Методы стерилизации, используемые в фармации

Размещено на http://www.allbest.ru/

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«Курский государственный медицинский университет

Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Фармацевтический факультет

Кафедра фармацевтической технологии

Курсовая работа

Методы стерилизации, используемые в фармации

Содержание

Введение

1. Стерилизация. Определение. Обоснование необходимости стерилизации некоторых фармацевтических объектов

2. Методы стерилизации. Классификация

3. Характеристика физических методов стерилизации с указанием повреждающего агента, механизмы повреждения, режима стерилизации, аппаратуры

3.1 Термическая стерилизация

3.2 Радиационная стерилизация

3.3 Стерилизация фильтрованием

3.4 Стерилизация УФ-светом

4. Характеристика химических методов стерилизации

4.1 Газовая стерилизация

4.2 Стерилизация растворами

5. Стерильность. Методы определения

Заключение

Список литературы

Введение

Организм человека в процессе эволюции приспособился к защите от окружающей его микрофлоры. Наиболее важные органы и биологические жидкости организма (кровь, спинномозговая жидкость, мозг, сердце и др.) стерильны. Дыхательные пути, желудочно-кишечный тракт, слизистые, кожа, естественные отверстия обеспечены разнообразными системами, удаляющими микрофлору, не позволяющими ей развиваться или даже вызывающими ее гибель. В частности, при непрерывно протекающем шелушении кожи с ее поверхности вместе с эпидермисом удаляется микрофлора. Эпителий и слизь дыхательных путей задерживают проникновение микроорганизмов в альвеолы. Кислая среда желудка обусловливает гибель патогенной микрофлоры. Слезная жидкость, содержащая лизоцим и орошающая слизистую глаза, лизирует микроорганизмы.

Следует отметить, что все указанные механизмы защиты человека от проникновения и развития микрофлоры появляются в нем не сразу. В неонатальный период (до 2--3 недель со дня рождения) и в грудной период (до 12 месяцев) ребенок еще в значительной степени беззащитен от вредного воздействия многих внешних факторов, в том числе от микрофлоры. Детский организм постепенно приспосабливается к новым для него условиям внеутробной жизни и требует тщательного гигиенического ухода, защиты от микроорганизмов, в том числе при использовании различных лекарств.

Организм больного человека может быть резко ослаблен и в значительной степени лишен присущих ему защитных механизмов, в частности, при ряде глазных заболеваний, ахилии желудка и других патологиях.

С другой стороны, человек подвергается опасности инфицирования при введении лекарств с нарушением защитных барьеров -- прежде всего, при инъекциях, в особенности -- при введении растворов в кровяное русло, стерильные полости, а также лечении ранений, травм, обморожений и ожогов.

В указанных случаях использование загрязненных микрофлорой лекарств может привести к инфицированию больных, тяжелым заболеваниям или даже к смерти. Описаны случаи потери зрения вследствие применения лекарства, загрязненного Ps. aeruginosa, гибели сотен людей при использовании нестерильных инъекционных лекарств; заболеваний сальмонеллезом при приеме таблеток из экстракта щитовидной железы; тяжелых поражений кожи и слизистых при использовании мазей, обсемененных стафилококками, стрептококками и грибками.

Вторым аспектом опасности микробного загрязнения лекарств является воздействие микрофлоры на ингредиенты лекарства, разложение микроорганизмами действующих и вспомогательных веществ. Это приводит к потере их терапевтического эффекта, появлению неприятного запаха и вкуса, а в отдельных случаях -- к образованию токсичных продуктов. Микробы и продукты их жизнедеятельности, а также убитые микробные тела, содержащиеся в инфузионных растворах, при внутрисосудистых введениях приводят к тяжелым пирогенным реакциям.

Таким образом, микробная загрязненность лекарств несет в себе опасность как инфицирования больных, так и порчи лекарств с появлением нежелательных или даже токсичных свойств у последних.[2]

Целью моей курсовой работы явилось изучение литературных источников по вопросам методов стерилизации.

1. Стерилизация. Определение. Обоснование необходимости стерилизации некоторых фармацевтических объектов

Стерилизация (от лат. stzerilis бесплодный) полное уничтожение в том или ином объекте живых микроорганизмов и их спор- Стерилизация имеет большое значение при изготовлении всех лекарственных форм и особенно инъекционных. В данном случае следует стерилизовать посуду, вспомогательные материалы, растворители и готовый раствор. Таким образом, работа по изготовлению растворов для инъекций должна начинаться со стерилизации и стерилизацией заканчиваться. Стерилизация имеет большое значение при создании условий асептики, необходимой как при изготовлении лекарственных форм для инъекций, так и нестерильных лекарственных форм, о чем свидетельствуют приказы Минздрава СССР № 581 и № 582 от 30. 04. 85 г.

