Вирусные инфекции

Вирусы имеют только один тип нуклеиновой кислоты: ДНК или РНК.

Вирусы являются строгими облигатными внутриклеточными паразитами, т.к. они не воспроизводятся самостоятельно, а могут размножаться только внутри клетки хозяина, используя его белоксинтезирующую систему.

Вирусы имеют 2 формы: внеклеточная (вирион) и внутриклеточная (представлена ДНК или РНК вируса)

Вирусы обладают особым дизъюнктивным (разобщенным) способом репродукции.

Вирусы обладают свойством фильтруемости.

Отличаются от прокариотов патогенностью, специфичностью, иммуногенностью.

49. Убитые вакцины для профилактики вирусных инфекций

Убитые вакцины в качестве действующего начала включают убитые химическим или физическим методом вирусы (цельновирионные вакцины) или же извлеченные протективные антигены (субвирионные вакцины). Для инактивации вирусов применяют формальдегид, спирт, фенол, УФО и т.д.

Получают инактивированные вирусы путем выращивания в клеточных культурах, куриных эмбрионах, которые затем подвергают инактивации, разрушению, выделению антигенных комплексов, очистке, конструированию препарата. Дозируют вакцины в антигенных единицах.

Примерами убитых вирусных вакцин могут быть: гриппозная, против клещевого энцефалита. Используются для специфической профилактики вирусных инфекций.

50. Принцип постановки реакций ГА и РТГА

1. Реакцию гемагглютинации (РГА) применяют для обнаружения гумагглютинирующих вирусов в культуральной жидкости зараженной культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона. Концентрация вирусных частиц соответствует гемагглютинирующему титру (максимальное разведение вируссодержащей жидкости, вызывающее агглютинацию эритроцитов). РГА ставят в пробирках, на специальных полистироловых планшетах, в аппарате Такачи. Для постановки РГА к исследуемому материалу добавляют взвесь эритроцитов. В присутствие вирусов происходит агглютинация эритроцитов. Результаты реакции учитывают через 40 минут после оседания эритроцитов:

(+) - выраженная гемагглютинация-тонкая пленка склеившихся эритроцитов на дне пробирки, имеющая вид зонтика,

(-) - резко очерченный осадок эритроцитов.

РНГА - реакция, в которой антитела взаимодействуют с антигенами, предварительно адсорбированными на инертных частицах, в данном случае- на эритроцитах. Реакция основана на способности гемагглютинирующих вирусов склеивать эритроциты животных или человека. За агглютинацию отвечают поверхностные структуры вирусов-гемагглютинины гликопротеидной природы. Нагруженные антигеном эритроциты склеиваются в присутствии специфических антител к данному антигену и выпадают в осадок.

Постановка.

В лунках полистироловых планшетов готовят ряд последовательных разведений сыворотки. В предпоследнюю лунку вносят - 0,5 мл заведомо положительной сыворотки и в последнюю 0,5 мл физиологического раствора (контроли). Затем во все лунки добавляют по 0,1 мл разведенного эритроцитарного диагностикума, встряхивают и помещают в термостат на 2 часа при 37, 20 или 4 градусах - в зависимости от свойств изучаемого вируса.

Учет. Положительный результат: эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя клеток со складчатым или зазубренным краем (перевернутый зонтик). Отрицательный результат- оседают в виде пуговки или колечка.

2.РТГА: Принцип реакции основан на способности АТ связывать различные вирусы и нейтрализовать их, лишая возможности агглютинировать эритроциты. Визуально этот эффект и проявляется в "торможении" гемагглютинации. РТГА применяют при диагностике вирусных инфекций для выявления специфических антигемагглютининов и идентификации различных вирусов по их гемагглютининам, проявляющим свойства Аг.

Феномен РТГА проявляется образованием компактного осадка эритроцитов вместо зонтика гемагглютинации.

Постановка.

Реакцию проводят на полистироловых пластинах и оценивают по отсутствию склеивания эритроцитов, добавленных к смеси вируса и специфической сыворотки. Для удаления неспецифических ингибиторов гемагглютинации сыворотку обрабатывают ацетоном или др. веществами. В полистироловых пластинках готовят двукратные разведения сыворотки в ИХН и к каждому разведению добавляют равное количество вируссодержащей жидкости. Смесь инкубируют 30-60 мин, при 0, 4, 20, 37 градусах, в зависимости от типа вируса. Затем добавляют равный объем 0.5% взвесь эритроцитов. Смесь инкубируют 45 мин.

