Размещено на http://www.allbest.ru/

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

УО «Витебский государственный медицинский университет»

Курсовая работа

Тема: «Фармакопейный контроль качества андрогенов и эстрогенов»

Подобед Кристина Владимировна

студентки 3 курса 13 группы

Научный руководитель:

Старший преподаватель Абраменко Л.Л.

Витебск, 2015



Введение

Эстрогены- (от греч. oistros - возбуждение и genos - род, происхождение), группа стероидных гормонов.

Эстрогены (эстрадиол, эстрон, эстриол) образуются у женщин в яичниках (в клетках зернистой оболочки фоликулла) и в плаценте. Также в незначительных количествах образуются, как женщин, так и у мужчин в коре надпочечников. Эстрогены способствуют развитию женских вторичных половых признаков, созреванию костной ткани, окостенению ростковых участков трубчатых костей, блокированию остеолитического действия паратгормона. Они устраняют действие прогестерона, вызывают стадию пролиферации эндометрия, увеличивают мышечную массу миометрия, нормализуют липидный профиль крови, регулируют психоэмоциональное состояние. В Государственой фармакопее Республики Беларусь лекарственных средств представителей эстрогенов нет. Поэтому буду рассматривать Международную, Европейскую и Японскую фармакопеи.

Цель: изучить подробно фармакопейный контроль качества эстрогенов, выявить отличия основных представителей в Международной, Европейской и Японской фармакопеях.

эстрогенный гормон этинилэстрадиол эстрадиолабензоат



Общие сведения

Эстрогены относятся с С18-стероидам, в основе которых лежит скелет эстрана. Названия эстрогенов по номенклатуре ИЮПАК включает корень "эстр" с окончаниями, отражающими набор содержащихся в молекуле заместителей.

Эстрогены обнаружены в некоторых высших растениях, преимущественно в цветках и плодах, например в плодах кокосовой пальмы, плодах и цветках ивы и пшеницы.

Структурной основой стероидных гормонов гидрированный скелет углеводорода циклопентанпергидрофенантрена. Общая формула стероидных гормонов может быть представлена следующим образом:

Метальные группы, присоединенные к стероидному циклу в положениях 10 и 13, называются ангулярными. Радикал R и атомы водорода (в положениях 8, 9, 14) ориентированы в пространстве в цис- или транс-положении. Условно принято считать, что ангулярные метильные группы расположены над плоскостью чертежа (это обозначают сплошной линией). Если другие заместители находятся в цис-положении, т. е. в одной плоскости с ангулярными группами (Р-конфигурация), то их также обозначают сплошной линией, а если в транс-положении (б-конфигурация), то пунктирной линией.



1. Представители эстрогенных гормонов

1.1 Этинилэстрадиол

C₂₀H₂₄O₂

296,40

17-этинилэстра- 1,3,5(10)- триен-3,17в-диол

1.1.1 Определение

По Международной фармакопее: этинилэстрадиол содержит не менее 97,0 и не более 102,0% C₂₀H₂₄O₂ в пересчёте на высушенное вещество [1].

По Японской фармакопее: этинилэстрадиол содержит не менее 97,0 и не более 98% C20H24O2 в пересчёте на высушенное вещество [2].

1.1.2 Описание

Белый или слегка желтовато-белый кристаллический порошок, без запаха.Практически нерастворим в воде, легко растворим в этаноле, растворим в хлороформе, ацетоне и диоксане.



1.1.3 Подлинность

Таблица 1 - Сравнительная характеристика методов идентификации этинилэстрадиола

Вещество	Лекарственная форма	НД	Методика
Этинилэстрадиол	Субстанция	МФ	1. ИК-спектроскопия 2. ТСХ
		JP-2006	1. Реакция с раствором этанола и серной кислоты 2. Температура плавления между 200 ° и 202° С
		EP-2008	__

По Международной фармакопее:

А. Инфракрасный спектр соответствует спектру, полученному со стандартным образцом этинилэстрадиола СО, или спектру сравнения этинилэстрадиола. Если спектр, полученный с испытуемым веществом в твердой фазе, не соответствует спектру, полученному со стандартным образцом, сравнивают спектры растворов в хлороформе , содержащих 30 мг/мл вещества, и используют кювету с толщиной слоя 0,2 мм.

