз у культур C.d.gravis tox+ PW-8 v. Massachusetts и S.aureus ATCC 25923. Способность коринебактерий к инактивации комплемента после второго-десятого пассажей в условиях микроаэрации в 1,3-1,9 раз превышает контрольные показатели.

Под влиянием микроаэрофильных условий культивирования более 40% культур коринебактерий становятся умеренно резистентными к пенициллину и цефалоспорину, а минимальные ингибирующие концентрации гатифлоксацина, эритромицина и рифампицина повышаются в 1,1-2,9 раз.

Микроаэрофильная газовая среда выращивания способствует повышению конкурентных свойств стафилококков и лактобактерий по отношению к коринебактериям.

Ключевые слова: коринебактерии, микрофлора миндалин, аэробные и микроаэрофильные условия культивирования, кинетика роста, адгезивные свойства, антикомплементарная активность, антибиотикочувствительность, антагонистические межмикробные взаимоотношения.

SUMMARY

Ryzhkova T.A. Microbiological characteristic of tonsillar microflora, Corynebacterium diphtheriae and peculiarities of microbial interactions under aerobic and microaerophilic conditions - Manuscript.

Thesis for scientific degree of candidate of medical sciences by speciality 03.00.07 - microbiology. - SE “Mechnikov Institute of Microbiology and Immunology of the AMS of Ukraine”, Kharkiv, 2009.

The thesis is devoted to ascertainment of microbiological peculiarities of biocenosis of tonsils mucous tunics and its deeper tissue layers and also to experimental study of influence of microaerophilic cultivation conditions on growth kinetics, adhesive properties, anticomplementary activity, antibiotic sensitivity and microbial interactions of Corynebacterium diphtheriae strains and some representative opportunistic bacteria which populate different tonsils tissue layers.

Key words: Corynebacteria, tonsillar microflora, aerobic and microaerophilic conditions of cultivation, growth kinetics, adhesive properties, anticomplementary activity, antibiotic sensitivity, antagonistic microbial interactions.

Размещено на Allbest.ru