Размещено на http://www.allbest.ru/

Содержание

Введение

1. Молекулярная цитогенетика

2. Молекулярный цитогенетический анализ

2.1 Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

2.2 Молекулярный цитогенетический тест

3. Методы анализа

3.1 Цитогенетический метод (Кариотипирование)

3.2 Метод флуоресцентной гибридизации in situ

4. Применение молекулярно-цитогенетических методов

Заключение

Список использованной литературы



Введение

Одной из наиболее актуальных проблем современной медицинской генетики является определение этиологии и патогенеза наследственных заболеваний. Цитогенетические и молекулярные исследования имеют высокую диагностическую информативность и ценность при решении данной проблемы, так как хромосомные аномалии встречаются с частотой от 4 до 34% при различных наследственных синдромах. В последние годы появились новые методы цитогенетических и молекулярно-цитогенетических исследований, значительно расширяющие диагностические возможности при заболеваниях, сопровождающихся различными хромосомными нарушениями. Данный обзор посвящен вопросам выбора необходимых цитогенетических или молекулярно-генетических анализов при различных формах генетических синдромов.



1. Молекулярная цитогенетика

Разработка новых подходов к исследованию молекулярной и ультраструктурной организации хромосом привела к созданию нового направления -- молекулярной цитогенетики, решающей вопросы молекулярной организации («молекулярной анатомии») специфичесских хромосомных структур: центромерных и теломерных районов, ядрышкового организатора, индивидуальных хромомер, гетерохроматических районов, не несущих структурных генов, но обладающих набором повторяющихся последовательностей ДНК, которые служат специфическими молекулярными маркерами индивидуальных хромосом. Методические основы молекулярной цитогенетики состоят в сочетании микроскопического и субмикроскопического исследования хромосом с изучением генов методами молекулярной биологии и молекулярной генетики. Так, клонирование мобильных генетических элементов (Д. Хоггнес и др. 1976, США, Г. П. Георгиев и др., 1977, СССР) и доказательство мутаций генов в результате внедрения этих элементов в геном (Дж. Рубин и другие, 1982, США) позволили использовать мобильные элементы в качестве ДНК-зондов для обнаружения мест локализации мутантных генов в хромосомах. Цитогенетические карты хромосом послужили основой для локализации всех выявленных к середине 2000 г. генов дрозофилы (13600 генов, кодирующих белки) и человека (около 60 тыс. генов и молекулярных маркеров). Методы работы с таким количеством генов выходят за рамки цитогенетики и основаны на методах геномики (включающих методы генной инженерии и компьютерного анализа, см Геном).

Цитогенетические исследования, связанные, прежде всего, с визуальными (микроскопическими) методами наблюдения наследственных структур клетки, сыграли важную роль в развитии и обосновании основных теоретических положений современной генетики. Закономерности цитогенетики широко используются при анализе путей эволюции растений и животных, позволяют контролировать генетические явления в ходе селекционного процесса в растениеводстве и животноводстве, осуществлять диагностику наследственных болезней человека, используются для выявления мутагенного действия факторов окружающей среды на живые организмы. этиология медицинский генетика цитогенетический

Наиболее активные исследования в области цитогенетики в настоящее время ведутся в США, Великобритании, Германии, Испании. В России они осуществляются в Институте цитологии и генетики СО РАН (Новосибирск) Институте биологии развития им. Н. К. Кольцова, Институте молекулярной биологии им. В. М. Энгельгардта, Институте молекулярной генетики, Институте общей генетики им. Н. И. Вавилова РАН (Москва), Всесоюзном медико-генетическом научном центре РАМН (Москва), Санкт-Петербургсом государственном университете (Санкт-Петербург), и других.

Результаты новейших исследований в области цитогенетики публикуются в журналах Генетика; Chromosoma; Chromosome Research; Cytogenetics and Cell Genetics; Genetics; Genome; Human Genetics и других.