В. Тонкослойная хроматография. В качестве адсорбента используют кизельгур и импрегнируют пластинку в смеси 1 объема пропиленгликоля и 9 объемов ацетона путем погружения ее на 5 мм ниже поверхности жидкости. Когда фронт растворителя пройдет не менее 16 см, вынимают пластинку из хроматографической камеры и выдерживают ее при комнатной температуре до полного испарения растворителя. Используют импрегнированную пластинку в пределах 2 ч с момента приготовления, проводя хроматографирование в том же направлении, что и импрегнирование. В качестве подвижной фазы используют толуол. Наносят отдельно на пластинку по 2 мкл каждого из двух растворов в смеси 9 объемов хлороформа и 1 объема метанола, содержащих: (А) 1,0 мг испытуемого вещества в 1 мл и (Б) 1,0 мг стандартного образца этинилэстрадиола СО в 1 мл. Проводят хроматографирование до прохождения фронта растворителя на 15 см. Вынимают пластинку из хроматографической камеры, дают ей высохнуть до испарения растворителей, нагревают при 120 °С в течение 15 мин, опрыскивают раствором 4-толуолсульфоновой кислоты в этаноле и затем нагревают при 120 °С в течение 5--10 мин. Дают пластинке охладиться и оценивают хроматограмму в дневном свете и в ультрафиолетовом свете (365 нм). Основное пятно, полученное с раствором А, соответствует по положению, внешнему виду и интенсивности пятну, полученному с раствором Б [1].

По Японской фармакопее

А. Растворяют 2 мг этинилэстрадиола в 1 мл смеси этанола (95%) и серной кислоты (в соотношении 1:1): появляется пурпурно-красный цвет с желто-зеленой флуоресценцией. Добавляют 2 мл воды: цвет раствора изменится на красно-пурпурный.

На примере эстрадиола дипропионата.

В. В пробирку со стеклянной пробкой вносят 0,02 г этинилэстрадиола, растворяют в 10 мл водного раствора гидроксида калия (1:20), добавляют 0.1 г бензоилхлорида и встряхивают. Собирают осадок, перекристаллизованный из метанола, и сушат в эксикаторе (в вакууме фосфора (V) оксида). Температура плавления осадка между 200 ° и 202° С [2].



1.1.4 Испытания

По Международной фармакопее

Удельное оптическое вращение. Используют раствор препарата в пиридине Р. С концентрацией 4.0 мг/мл и пересчитывают результат на высушенное вещество; [б]_D ^20C = от -27,0 до 30,0.

Потеря массы при высушивании. Высушивают до постоянной массы при 105С; потеря составляет не более 10мг/г.

Эстрон. Проводят испытания, как описано в разделе «Тонкослойная хроматография» (т.1, с.92), используя в качестве адсорбента силикагель Р1, а в качестве подвижной фазы смесь 92 объёмов дихлорэтана Р, 8 объёмов метанола Р и 0,5 объёма воды. Наносят отдельно на пластинку по 5 мкл каждого их двух свежеприготовленных растворов в смеси 9 объёмов хлороформа Р и 1 объёма метанола Р, содержащих: (А) 20 мг испытуемого вещества в 1 мл и (Б) 0,20 мг стандартного образца эстрона СО в 1 мл. Вынимают пластинку из хроматографической камеры, оставляют её высыхать на воздухе до тех пор, пока не перестанет ощущаться запах растворителя, затем нагревают при 110С в течение 10 минут и оценивают хроматограмму в ультрафиолетовом свете (365 нм). Пятно, полученное с раствором Б, более интенсивнее, чем любое соответствующее по положению и внешнему виду пятно, полученное с раствором А.

