Полимерзная цепная реакция
Открытие Гобиндом Кораном метода полимеразной цепной реакции. Молекулярные основы метода ПЦР. Размножение небольшого участка ДНК или РНК для диагностики заболеваний, передающихся половым путем. Преимущества, недостатки, разновидности и применение ПЦР.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | реферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 17.05.2015 |
| Размер файла | 30,7 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Министерство образования Республики Беларусь
Учреждение образования витебский государственный университет имени П.М. Машерова
Реферат
по предмету: Организация генома и генная инженерия
на тему: Полимерзная цепная реакция
Выполнила:
Жерносек Яна Геннадьевна
Витебск 2014
Содержание
1. История развития
2. Молекулярные основы метода ПЦР
3. Необходимые условия для проведения реакции
4. Методы, основанные на полимеразной цепной реакции
5. Оборудование
6. Преимущества метода ПЦР
7. Недостатки метода ПЦР
8. Разновидности ПЦР
9. Применение
Заключение
Литература
1. История развития
Принцип ПЦР сформулировал Гобинд Корана в 1971. В 1983 американскому биохимику Кэри Мюллису удалось провести ПЦР. В момент изобретения метода он работал в компании Cetus Corporation (Калифорния), в качестве биохимика, специалиста в области ДНК.
Первая публикация по методу ПЦР появилась в ноябре 1985 года в журнале Science. Через четыре года, в 1989 журнал Science объявил термостабильную ДНК-полимеразу Taq молекулой года, поскольку она позволила добиться автоматизации ПЦР. В 1993 за изобретение метода ПЦР К. Муллис получил Нобелевскую премию. Компании Cetus Corporation запатентовала метод ПЦР.
Суть ПЦР состоит в циклическом удвоении (амплификации) определённого участка ДНК с помощью специфических праймеров (затравок) особых ферментов-полимераз. После первого цикла из одного фрагмента ДНК образуется два, после второго - четыре и далее увеличение количества ДНК идёт в геометрической прогрессии. Процесс накопления фрагментов называется амплификацией. В конечном итоге, даже если в образце присутствовала всего одна молекула НК, образуется достаточное количество ДНК, чтобы её можно было легко выявить обычными физико-химическими методами - хроматографией или электрофорезом.
2. Молекулярные основы метода ПЦР
В основе метода полимеразной цепной реакции лежит процесс естественной репликации ДНК, который включает три этапа:
1 этап. Денатурация (расплетение двойной спирали и расхождения нитей). полимеразный цепная реакция молекулярный
2 этап. Образование затравок. Отжиг. (Образование коротких двухцепочечных участков ДНК, которые служат затравками для синтеза новых цепей)
3 этап. Синтез новых цепей. Эллонгация (удлинение обеих цепей затравок в результате комплементарного достраивания в направлении от 5' к 3' концу молекулы ДНК)
Материалом для достраивания служат дезоксинуклеотид-трифосфаты. Этот процесс катализируется ферментом ДНК - полимеразой. ДНК - полимераза катализирует последовательное присоединение дезоксирибонуклеотидных остатков к цепи затравки со свободной 3'ОН группы. В этом процессе сначала образуется водородные связи между комплементарными азотистыми основаниями, а затем фосфодиэфирная связь между остатками рибозы. В результате этой реакции образуется новая цепь ДНК, комплементарная исходной матричной цепи.
ПЦР проводят в амплификаторе -- приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1 °C.
Современные амплификаторы позволяют задавать сложные программы, в том числе с возможностью «горячего старта», Touchdown ПЦР и последующего хранения амплифицированных молекул при 4 °C.
3. Для проведения полимеразной цепной реакции необходимо соблюдение ряда условий:
Наличие в реакционной смеси ряда компонентов:
Праймеры - пара искусственно синтезированных олигонуклеотидов, имеющих, как правило, размер от 15 до 30 п.н., идентичные соответствующим участкам ДНК-мишени.
Они играют ключевую роль в образовании продуктов реакции амплификации.
Правильно подобранные праймеры обеспечивают специфичность и чувствительность тест-системы.
Taq-полимераза - термостабильный фермент, обеспечивающий достраивание 3'-конца второй цепи ДНК согласно принципу комплементарности.