Молекулярно-цитогенетическая диагностика является современным направлением в клинической цитогенетике, целью которого является разработка и применение новых и высокоэффективных методов анализа хромосомопатий. Представлены результаты молекулярно-цитогенетических исследований в пост- и пренатальной идентификации хромосомных аномалий. Объектом исследования были культивируемые клетки крови детей с умственной отсталостью и врожденными пороками развития (ВПР) (3304 случая) и клетки культуры амниотической жидкости и хориона плода беременных женщин (1971). Молекулярно-цитогенетические методы (FISH-диагностика) использовались в 50 пренатальных и 76 постнатальных случаях диагностики (всего 126), когда классические цитогенетические методы были малоэффективны: пост- и пренатальные трисомии аутосом; анеуплоидии гоносом, включая мозаичные формы; маркерные хромосомы; структурные хромосомные аномалии, в том числе синдром ломкой хромосомы Х. При проведении молекулярно-цитогенетической диагностики использовали протокол быстрой (15-30 мин) FISH и оригинальную коллекцию центромерных, теломерных и сайтспецифичных ДНК-проб (плазмидных, космидных, РАС и УАС клонов). Проведенные исследования показали, что молекулярно-цитогенетический анализ эффективен для идентификации различных хромосомных аномалий в пре- и постнатальной диагностике; FISH-анализ - необходимый, дополнительный к классической цитогенетической диагностике метод для выявления определенных хромосомных аберраций. Молекулярные исследования хромосомопатий имеют как прикладное, так и важное теоретическое значение, поскольку позволяют выделять специфические хромосомные синдромы в обширной группе детей с недифференцированными формами умственной отсталости и врожденными пороками развития.

Достижения молекулярной цитогенетики связаны в последнее десятилетие с принципиально новыми подходами к диагностике наследственно обусловленной патологии и, прежде всего, хромосомных болезней. Это стало возможным в результате разработки и внедрения в клиническую цитогенетику комплекса новых технологий - ДНК-диагностики, гибридизации нуклеиновых кислот in situ и компьютерных систем для анализа хромосом. ДНК-диагностика основана на использовании технологиирекомбинантных молекул ДНК и приготовления специальных ДНК-зондов для выявления и молекулярного анализа генетических дефектов. Флюоресцентная гибридизация in situ (FISH - fluorescence in situ hybridization) включает применение специально подготовленных (флюоресцирующих) ДНК-проб для выявления генетических дефектов на хромосомном уровне и проведения процедуры молекулярно-цитогенетической диагностики с использованием современной флюоресцентной микроскопии. Компьютерные системы для анализа хромосом включают специальные телекамеры для выявления сверхслабых сигналов, полученных при проведении in situ гибридизации, а также компьютерные программы, позволяющие проводить автоматический анализ хромосом и высокоэффективную многоцветную детекцию ДНК-зондов для диагностики хромосомных и генных нарушений на микроскопическом уровне.



2. Молекулярный цитогенетический анализ

О молекулярно-генетическом анализе говорят в случаях, когда анализируются не структуры хромосом в целом, а конкретные последовательности ДНК или РНК - например, те или иные гены. Высокочувствительный молекулярно-генетический анализ важен не только для более точной диагностики многих заболеваний, но и для многих других целей: например, для контроля минимальной остаточной болезни и максимально раннего обнаружения рецидива лейкоза, когда немногочисленные лейкемические клетки еще нельзя обнаружить стандартными методами. Также с помощью этого анализа можно с высокой точностью определять микрометастазы многих опухолей.

2.1 Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Основа молекулярно-генетического анализа - метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Технология ПЦР позволяет получать многочисленные идентичные копии нужного участка ДНК, после чего последовательность ДНК на этом участке можно определять обычными методами. Метод ПЦР позволяет достичь высочайшей точности и чувствительности диагностики.