1.1.5 Количественное определение

Таблица 3 - Сравнительная характеристика методов количественного определения

Вещество	ЛФ	Методика количественного определения
		МФ	JP-2006	EP-2008
Этинилэстрадиол	Субстанция	Спектрофотометрия	Алкалиметрическое титрование	--



По Международной фармакопее

Растворяют около 0,05 г препарата (точная навеска) растворяют в достаточном количестве безводного этанола до получения 100 мл и разводят 10,0 мл этого раствора до 50,0 мл тем же растворителем. Измеряют поглощение разведенного раствора в кювете с толщиной слоя 1 см при максимуме 281 нм. Рассчитывают содержание С20Н24О2 в испытуемом веществе путем сравнения со стандартным образцом этинилэстрадиола СО, который исследуют одновременно аналогичным образом.

Поглощение раствора стандартного образца в правильно откалиброванном спектрофотометре должно составлять 0,72±0,04 [1].

По Японской фармакопее

Взвешивают около 0,2 г этинилэстрадиола, предварительно высушив и растворив в 40 мл тетрагидрофурана. Добавляют 10 мл раствора нитрата серебра (1:20) и титруют 0,1 моль/л гидроксидом натрия. Точку эквивалентности определяют потенциометрически.

Каждый мл 0,1 моль / л гидроксида натрия соответствует 29.64 мг C20H24O2 [2].

1.1.6 Хранение

В хорошо укупоренном контейнере, предохраняющий от действия света.

1.1.7 Формы выпуска

Таблица 4- Формы выпуска этинилэстрадиола

Вещество	Препарат	Содержание эстрогена (мкг)
Этинилэстрадиол/ норетиндрон	Loestrin 1/20 Loestrin 1.5/30 Norethin 1/35 Brevicon Ovcon-35 Ovcon-50	20 30 35 35 35 50
Этинилэстрадиол/левоноргестрел	Alesse Levlen Minisiston Ovidon	50 30 30 50
Этинилэстрадиол/норгестрел	Lo Ovral	30 50
Этинилэстрадиол/норгестимат	Cilest	35
Этинилэстрадиол/дезогестрел	Marvelon Novynette	30 20
Этинилэстрадиол/норетистерон	Non-ovlon Loveston	50 50
Этинилэстрадиол/гестоден	Minulet Lindynette Logest	30 30 20
Этинилэстрадиол/этинодиола ацетат	Demulen1/35 Demulen 1/50	35 50
Этинилэстрадиол/норетиндрон	Norinyl 1+50	50
Этинилэстрадиол/диеногест	Jeanine	30
Этинилэстрадиол/дроспиренон	Yarina	30
Комбинированные двухфазые оральные контрацептивы
Этинилэстрадиол/дезогестрел	Mircette	20 10
Этинилэстрадиол/норетиндрон	Jenest-28	35
Этинилэстрадиол/левоноргестрел	Anteovin	50
Комбинированные трёхфазые оральные контрацептивы
Этинилэстрадиол/норетиндрон	Ortho-Novum 7/7/7	35 35 35
Этинилэстрадиол/левоноргестрел	Trisiston	30 40 30
Этинилэстрадиол/норетистерон	Synphasis	35 35 35
Этинилэстрадиол/норгестимат	Tri-Merci	35 30 30

1.2 Эстрадиолабензоат

С₂₅Н₂₈О₃

М.м. 376,5

17в-гидроксиэкстра-1,3,5(10)-триен-3-ил бензоат



1.2.1 Определение

Эстрадиол бензоат содержит не менее 97,0 и не более 103,0% C₂₅H₂₈O₃ в пересчёте на высушенное вещество [3].

1.2.2 Описание

Почти белый порошок или бесцветные кристаллы.

1.2.3 Подлинность

Таблица 5 - Сравнительная характеристика методов идентификации эстрадиола бензоата

Вещество	Лекарственная форма	НД	Методика
Эстрадиола бензоат	Субстанция	JP-2006	1. Реакция с серной кислотой 2. ИК-спектроскопия
		EP-2008	1. ИК-спектроскопия

А. К 2 мг эстрадиола бензоата добавить 2 мл серной кислоты: появляется желтовато-зеленое окрашивание с синей флуоресценцией. При осторожном добавлении 2 мл воды цвет раствора изменяется до светло-оранжевого.