Смесь дезоксинуклеотидтрифосфатов (дНТФ) - дезоксиаденозинтрифосфат (дАТФ), дезоксигуанозинтрифосфат (дГТФ), дезоксицитозинтрифосфат (дЦТФ) и дезокситимидинтрифосфат (дТТФ) - «строительный материал», используемый Taq-полимеразой для синтеза второй цепи ДНК;
Буфер - смесь катионов и анионов в определенной концентрации, обеспечивающих оптимальные условия для реакции, а также стабильное значение рН;
Анализируемый образец - подготовленный к внесению в реакционную смесь препарат, который может содержать искомую ДНК, служащую мишенью для последующего многократного копирования (например, ДНК микроорганизмов).
При отсутствии ДНК-мишени специфический продукт амплификации не образуется.
Циклический температурный режим.
Если в анализируемом образце присутствует искомая ДНК, то в процессе реакции амплификации с ней происходит ряд событий, обеспечиваемых определенными температурными циклами.
На первом этапе реакционную смесь нагревают до 92-95° С.
На втором этапе температуру смеси понижают до 55°
На третьем этапе температуру в реакционной смеси доводят до оптимума работы Taq-полимеразы - 75°С.
4. Методы, основанные на полимеразной цепной реакции
Качественный анализ.
Классический способ постановки ПЦР, принципы которого были изложены выше, нашел свое развитие в некоторых модификациях, направленных на преодоление ограничений ПЦР и повышение эффективности прохождения реакции.
Способ постановки ПЦР с использованием “горячего старта"
Чтобы уменьшить риск образования неспецифических продуктов реакции амплификации, используют подход, получивший название “горячий старт" (“Hot-start”). Суть его состоит в предотвращении возможности начала реакции до момента достижения в пробирке условий, обеспечивающих специфический отжиг праймеров.
Дело в том, что в зависимости от ГЦ-состава и размера, праймеры имеют определенную температуру плавления (Tm). Если температура системы превышает Тm, праймер не в состоянии удерживаться на цепи ДНК и денатурирует.
При соблюдении оптимальных условий, т.е. температуры отжига, близкой к температуре плавления, праймер образует двухцепочечную молекулу только при условии его полной комплементарности и, таким образом, обеспечивает специфичность реакции.
Существуют различные варианты реализации "горячего старта":
Внесение в реакционную смесь Taq-полимеразы во время первого цикла после прогрева пробирки до температуры денатурации.
Разделение ингредиентов реакционной смеси парафиновой прослойкой на слои (в нижней части - праймеры, в верхней - Taq-полимераза и ДНК-мишени), которые смешиваются при расплавлении парафина (~65-750С).
Использование моноклональных антител к Taq-полимеразе. Фермент, связанный моноклональными антителами, становится активным лишь после стадии первой денатурации, когда моноклональные антитела необратимо денатурируют и освобождают активные центры Taq-полимеразы.
Во всех перечисленных случаях, даже если неспецифический отжиг произошел до начала температурного циклирования, элонгации не происходит, а при нагревании комплексы праймер-ДНК денатурируют, поэтому неспецифические продукты не образуются.
В дальнейшем температура в пробирке не опускается ниже температуры плавления, что обеспечивает образование специфического продукта амплификации.
5. Виды необходимого оборудования
На сегодняшний день существует три «разновидности» ПЦР-лабораторий, в основу функционирования которых положено три методики.
1. Классическая реакция (применяется электрофоретическая детекция). Главное звено всей цепочки необходимого оборудования -- амплификатор.
2. FLASH ПЦР (флуоресцентная детекция по «конечной точке»). Проводится с помощью флуоресцентного ПЦР-детектора.
3. Новая технология -- Real-time PCR, или ПЦР в режиме реального времени. С каждым днем она все больше заменяет традиционный метод благодаря целому ряду преимуществ. Предназначенные для нее приборы производят автоматическую регистрацию и интерпретацию готовых результатов. В процедуру ПЦР в режиме реального времени не входит стадия электрофореза, что позволяет снизить расходы на оснащение лаборатории.