Титр сыворотки- её наибольшее разведение, которое тормозит гемагглютинацию.

Учет. Положительный результат: компактный диск- пуговка- отсутствие гемагглютинации, отрицательный результат: зонтик гемагглютинации.

51. Использование РСК при лабораторной диагностике вирусных инфекций

РСК в вирусологии используется для серодиагностики вирусных инфекций, а также для определения вирусспецифических антигенов в различных материалах, полученных от больных, т.е. для идентификации вирусов.

Для проведения РСК необходимо 2 системы: 1) АГ, АТ, комплемент, 2) эритроциты барана и гемолитическая сыворотка.

Специфическое взаимодействие АТ с АГ сопровождается связыванием комплемента. Гемолитическая система показывает фиксирован ли комплемент комплексом АГ-АТ. Разрушение эритроцитов гемолитической сывороткой происходит только в случае присоединения комплемента к гемолитической системе. Если АГ и АТ соответствуют друг другу, т.е. образовался иммунный комплекс, то комплемент связывается этим комплексом и гемолиза эритроцитов не происходит. Если же АТ и АГ не соответствуют друг другу, то не происходит образования иммунного комплекса, и, соответственно комплемент не связывается и оставаясь свободным он связывается с гемолитической системой, вызывая гемолиз эритроцитов.

Особенности РСК в вирусологии: осуществление связывания комплемента на холоде (+4гр.), а также включение дополнительного контроля с так называемым нормальным АГ (АГ из клеток, в котрых репродуцировался вирус)

Результат опыта оценивают, отмечая наличие или отсутствие гемолиза во всех пробирках. Реакцию считают положительной при полной задержке гемолиза, когда жидкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дно, отрицательной - при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно окрашена ("лаковая" кровь). Степень задержки гемолиза оценивают в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дне (++++, +++, ++, +).

52. Постановка реакции нейтрализации и цветной пробы

РН: основана на нейтрализации инфекционной активности вирусов при связывании со специфическими противовирусными антителами. РН используется для идентификации выделенных вирусов, т.е. для определения видовой и типовой принадлежности вируса.

Постановка: РН воспроизводится в чувствительных к вирусу живых системах.

Из вируссодержащего материала готовят серийные разведения, добавляют к ним специфическую сыворотку в разведении в соответствии с титром, указанным на этикетке ампулы. Смеси вирус-сыворотка инкубируют 30-60 мин. при 37 гр. Для обеспечения связывания АГ с АТ. Затем, смесью заражают культуру ткани, куриные эмбрионы, лабораторных животных. Контролем служит чувствительная система зараженных вирусом без сыворотки.

Учет. Положительный результат: нейтрализация ЦПД (отсутствие дегенеративных изменений) в культуре клеток, патологических изменений в куриных эмбрионах или организме животных. Отрицательный результат: наличие ЦПД, следовательно вирус не был нейтрализован.

Индекс нейтрализации-отношение титра вируса в контроле к титру вируса в опыте. Если ИН менее 10- реакция отрицательна, от 11-49- сомнительная, выше 50- положительная.

Вариант РН - подавление вирусного бляшкообразования под действием вирусспецифической антисыворотки. Постановка. К вируссодержащему материалу добавляют антисыворотку. Инкубация 30-60 мин. Затем смесь наносят на монослой чувствительных культур клеток. Затем покрывают тонким слоем агара. После инкубирования посевов в течение суток на поверхности агара появляются просветленные участки определенной формы (бляшки), представляющие собой участки погибших клеток в сплошном монослое культуры клеток. Титр вируса, установленный этим методом, выражают числом бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл.

Цветная проба- вариант РН. В результате жизнедеятельности клеток в питательной среде накапливаются кислые продукты. В результате цвет входящего в состав среды индикатора (фенолового красного) становится оранжевым. При заражении культуры клеток цитопатогенными вирусами метаболизм клеток подавляется, рН среды и ее цвет не изменяются, она остается красной.

Постановка. В пробирки вносят по 0,25 мл рабочего разведения вируса и соответствующего разведения сыворотки. Смесь выдерживают при комнатной температуре 30-60 мин., добавляют в пробирки по 0.25 мл клеточной суспензии, закрывают пробирки пробками. Термостат 6-8 дней при 37 гр. Учет рН 7.4 и выше - репродукция вируса, 7.2 и ниже - нейтрализация антителами.

Размещено на Allbest.ru