Размещено на http://www.allbest.ru/

НаціональнА МЕДИЧНА АКАДЕМІЯ ПІСЛЯДИПЛОМНОЇ ОСВІТИ ІМені п.л. шУПИКА

Черних Юлія Валентинівна

УДК: 615.014.22:618.15-002:615.454.2:638.135:582.866

РОЗРОБКА СКЛАДУ ТА ТЕХНОЛОГІЇ вагінальних супозиторіїв з прополісом та олією обліпиховою

15.00.01 - технологія ліків та організація фармацевтичної справи

АВТОРЕФЕРАТ

дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата фармацевтичних наук

Київ - 2008

Дисертацією є рукопис.

Робота виконана на кафедрі аптечної технології ліків Національного фармацевтичного університету Міністерства охорони здоров'я України.

Науковий керівник: заслужений діяч науки і техніки України,

доктор фармацевтичних наук, професор

ТИХОНОВ ОЛЕКСАНДР ІВАНОВИЧ

Національний фармацевтичний університет,

завідувач кафедри аптечної технології ліків

Офіційні опоненти: доктор фармацевтичних наук, професор

БОРЗУНОВ ЄВГЕНІЙ ЄРМОЛАЄВИЧ

Національна медична академія післядипломної освіти імені П.Л.Шупика, професор кафедри промислової фармації

кандидат фармацевтичних наук, доцент

ПОПОВИЧ ВАЛЕРІЙ ПАВЛОВИЧ

Національний медичний університет імені

О.О. Богомольця, доцент кафедри аптечної та промислової технології ліків

Захист відбудеться "6" червня 2008 р. о 1100 годині на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 26.613.04 при Національній медичній академії післядипломної освіти імені П.Л. Шупика за адресою: 04112. м. Київ, вул. Дорогожицька, 9.

З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці Національної медичної академії післядипломної освіти імені П.Л. Шупика (04112. м. Київ, вул. Дорогожицька, 9).

Автореферат розісланий "3" травня 2008 р.

Вчений секретар

спеціалізованої вченої ради Л.Б. Пилипчук

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

Актуальність теми. Однією з медико-соціальних проблем у сучасних умовах залишаються запальні захворювання репродуктивної системи у жінок. Частота гінекологічних захворювань (вульвіт, кольпіт, вагініт, ерозія шийки матки) має тенденцію до зростання. За останні десять років їх показники збільшилися у 1,5 рази.

При лікуванні даних патологій важлива роль приділяється традиційній антибактеріальній терапії, яка у більшості негативних випадків спричиняє виникнення алергічних проявів, антибіотикорезистентність різних видів штамів мікроорганізмів, а також порушення нормального вагінального біоценозу. Тому вибір препаратів для лікування запальних гінекологічних захворювань залишається важким завданням, особливо у вагітних жінок.

З цією метою успішно застосовують екстемпоральні лікарські форми на основі продуктів бджільництва (прополісу, меду, бджолиної отрути), які сприяють стійкому відновленню мікроекосистеми піхви, а також олійні каротиноїдовмісні препарати, такі як олія обліпихова, каротолін, олія шипшини, виготовлені з ліпофільних комплексів відповідної рослинної сировини.

З урахуванням вищевикладеного перспективним є використання апі-продуктів у комбінації з фітопрепаратами, зокрема фенольного гідрофобного препарату прополісу (ФГПП) у поєднанні з олією обліпиховою, які проявляють антимікробну, протизапальну, капілярозміцнюючу дію, мають репаративні властивості та прискорюють епітелізацію уражених слизових оболонок.

Найбільш раціональною лікарською формою для лікування захворювань статевої сфери є вагінальні супозиторії. Перевагами даної форми є безпосередня дія на збудників захворювання та висока інтенсивність проникнення діючих речовин до оточуючих тканин.

У зв'язку з цим створення комбінованих лікарських препаратів на основі природних речовин у формі вагінальних супозиторіїв протизапальної, антимікробної, репаративної дії для застосування у гінекології є актуальним напрямком фармації.

Зв'язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисертаційна робота виконана згідно з планом науково-дослідних робіт Національного фармацевтичного університету "Створення нових лікарських препаратів на основі рослинної та природної сировини, зокрема продуктів бджільництва, для дорослих і дітей" (номер державної реєстрації 0198U007008) та проблемної комісії "Фармація" МОЗ та АМН України.

Мета і завдання дослідження. Метою дисертаційної роботи є розробка науково обгрунтованого складу, технології та методик контролю якості супозиторіїв з фенольним гідрофобним препаратом прополісу та олією обліпиховою під умовною назвою "Феміпролен" для лікування запальних гінекологічних захворювань.

Реалізація поставленої мети вимагала вирішення таких завдань:

§ вивчити та узагальнити літературні дані щодо сучасного стану фармакотерапії гінекологічних захворювань;

§ проаналізувати можливість застосування апіпродуктів у гінекологічній практиці та біофармацевтичні аспекти створення вагінальних лікарських форм;

§ теоретично та експериментально обґрунтувати склад лікарського препарату у формі супозиторіїв;

§ провести біофармацевтичні дослідження супозиторних мас та дослідити їх технологічні, фізико-хімічні і реологічні властивості;

§ експериментально обґрунтувати та розробити раціональну технологію супозиторіїв "Феміпролен" у промислових та аптечних умовах;

§ вивчити фізико-хімічні властивості та встановити основні показники якості розробленого препарату;

§ розробити проект аналітичної нормативної документації (АНД) на супозиторії "Феміпролен";

§ визначити оптимальні терміни та умови зберігання супозиторіїв "Феміпролен";

§ проаналізувати дані біологічних досліджень з вивчення специфічної активності розробленого лікарського засобу;

§ розробити проект технологічного промислового регламенту (ТПР) на виробництво супозиторіїв "Феміпролен" та провести його апробацію у промислових умовах.

Об'єкт дослідження - вагінальні супозиторії "Феміпролен", ФГПП, олія обліпихова, концентрат олії обліпихової, супозиторні основи.

