Рассмотрим для примера фармакопейный анализ таких гипотензивных средств как резерпин, гидралазина гидрохлорид, метилдофа и натрия нитропруссид.

6.1 Резерпин (Reserpinum)

Подлинность

Можно применять либо только испытание А, либо испытания Б и В.

А. Проводят спектрофотометрическое определение в инфракрасной области спектра. Инфракрасный спектр соответствует спектру, полученному со стандартным образцом резерпина, или спектру сравнения резерпина [25].

Б. К 1 мг препарата прибавляют 0,2 мл свежеприготовленного раствора ванилина (10 г/л) в соляной кислоте (~250 г/л) с концентрацией 10 г/л; примерно через 2 мин появляется розовое окрашивание.

В. Смешивают 0,5 мг препарата с 5 мг 4-диметиламинобензальдегида и 0,2 мл ледяной уксусной кислоты и прибавляют 0,2 мл серной кислоты (~1760 г/л); появляется зеленое окрашивание. Прибавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты; окрашивание переходит в красное.

Удельное оптическое вращение. Используют раствор препарата в хлороформе с концентрацией 10 мг/мл; [б]DІє = от -113 до -127°.

Сульфатная зола. Не более 1,0 мг/г.

Потеря при высушивании. Высушивают до постоянной массы при 60 °С при пониженном давлении (непревышающем 0,6 кПа, или около 5 мм рт. ст.); потеря составляет не более 10 мг/г.

Продукты окисления. Измеряют поглощение раствора препарата в ледяной уксусной кислоте с концентрацией 0,2 мг/мл в кювете с толщиной слоя 1 см при максимуме 388 нм; поглощение составляет не более 0,10 (для измерения предпочтительно использовать кювету с толщиной слоя 2 см и сделать пересчет на поглощение в кювете с толщиной слоя 1 см).

Количественное определение

Во время количественного определения растворы следует защищать от действия воздуха и света.

Смачивают около 25 мг препарата (точная навеска) 2 мл этанола (~750 г г/л), прибавляют 2 мл серной кислоты (0,25 моль/л) и 10 мл этанола (~750 г/л) и слегка нагревают для получения раствора. Охлаждают, разводят до 100,0 мл этанолом (~750 г/л) и разводят 5,0 мл этого раствора до 50,0 мл тем же растворителем. Переносят 10,0 мл полученного раствора в пробирку для кипячения, прибавляют 2,0 мл серной кислоты (0,25 моль/л) и 2,0 мл свежеприготовленного раствора нитрита натрия (3 г/л), перемешивают и нагревают на водяной бане при 55 °С в течение 30 мин. Охлаждают, прибавляют 1 мл свежеприготовленного раствора сульфаминовой кислоты (50 г/л) и разводят до 25,0 мл этанолом (~750 г/л). Измеряют поглощение полученного раствора в кювете с толщиной слоя 1 см при максимуме 390 нм против контрольной кюветы, содержащей раствор, приготовленный аналогичной обработкой 10,0 мл того же раствора, но без добавления нитрита натрия. Рассчитывают содержание C33H40N2O9 в испытуемом веществе путем сравнения со стандартным образцом резерпина, который исследуют одновременно аналогичным образом. Поглощение раствора стандартного образца в правильно откалиброванном спектрофотометре должно составлять 0,24 ± 0,01 (для измерения предпочтительно использовать кювету с толщиной слоя 2 см и сделать пересчет на поглощение в кювете с толщиной слоя 1 см).

6.2 Гидралазина гидрохлорид (Hydralazini hydrochloridum)

Подлинность

А. Спектр поглощения раствора испытуемого вещества с концентрацией 10 мкг/мл при наблюдении между 220 и 350 нм, дает максимумы при длинах волн 240, 260, 303 и 315 нм; поглощения в кюветах с толщиной слоя 1 см при этих длинах волн составляют соответственно 0,58, 0,54, 0,27 и 0,21.

Б. Растворяют 0,5 г испытуемого вещества в смеси 100 мл воды и 8 мл соляной кислоты (~70 г/л), добавляют 20 мл раствора нитрата натрия (10 г/л), оставляют на 10 минут и фильтруют. Промывают остаток водой и высушивают при 105 °С; температура плавления около 210°С.