В. ИК-спектроскопия. Определяют спектр инфракрасного поглощения эстрадиола бензоата, предварительно высушенного, и равнивают с эталонным спектром или со спектром высушенного эстрадиола бензоата эталонного стандарта: оба спектра показывают подобные интенсивности поглощения при том же количестве волн [3].

Методика идентификации эстрадиола бензоата с помощью ИК-спектроскопии по Европейской фармакопеи не имеет существенных отличий по сравнению с этой же методикой по Японской фармакопее.

1.2.4 Испытания

Удельное оптическое вращение: + 55,0 до + 59,0 на сухое вещество.

Растворяют 0,250 г вещества в ацетоне Р и доводят до 25,0 мл тем же растворителем.

Посторонние примеси. Жидкостной хроматографии. Растворяют 20 мг вещества в смеси ацетонитрила R1 и доводят до 10,0 мл тем же растворителем.

Контрольный раствор (а.) Растворяют 5 мг эстрадиола бензоата для пригодности системы CRS (содержащий примеси, B, C, E и г) в ацетонитриле R1 и разбавляют до 2,5 мл этим же растворителем.

Контрольный раствор (б). Разводим 0,5 мл исследуемого раствора в 100,0 мл ацетонитрила R1.

Колонка: - Размер: L = 0,25 м, Ш = 4,6 мм;

Стационарная фаза: с концевыми октилсиликагель для хроматографии R (5 мкм).

Подвижная фаза:

Подвижна фаза: вода R, R1 ацетонитрил (40:60 об / об);

Подвижная фаза В: ацетонитрил R 1;

Скорость потока: 1,0 мл / мин.

Обнаружение: спектрофотометр при 230 нм.

Раствор для инъекций: 10 мкл.

Идентификация примесей: используют хроматограмму в комплект поставки с эстрадиола бензоата для пригодности системы CRS и хроматограмме раствора сравнения (а) определить пики из-за примесей A, B, C, E и G.

Относительное удержание со ссылкой на эстрадиол бензоата (время удерживания = около 19 мин): примеси = около 0,3;

примесь E = около 1,1; примеси B = около 1,2;

примесь G = около 1,3; примеси C = 1,5.

Система пригодность: эталонный раствор (а):Пик-долина соотношение: минимум 2,0, где Hp = высота выше базовой линии пика из-за примесей Е и Hv = высота над базовой линией нижней точке кривая выделения этого пика от пика из-за эстрадиола бензоат. Ограничения:

Поправочные коэффициенты: для расчета содержания, умножить площадей пиков следующих примесей соответствующий поправочный коэффициент: примесь = 3,3;примеси C = 0,7;

Примеси С: не более площади основного пика в хроматограмме эталонного раствора (б) (0,5 процента);

Примеси B, E, G: для каждой примеси, не более чем 0,6 раза больше площади основного пика в хроматограмме раствора сравнения (б) (0,3 процента); Примеси: не более 0,4 раз площадь.

Основной пик в хроматограмме эталонный раствор (б) (0,2 процента);

Неуказанные примеси: для каждого примесей, не более чем 0,2 раза больше площади основного пика в хроматограмме раствора сравнения (б) (0,10 процента);

Общее: не более чем в два раза площади основного пика в хроматограмме эталонного раствора (б) (1,0 процента);

Пренебрежение предел: 0,1 раз площадь основного пика в хроматограмме эталонного раствора (б) (0,05 процента).

Потеря массы при высушивания: не более 0,5%, определяется на 1,000 г сушкой в печи при 105 ° С в течение 3 ч.

1.2.5 Количественное определение

Таблица 6 - Сравнительная характеристика методов количественного определения

Вещество	ЛФ	Методика количественного определения
		МФ	JP-2006	EP-2008
Эстрадиолабензоат	Субстанция	--	ВЭЖХ	Спектрофотометрия



По Европейской фармакопее 25,0 мг исследуемого образца (точная навеска) растворяют в безводном этаноле до получения 250,0 мл раствора. Отмеривают 10,0 мл этого раствора и доводят до 100,0 мл этим же растворителем. Измеряют поглощение разведенного раствора в кювете с толщиной слоя 1 см при максимуме 231 нм. Рассчитывают содержание C25H28O3 в испытуемом веществе путем сравнения со стандартным образцом эстрадиола бензоата, который исследуют одновременно аналогичным образом [3].