Предмет дослідження - розробка складу і технології вагінальних супозиторіїв для лікування запальних гінекологічних захворювань: вульвовагінітів, кольпітів, ерозій шийки матки. Визначення оптимальної концентрації діючих та допоміжних речовин, дослідження технологічних, біофармацевтичних і фізико-хімічних властивостей розробленого засобу, обґрунтування критеріїв якості препарату, та методик їх визначення. Розробка проекту АНД та вивчення терміну придатності супозиторіїв. Аналіз даних специфічної біологічної активності. Розробка проекту ТПР та його апробація у промислових умовах.

Методи дослідження - у роботі застосовувались загальноприйняті органолептичні, технологічні, фізико-хімічні (потенціометричне визначення рН, дослідження реологічних характеристик, термогравіметричний аналіз, спектрофотометрія, дослідження елементного складу діючих субстанцій), хроматографічні (тонкошарова хроматографія), математичні (статистична обробка результатів), біофармацевтичні (вивчення осмотичної активності, вивільнення діючих речовин in vitro та in vivo), мікробіологічні та біологічні (обґрунтування концентрації ФГПП та олії обліпихової, визначення специфічної активності і антимікробних властивостей) методи досліджень, що дозволяють об'єктивно і в повній мірі оцінити якісні та кількісні показники розробленого лікарського засобу на підставі експериментально одержаних результатів.

Наукова новизна одержаних результатів. Вперше запропоновано науково-методичний підхід до створення вагінальних лікарських препаратів, що містять природні субстанції, та доведено доцільність створення комбінованих супозиторіїв на основі ФГПП та олії обліпихової для лікування запальних гінекологічних захворювань.

Вперше на підставі фізико-хімічних, реологічних і біофармацевтичних досліджень теоретично та експериментально обгрунтовано склад і розроблено раціональну технологію супозиторіїв під умовною назвою "Феміпролен" з антимікробною, репаративною та протизапальною дією (заявка на патент України № а 200711358 від 15.10.2007 р.). Визначено вплив допоміжних речовин на структурно-механічні властивості супозиторіїв та вивільнення з них діючих речовин. Опрацьовані методики ідентифікації та визначення кількісного вмісту діючих речовин, що ввійшли до проекту АНД на супозиторії "Фемі-пролен". Вивчено фізико-хімічні властивості запропонованого препарату, його стабільність у процесі зберігання, специфічну активність та нешкідливість.

Практичне значення одержаних результатів. Створено і запропоновано для практичної медицини новий комбінований лікарський препарат на основі субстанцій природного походження, який проявляє протизапальну, антимікробну, репаративну дію при лікуванні запальних гінекологічних захворювань. Розроблено проекти аналітичної нормативної документації та технологічного промислового регламенту на виробництво супозиторіїв під умовною назвою "Феміпролен", які апробовано в умовах заводу ЗАТ "Лекхім-Харків", м. Харків (акт апробації від 24.10.2007 р.).

Розроблено та затверджено Укрмедпатентінформом Інформаційний лист «Технологія виготовлення супозиторіїв з прополісом та олією обліпиховою в умовах аптек» № 109-2007 (протокол № 47 від 20.06.2007р.), який впроваджено в роботу аптек (акти впровадження від 20.09.2007 р.; 27.09.2007р.; 04.10.2007 р.). Фрагменти роботи впроваджені в навчальний процес ряду медичних та фармацевтичних навчальних закладів України (акти впровадження від 03.10.2007; 01.11.2007 р.; 05.11.2007 р.; 08.11.2007 р.).

Особистий внесок здобувача Автором особисто проаналізовано та узагальнено дані літератури відносно фармакотерапії гінекологічних захворювань, а також застосування продуктів бджільництва та олії обліпихової в медицині; проведено експериментальні дослідження з вивчення фізико-хімічних, технологічних та біофармацевтичних властивостей модельних зразків; теоретично обґрунтовано та експериментально розроблено склад і технологію супозиторіїв з ФГПП і олією обліпиховою; вивчено стабільність препарату під час зберігання; розроблено методики контролю його якості, які введені до проекту АНД; узагальнено результати експериментальних досліджень з вивчення протизапальної, репаративної та антимікробної активності супозиторіїв; розроблено проект ТПР на виробництво супозиторіїв з ФГПП та олією обліпиховою; статистично оброблено, систематизовано та проаналізовано результати експериментальних досліджень.

Апробація результатів дисертації. Основні теоретичні і практичні результати дисертаційної роботи доповідались і обговорювались на ІІ з'їзді апітерапевтів України (Харків, 2002), VI Національному з'їзді фармацевтів України (Харків, 2005), ІІІ Міжнародній медико-фармацевтичній конференції (Чернівці, 2006), міжрегіональній науково-практичній конференції "Актуальні питання фармацевтичної науки та практики" (Запоріжжя, 2006), ІІІ з'їзді апітерапевтів України (Харків, 2006), IV Міжнародній (XII Всеросійській) науково-практичній конференції "Успехи современной апитерапии", (Рыбное, 2006), ХІ Ювілейному міжнародному медичному конгресі студентів і молодих учених (Тернопіль, 2007), науково-практичній конференції "Сучасні проблеми екстемпоральної рецептури" (Харків, 2007).

Публікації. За матеріалами дисертації опубліковано 19 наукових робіт, у тому числі 9 статей (4 з яких у наукових фахових журналах), 9 тез доповідей, 1 інформаційний лист.

Обсяг і структура дисертації. Дисертаційна робота складається зі вступу, 5 розділів, загальних висновків, списку використаних літературних джерел та 14 додатків. Загальний обсяг дисертації складає 182 сторінки машинописного тексту. Робота ілюстрована 23 таблицями та 41 рисунком. Обсяг основного тексту дисертації складає 133 сторінки. Список використаних літературних джерел містить 170 найменувань, з них 133 кирилицею та 37 латиною.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

У вступі наведено актуальність теми, мета та основні завдання досліджень, відзначена наукова новизна і практичне значення отриманих результатів.

У першому розділі проаналізовані дані літератури з питань класифікації, етіології та патогенезу гінекологічних захворювань. Показано, що сучасна фармакотерапія даної патології включає використання антибіотиків та лікарських препаратів природного походження. Враховуючи, що інтравагінальне введення діючих речовин забезпечує безпосередню дію на уражену ділянку та сприяє швидкому усуненню патологічного процесу запальних гінекологічних захворювань, перспективним є використання ФГПП і олії обліпихової у формі вагінальних супозиторіїв.