ГФ XI определяет стерилизацию как процесс умерщвления в объекте или удаления из него микроорганизмов всех видов, находящихся на всех стадиях развития. Статья «Стерилизация», включенная в ГФ XI, тщательно переработана по сравнению с аналогичной статьей ГФ X. в ее создании принимал и участие Всесоюзный научно--исследовательский институт фармации. Всесоюзный научно-исследовательский институт профилактической токсикологии и дезинфекции, научно--исследовательский институт биофизики и др. В статью не включены ненадежные методы стерилизации, такие, как кипячение в воде, текучепаровая, имевшие место в ГФ X.[5]

Сложность проблемы стерилизации заключается, с одной стороны, в высокой жизнеспособности и большом разнообразии микроорганизмов, с другой термолабильностью многих лекарственных

веществ и лекарственных форм (эмульсий, суспензий и др.) или невозможностью по ряду причин использования других методов стерилизации. Отсюда и сходят требования к методам стерилизации: сохранение свойств лекарственных форм и освобождение их от микроорганизмов. Методы стерилизации должны быть удобными для использования в условиях аптек, особенно аптек лечебно-профилактических учреждений, в рецептуре которых инъекционные растворы составляют до 60- 80%.

В технологии лекарственных форм используют разные методы стерилизации: термическую стерилизацию, стерилизацию фильтрованием, стерилизацию ультрафиолетовой радиацией; радиационную стерилизацию, химическую стерилизацию.

Надежность методов зависит от соблюдения режима стерилизации. [14]

2. Методы стерилизации. Классификация

В технологии лекарственных форм используют разные методы стерилизации;

2.1.Физические методы:

2.1.1.Термическая стерилизация: паровая и воздушная;

2.1.2.Радиационная стерилизация;

2.1.3.Стерилизация фильтрованием;

2.1 .4. Стерилизация УФ - светом;

2.2.Химические методы:

2.2.1. Газовая стерилизация;

2.2.2.Стерилизация растворами. [5, 11]

3. Характеристика физических методов стерилизации с указанием повреждающего агента, механизма повреждения, режима стерилизации, аппаратуры.

3.1 Термическая стерилизация

Воздушная стерилизация

Этот метод стерилизации осуществляется горячим воздухом в воздушных стерилизаторах при температуре 180--200°С. при этом погибают все формы микроорганизмов за счет пирогенетического разложения белковых веществ.

Для стерилизации воздушным методом в аптеках используют шкаф сушильно-стерилизационный марки ШСС-250 , стерилизатор сухожаровой СС-200, а также воздушные стерилизаторы с небольшим объемом стерилизационной камеры марки ВП-10, ГП-20 и ГГТ-40. В крупных больничных аптеках наиболее часто используют сушильно-стерилизационные шкафы ШСС-500 и ШСС-ЮООП и ШСС-500П и ШСС-ЮОП (проходного типа).

Шкафы ШСС имеют аналогичную конструкцию и отличаются емкостью стерилизационной камеры. ШСС-250 с прямоугольной стерилизационной камерой односторонний, ШСС-500П -- двусторонний (имеется и односторонний). В стерилизаторе предусмотрена принудительная циркуляция воздуха, имеется фильтр очистки воздуха.

Эффективность воздушной стерилизации зависит от температуры и времени. Равномерность прогрева объектов зависит от степени их теплопроводности и правильности расположения внутри стерилизационной камеры для обеспечения свободной циркуляции горячего воздуха. Стерилизуемые объекты должны быть расфасованы в соответствующую тару, плотно укупорены и свободно размещены в стерилизаторах, в связи с тем что воздух обладает невысокой теплопроводностью, прогрев стерилизуемых объектов происходит довольно медленно, поэтому загрузка должна производиться в не нагретые стерилизаторы или когда температура внутри них не превышает 60°С.

Время, рекомендуемое для стерилизации, должно отсчитываться с момента нагрева воздуха в стерилизаторе до температуры 180--200°С.

воздушный метод используют для стерилизации термостойких порошкообразных лекарственных веществ (натрия хлорида, цинка оксида, талька, глины белой и др.)