Помимо амплификаторов (термоциклеров) существует и другое обязательное оборудование:
· для визуализации результатов -- системы гель-электрофореза (только для «классических» лабораторий),
· для анализа результатов -- системы гель-документации (только для «классических» лабораторий),
· для пробоподготовки -- ПЦР-боксы,
· для перемешивания реагентов -- вортексы и микроцентрифуги,
· для забора материала и реакционной смеси -- автоматические дозаторы.
Помимо основного и вспомогательного оборудования для полноценного функционирования ПЦР-лаборатории, необходимы некоторые расходные материалы: стерильные наконечники, пробирки, штативы для пробирок и дозаторов.
Реагентная база в обычной ПЦР-лаборатории для проведения полноценной полимеразной цепной реакции включает в себя фермент ДНК-полимеразу с буфером, праймеры (небольшие синтетические фрагменты ДНК, комплементарные началу и концу анализируемого участка ДНК-матрицы), смесь нуклеотидов (А, Т, Г, Ц). Также абсолютно необходима очищенная вода.
6. Преимущества метода ПЦР
Высокая чувствительность исследования.
Чувствительность метода такова, что амплифицировать в ПЦР и выявить целевую последовательность можно даже в том случае, если она встречается однажды в образце из 105 клеток.
Специфичность анализа.
ПЦР позволяет выявлять ДНК конкретного инфекционного агента в присутствии ДНК других микроорганизмов и ДНК организма-хозяина, а также проводить генотипирование. Специфически подбирая компоненты реакции (праймеры), Вы можете одновременно выявлять ДНК близкородственных микроорганизмов.
Универсальность метода ПЦР
Дело в том, что для ПЦР-диагностики инфекционных заболеваний, либо наследственных заболеваний человека можно использовать одно и то же оборудование, следовать универсальным процедурам подготовки образцов (проб) и постановки анализа, а также однотипные наборы реактивов.
Экономия времени.
Важное преимущество ПЦР - отсутствие стадий культуральной микробиологической работы. Подготовка образцов, проведение реакции и анализ результатов максимально облегчен и во многом автоматизирован. Благодаря этому, время получения результата может сокращаться до 4-5 часов.
Эффективность метода ПЦР.
ПЦР помогает избежать известных сложностей, возникающих при выращивании труднокультивируемых, некультивируемых или персистирующих форм микроорганизмов для диагностики латентных и хронических инфекций. Эффективен метод ПЦР и при скрининге возбудителей с высокой антигенной изменчивостью, а также внутриклеточных паразитов.
Широта исследуемого клинического материала.
В качестве образца при полимеразной цепной реакции может быть использован не только биологический материал от больного, но также и многие другие субстраты, в которых могут быть идентифицированы молекулы ДНК с высокой чувствительностью, например, вода, почва, продукты питания, микроорганизмы, смывы и многое другое.
Все перечисленные выше достоинства этого уникального метода - высокая чувствительность и специфичность, идентификация инфекционного агента и проведение генотипирования любого гена человека, высокая эффективность и экономия времени, универсальность приборной базы - позволяют широко применять сегодня метод ПЦР в клинической диагностике, медицинской практике, научных исследованиях, контроле качества и многих других областях.
Следует отметить, что методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т.д.).
7. Недостатки метода ПЦР
1.Амплифицируется ДНК как живого, так и погибшего микроорганизма.
Это налагает определенные требования при использовании ПЦР для контроля эффективности лечения. В общем случае подобный контроль должен проводиться спустя промежуток времени, в течение которого происходит полная элиминация возбудителя. Обычно этот интервал составляет 4-8 недель.
2. Возможность перекрестной реакции.
Подбор праймеров происходит на основе существующих знаний о геноме данного и сходных микроорганизмов. Теоретически существует возможность присутствия такого же фрагмента и у других микроорганизмов, геном которых в настоящее время не расшифрован, и которые не были протестированы на возможность перекрестной реакции. Присутствие в пробе таких микроорганизмов может привести к ложноположительному результату анализа.
3. Изменчивость микроорганизмов.
Хотя при конструировании тест-системы фрагмент генома, используемый для амплификации, выбирается из высоко консервативной области, изменчивость микроорганизмов может приводить к тому, что некоторые генотипы или штаммы исследуемого возбудителя могут приобретать мутации в амплифицируемом участке генома, и, таким образом, становиться неуловимыми данной тест-системой.