У другому розділі описана загальна методологія досліджень, характеристики діючих та допоміжних речовин, які були використані для розробки складу вагінальних супозиторіїв. Обґрунтовано вибір методик та методів досліджень.

У третьому розділі наведені результати теоретичних та експериментальних досліджень з розробки складу та технології вагінальних супозиторіїв «Феміпролен». З метою обгрунтування концентрацій ФГПП та олії обліпихової при розробці вагінальної лікарської форми, встановлювали їх вихідні антимікробні властивості. Дослідження проводили на кафедрі мікробіології НФаУ, під керівництвом д.мед.н., проф. І.Л. Дикого. Для цього були виготовлені супозиторії на ПЕО основі (9:1) з різним вмістом ФГПП (табл. 1).

Таблиця 1

Рівні та спектри мікробоцидних властивостей ФГПП, n = 6, Р = 0,95

Тест-штам	Вміст ФГПП, г
	0,01	0,02	0,025	0,03	0,035	0,04	0,05
	Діаметр зони затримки росту тест-штамів, мм
Staphylococcus aureus ATCC 25923	16,2±0,8	17,3±0,4	18,2±0,3	20,2±0,4	21,5±0,6	20,7±0,5	21,3±0,8
Staphylococcus aureus*	15,8±0,4	16,7±0,5	17,4±0,3	21,3±0,6	20,0±0,2	19,4±0,3	20,7±0,4
Escherichia coli ATCC 25922	16,3±0,9	16,4±0,2	16,5±0,4	17,5±0,3	16,8±0,2	17,2±0,3	17,0±0,4
Escherichia coli*	14,2±1,3	15,7±0,2	16,2±0,3	16,6±0,2	15,4±0,7	16,8±0,6	17,3±0,4
Bacillus subtilis ATCC 6633	15,3±1,6	15,6±0,4	16,2±0,3	18,0±0,3	17,6±0,2	18,3±0,6	18,0±0,4
Bacillus subtilis*	14,8±1,3	15,2±0,4	16,0±0,5	17,6±0,3	17,2±0,2	17,4±0,4	17,6±0,5
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027	13,0±0,8	13,2±0,2	13,0±0,3	12,4±0,2	12,6±0,3	13,2±0,4	13,6±0,3
Pseudomonas aeruginosa*	12,6±1,2	12,0±0,8	12,8±0,4	13,0±0,3	12,4±0,3	12,8±0,4	12,4±1,0
Candida albicans ATCC 885-653	13,0±0,8	13,2±0,4	13,6±0,3	13,3±0,2	12,8±0,4	13,2±0,3	13,0±0,4
Candida albicans*	11,4±1,0	12,6±0,2	12,8±0,4	12,6±0,2	12,6±0,3	13,7±0,5	12,6±0,3

Примітка.* - Клінічні штами мікроорганізмів.

Як видно з даних табл. 1 ФГПП має помірно виражену мікробоцидну здатність по відношенню, як до референтних, так і клінічних антибіотикорезистентних штамів. Найбільшу активність ФГПП проявляв по відношенню до Staphylococcus aureus та Bacillus subtilis.З метою виявлення можливої синергідної дії були виготовлені супозиторії з ФГПП та олією обліпиховою, у яких концентрація фенольної фракції становила 0,01 г, 0,02 г, 0,025 г, 0,03 г, 0,035 г, 0,04 г, 0,05 г на один супозиторій відповідно, а вміст олії обліпихової - 0,05 г для кожного складу. Було встановлено підвищення вихідної активності ФГПП у середньому в 1,2-1,4 рази. Останнє стало підставою для подальшого мікробіологічного обґрунтування концентрації олії обліпихової у суміші з ФГПП. Для цього проводили порівняльне визначення антимікробної активності супозиторіїв, які містили 0,03 г або 0,05 г ФГПП на один супозиторій і відповідну кількість олії обліпихової (0,004 г, 0,008 г, 0,012 г, 0,016 г, 0,02 г, 0,05 г). На рис. 1 представлена динаміка зміни антимікробної активності зразків супозиторіїв по відношенню до культури Staphylococcus aureus, з якого видно, що максимальний рівень бактерицидної активності проявляють супозиторії при вмісті ФГПП 0,05 г та олії обліпихової 0,05 г.

Рис. 1. Динаміка зміни антимікробної активності зразків супозиторіїв по відношенню до Staphylococcus aureus ряд 1 - ФГПП - 0,03 г, ряд 2 - ФГПП-0,05 г 1-6 - об'єкти дослідження.

Таким чином, співвідношення діючих речовин: ФГПП - 0,05 г та олії обліпихової 0,05 г і було обрано як оптимальне. Обрана концентрація діючих речовин була підтверджена також фармакологічними дослідженнями.

Ефективність дії вагінального лікарського препарату у вигляді супозиторіїв залежить від вибраної супозиторної основи та її реологічних властивостей. Для обгрунтування вибору носія для вагінальних супозиторіїв були виготовлені супозиторії на гідрофобних (твердий жир, масло какао) та гідрофільних - ПЕО-1500 та ПЕО-400 (9:1) і ПЕО-1500 та ПЕО-400 (9,5:0,5) основах.

Супозиторії на поліетиленоксидних основах та твердому жирі готували методом виливання, а на маслі какао - методом викачування. Супозиторії на поліетиленоксидній основі готували за такою технологією: розплавляли ПЕО-1500 та змішували з ПЕО-400, додавали ФГПП і розчиняли при перемішуванні. Олію обліпихову змішували з твіном-80, додавали до приготованого розчину та перемішували до однорідності. Отриману супозиторну масу розливали у підготовлені форми об'ємом 3,0 г.

Вивчення антимікробної активності отриманих зразків супозиторіїв показало, що найбільш виражену мікробоцидну активність по відношенню до штамів Staphylococcus aureus (20,8±0,4 мм) та Bacillus subtilis (17,6±0,5 мм) мають супозиторії, приготовані на ПЕО-1500 та ПЕО-400 (9:1).

Для остаточного вибору носія супозиторіїв були проведені біофармацевтичні дослідження «in vitro» методом дифузії в агаровий гель.