С целью равномерного прогрева толщина слоя порошков должна быть не более 6-- 7 см.

Предельная масса при надежной стерилизации не должна превышать 500 г.

Изделия из стекла, металла, силиконовой резины, фарфора, установки для стерилизации фильтрованием с фильтрами и приемники фильтрата стерилизуют при 1800С в течение 60 мин. Мелкие стеклянные и металлические предметы (воронки, пипетки и др.) помещают в стерилизаторы в специальных биксах. Растворы нельзя стерилизовать в воздушных стерилизаторах, так как из-за плохой теплопроводности воздух, имеющий температуру 100--120°С, не обеспечивает быстрый прогрев растворов до нужной температуры. Так. например, раствор натрия хлорида (объем 200 мл), помещенный в стерилизатор с температурой 1200С, через 1 ч прогревается всего лишь до 60°С. Горячий воздух более высокой температуры может вызвать разложение лекарственных веществ и разрыв флаконов вследствие разницы давления внутри и снаружи их.

Также в практике находят применение следующие физические методы стерилизации:

Прокаливание является одним из наиболее надежных видов стерилизации. Осуществляется в муфельных или тигельных печах нагреванием объекта до 500--800е или же его прокаливанием на голом огне. Применяется для стерилизации платиновых игл для шприцев, фарфоровых фильтров и других фарфоровых предметов. Стальные предметы стерилизовать этим способом не рекомендуется, так как они ржавеют и теряют закалку.

Стерилизация сухим жаром. Стерилизуемый объект нагревают в сушильном шкафу при температуре 180° в течение 20--40 мин или при 200° в течение 10--20 мин. Сухим жаром стерилизуют стеклянную и фарфоровую посуду, жиры, вазелин, глицерин, термоустойчивые порошки (каолин, стрептоцид, тальк, кальция сульфат, цинка окись и др.).

Воздушный метод стерилизации широко используют в аптеках. [13]

Паровая стерилизация

При этом методе стерилизации происходит комбинированное воздействие на микроорганизмы высокой температуры и влажности.

В настоящее время паровой метод стерилизации рекомендуется осуществлять насыщенным водяным паром, в двух режимах:

1. при избыточном давлении 0,11±0,02 МПа (1,1±0,2 кгс/см2), температура (120±2)°С;

2. при избыточном давлении 0,20±0,02 МПа (2,2±0,2 кгс/см"), температура (132±2)0С.

Насыщенный пар -- это пар, находящийся в состоянии равновесия с жидкостью, из которой он образуется. Признак насыщения пара -- строгая зависимость его температуры от давления. Стерилизацию паром под давлением проводят в паровых стерилизаторах различной конструкции.

По форме стерилизаторы паром под давлением делятся на цилиндрические и квадратные. Цилиндрические могут располагаться горизонтально и вертикально.

При проведении стерилизации в условиях аптек необходимо руководствоваться требованиями ГФ X (стр. 991) и инструкции, по изготовлению и хранению стерильных растворов в аптеках, утвержденной ГАПУ М3 СССР 29 октября 1969 года: а) Растворы для инъекций и глазные капли, в состав которых входят термоустойчивые вещества, дистиллированную воду и воду для инъекций

Объем раствора, мл	Время стерилизации, мин
до 100	8
101-500	12
501 -1000	15

При отсутствии автоклава допускается стерилизация текучим паром при 100°.

б) Растворы для инъекций и глазные капли, в состав которых входят термолабильные вещества, разлагающиеся при воздействии температуры 119--121°, следует стерилизовать паром при 0,5 атм

(110°) или текучим паром в автоклавах или аптечных стерилизаторах

в) Для стерилизации растворов и глазных капель, разлагающихся при нагревании, прибегают к тиндализации или бактериальной фильтрации их.

г) При приготовлении растворов из веществ, разлагающихся при стерилизации, препарат готовят асептически с прибавлением консервантов: 0,5% фенола или 0,3% трикрезола или на насыщенном растворе хлорбутанолгидрата. В этом случае такие препараты погружают в воду и нагревают при 80° в течение не менее 30 мин.

д) Растворы лекарственных веществ, которые не выдерживают тепловой обработки, должны изготовляться без тепловой стерилизации в асептических условиях. Водные растворы лекарственных веществ должны стерилизоваться во флаконах в объеме не более 1 л.