В. Раствор испытуемого вещества с концентрацией 20 мг/мл дает характерную для хлоридов реакцию.

Готовят раствор вещества, как указано в частной статье, подкисляют азотной кислотой (~130 г/л) и прибавляют раствор нитрата серебра (40 г/л); образуется белый творожистый осадок, растворимый в аммиаке (~100 г/л), но практически нерастворимый в азотной кислоте (~1000 г/л) [24].

Вещества, нерастворимые в воде. Помещают 2,0 г испытуемого вещества в коническую колбу объемом 250 мл, добавляют 100 мл воды и встряхивают с помощью механического устройства в течение 30 мин. Фильтруют раствор через предварительно взвешенную воронку со стеклянным фильтром, промывают колбу и смывают нерастворенный остаток в воронку. Промывают остаток тремя порциями воды, по 10 мл каждая, высушивают 3 ч при 105°С, охлаждают и взвешивают; масса остатка не более 10 мг (5 мг/г) [25].

Сульфатная зола. Не более 1,0 мг/г.

Потеря при высушивании. Высушивают при комнатной температуре и пониженном давлении (не выше 0,6 кПа или около 5 мм рт. ст.) над пентоксидом фосфора в течение 8 ч; потеря не более 5,0 мг/г.

Посторонние примеси. Проводят испытание методом тонкослойной хроматографии, используя в качестве сорбента силикагель. Для приготовления подвижной фазы встряхивают смесь 2 объемов этилацетата, 2 объемов аммиака (~260 г/л) и 8 объемов гексана, дают слоям разделиться и используют верхний слой. Для приготовления испытательного раствора растворяют 0,10 г испытуемого вещества в смеси 100 объемов метанола и 1 объема соляной кислоты (~420 г/л) и разводят до 20 мл той же смесью растворителей; к 2,0 мл раствора добавляют 1,0 мл салицилальдегида, центрифугируют и сливают надосадочную жидкость (раствор А). Для приготовления раствора сравнения растворяют 25,0 мг гидразина сульфата в 10 мл воды и разводят до 100 мл смесью 1 объема соляной кислоты (~420 г/л) и 100 объемов метанола; разводят 1,0 мл полученного раствора до 100 мл той же смесью растворителей. К 2,0 мл этого раствора добавляют 1,0 мл салицилальдегида, центрифугируют и сливают надосадочную жидкость (раствор Б). Наносят на пластинку отдельно по 40 мкл каждого из растворов А и Б. После извлечения пластинки из хроматографической камеры дают ей высохнуть на воздухе и опрыскивают ее 4-диметиламинобензальдегидом. Оценивают хроматограмму в ультрафиолетовом свете (254 нм). Любое пятно, которое даст раствор А, кроме основного пятна, не должно быть более интенсивным, чем пятно, которое дает раствор Б.

Количественное определение

Растворяют около 0,15 г испытуемого вещества (точная навеска) в 25 мл воды, добавляют 25 мл соляной кислоты (~420 г/л), охлаждают до комнатной температуры и добавляют 5 мл хлороформа и титруют раствором йодата калия (0,05 моль/л), постоянно встряхивая, пока не исчезнет лиловая окраска йода в хлороформном слое. Конечное значение считается достигнутым тогда, когда хлороформный слой остается бесцветным по крайней мере в течение 5 мин. Каждый миллилитр раствора йодата калия (0,05 моль/л) соответствует 9,832 мг С8Н8N4*НСl.

6.3 Метилдопа (Methyldopum)

Подлинность

Можно применять либо только испытание А, либо испытания Б и В.

А. Проводят спектрофотометрическое определение в инфракрасной области спектра. Инфракрасный спектр соответствует спектру, полученному со стандартным образцом метилдопы, или спектру сравнения метилдопы.