Вивільнення фенольних сполук із модельних супозиторних композицій з ФГПП та олією обліпиховою на різних носіях від часу показало перевагу поліетиленоксидних основ (15,2±0,3 мм і 12,0±0,4 мм) у порівнянні з твердим жиром (9,8±0,6 мм) та масло какао (11,2±0,5 мм). Слід відзначити, що вивільнення фенольних сполук з поліетиленоксидної основи (9:1) більш інтенсивне, ніж з поліетиленоксидної основи (9,5:0,5), тому саме ця основа була обрана для подальших досліджень.

Для одержання необхідного терапевтичного ефекту препарату у формі супозиторіїв важливе значення має вибір поверхнево-активних речовин (ПАР). Тому, з метою оптимізації складу до поліетиленоксидної основи вводили твін-80 та ПЕГ-40 у кількості до 3 %.

Супозиторії готували методом виливання за вказаною вище технологією, а олію обліпихову змішували з ПЕГ-40 або твіном-80. Як видно з рис. 2, найбільш повне вивільнення фенольних сполук ФГПП спостерігається у супозиторіях, виготовлених з твіном-80: в 1,3 рази швидше, ніж з ПЕГ-40. Одержані дані узгоджуються з результатами мікробіологічних досліджень.

Таким чином, на підставі проведених досліджень обрано такий склад комбінованих вагінальних супозиторіїв «Феміпролен», (г):

Фенольного гідрофобного

препарату прополісу (ФГПП) 0,05 г.

Олії обліпихової (ООБ) 0,05 г.

твіну-80 0,08 г.

Супозиторної основи ПЕО 1500 : ПЕО 400 (9:1)

до отримання супозиторію 3,0 г.

Враховуючи, що поліетиленоксидна основа має дегідратуючу властивість, далі ми вивчали вплив діючих та допоміжних речовин на осмотичну активність супозиторіїв «Феміпролен».

Особливості перебігу запальних захворювань внутрішніх статевих органів у жінок у більшості випадків визначаються імунологічним статусом організму, який залежить від елементного дисбалансу. Порушення вмісту мікроелементів (МЕ) в організмі людини призводить до появи певних патологій. У зв'язку з цим доцільним було визначення мікро- та макроелементів, що входять до складу діючих речовин супозиторіїв «Феміпролен». Знання мінерального складу може пояснити позитивний терапевтичний ефект препарату. Аналіз даних (табл.2) показав наявність у ФГПП та олії обліпихової 16 елементів, серед яких у більшій кількості містяться: залізо, кремній, магній,фосфор, кальцій, калій та цинк.

Таким чином, новий лікарський препарат «Феміпролен» має значний вміст есенціальних макро- та мікроелементів, які сприятимуть нормалізації обміну речовин, регуляції імунної системи та подоланню запального процесу.

Це припущення можна підтвердити за допомогою вивчення фармакокінетики і системної біодоступності препарату, яке проводили на базі лабораторії фармакокінетики ДП «Державний фармакологічний центр» під керівництвом к.м.н. Лібіної В.В. Дослідження фармакокінетики супозиторіїв «Феміпролен», яке проводили із застосуванням кверцетину як маркерного компоненту ФГПП, показало, що при вагінальному введенні препарат забезпечує незначну системну біодоступність діючих речовин у системний кровообіг з подальшим швидким розподіленням їх у тканини і елімінацією з організму (табл. 3, рис. 3). Тобто, можлива фармакологічна дія, яку проявляють макро- та мікроелементи, що входять до складу препарату.

Таблиця 2

Результати елементного аналізу ФГПП та олії обліпихової

Мінеральні компоненти	ФГПП	Олія обліпихова	Мінеральні компоненти	ФГПП	Олія обліпихова
	Вміст елемента, мг/100 г		Вміст елемента, мг/100 г
Si	290	0,06	Mn	2,50	0,12
Ca	190	32	Cu	1,80	0,01
Fe	72	0,12	Cr	1,80	<0,03
Zn	72	0,12	Ni	0,70	<0,03
P	60	11	Pb	0,1	<0,03
Mg	36	14	Bi	0,07	<0,03
Al	30	0,01	Mo	0,04	<0,03
Na	8	2,40	K	<0,1	<0,1

Таблиця 3

Параметри фармакокінетики кверцетину при вагінальному введенні супозиторіїв «Феміпролен» кроликам

Параметри фармакокінетики	Значення
Максимальна концентрація - Сmax,, мкг/мл	0,171
Час досягнення максимальної концентрації - tmax, хв	45
Середній час всмоктування - MAT, хв	43,95
Питомий кінетичний об'єм розподілу - Vz, л/кг	2,872
Період напіввиведення - Т1/2, хв	12,32
Константа швидкості елімінації - Кel, хв -1	0,0563
Загальний кліренс при позасудинному введенні - Clpo, л/хв/кг	0,1616
Середній час утримання при позасудинному введенні - MRTpo, хв	49,89
Площа під фармакокінетичною кривою - AUC0t, мкг/мл* хв	8,085
Площа під фармакокінетичною кривою - АUС 0, мкг/мл* хв	8,476
Ступінь абсолютної біодоступності - F,%	5,75

Динаміка вмісту кверцетину в плазмі крові кроликів після однократного вагінального введення супозиторію.

З метою розробки раціональної технології супозиторіїв «Феміпролен», було проведено реологічні дослідження, показники яких є найважливішою характеристикою, яка визначає стійкість зв'язно-дисперсних систем

Вимірювання реологічних параметрів супозиторної маси проводили на ротаційному віскозиметрі «Reotest» (Німеччина) при різних значеннях температур. Температура плавлення супозиторіїв складає 45 С, температура затвердіння 43,5 С. Як видно з рис. 4, супозиторна маса при температурі 44 С має пластичний тип плинності. При підвищенні температури до 45 С тип плинності супозиторної маси змінюється на псевдопластичний. Наявність петель гістерезису свідчить про те, що супозиторна маса проявляє певні тиксотропні властивості, причому, чим нижча температура, тим більша площа петель гістерезису. При подальшому підвищенні температури до 46 С реограма представляє собою лінію, що свідчить про відсутність тиксотропних властивостей та наближенні плинності системи до ньютонівського типу.

Рис. 4. Реограма супозиторної маси з ФГПП та ООБ при температурах: 1 - 44єС, 2 - 45 єС, 3 - 46 єС.