Высокие показатели чувствительности и специфичности полимеразной цепной реакции (ПЦР) делают ее революционной в лабораторной диагностике. Основными мишенями при выявлении хламидии являются нуклеотидная последовательность криптической плазмиды, последовательность главного белка внутренней мембраны, рибосомальные гены.

Показания к применению ПЦР такие же, как и у культурального метода, за исключением невозможности выявления резистентности к антибиотикам. Следует учитывать, что при исследовании биопроб методом ПЦР сразу после курса антибактериального лечения в некоторых случаях можно получить «ложноположительные с клинической точки зрения» результаты, поскольку невозможно однозначно оценить жизнеспособность микробной клетки на основании выявления фрагмента ее генома, используя только молекулярно-биологические методы. При исследовании культуральным методом микробные клетки, потерявшие эти важные с клинической точки зрения свойства, не дадут роста в клеточной культуре.

На основании изложенного можно предложить клиницистам лабораторный диагностический алгоритм хламидийной инфекции:

-первоначально применение ПЦР с целью выявления ДНК C.trachomatis и определение титра антител классов IgМ, IgA, IgG к C.trachomatis (для характеристики стадии заболевания);

-в ходе лечения возможно повторное определение титра антител классов IgA, IgG с целью мониторинга эффективности лечения инфекционного заболевания;

-по окончания курса лечения оценка его эффективности культуральным методом или спустя 4 недели (полное обновление эпителия мочеполовых путей) с применением ПЦР;

-через 3-6 месяцев после курса лечения определение титров антител IgA, IgG в качестве отдаленной оценки его эффективности.

2.2 Молекулярный цитогенетический тест

Первый анализ, который рекомендуется сделать при врожденных пороках развития, задержке психического развития и аутизме - молекулярный цитогенетический тест (хромосомный микроматричный анализ). Молекулярное генетическое тестирование на микроматрицах позволяет провести исследование всего генома человека. При этом используются более чем 2,6 миллиона маркеров для анализа числа копий генов и примерно 750 000 однонуклеотидных полиморфизмов. Эта технология обладает большой разрешающей способностью, высотой точностью, чувствительностью и специфичностью. Высокая плотность исследуемых маркеров генома позволяет определить большое количество синдромов и несиндромальной патологии, связанной с изменением структуры ДНК.

Показанием к проведению молекулярного цитогенетического исследования на микроматрицах являются:

- Врожденные пороки развития.

- Задержка психического развития.

- Аутизм и аутизмоподобные (аутические) расстройства - ASDs.

- Детекция однородительских дисомий и потери гетерозиготности на участках хромосом.

- Подтверждение и более точная диагностика ранее выявленных цитогенетических нарушений, таких как несбалансированные перестройки, вставки и делеции.

- Анализ возможных сбалансированных перестроек хромосом у пациентов с патологическим фенотипом.

Организм человека содержит генетическую информацию, зашифрованную в молекуле ДНК. ДНК имеет особенную пространственные структуры, которая называется хромосомы. Эта генетическая информация определяет как организм человека будет расти и развиваться. К сожалению, иногда бывает так, что часть молекулы ДНК, содержащая такую информацию исчезает, или наоборот, удваивается. В обоих случаях это ведет к неправильному формированию организма. В некоторых случаях это может проявляться в виде врожденных пороков развития, задержки психического развития, аутизме или имеет другие проявления.

Грубые нарушения в хромосомах можно увидеть под микроскопом с помощью специального исследования -кариотипирования. Однако, большинство генетических дефектов носят субмикроскопический характер не могут быть обнаружены этим методом. При молекулярном цитогенетическом тесте используется новая технология с ДНК-чипами (микроматрицами). На такую микроматрицу нанесено 2,6 миллиона отдельных тестов, каждый из которых определяет наличие или отсутствие в геноме очень маленькой последовательности размером в 25 нуклеотидов. Такие последовательности исследуются по всему геному, что дает полное представление о его структуре и позволяет определить наличие или отсутствие в нем важных участков.