Б. Проводят испытание методом тонкослойной хроматографии, используя в качестве адсорбента целлюлозу, а в качестве подвижной фазы смесь 50 объемов 1-бутанола, 25 объемов ледяной уксусной кислоты и 25 объемов воды. Наносят отдельно на пластинку по 5 мкл каждого из двух растворов в соляной кислоте (1 моль/л), содержащих: (А) 10 мг испытуемого вещества в 1 мл и (Б) 10 мг стандартного образца метилдопы в 1 мл. Вынимают пластинку из хроматографической камеры, высушивают ее в потоке теплого воздуха, опрыскивают свежеприготовленным раствором, состоящим из 2 объемов раствора хлорида железа (III) (25 г/л) и 1 объема раствора феррицианида калия (50 г/л) и оценивают хроматограмму в дневном свете. Основное пятно, полученное с раствором А, соответствует по положению, внешнему виду и интенсивности пятну, полученному с раствором Б.

В. К 45 мг препарата прибавляют 1 мл воды, 1 мл пиридина и 5 мг 4-нитробензоилхлорида и нагревают до кипения. При встряхивании прибавляют 0,1 мл раствора карбоната натрия (200 г/л); появляется оранжевое или янтарное окрашивание.

Удельное оптическое вращение. Используют раствор препарата в растворе хлорида алюминия с концентрацией 44 мг/мл и пересчитывают результат на безводное вещество; [б]DІє = от -25 до - 28°.

Тяжелые металлы. Не более 10 мкг/г.

Испытание на тяжелые металлы предусмотрено для доказательства того, что содержание примесей металлов, окрашивающихся сероводородом, не превышает предел, указанный в частной статье и выраженный в микрограммах свинца на 1 грамм испытуемого вещества [24]

Реакцию с сероводородом проводят путем смешивания испытуемого раствора со свежеприготовленным раствором сероводорода. Сравнение интенсивности полученной таким образом окраски проводят, сравнивая окраску жидкости в подходящих сосудах для сравнения.

Чтобы приготовить исследуемый раствор, помещают навеску вещества (1,0 г) в подходящий тигель, предпочтительно кварцевый, и осторожно сжигают при низкой температуре до полного обугливания содержимого. Во время обугливания тигель может быть неплотно прикрыт крышкой. Прибавляют к содержимому тигля 2 мл азотной кислоты (~ 1000 г/л) и 5 капель серной кислоты (~1760 г/л) и осторожно нагревают до выделения белых паров, а затем сжигают, предпочтительно в муфельной печи, при температуре 500 °С до полного сгорания органического вещества. Охлаждают, прибавляют 2 мл соляной кислоты (~250 г/л) и медленно выпаривают на водяной бане досуха. Смачивают остаток 1 каплей соляной кислоты (~250 г/л), прибавляют 10 мл горячей воды и настаивают в течение 2 мин. Прибавляют по каплям аммиак (~100 г/л) Рb, пока рН раствора не достигнет 8 8,5, а затем по каплям прибавляют уксусную кислоту (~б0г/л) Рb до рН, равного 3 4. Фильтруют, если необходимо, промывают тигель и фильтр примерно 10 мл воды, разводят водой до 40 мл и перемешивают.

Сульфатная зола. Не более 1,0 мг/г [25].

Вода. Определяют количество воды методом Карла Фишера, используя около 0,2 г вещества; содержание воды не менее 100 и не более 130 мг/г.

Кислотность. Растворяют 1,0 г препарата в 100 мл воды, свободной от углекислоты, при нагревании и титруют раствором гидроокиси натрия (0,1 моль/л), используя в качестве индикатора раствор метилового красного в этаноле; для достижения средней точки перехода окраски индикатора (оранжевая) требуется не более 0,5 мл.