Дослідження залежності структурної в'язкості супозиторіїв «Феміпролен» від температури при різних значеннях градієнта швидкості зсуву показало, що при підвищенні температури від 44С до 45С значення структурної в'язкості супозиторної маси при градієнтах швидкості зсуву 14,5с-1 та 28с-1 зменшується більше, ніж у 2 рази (рис. 5). При температурі від 45 С до 46 С значення структурної в'язкості супозиторної маси при тих же градієнтах швидкості зсуву зменшується у 7 разів, супозиторна маса стає рідиною, що пов'язано з остаточним розплавленням ПЕО-1500.

Враховуючи отримані результати, можна зробити висновок, що температура приготування та дозування супозиторної маси повинна бути 45-460С. Саме в даному діапазоні температур супозиторна маса має достатню плинність, здатну забезпечити однорідність дозування та рівномірний розподіл ФГПП і олії обліпихової у препараті.

У зв'язку з тим, що температурний режим виробництва супозиторіїв є одним з критичних параметрів, нами для визначення його оптимального значення було проведено дослідження температури розкладання усіх компонентів препарату.

Ці дані дозволяють визначити відповідність теплових ефектів окремих складових тепловому ефекту суміші, що, в свою чергу, впливає на порядок введення діючих речовини до основи без небезпеки руйнування структури субстанцій та зміни фармакологічного ефекту лікарського засобу.

Рис. 5. Залежність структурної в'язкості супозиторної маси від температури.

Дериватограма супозиторіїв (рис. 6) показала повну ідентичність теплових ефектів окремих субстанцій, що свідчить про відсутність взаємодії між інгредієнтами і доводить, що супозиторії є механічною сумішшю вихідних компонентів вагінального лікарського засобу. Отримані дані були використані нами для обгрунтування послідовності і температури введення діючих речовин при розробці аптечної та промислової технології супозиторіїв «Феміпролен».



Рис. 6. Дериватограма супозиторіїв з ФГПП та олією обліпиховою.

Технологічна схема промислового виробництва супозиторіїв наведена на рис. 7, з якої видно, що технологічний процес складається із стадій допоміжних робіт, основного технологічного процесу та пакування готового продукту.

Вихідна сировина, проміжні продукти, матеріали		Виготовлення супозиторіїв		Контроль в процесі виробництва
ФГПП, ПЕО-400, ПЕО-1500, твін-80, олія обліпихи		Стадія 1 Зважування компонентів Ваги		Вхідний контроль, вага компонентів
		Стадія 2 Подрібнення ФГПП Шаровий млин		Ступінь подрібнення, вага
		Стадія 3 Приготування масляної фази Реактор		Температура приготування, швидкість перемішування, зовнішній вигляд, однорідність
Подрібнений ФГПП зі стадії 2 ПЕО-400, ПЕО-1500 зі стадії 1		Стадія 4 Приготування супозиторної маси Реактор		Температура приготування, швидкість і час перемішування, зовнішній вигляд, однорідність, кількісний вміст
		Пакування супозиторіїв
Супозиторна маса зі стадії 4, ПВХ плівка		Стадія 5 Розлив супозиторіїв Автоматична лінія розливу		Температура розливу, швидкість перемішування, температура склеювання та охолодження
Пачки, листки-вкладиші		Стадія 6 Упаковка супозиторіїв в пачки Автомат упаковки		Комплектність, печать, маркування
Коробки, групові етикетки		Стадія 7 Упаковка пачок в коробки Пакувальний стіл		Кількість пачок в коробці
		Готова продукція		Контроль готової продукції

Рис. 7. Технологічна схема виробництва супозиторіїв "Феміпролен".

У четвертому розділі наведені результати фізико-хімічних досліджень та розробки методик аналізу супозиторіїв «Феміпролен». Для ідентифікації фенольних сполук ФГПП та контролю взаємодії між компонентами в розробленому препараті нами була використана тривимірна флуоресцентна спектроскопія. На тривимірному спектрі флюоресценції супозиторіїв (рис. 8) добре помітний пік флюоресценції флавонів і флавонолів ФГПП в області em-400-450 нм (лexс-325-360 нм); слабкіший пік ФГПП в області лem-550-580 нм (лexс-500-530 нм) маскується сильнішою флюоресценцією компонентів в інших областях спектру. Точки максимумів спектру супозиторіїв відповідають точкам максимумів спектрів окремих компонентів, що побічно свідчить про відсутність хімічної взаємодії між компонентами.

Рис. 8. Тривимірний спектр флюоресценції супозиторіїв з ФГПП та олією обліпиховою.

Таким чином, 3-DF-спектроскопія підтвердила відсутність хімічної взаємодії між окремими компонентами супозиторіїв «Феміпролен». Індивідуальний характер 3-DF-спектрів біологічно активних речовин ФГПП і олії обліпихової дозволяє використовувати їх як додатковий метод ідентифікації.

З метою розробки методики кількісного визначення діючих речовин у супозиторіях «Феміпролен» були зняті УФ-спектри поглинання розчинів субстанції ФГПП та олії обліпихової. Методику кількісного визначення суми фенольних сполук у супозиторіях «Феміпролен» було розроблено з використанням методу прямої УФ-спектрофотометрії за довжини хвилі 290±2 нм. Як розчин порівняння використовували 95% спирт, за зовнішній стандарт слугував розчин калію дихромату. Було досліджено вплив основи та інших речовин, які входять до складу супозиторіїв на спектр поглинання суми фенольних сполук. Показано, що речовини, які входять до складу супозиторіїв, на спектр поглинання не впливають.

Визначення кількісного вмісту каротиноїдів у супозиторіях засновано на методі абсорбційної спектрофотометрії за довжини хвилі 450±2 нм. Як зовнішній стандарт використовували розчин калію дихромату, як розчинник - гексан : спирт (1:1).

До проекту АНД на препарат нами були включені розділи: опис, ідентифікація, рН, однорідність, маса супозиторіїв, однорідність дозування, час розчинення, мікробіологічна чистота, кількісне визначення, пакування, маркування, зберігання (табл. 4).

З метою вивчення стабільності, супозиторії «Феміпролен» були закладені на зберігання при температурі 15-25 єС та 8-15 єС протягом 2 років 3 міс. у контурних чарункових упаковках з плівки полівінілхлоридної марки ЕП-37С.