Последние два пункта важны для разработчиков ПЦР-диагностикумов. В настоящее время разработаны стандарты, регламентирующие объем испытаний (включая проверку на перекрестные реакции, а также тестирование известных штаммов определяемого Размещено на http://www.allbest.ru/
возбудителя), которые должна выдержать тест-система, прежде чем она попадет на рынок.
8. Разновидности ПЦР
· «Вложенная» ПЦР) -- применяется для уменьшения числа побочных продуктов реакции. Используют две пары праймеров и проводят две последовательные реакции. Вторая пара праймеров амплифицирует участок ДНК внутри продукта первой реакции.
· «Инвертированная» ПЦР) -- используется в том случае, если известен лишь небольшой участок внутри нужной последовательности. Этот метод особенно полезен, когда нужно определить соседние последовательности после вставки ДНК в геном. Для осуществления инвертированной ПЦР проводят ряд разрезаний ДНК рестриктазами с последующим соединением фрагментов. В результате известные фрагменты оказываются на обоих концах неизвестного участка, после чего можно проводить ПЦР как обычно.
· ПЦР с обратной транскрипцией) -- используется для амплификации, выделения или идентификации известной последовательности из библиотеки РНК. Перед обычной ПЦР проводят на матрице мРНК синтез одноцепочечной молекулы ДНК с помощью ревертазы и получают одноцепочечную кДНК, которая используется в качестве матрицы для ПЦР. Этим методом часто определяют, где и когда экспрессируются данные гены.
· Асимметричная ПЦР -- проводится тогда, когда нужно амплифицировать преимущественно одну из цепей исходной ДНК. Используется в некоторых методиках секвенирования и гибридизационного анализа. ПЦР проводится как обычно, за исключением того, что один из праймеров берется в большом избытке.
· Количественная ПЦР) -- используется для быстрого измерения количества определенной ДНК, кДНК или РНК в пробе.
· Количественная ПЦР в реальном времени -- в этом методе используют флуоресцентно меченые реагенты для точного измерения количества продукта реакции по мере его накопления.
· Touchdown ПЦР) -- с помощью этого метода уменьшают влияние неспецифического связывания праймеров на образование продукта. Первые циклы проводят при температуре выше температуры отжига, затем каждые несколько циклов температуру снижают. При определённой температуре система пройдёт через полосу оптимальной специфичности праймеров к ДНК.
· Метод молекулярных колоний -- акриламидный гель полимеризуют со всеми компонентами ПЦР на поверхности и проводят ПЦР. В точках, содержащих анализируемую ДНК, происходит амплификация с образованием молекулярных колоний.
· ПЦР с быстрой амплификацией концов кДНК
· ПЦР длинных фрагментов -- модификация ПЦР для амплификации протяженных участков ДНК. Используют две полимеразы, одна из которых -- Taq-полимераза с высокой процессивностью, а вторая -- ДНК полимераза с 3'-5' экзонуклеазной активностью. Вторая полимераза необходима для того, чтобы корректировать ошибки, внесённые первой.
· RAPD PCR. Этот праймер будет частично комплементарен случайным участкам ДНК исследуемых организмов. Подбирая условия, удаётся добиться удовлетворительного отличия картины ПЦР для двух организмов.
· PCR с использованием горячего старта и нижней смесей с целью недопущения раннего смешивания компонентов реакции. До начала реакции амплификатор необходимо прогреть до температуры плавления парафина.