3-О-Метилпроизводное. Проводят испытание методом тонкослойной хроматографии, используя в качестве адсорбента целлюлозу, а в качестве подвижной фазы смесь 65 объемов 1-бутанола, 15 объемов ледяной уксусной кислоты и 25 объемов воды. Наносят отдельно на пластинку 10 мкл раствора испытуемого вещества в смеси 4 объемов соляной кислоты (250 г/л) и 96 объемов метанола с концентрацией 10 мг/мл (раствор А), 10 мкл раствора стандартного образца (-)-3-(4-окси-3-метоксифенил)-2-метилаланина с концентрацией 50 мкг/мл (раствор Б) и 20 мкл смеси равных объемов растворов А и Б (раствор В). Вынимают пластинку из хроматографической камеры, высушивают ее в токе теплого воздуха и опрыскивают смесью 5 объемов раствора нитрата натрия с концентрацией 0,05 г/мл и 45 объемов раствора 4-нитроанилина с концентрацией 3 мг/мл, растворенного в смеси 80 объемов соляной кислоты (~420 г/л) и 20 объемов воды. Высушивают в токе теплого воздуха, опрыскивают раствором карбоната натрия (75 г/л) и оценивают хроматограмму в дневном свете. Пятно, полученное с раствором Б, должно быть более интенсивным, чем любое пятно, соответствующее по положению и внешнему виду, полученное с раствором А. Испытание считают правильным только в том случае, если на хроматограмме, полученной с раствором В, видны два четко разделившихся пятна.

Количественное определение

Для анализа используется метод неводного титрования. Растворяют около 0,20 г препарата (точная навеска) в 20 мл ледяной уксусной кислоты, прибавляют 20 мл диоксана и титруют хлорной кислотой (0,1 моль/л). Окончание титрования определяют визуально с помощью индикатора кристаллического фиолетового или потенциометрически с помощью стеклянного насыщенного каломельного электродов. Каждый миллилитр хлорной кислоты (0,1 моль/л) соответствует 21,12 C10H13NO4 мг.

6.4 Натрия нитропруссид (Natrii nitroprussidum)

Подлинность

А. Спектр поглощения раствора испытуемого вещества с концентрацией 4,0 мг/мл при наблюдении между 350 и 600 нм дает максимум при длине волны около 395 нм; поглощение слоя в 1 см при этой длине волны около 1,10.

Б. Испытуемое вещество дает характерные для натрия реакции. Для реакции Б готовят раствор испытуемого вещества с концентрацией 0,10 г/мл, подкисленный уксусной кислотой (~300 г/л).

Б 1. Смачивают вещество соляной кислотой (~ 250 г/л); при внесении в бесцветное пламя полученный раствор окрашивает его в желтый цвет.

Б 2. Готовят раствор испытуемого вещества с концентрацией 0,10 г/мл, подкисленный уксусной кислотой (~300 г/л), фильтруют, если необходимо, и прибавляют раствор ацетата уранила-цинка; образуется желтый кристаллический осадок.

В. Растворяют 5 мг испытуемого вещества в 2,0 мл воды, добавляют 0,1 мл ацетона и 0,5 мл раствора гидроксида натрия (~80 г/л); появляется оранжевое окрашивание. Добавляют около 2 мл уксусной кислоты (~300 г/л); окрашивание становится лиловым.

Хлориды. Не более 0,2 мг/г.

Испытание проводят в подобранных для сравнения сосудах с плоским дном из прозрачного стекла емкостью около 70 мл и внутренним диаметром около 23 мм, имеющих отметки 45 и 50 мл. Для испытания пригодны цилиндры Несслера указанных выше размеров.

Растворяют 1,20 г испытуемого вещества в смеси 2 мл азотной кислоты (~130 г/л) и 30 мл воды; проводят определение, переносят в сосуд для сравнения, разводят водой до 50 мл и прибавляют 1 мл раствора нитрата серебра (40 г/л) ИР. Тотчас перемешивают стеклянной палочкой и оставляют стоять на 5 мин, защищая от прямого солнечного света. При рассмотрении сверху вниз по вертикальной оси в рассеянном свете на черном фоне опалесценция, появившаяся в испытуемом растворе, не должна быть интенсивнее опалесценции в стандартном растворе.

Для приготовления эталона отмеряют 5,0 мл соляной кислоты и 10 мл азотной кислоты (~130 г/л) в сосуд для сравнения. Доводят водой до 50 мл и прибавляют 1 мл раствора нитрата серебра (40 г/л). Тотчас перемешивают стеклянной палочкой и оставляют стоять на 5 мин, защищая от прямого солнечного света.

Сульфаты. Не более 0,1 мг/г.

Испытание на сульфаты предусмотрено для доказательства того, что содержание сульфатов не превышает предел, указанный в частной статье и выраженный в микрограммах сульфатов на 1 г испытуемого вещества.