По Японской фармакопее ВЭЖХ. В качестве подвижной фазы используют смесь ацетонитрила и воды (7:3). Неподвижная фаза представлена силикатным гелем. Детектор - ультрафиолетовый фотометр поглощения (длина волны 230 нм)

1.2.6 Хранение

Хранить в прохладном, защищённом от света месте.

1.2.7 Формы выпуска

Таблица 7 - Форма выпуска эстрадиола бензоата

Вещество	Препарат	Форма выпуска
Эстрадиол Estradiol	Estrace Estring Estrimax Estraderm TTS Oestrogel Alora Climara Esclim Vivelle	Табл. 0,5, 1; 2 мг. Пластырь ТТС. Пластырь 0 ,05; 0,075 и 0,01 мг/д. Гель (2,5 мл/ 1 доза) Вагинальные кольца по 7,5 мг/24 ч.
Эстрадиол влериат Estradiol valerate	Duragen Valergen zdioval Delestrogen	Амп. 10; 20; 40 мг/1 мл
Этинил эстрадиол Ethinyl estradiol	Estinyl Microfollin	Табл. 0,01; 0,02; 0,05; 0,5 мг



Заключение

На основании анализа данных литературы и сравнения методик анализа, включенных в зарубежные фармакопеи на лекарственные средства производных эстрогенных гормонов, установлено, что уровень требований и методы анализа указанной группы препаратов достаточно совершенны и позволяют объективно оценить их качество.

Идентификация данной группы лекарственных препаратов проводится как химическими, так и физическими и физико-химическими методами (ИК-спектроскопии, ТСХ, ВЭЖХ и др)..

Количественное определение лекарственных веществ исследуемой группы проводится с помощью ВЭЖХ, спектрофотометрического метода, отличающихся доступностью, простотой методик анализа, высокой чувствительностью, воспроизводимостью, низкой токсичностью. Значительно реже с этой же целью используется метод алкалиметрического титрования (для количественного определения этинилэстрадиола по JP-2006). Указанный метод не требует дорогого оборудования и дорогих реактивов.



Литература

1. Международная фармакопея 3-е издание / Женева: ВОЗ, 1981. - 604 с., 1983. - 364 с., 1990 - 435 с. 1-3 т.

2. Japanese Pharmacopoeia - 2007, version 15.0 [Электронный ресурс]. - Электрон. текстовые дан. и прогр. (83 Мб). - 1 электрон. опт. диск (CD-ROM) и последующие версии.

3. EuropeanPharmacopoeia - 2002, version 4.0 [Электронный ресурс ]. -электрон. текстовые дон. и прогр. (246 Мб). - 2002. -1 электрон. опт. диск. (CD-ROM).

4. Конорев М.Р. Курс лекций по фармакологии в 2-х томах: Том 1; Пособие / М.Р. Конорев, И.И. Крапивко, Д.А. Рождественский. - Витебск:ВГМУ,2013.-83с.

5. Конорев М.Р. Курс лекций по фармакологии в 2-х томах: Том 2; Пособие / М.Р. Конорев, И.И. Крапивко, Д.А. Рождественский. - Витебск:ВГМУ,2013.-27с.

6. Моисеев Д.В. Фармакопейный анализ. Химические методы анализа лекарственных средств. Учебное пособие / Д.В. Моисеев, В.А.Куликов. - Витебск: ВГМУ, 2011. - 137с.

7. Жерносек А.К. Фармацевтическая химия. Практическое рукодоство. Часть 1. Учебно-методическое пособие / А.К. Жерносек. - Витебск: ВГМУ, 2010

8. Кристиан Г. Аналитическая химия в 2-х томах: Том 2 / Г. Кристиан ; перев. с англ. М.: БИНОМ. Лаборатория занятий, 2009.

9. Дудко В.В. Д 814 Химический анализ лекарственных веществ: учебное

пособие / В.В. Дудко, Л.А. Тихонова. - Томск. - СибГМУ, 2009. - 52 с.