Встановлено, що впродовж періоду спостереження препарат відповідав вимогам проекту АНД та ДФУ за всіма показниками якості. Коливання кількісного вмісту діючих речовин (фенольних сполук та каротиноїдів) відбувалось в межах помилки спектрофотометричного методу.

Таблиця 4.

Фізико-хімічні показники якості вагінальних супозиторіїв «Феміпролен»

Показник якості	Вимоги проекту АНД	Результати аналізу
Опис	супозиторії коричневого кольору, торпедоподібної форми	супозиторії коричневого кольору, торпедоподібної форми
Ідентифікація: -з розчином сурми хлориду -з розчином заліза (ІІІ) хлориду -з розчином калію фероціаніду	з'являється: зелено-синє забарвлення буро-зелене забарвлення утворюється зеленуватий осад	з'являється: зелено-синє забарвлення буро-зелене забарвлення утворюється зеленуватий осад
Однорідність	мають бути однорідними	однорідні
рН	від 5,0 до 7,0	5,40±0,05
Розчинення	Не більше 60 хв.	22 хв.
Мікробіологічна чистота	Бактерій і грибів не більше 102 ; Enter., Ps. auerug., St.aureus не допускається	Відповідає
Кількісне визначення: (в перерахунку на середню масу супозиторія) -сума фенольних сполук, % -сума каротиноїдів, мг%	не менше 0,023 не менше 0,135	0,029 0,162

Якість супозиторіїв «Феміпролен» залишалась стабільною з урахуванням усіх досліджуваних факторів протягом 2-х років 3 міс при зберіганні в сухому місці при температурі 8-15 єС , що дає можливість встановити строк зберігання - 2 роки.

У п'ятому розділі наведені доклінічні дослідження специфічної активності супозиторіїв «Феміпролен», які були проведені на базі кафедри фізіології НФаУ під керівництвом проф. Малоштан Л.М. та ЦНДЛ під керівництвом проф. Яковлєвої Л.В. Дослідження протизапальної активності на моделі карагенінового набряку у щурів дозволили обґрунтувати концентрації діючих речовин супозиторіїв. Була також доведена виражена протизапальна та репаративна дія розробленої вагінальної лікарської форми на моделі формалінового вагініту.

ВИСНОВКИ

1. Вперше науково обґрунтовано і розроблено склад, технологію, методики контролю якості супозиторіїв з фенольним гідрофобним препаратом прополісу і олією обліпиховою під умовною назвою «Феміпролен» для лікування запальних гінекологічних захворювань.

2. Технологічними, фізико-хімічними, біофармацевтичними та фармакологічними дослідженнями обгрунтовано склад супозиторіїв «Феміпролен»: ФГПП-0,05 г, олії обліпихової-0,05 г, твіну-80-0,08г, ПЕО-1500 та 400 (9:1) до одержання супозиторію масою 3,0 г. (подано заявку на патент № а 200711358 від 15.10.2007 р.). У запропонованих концентраціях доведено наявність синергідної дії між ФГПП та олією обліпиховою.

3. Доведено відсутність взаємодії між компонентами супозиторіїв за допомогою УФ-спектрофотометрії, 3-DF-спектроскопії, хроматографічного та термогравіметричного аналізу.

4. Вивчено мінеральний склад ФГПП, олії обліпихової окремо і у супозиторіях «Феміпролен». Виявлено 16 макро- й мікроелементів, що сприяють нормалізації обміну речовин, регуляції імунної системи та подоланню запального процесу.

5. Розроблено методики якісного та кількісного аналізу ФГПП та олії обліпихової, які введені до проекту АНД на супозиторії “Феміпролен”.

6. На підставі проведених реологічних і термогравіметричних досліджень розроблено раціональну технологію комбінованих вагінальних супозиторіїв, та проект промислового технологічного регламенту, який апробовано в умовах виробництва заводу «ЗАТ Лекхім-Харків» (акт апробаціі від 24.10.2007 р.).

7. Складено інформаційний лист «Технологія виготовлення супозиторіїв з прополісом та олією обліпиховою в умовах аптек» (№109-2007), який затверджено Укрмедпатентінформом та впроваджено у роботу аптек (акти впровадження від 20.09.2007 р.; 27.09.2007 р.; 04.10.2007 р.).

8. Експериментально доведено стабільність препарату «Феміпролен», встановлено термін та умови його зберігання - 2 роки у сухому місці при температурі 8-15 єС .

9. Біологічними дослідженнями встановлено протизапальну та репаративну дію розробленої вагінальної лікарської форми на моделі формалінового вагініту.

10. Фрагменти роботи впроваджено до навчального процесу ряду вищих навчальних закладів України (акти впровадження від 03.10.2007; 01.11.2007 р.; 05.11.2007 р.; 08.11.2007 р.).

Список опублікованих праць за темою дисертації

1. Мікробіологічне обґрунтування діючих речовин вагінальних супозиторіїв з фенольним гідрофобним препаратом прополісу та олією обліпиховою / Ю.В.Черних, О.І. Тихонов, І.Л. Дикий, Л.І. Щебликіна, Л.Ф. Сілаєва // Вісник фармації. - 2005. - № 1 (41) - С. 31-34. (Особистий внесок: планування експерименту, виготовлення зразків, експериментальна частина досліджень та узагальнення експериментальних даних, підготовка статті).

2. Черних Ю.В. Вивчення мінерального складу фенольного гідрофобного препарату прополісу та олії обліпихи / Ю.В. Черних, О.І. Тихонов, Л.І. Щебликіна // Актуальні питання фармацевтичної та медичної науки та практики: зб. наук. ст.- Запоріжжя: Вид-во ЗДМУ, 2006. - Вип. XV, Т. 1. - С. 129-132. (Особистий внесок дисертанта: планування експерименту, виготовлення зразків, підготовка статті).

3. Тихонов О.І. Біофармацевтичні та реологічні дослідження вагінальних супозиторіїв «Феміпролен» / О.І. Тихонов, Ю.В. Черних // Вісник фармації. -2007. - № 3 (51) - С. 24-26. (Особистий внесок: участь у дослідженні, виготовлення експериментальних зразків, підготовка статті).

4. Тихонов О.І. Технологія та стандартизація вагінальних супозиторіїв «Феміпролен» / О.І. Тихонов, Ю.В. Черних // Фармац. журн. - 2007. - № 6. - С. 75-79. (Особистий внесок: планування експерименту, виготовлення зразків, узагальнення даних дослідження, підготовка статті).