Молекулярный цитогенетический тест впервые начал использоваться в лабораториях США несколько лет назад. За это время он показал высокую диагностическую эффективность. Американское общество медицинских генетиков (ACMG) рекомендовало молекулярный цитогенетический анализ на микроматрицах как первое лабораторное исследование при следующих заболеваниях:

-Подозрение на микроделеционные синдромы.

-Врожденные пороки развития.

- Задержка психического развития или умственная отсталость.

-Аутизм.

Если врач видит наличие у ребенка признаков вышеперечисленных заболеваний, то для установления его точной причины и может быть назначен молекулярный цитогенетический анализ.

Молекулярный цитогенетический анализ может помочь Вам и Вашему ребенку в следующем:

- Врач сможет установить точную причину заболевания и даст Вам необходимые рекомендации.

- Будут понятны возможности и методы реабилитации больного ребенка.

- Выявление генетических причин заболевания ребенка может быть важным и для других членов Вашей семьи, а также для возможной будущей беременности.

Для проведения молекулярного цитогенетического анализа требуется небольшое количество крови. Кровь получают из вены обычным способом в специальную пробирку, которая доставляется в лабораторию.



3. Методы анализа

3.1 Цитогенетический метод (Кариотипирование)

У каждого биологического вида, включая человека, есть определенный, присущий ему набор хромосом, который принято называть кариотипом. Человеческий кариотип состоит из 46 хромосом - из них 22 пары аутосом и 2 половые хромосомы. По половым хромосомам можно идентифицировать пол: у женщин две X хромосомы, а у мужчин одна X и одна Y. Соответственно кариотип мужчины может быть записан как 46, XY, а кариотип женщины как 46, ХХ. Каждая хромосома содержит в себе элементы, которые определяют основные наследуемые свойства. Исследовать кариотип можно с помощью цитогенетического и молекулярно-цитогенетического метода.

Кариотипирование основано на цитогенетическом методе и дает возможность проанализировать хромосомы, их число и структуру. Цитогенетический метод позволяет выявить отклонения, которые могут служить как причиной бесплодия или не вынашивания беременности, так и свидетельствовать о высоком риске рождения ребенка с тяжелыми врожденными патологиями. Современные методы диагностики позволяют своевременно обнаружить нарушения в хромосомном составе и сделать соответствующие выводы.

Проведение кариотипирования, как правило, назначается врачами-генетиками в двух случаях:

1.для изучения кариотипа будущих родителей

2.пренатальное кариотипирование для исследования хромосом плода - один из видов пренатальной (дородовой) диагностики.



Первые диагностические методы, позволяющие анализировать каждую хромосому и ее структуру, появились в 60х - начале 70х годов прошлого века. Тогда же генетиками было установлено существование взаимосвязи между тяжелыми врожденными патологиями и нарушением качественного или количественного хромосомного состава. В тот период начали зарождаться, основы пренатального кариотипирования.

Некоторые структурные и количественные нарушения не приводят к явно заметным симптомам, и пациент может даже не догадываться о том, что он является носителем хромосомной аномалии. Как правило, в таких случаях причиной для обращения к врачу является невозможность забеременеть. Поэтому клиника лечения бесплодия зачастую является единственным местом, где может быть выявлено подобное нарушение.

Цитогенетический метод исследования показан в следующих ситуациях:

1. Тяжелая степень олигозооспермии (<5 млн/мл).

2. Необструктивная азооспермия

3. Первичная и вторичная аменорея (преждевременная менопауза)

4. Задержка полового развития

5. Привычное невынашивание беременности на малых сроках (наличие в анамнезе двух и более выкидышей в первом триместре) - обследуются оба родителя

6. Наличие в истории болезни одного или нескольких случаев мертворождения

7. Наличие у пары или одного из партнеров детей с тяжелыми врожденными патологиями

8. Диагностика кандидатов в программах донорства ооцитов и спермы.