Раствор, с которым проводится сравнение мутности, содержит на 480 мкг сульфат-ионов больше, чем стандартная суспензия сульфата бария.

Испытание проводят в подобранных для сравнения сосудах с плоским дном из прозрачного стекла емкостью около 70 мл и внутренним диаметром около 23 мм, имеющих отметки 45 и 50 мл. Для испытания пригодны цилиндры Несслера указанных выше размеров.

Растворяют 5,0 г испытуемого вещества в 40 мл воды и проводят определение, переносят в сосуд для сравнения, разводят водой до 45 мл и прибавляют 5 мл суспензии сульфата бария. Тотчас перемешивают стеклянной палочкой и оставляют стоять на 10 мин. При рассмотрении сверху вниз по вертикальной оси в рассеянном свете на черном фоне мутность, появившаяся в испытуемом растворе, не должна быть интенсивнее мутности в стандартном растворе.

Для приготовления стандартного раствора отмеряют 1,0 мл серной кислоты (0,005 моль/л) и 3 мл соляной кислоты (~70 г/л) в сосуд для сравнения. Разводят водой до 45 мл и прибавляют 5 мл суспензии сульфата бария. Тотчас перемешивают стеклянной палочкой и оставляют стоять на 10 мин.

Феррицианид. Растворяют 0,50 г испытуемого вещества в 20 мл аммиачно-ацетатного буферного раствора рН 4,62 ИР и разделяют раствор на две равные порции, А и Б. К порции Б добавляют 1 мл феррицианида стандарта (50 мкг/мл) ИР, затем к обеим порциям добавляют по 5 мл раствора железа (II) аммония сульфата (1 г/л) ИР и разводят до 50 мл водой. Готовят контрольный раствор путем растворения 0,25 г испытуемого вещества в 10 мл аммиачно-ацетатного буферного раствора рН 4,62 ИР и разведения до 50 мл водой. Оставляют на 1 ч и измеряют поглощения растворов при максимуме около 720 нм.

Поглощение порции А против контрольного раствора не должно превышать поглощения порции Б против порции А (0,2 мг/г).

Ферроцианид. Растворяют 2,0 г испытуемого вещества в 40 мл воды и разделяют раствор на две равные порции А и Б. К порции Б добавляют 2 мл ферроцианида стандарта (100 мкг/мл), затем добавляют к обеим порциям по 0,2 мл раствора хлорида железа (III) (50 г/л) и разводят до 50 мл водой. Оставляют на 5 мин. Готовят контрольный раствор, растворяя 1,0 г испытуемого вещества в достаточном для получения 50 мл раствора количестве воды. Измеряют поглощения растворов при максимуме около 695 нм. Поглощение порции А против контрольного раствора не должно превышать поглощения порции Б против порции А (0,2 мг/г).

Нерастворимое вещество. Растворяют 10,0 г испытуемого вещества в 50 мл воды, нагревают раствор 30 мин на водяной бане, фильтруют, промывают нерастворимое вещество водой и высушивают до постоянной массы при 105 °С; содержание нерастворимого вещества не более 0,1 мг/г.

Вода. Проводят определение воды методом Карла Фишера, используя около 1 г испытуемого вещества; содержание воды не менее 90 и не более 150 мг/г.

Количественное определение

Растворяют около 0,35 г испытуемого вещества (точная навеска) в 100 мл воды. Добавляют 0,1 мл серной кислоты (~100 г/л) и 20 мл этанола (~750 г/л). Титруют раствором нитрата серебра (0,1 моль/л), определяя конечное значение потенциометрически с использованием системы электродов серебро/серебра хлорид. Каждый миллилитр раствора нитрата серебра (0,1 моль/л) соответствует 13,10 Na2[Fe(CN)5NO] мг

Сводная таблица гипотензивных средств

Литература

1. Кухарчук В. В. Развитие отечественной кардиологии. // Журнал «Природа». Ї М.: Медицина, 2005. Ї № 10. Ї С. 16 21

2. Библиотечное дело: Энциклопедический словарь медицинских терминов / Сост. Петровский