5. Черних Ю.В. Перспективи створення вагінальних супозиторіїв на основі прополісу / Ю.В. Черних, О.І.Тихонов, Л.І. Щебликіна // Апітерапія: погляд у майбутнє: матеріали ІІ з`їзду апітерапевтів України. - Х.: Вид-во НФаУ: Золоті сторінки, 2002. - С. 156-160. (Особистий внесок: аналіз даних щодо застосування продуктів бджільництва у медичній практиці, визначення перспективних напрямків створення вагінальних супозиторіїв для місцевого лікування запальних захворювань у гінекології , підготовка статті).

6. Черних Ю.В. Біофармацевтичне обгрунтування носія вагінальної лікарської форми / Ю.В. Черних, О.І. Тихонов, Л.І. Щебликіна // Апітерапія: досягнення та перспективи розвитку: матеріали ІІІ з'їзду апітерапевтів України, 28-30 верес. 2006 р. - Х.: Вид-во НФаУ: Золоті сторінки, 2006. - С. 38-43. (Особистий внесок: планування експерименту, виготовлення зразків, участь у дослідженні, узагальнення даних експерименту, підготовка статті).

7. К вопросу стандартизации суппозиториев на основе субстанций продуктов пчеловодства / А.И. Тихонов, Т.Г. Ярных, Л.И. Щеблыкина, В.К. Яковенко, Ю.В. Черных // Успехи современной апитерапии: материалы IV Междунар. (XII Всероссийской) науч.-практ. конф., г. Рыбное, Рязанская обл., 25-27 мая 2006 г.- Рыбное, 2006. - С. 221-225. (Особистий внесок: участь у дослідженні, підготовка статті).

8. Тихонов О.І. Сучасні методи фармакотерапії запальних гінекологічних захворювань / О.І. Тихонов, Ю.В. Черних // Сучасні проблеми екстемпоральної рецептури: матеріали наук.-практ. конф., Харків, 27-28 верес. 2007 р. - Х.: Вид-во НФаУ, 2007. - С. 216-220. (Особистий внесок: аналіз екстемпоральної рецептури супозиторіїв, підготовка статті).

9. Using three-dimensional fluorescent spectroscopy in the drug analysis on the basis of apiculture products / A.M. Kotenko, A.I. Tikhonov, Yu.V. Chernykh, O.S. Shpichak, L.I. Tscheblykina // Pharmacia. - 2007 - Vol. LIV, 3-4th issue. - P. 3-9. (Особистий внесок: планування експерименту, виготовлення зразків, узагальнення даних дослідження, підготовка статті).

10. Tikhonov A.I., Chernykh Y.V., Scheblykina L.I. The perspectives of vaginal medicines creation on the basis of propolis for treating of infectious and inflammatory diseases in gynaecology // Materialy z konferencij XL Naukowa konferencja pszczelarska, Pulawy, 11-12 marca 2003 r. - Р. 137.

11. Технологія виготовлення супозиторіїв з прополісом та олією обліпиховою в умовах аптек: інформ. лист / О.І. Тихонов, Ю.В. Черних.- К., 2007.- № 109.- 4с. (протокол № 47 від 20.06.2007р.).

12. Черних Ю.В. Перспективи створення вагінальних препаратів на основі прополісу для лікування інфекційно-запальних захворювань у гінекології / Ю.В. Черних, О.І. Тихонов, Л.І. Щебликіна // Тез. доп. міжвуз. наук. студ. конф., 17-18 квіт. 2003 р. - Х.: Вид-во НФаУ, 2003. - С. 123.

13. Черних Ю.В. Розробка вагінальних супозиторіїв на основі природних продуктів / Ю.В. Черних, О.І. Тихонов, Л.І. Щебликіна // Тез. доп. міжвуз. наук. студ. конф., 13-14 квіт. 2004 р. - Х.: Вид-во НФаУ, 2004. - С. 131.

14. Тихонов О.І. Створення вагінальної лікарської форми з фенольним гідрофобним препаратом прополісу та олією обліпиховою / О.І. Тихонов, Ю.В. Черних, Л.І. Щебликіна // Досягнення та перспективи розвитку фармацевтичної галузі України: матеріали VI Нац. з'їзду фармац. України, м. Харків, 28-30 верес. 2005 р.Ї Х., 2005.Ї С. 296-297.

15. Черних Ю.В. Перспективи створення вагінальних супозиторіїв для місцевого лікування інфекційно-запальних гінекологічних захворювань / Ю.В. Черних, О.І. Тихонов, Л.І. Щебликіна // Український медичний альманах. - 2005. - Т. 8., № 6. - С. 231.

16. Черных Ю.В. Разработка лекарственной формы для лечения воспалительных заболеваний в гинекологии / Ю.В. Черных, А.И. Тихонов, Л.И. Щеблыкина // Лекарства-человеку. Современные проблемы создания, исследования и апробации лекарственных средств: материалы конф., 23 марта 2006 г. - Х.: Изд-во НФаУ, 2006. - С. 131.

17. Черних Ю.В. Дослідження мікроелементного складу діючих субстанцій вагінальної лікарської форми / Ю.В. Черних // Тез. доп. ІІІ міжнар. мед.-фармац. конф., 3-5 квіт. 2006 р.- Чернівці, 2006. - С. 236.

18. Визначення цитотоксичності діючих субстанцій при розробці складу вагінальних супозиторіїв / Ю.В. Черних, О.І. Тихонов, Л.М. Малоштан, В.М. Маркова, Л.І. Щебликіна, // Український вісник психоневрології. - 2006.- Т. 14., Вип. 2 (47). - С. 173-174.

19. Черних Ю.В. Дослідження протизапальної активності діючих субстанцій вагінальних супозиторіїв / Юлія Черних, Олександр Тихонов, Людмила Шульга, Віра Уланова // Матеріали ХІ Ювілейного міжнародного медичного конгресу студентів і молодих вчених, 10-12 трав. 2007 р. - Тернопіль: Укрмедкнига, 2007. - С. 278.