Бывают ситуации, когда цитогенетического метода оказывается недостаточно для получения необходимой информации о кариотипе. В таких случаях назначают молекулярно-цитогенетическое исследование, как правило, диагностику по методу FISH. Данный метод позволяет более детально исследовать строение хромосом, быстро проанализировать хромосомный участок тканей пациента. Диагностика методом FISH часто назначается, если материал, пригодный для исследования, имеется в небольшом количестве.

3.2 Метод флуоресцентной гибридизации in situ

В некоторых случаях цитогенетического исследования бывает недостаточно для выдачи заключения о кариотипе, в этих случаях используют молекулярно-цитогенетические методы в частности флуоресцентную гибридизацию in situ (англ. - Fluorescence In Situ Hybridization - FISH) [5].

Появление новых технологий молекулярной цитогенетики, базирующихся преимущественно на in situ гибридизации нуклеиновых кислот, значительно расширило возможности хромосомной диагностики. Метод in situ гибридизации был разработан для локализации конкретных последовательностей ДНК непосредственно на цитологических препаратах. Произошел переход в идентификации хромосом и хромосомных районов с анализа цитологической организации хромосомы на анализ последовательностей ДНК, входящих в их состав. Сравнение эффективности классических цитологических методов выявления и анализа хромосомных перестроек, таких как дифференциальные окраски хромосом, с современными молекулярно-цитогенетическими технологиями показало, что при гематологических нарушениях цитологический анализ хромосом детектирует и правильно идентифицирует лишь около трети хромосомных перестроек, выявляемых при использовании спектрального кариотипирования (SKY). Еще около трети перестроек идентифицируются цитологическими методами неверно, а треть остается совсем незамеченной. Классические методы цитогенетического анализа позволяют выявлять лишь около 15 % хромосомных перестроек, идентифицируемых с помощью SKY.

В методе FISH используются флуоресцирующие молекулы для прижизненной окраски генов или хромосом. Метод используется для картирования генов и идентификации хромосомных аберраций.

Методика начинается с приготовления коротких последовательностей ДНК, называемых зондами, которые являются комплементарными по отношению к последовательностям ДНК, представляющим объект изучения. Зонды гибридизуются (связываются) с комплементарными участками ДНК и благодаря тому, что они помечены флуоресцентной меткой, позволяют видеть локализацию интересующих генов в составе ДНК или хромосом. В отличие от других методов изучения хромосом, требующих активного деления клетки, FISH можно выполнять на неделящихся клетках, благодаря чему достигается гибкость метода.

FISH может применяться для различных целей с использованием зондов трех различных типов:

* локус-специфичные зонды, связывающиеся с определенными участками хромосом. Данные зонды используются для идентификации имеющейся короткой последовательности выделенной ДНК, которая используется для приготовления меченого зонда и его последующей гибридизации с набором хромосом;

* альфоидные или центромерные зонды-повторы представляют собой повторяющиеся последовательности центромерных областей хромосом. С их помощью каждая хромосома может быть окрашена в различный цвет, что позволяет быстро определить число хромосом и отклонения от нормального их числа;

* зонды на всю хромосому являются набором небольших зондов, комплементарных к отдельным участкам хромосомы, но в целом покрывающими всю ее длину. Используя библиотеку таких зондов можно «раскрасить» всю хромосому и получить дифференциальный спектральный кариотип индивида. Данный тип анализа применяется для анализа хромосомных аберраций, например транслокаций, когда кусочек одной хромосомы переносится на плечо другой.

Гибридизация in situ с флуоресцентной меткой (FISH)

Материалом для исследования является кровь, костный мозг, биопсия опухоли, плацента, эмбриональные ткани или амниотическая жидкость. Образцы для исследования должны доставляться в лабораторию в свежем виде. Препараты (слайды) готовятся непосредственно из образцов ткани или после их культивирования. Могут использоваться как метафазные, так и интерфазные препараты клеток. Меченные флуоресцентными метками специфические ДНК-зонды гибридизуюся с хромосомной ДНК, причем можно одновременно использовать множественные зонды к разным локусам.