10. Латовская С.В. Основы строения и реакционной способности органических соединений. Часть 2. Учебное пособие / С.В. Латовская. - Витебск:ВГМУ, 2008.

11. Беликов, В.Г. Фармацевтическая химия. В 2 частях: Ч. 2 Специальная фармацевтическая химия: Учеб.пособие / В.Г. Беликов - 2-е изд. - М.: МЕДпресс-информ, 2008. - 616 с.

12. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. - М.: АстраФармСервис, 1995-2007

13. Бышевский, А.Ш. Влияние превращения арахидоновой кислоты в тромбоцитах на эффективность этинилэстрадиола / А.ШБышевский, С.Л. Галян, П.Я. Шаповалов // Тромбоз, гемостаз и реология. - 2007. - т. 34, № 7. - С. 29 - 32.

14. Арзамасцев А. П. Фармацевтическая химия / А. П. Арзамасцев.- М.: Гэотар-Медиа, 2006. - 636 с.

15. Машковский М. Д. Лекарственные средства / М. Д. Машковский. - М.: Новая волна, 2005.- 1206 с.

16. Дедов И.И. Проблема химии гормонов и клиническая эндокринология / И.И. Дедов / Журн. Рос. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева. - 2005. - Т.XLIX, №1. - С.8-10

17. Глущенко Н.Н. Фармацетвтическая химия / Н.Н. Глущенко, В.А. Попков, Т.В. Плетнёва. - М.:Акадения, 2004 - С.384

18. Харкевич, Д.А. Фармакология / Д.А. Харкевич. - М.: ГЭОТАРМЕД, 2001. - 664 с.

19. Солдатенков А. Т. Основы органической химии лекарственных веществ / А. Т. Солдатенков, Н. М. Колядина, И. В. Шендрик. - М.: Химия, 2001.- 189 с.

20. Ф. Гейс. Основы тонкослойной хроматографии в 2 т. / Ф. Гейс. Пер. с англ. М.А. Кошевник, Б.П. Лапина/ Под ред. проф. В.Г. Березкина. - М.: Химия, 1999. - 751с.

21. Международная фармакопея 3-е издание / Женева: ВОЗ, 1981. - 604 с., 1983. - 364 с., 1990 - 435 с. 1-3 т.

22. Кулешова, М.И. Пособие по качественному анализу лекарств / М.И. Кулешова, Л.Н. Гусева, О.К. Сивицкая. - М.: Медицина, 1989. - 288 с.

23. Гёрёг Ш.Г. Количественный анализ стероидов: Пер. с англ.--М.: Мир, 1985.--504 с.

24. Стыский, Е.Л. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография / Е.Л. Стыский, Л.Б. Ициксон, Е.В. Брауде. -М.: Химия, 1986. -214 с.

25. Мелентьева, Г.А. Фармацевтическая химия/ Г.А. Мелентьева, Л.А. Антонова. - М.: Медицина, 1985. - 480 с.

26. Халецкий, А.М. Фармацевтическая химия / А.М. Халецкий. - М.: Медицина, 1966. - 763 с.

27. Библифонд [Электронный ресурс] / Фармацевтическая химия половых гормонов. - Режим доступа: http://www.bibliofond.ru/view.aspx?id=459951#_Toc288408268. - Дата доступа: 10.03.2015.

28. T [Электронный ресурс]/ European pharmacopoeia 7.0-Режим доступа: http://www.twirpx.com/file/760066/. - Дата доступа: 18.03.2015

29. Фармакокинетика и фармакодинамика [Электронный ресурс]/ Фармакопеи разных стран: обзор стандартов качества лекарственных средств- Режим доступа: http://www.pharmacokinetica.ru/news-det.php?nid=81. -Дата доступа:18.03.2015

30. Etolen [Электронный ресурс] / Эстрадиола бензоат - Режим доступа: http://www.etolen.com/index.php?id=2946&option=com_content&task=view. Дата доступа: 18.03.2015

31. Медицинские инструкции [Электронный ресурс ] / Эстрадиола бензоат-Режим доступа: http://best-doctors.ru/preparat?id=15459. Дата доступа: 18.03.2015

Размещено на Allbest.ru