9. Применение ПЦР
Области применения полимеразной цепной реакции как современного метода молекулярной биологии разнообразны. Во многом это обусловлено широтой материала, который можно анализировать (практически все, из чего можно выделить более-менее качественую ДНК может стать объектом исследования), а также подобранных праймеров. Основные области применения ПЦР:
клиническая медицина
· диагностика инфекционных заболеваний
· диагностика наследственных заболеваний
· выявление мутаций
· генотипирование
· клеточные технологии
· создание генетических паспортов
экология
· мониторинг состояния окружающей среды
· анализ продуктов питания
· анализ генетически-модифицированных организмов (ГМО)
судебная медицина и криминалистика
ПЦР используют для сравнения так называемых «генетических отпечатков пальцев». Необходим образец генетического материала с места преступления -- кровь, слюна, сперма, волосы и т. п. Его сравнивают с генетическим материалом подозреваемого. Достаточно совсем малого количества ДНК, теоретически -- одной копии. ДНК расщепляют на фрагменты, затем амплифицируют с помощью ПЦР. Фрагменты разделяют с помощью электрофореза ДНК. Полученную картину расположения полос ДНК и называют генетическим отпечатком пальцев (англ. genetic fingerprint)
· идентификация личности
· установление отцовства (хотя «генетические отпечатки пальцев» уникальны за исключением случая однояйцевых близнецов, родственные связи все же можно установить, сделав несколько таких отпечатков. Тот же метод можно применить, слегка модифицировав его, для установления эволюционного родства среди организмов.)
фармакология
ветеринария
научные исследования (молекулярная биология, генетика)
Заключение
ПЦР - полимеразная цепная реакция. Она позволяет быстро размножить небольшой участок ДНК или РНК. Для чего это нужно? Если в крови или другом исследуемом материале присутствуют бактерии или вирусы в ничтожном количестве, определить их традиционными способами очень трудно. С помощью ПЦР происходит многократное клонирование участка ДНК именно того организма, который нужно найти. Размноженная таким образом ДНК становится «видимой» для исследователя.
В отличие от других методов исследования, ПЦР реакция специфична на 100%. Вирусы и бактерии, а также клетки организма определяются не косвенными методами, а по ДНК, присущей только этому организму. Открытие ПЦР сделало возможным выявление самых трудноопределимых вирусов и бактерий, даже когда их количество минимально.
Наиболее востребован анализ ПЦР для диагностики заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП). Такие заболевания, как хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз, гарднереллез, не имеют никаких клинических симптомов в начальных стадиях. А позднее их очень сложно лечить. Раннее выявление ЗППП способствует более эффективному лечению и профилактике распространения инфекции.
Метод ПЦР незаменим в диагностике вирусных инфекций: вируса папилломы человека (ВПЧ), гепатитов, ВИЧ. Обнаружить вирусы другими способами можно только косвенно, определяя наличие антител или продуктов жизнедеятельности вирусов (РПГА, ИФА).
Методом ПЦР можно определить возбудителей не только в крови, но и в любой другой среде: моче, слизи, слюне, слизистой оболочке и даже в воде или почве. ПЦР широко применяется не только в медицине, но и в криминалистике для идентификации биологического материала.
Полимеразная цепная реакция в настоящее время является наиболее совершенным диагностическим методом, позволяющим выявлять единичные клетки возбудители многих инфекционных заболеваний за счет многократного увеличения количества копий тестируемых специфических последовательностей ДНК.
Тест-системы, основаны на принципе амплификации ДНК, позволяет обнаруживать патогенные для человека бактерии и вирусы даже в тех случаях, когда другими способами (иммунологическим, бактериологическим, микроскопическим) их выявление невозможно. Достигается это за счет высокой чувствительности ПЦР- системы, которая составляет около 10 бактериальных клеток, в то время как чувствительность и монологических и микроскопических тестов колеблется в пределах 103-106 клеток.
При ПЦР - диагностике размножению подвергается не бактерия, а только ее ДНК, причем не вся молекула ДНК, а только определенный фрагмент, являющийся маркером данного возбудителя.
ПЦР- диагностикумы, в отличие от иммунологических тест-систем, позволяют избежать проблем, связанных с перекрестно-реагирующими антигенами, тем самым обеспечивая абсолютную специфичность.
Определение можно проводить непосредственно в клиническом материале (кровь, сыворотка, лаважные массы, мокрота, слюна, желудочный сок, биопсийный материал, мазки, смывы) ив материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва).
Объем продаж ПЦР- диагностикумов по данным зарубежных источников в 1994 году составил 2 миллиарда долларов США.
Литература
1. Биохимия: Учебное руководство/ А.А. Чиркин, Е.О. Данченко. - М.: Мед. лит., 2010. - 624 с.: ил.
2. Медецинская и санитарная микробиология: учеб пособие для студ. высш. мед. учеб. заведений/А.А.Воробьёв, Ю.С.Кривошеин, В,П. Широбоков. М; издательский центр «Академия» 20.08 - 464с., 16 л. ув. вел.