3. Ранние симптомы поражения сердца у подростков с артериальной гипертензией / Студеникин М., Таранушенко Т., Емельянчик Е. и др. // Журнал «Врач». Ї М.:Издательский Дом «Русский Врач», 2003Ї № 3Ї С

4. Постнов А. Ю. О природе первичной гипертензии. // Журнал «Природа». Ї М.: Медицина, 2005. Ї № 10. Ї С. 28 30

5. http: // www.remedium.ru

6. Труднева О. В. Строение и функции сердца. // Журнал «Твоё Здоровье». Ї 2005. Ї № 2. Ї С. 26 29

7. Иллюстрированный атлас анатомии человека

8. Физиология человека: В 2-х т. / Покровский В. М., Коротько Г. Ф., Кобрин В. И. и др. / Под ред. В. М. Покровского. Ї М.: Медицина, 1997. Ї Т.1.Ї 448 с.

9. Граник В. Г. Основы медицинской химии. Ї М.: Вузовская книга, 2001. Ї384 с.

10. Пауков В. С., Хитров Н. К. Патология. Ї М.: Медицина, 1989.Ї352 с.

11. http: // www.cardiosite.ru

12. Мелентьева Г. А., Антонова Л. А. Фармацевтическая химия. Ї М.: Медицина, 1985. Ї 480 с.

13. Машковский М. Д. Лекарства XX века. Ї М.: ООО «Издательство Новая Волна», 1998. Ї 320 с.

14. Дроговоз С. М. Фармакология на ладонях. Ї Харьков: ООО «ПП «Плеяда», 2006. Ї 116 с.

15. Машковский М. Д. Лекарственные средства: В 2-х ч. / Медицина. Ї М., 1998. Ї Ч.1. Ї 736 с.

16. Нейрохимия / Ашмарин И. П., Антипенко А. Е., Ашапкин В. В. И др./ Под ред. И. П. Ашмарина. Ї М.: Изд. Института биомедицинской химии РАМН, 1996. Ї 470 с.

17. Южаков С. Д.,Глушков Р. Г., Машковский М. Д. Зависимость между структурой и действием в-адреноблокаторов. // Химико-фармацевтический журнал. Ї М: Медицина, 1991. Ї № 5. Ї С. 21 28

18. Ольбинская Л., Андрущишина Т. Клиническая эффективность и перспективы применения эпросартана (теветена). // Журнал «Врач». Ї М.: Издательский Дом «Русский Врач», 2003. Ї № 3. Ї С. 43 45

19. Яхонтов Л. Н., Глушков Р. Г. Синтетические лекарственные средства./ Под ред. А. Н. Натрадзе. Ї М.: Медицина, 1983. Ї 272 с.

20. Ягупольский Л. М., Фиалков Ю. А., Тарасова Е. В. Аналоги клофелина, содержащие дифторметоксильную группу. // Химико-фармацевтический журнал. Ї М: Медицина, 2006. Ї № 4. Ї С. 15 18

21. Синтез и фармакологическая активность некоторых 1-фенокси-3-аминопропанолов-2 / Глозман О. М., Орлова Э. К., Жмуренко Л. А. и др. // Химико-фармацевтический журнал. Ї М: Медицина, 1983. Ї № 7. Ї С. 791 796

22. Поиск в-адреноблокаторов длительного действия в ряду производных 4-оксииндола / Глушко Р. Г., Машковский М. Д., Суворов Н. Н. и др. // Химико-фармацевтический журнал. Ї М: Медицина, 1993 Ї № 8ЇС. 8 12

23. Державна Фармакопея України / Державне підприємство «Науково-експертний центр». Ї 1-е вид. Ї Харків: РІРЕГ, 2001. Ї 556 с.

24. Международная Фармакопея / Всемирная организация здравоохранения. Ї 3-е изд. Ї М.: Медицина, 1981. Ї Т.1: Общие методы анализа. Ї 242 с.

25. Международная Фармакопея / Всемирная организация здравоохранения. Ї 3-е изд. Ї М.: Медицина, 1983. Ї Т.2: Спецификации для контроля качества фармацевтических препаратов. Ї 364 с.

Размещено на Allbest.ru