FISH является полезным и чувствительным методом цитогенетического анализа при выявлении количественных и качественных хромосомных аберраций, таких как делеции (в том числе и микроделеции), транслокации, удвоение и анэуплоидия. FISH на интерфазных хромосомах служит быстрым методом пренатальной диагностики трисомий по 21, 18 или 13 хромосомам или аберраций половых хромосом. В онкологии с помощью FISH можно выявлять рад транслокаций (bcr/abl, MLL, PML/RARA, TEL/AML1), связанных с гематологическими злокачественными новообразованиями. Метод также может использоваться для мониторинга остаточных явлений онкозаболевания после химиотерапии и пересадки костного мозга и выявления усиленных онкогенов (c-myc/n-myc), связанных с неблагоприятным прогнозом в отношении некоторых опухолей. FISH также используется для контроля приживаемости аллотрансплантата костного мозга, полученного от индивида противоположного пола.

FISH является чувствительным методом для идентификации хромосомных аберраций и одномоментного быстрого анализа большого (> 500) числа клеток. Метод обладает высокой точностью при идентификации природы хромосом и неизвестных фрагментов хромосомной ДНК.



4. Применение молекулярно-цитогенетических методов

Молекулярно-цитогенетическая диагностика является современным направлением в клинической цитогенетике. Целью ее является разработка и применение новых высокоэффективных методов анализа хромосомопатий как в пост-, так и в пренатальный период. Молекулярные исследования (5275) были использованы нами в постнатальной и пренатальной идентификации хромосомных аномалий. Объектами исследования были культивируемые клетки крови детей с умственной отсталостью и врожденными пороками развития (3304) или культивируемые клетки амниотической жидкости и хориона плода беременных женщин (1971).

Согласно современным представлениям, молекулярно-цитогенетическая диагностика с использованием FISH-метода применяется в различных разделах медицинской генетики:

- для определения численных и структурных хромосомных аномалий в клинической цитогенетике;

- для идентификации маркерных (мини-, дополнительных) хромосом;

- для определения анеуплоидий в неделящихся пренатальных и постнатальных интерфазных клетках;

- для определения различных специфических и неспецифических хромосомных аномалий в онкоцитогенетике;

- для анализа хромосомных аномалий в клинической цитогенетике (изохромосомы, сбалансированные хромосомные аномалии при различных клинических картинах синдрома и т.д.);

- для анализа хромосомных аберраций в генетико-токсикологических исследованиях.

В результате проведенных нами исследований впервые в мире были разработаны показания к применению молекулярно-цитогенетических методов в постнатальной диагностике у детей с недифференцированными формами умственной отсталости и множественными врожденными пороками развития. Эти показания включают:

1) анализ случаев сложного хромосомного мозаицизма с небольшим клоном аномальных клеток;

2) определение происхождения и генетического состава дополнительных маркерных хромосом;

3) идентификация хромосом, вовлеченных в сложные перестройки при участии 3 хромосом и более;

4) уточнение точек разрыва на хромосомах и потерь генетического материала на хромосомном и субхромосомном уровнях в случае сложных хромосомных аномалий (сбалансированные и несбалансированные транслокации, особенно семейные случаи) или теломерных (субтеломерных) хромосомных делеций;

5) идентификация ломкой хромосомы Х при синдроме умственной отсталости, сцепленной с ломкой хромосомой Х;

6) изучение и выявление хромосомных вариантов.