Анотація

вагінальний гінекологічний захворювання супозиторій

Черних Ю.В. Розробка складу та технології вагінальних супозиторіїв з прополісом та олією обліпиховою. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата фармацевтичних наук за спеціальністю 15.00.01 технологія ліків та організація фармацевтичної справи - Національна медична академія післядипломної освіти імені П.Л. Шупика, Київ, 2008.

Розроблено науково-методичний підхід до створення вагінальних лікарських форм, що містять природні субстанції, та доведено доцільність створення комбінованих супозиторіїв на основі фенольного гідрофобного препарату прополісу та олії обліпихової для лікування запальних гінекологічних захворювань. Визначено вплив допоміжних речовин на структурно-механічні властивості супозиторіїв та вивільнення з них діючих речовин. Досліджено фізико-хімічні властивості запропонованого препарату, його стабільність у процесі зберігання, специфічну активність та нешкідливість.

На підставі фізико-хімічних, біофармацевтичних, реологічних і біологічних досліджень теоретично та експериментально обгрунтовано склад і розроблено раціональну технологію супозиторіїв під умовною назвою "Феміпролен" з антимікробною, репаративною та протизапальною дією.

Ключові слова: вагінальні супозиторії, запальні гінекологічні захворювання, фенольний гідрофобний препарат прополісу, олія обліпихова, концентрат олії обліпихової, допоміжні речовини, технологія.

Черных Ю.В. Разработка состава и технологии вагинальных суппозиториев с прополисом и маслом облепиховым. - Рукопись.

Диссертация на соискание научной степени кандидата фармацевтических наук по специальности 15.00.01 технология лекарств и организация фармацевтического дела - Национальная медицинская академия последипломного образования имени П.Л. Шупика, Киев, 2008.

Разработан научно-методический подход к созданию вагинальных лекарственных форм, которые содержат природные субстанции, и доказана целесообразность создания комбинированных суппозиториев на основе ФГПП и масла облепихового для лечения воспалительных гинекологических заболеваний.

С целью определения концентраций действующих субстанций: ФГПП и масла облепихового были проведены микробиологические и фармакологические иссследования. Доказано наличие синергидного действия между ФГПП и маслом облепиховым. Соотношение действующих веществ: ФГПП - 0,05 г и масла облепихового 0,05 г было выбрано как оптимальное.

Для обоснования выбора основы суппозиториев были проведены биофармацевтические и микробиологические исследования, которые показали преимущество полиэтиленоксидной основы в соотношении ПЭО 1500 к ПЭО 400 как 9:1.

Для получения необходимого терапевтического эффекта препарата в форме суппозиториев важное значение имеет выбор ПАВ. С целью оптимизации состава суппозиториев добавляли твин-80 и ПЭГ-40 в количестве до 3%. Согласно полученным данным высвобождение фенольных соединений ФГПП из суппозиториев на гидрофильной основе с твином-80 в 1,3 раза превышает высвобождение фенольных соединений из суппозиториев на гидрофильной основе с ПЭГ-40.

На основании проведенных микробиологических, биофармацевтических и фамакологических исследований, был обоснован состав суппозиториев «Фемипролен»: ФГПП - 0,05 г, масла облепихового - 0,05 г, твина-80 - 0,08 г, суппозиторной основы ПЭО 1500:ПЭО 400 (9:1) - до получения суппозитория массой 3,0 г. С целью разработки рациональной технологии суппозиториев «Фемипролен», нами были проведены реологические исследования, которые позволили установить оптимальные температурные режимы для приготовления суппозиторной массы (45-50 єС) и растворения действующих веществ в основе, гомогенизации и розлива суппозиториев в формы (50-55 С). Именно в данном диапазоне температур суппозиторная масса имеет достаточную текучесть, способную обеспечить однородность дозирования и равномерное распределение ФГПП и масла облепихового в препарате. На основании полученных данных разработана технологическая и аппаратурная схемы промышленного производства суппозиториев, которые легли в основу проекта технологического промышленного регламента на производство суппозиториев «Фемипролен».

Проведено исследование минерального состава ФГПП, масла облепихового отдельно и в самом препарате, в ходе которого установлено наличие 16 эссенциальных макро- и микроэлементов. Изучение фармакокинетики показало, что суппозитории «Фемипролен» проявляют незначительную системную биодоступность. Данный факт позволяет сделать предположение о возможном проявлении фармакологической активности макро- и микроэлементов, входящих в состав препарата.

С помощью УФ-спектрофотометрии, 3-DF-спектроскопии, хроматографического и термогравиметрического анализа доказано отсутствие взаимодействия между компонентами суппозиториев.

Разработаны методики качественного и количественного определения действующих веществ суппозиториев, включенные в проект АНД.

Изучена стабильность разработанного препарата и установлен срок хранения - 2 года в сухом месте при температуре 8-15 єС .

Экспериментальные исследования на модели формалинового вагинита показали выраженную противовоспалительную и репаративную активность вагинальных суппозиториев «Фемипролен».

Ключевые слова: вагинальные суппозитории, воспалительные гинекологические заболевания, фенольный гидрофобный препарат прополиса, масло облепиховое, концентрат масла облепихового, вспомогательные вещества, технология.

Chernykh Y.V. Development of the composition and technology of vaginal suppositories with propolis and oil Hippophae. - A manuscript.

A thesis for the Candidate of Pharmacy Degree in speciality 15.00.01 Technology of drugs and Organization of Pharmacy - National Medical Academy of Postgraduate Education named by P.L. Shupik, Kiev, 2008.

Scientific-methodical approach for vaginal medicinal forms creation, which contains natural substances, has been developed, and expediency of combined suppositories creation on the basis of phenolic hydrophobic drug of propolis and oil Hippophae for the application in treatment of inflammatory gynecologic diseases has been proved. The influence of auxiliary substances on the structural and mechanical properties of suppositories and release of active substances from them has been determined. The physical-chemical properties of suggested preparation, its stability, specific activity and harmlessness have been studied.

On the basis of physical-chemical, biopharmaceutical, rheological and biological studies, the composition has been theoretically and experimentally grounded, and rational technology of suppositories under the cod name «Femiprolenum» with antimicrobial, reparative and anti-inflammatory action has been developed.

Key words: vaginal suppositories, inflammatory gynecologic diseases, phenolic hydrophobic drug of propolis, oil Hippophae, concentrate of oil Hippophae, additives, technology.

Размещено на Allbest.ru