3. Микробиология, вирусология и иммунология: учеб. Для студентов мед. Вузов/под ред. В.Н. Царёва. - М.: Практическая медицина, 2010. -581 с.: ил.
4. Медицинская микробиология: уч. псобие/под ред. В.И. Покровского.-4 изд. испр. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 768 с.: ил
5. Бакулина Н.А, Краева Э.Л. Микробиология. - 2е изд. перераб. и доп. М.: Медицина, 1980-446 с, ил.
6. Микробиология с основами эпидемиологии и методами С23 микробиологических исследований; учебник для средних медицинских учебных заведений/ В.Б.Сбойчаков. -СПб.: СпецЛит, 2007.-592 с.: ил
7. Камышева К.С. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии/К.С. Камышева. - Ростов н/Д: Феникс, 2009. - 281, 1 с. -(Медицина)
8. А.А. Воробьёв, Быков А.С., Пашков С.П, Рыбакова А.М. Микробиология: Учебник - М: Медицина, 1994-288с. Ил. - (Уч. лит. для студ. фарм. ин-ов.
Размещено на Allbest.ru
Подобные документы
Сущность и принципы метода полимеразной цепной реакции, его достоинства и недостатки. Метод молекулярных колоний. Онкомаркеры в клинической диагностике. Муциноподобный ассоциированный антиген в сыворотке. Алгоритм и методика исследования на онкомаркеры.
курсовая работа [59,6 K], добавлен 19.11.2014Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) как метод диагностики инфекционных заболеваний. Подготовка пробы биологического материала. Принципы подбора праймеров. Амплификация, горизонтальный и вертикальный электрофорез. Организация технологического процесса.
реферат [23,1 K], добавлен 22.09.2009История открытия метода полимеразной цепной реакции (ПЦР), его особенности и этапы. Методика проведения анализа в режиме реального времени. Преимущества применения метода ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний, его ограничения и сферы использования.
реферат [685,7 K], добавлен 03.05.2013Причины, затрудняющие диагностику и лечение урогенитальных инфекций. Исследование частоты выявления возбудителей инфекций у женщин, передаваемых половым путем методом полимеразной цепной реакции с применением диагностических тест- систем "Ампли Сенс".
дипломная работа [20,2 K], добавлен 20.07.2013Иммунная электронная микроскопия. Схема иммуноферментного анализа. Полимеразная цепная реакция. Приборная база для применения метода полимеразной цепной реакции в лаборатории. Образование нуклеотидной цепи. Поражение вирусом Эпштейна-Барр, мононуклеары.
презентация [207,3 K], добавлен 04.02.2014Характеристика основных этапов проведения анализа полимеразной цепной реакции в лаборатории. Обнаружение продуктов ПЦР в агарозном геле, с помощью гибридизации. Инфекционный контроль. Зона для приготовления реагента и для амплификации и регистрации.
презентация [2,0 M], добавлен 28.02.2015Методы профилактики заболеваний, передающихся половым путем на популяционном и индивидуальном уровнях. Инфицирующие биологические жидкости (с высокой степенью риска). Защита против профессионального риска инфицирования. Цели и задачи консультирования.
презентация [1,0 M], добавлен 24.06.2014Оценка проблематики распространения венерических заболеваний. Характеристика возбудителей болезней передающихся половым путем. Описание симптомов сифилиса, трихомониаза, хламидиоза, гепатита и генитального герпеса. Профилактика венерических заболеваний.
презентация [1,9 M], добавлен 24.11.2013Сущность, значение и области применения молекулярно-генетических методов исследования. Специфика метода полимеразной цепной реакции. Блот-гибридизация по Саузерну. Картирование генов и идентификация хромосомных аберраций с помощью "FISH"-метода.
презентация [971,4 K], добавлен 07.12.2014Заболевания, передающиеся половым путем. Классификация заболеваний. Половой путь передачи ЗППП, контактно-бытовой, внутриутробный, парентеральный и другие пути передачи ЗППП. Профилактика заболеваний. Несколько правил, как избежать риска заражения.
реферат [30,6 K], добавлен 23.10.2008