Заключение

Таким образом, разработка методов молекулярно-цитогенетической диагностики дала реальную возможность для идентификации маркерных хромосом и хромосомного мозаицизма в случаях, когда в организме ребенка, помимо нормального, развивается один или несколько клонов аномальных клеток. Среди нозологических форм, сопровождающихся клеточным мозаицизмом, наиболее часто встречаются синдромы аномалий гоносом такие как синдромы Клайнфелтера (кариотип полной формы 47, XXY) и Шерешевского-Тернера (45,Х), дисомии Y (47,ХYY) и трисомии Х (47,ХХХ). Частота полных (немозаичных) форм синдромов составляет в сумме около 4,6 на 1000 новорожденных детей (2,0, 0,4, 1,5 и 0,65 соответственно). Частота мозаичных форм при определении у больного нормальных (кариотипы - 46,XY или 46,ХХ) и аномальных (кариотипы - 47,XXY; 45,X; 47,XYY; 47,XXX) клонов клеток изучена недостаточно, что связано с методическими трудностями в диагностике, особенно при незначительной (до 20%) доле аномального клона клеток [14]. К методическим сложностям относятся такие, как недостаточность числа метафазных клеток для постановки диагноза, а также элиминация аномальной клеточной линии при однократном (иногда и при повторном) цитогенетическом исследовании клеток крови. Все сказанное увеличивает значимость молекулярно-цитогенетической диагностики мозаичных форм хромосомных синдромов. Сложные формы мозаицизма являются показанием для проведения молекулярно-цитогенетической диагностики.



Список использованной литературы

1. Гинтер Е.К. Медицинская генетика: Учебник. - М.: Медицина, 2003. - 448с.

2. Ридли М. Геном. Автобиография вида в 23 главах. - М.: Эксмо, 2008. - 432с.

3. Денисенкова Е.В., Петрин А.Н., Байков А.Д. Цитогенетические и молекулярно-цитогенетические аспекты диагностики заболеваний, сопровождающихся умственной отсталостью, у детей // Издательство «Медиа Сфера», 2005. Режим доступа:

http://www.mediasphera.ru/journals/detail/206/2988/

4. Сапиенца К. Геномный импринтинг // В мире науки. (ScientificAmerican. Издание на русском языке). - 1990. - №12. - стр.14-20. Режим доступа: http://www.evolbiol.ru/gen.html

5. Дулипа О.Г. Синдром Прадера-Віллі (Prader-Willi Syndrome). Режим доступа: http://www.ibis-birthdefects.org/start/ ... prader.htm

6. Казанцева Л.З., Новиков П.В., Семячкина А.Н., Николаева Е.А., Курбатов М.Б., Добрыкина Э.В. Московский НИИ педиатрии и детской хирургии Минздрава РФ. Синдром Прадера - Вилли у детей: новое в этиологии, патогенезе и лечении. Режим доступа: http://nature.web.ru/db/msg.html?mid=1174772&uri=index2.html

7. Миронов М.Б., Мухин К.Ю., Кузина Н.Ю., Боровиков К.С., Гоева И.А., Красильщикова Т.М., Коркин А.В., Петрухин А.С. Синдром Ангельмана. Клинический случай. Режим доступа: http://www.epileptologist.ru/pub/Angelman.html

8. Белозеров Ю.В., Леонтьева И.В., Школьникова М. А., Страхова О.С., Себелева И.А., Макаров Л.М., Давыдкин В.В., Динов Б.А. Наследственные болезни сердца у детей // Мир науки и культуры, 2000-2009. Режим доступа: http://nature.web.ru/db/msg.html?mid=1166264&s=111400060

9. Соколов В.Н. Гипопаратериоз // Наука и практика, 2009. Режим доступа: http://www.chtfoms.ru/index.php?option=com_content&task=view&id=26467&Itemid=24

10. Ярцев М.Н., Яковлева К.П., Плахтиенко М.В. ГНЦ Института иммунологии ФМБА России, Москва Иммунодефицитные состояния у детей // Издательство Media Medica, 2000. Режим доступа: http://old.consilium-medicum.com/media/pediatr/06_01/4.shtml

Размещено на Allbest.ru