е) Жирные и минеральные масла, вазелин и ланолин следует стерилизовать горячим воздухом при 180 или 200° в сушильных шкафах в течение следующего времени

Масса	Температура	Время, мин
до 100 г	180е	200°	30	15
101-500 г	180°	200°	40	20
Масса	Температура	Время, мин
До 25 г	180°	200°	30	10
26-100	180°	200°	40	20
101-200	180°	200°	60	30

Выбор метода и продолжительность стерилизации зависят от объема пли массы стерилизуемого материала и его устойчивости к нагреванию. В результате стерилизации свойства стерилизуемых веществ не должны изменяться.

Стерилизация паром под давлением (автоклавирование). Осуществляется в различной конструкции автоклавах. Автоклав представляет собой герметически закрывающийся сосуд, состоящий из толстостенной стерилизационной камеры и кожуха. На автоклаве имеется предохранительный клапан, обеспечивающий выход пара при избыточном давлении, и манометр. При каждом автоклаве должны быть инструкция по его эксплуатации и уходу, а также паспорт котлонадзора.

Стерилизуемый объект помещают внутрь паровой камеры. Водяную камеру подвергают нагреванию. Вначале автоклав нагревают при открытом кране до тех пор, пока пар не пойдет сильной сплошной струей и не вытеснит находящийся в автоклаве воздух, который значительно снижает теплопроводность водяного пара (при содержании в водяном паре 5% воздуха она уменьшается на 50%). [5, 7]

Во время нагревания автоклава после закрывания крана необходимо следить за давлением, параллельно с возрастанием которого увеличивается температура пара.

Зависимость температуры насыщенного пара от давления:

Давление, кгс/см	Температура, °С
0,5 1 2 4	112,7 119,6 132,9 151,1

Стерилизатор состоит из 3 цилиндров:

Первый (наружный) цилиндр называется кожухом. Он предохраняет паровой котел стерилизатора от возможных механических повреждений, а обслуживающий персонал от ожогов, так как стенки водопаровой камеры имеют высокую температуру.

Второй (средний) цилиндр -- главная часть стерилизатора, называемая водопаровой камерой. Она изготовляется из высококачественной стали и предназначена для получения пара из воды.

Третий (внутренний) цилиндр называется стерилизационной камерой. Ее назначение -- вмещать стерилизуемый материал, ограждая его от воды. В верхней части стерилизационной камеры расположены отверстия для прохождения в нее пара. Кроме того, они служат сепаратором, отделяя пар от капель воды, чтобы стерилизуемый материал не увлажнялся (пар захватывает частички воды). Крышка с резиновой прокладкой и центральным затвором служит для того, чтобы наглухо закрывать водопаровую камеру. Через эту же крышку загружают стерилизуемый материал. Пар в стерилизационную камеру поступает из котелка (или из водопаровой камеры), имеющего внутри электронагревательный элемент. Заполняется камера водой дистиллированной через воронку. За наполнением воды в котелок следят по водомерному стеклу (устройство по принципу сообщающихся сосудов).

Стерилизаторы под давлением снабжены электроконтактным манометром, мановакуумметром, водоструйным эжектором, насосом и предохранительным электроконтактным манометром, мановакуумметром, водоструйным эжектором, насосом и предохранительным клапаном.

Электроконтактный манометр обеспечивает автоматическое поддержание заданного давления. Мэновакуумметр служит для контроля давления в стерилизационной камере. С помощью водоструйного эжектора достигается быстрый отсос пара после каждой стерилизации, создание вакуума в стерилизационной камере и сушка стерилизуемых материалов, что особенно важно при стерилизации бумаги (фильтры), ваты и др. Предохранительный клапан служит для предохранения стерилизатора от чрезмерного повышения давления пара в нем. Если давление пара выше разрешенного рабочего давления, то предохранительный клапан должен автоматически подниматься и выпускать часть лишнего пара и, следовательно, понижать давление.

Наиболее удобны паровые стерилизаторы, в которых автоматически поддерживается заданное давление и температура, а также предусмотрена возможность просушивания вспомогательного материала после стерилизации (вата, фильтровальная бумага, марля и т. п.).

В настоящее время широкое распространение получили стерилизаторы типа АВ-1, АВ-2, ВК-15 и ВК-30 (полуавтоматические), ГК-ЮО, ГП-280 (автоматический). В практике аптек лечебно-профилактических учреждений могут быть использованы также стерилизаторы типа: ГП-400 и ГПД-280 (автоматические), которые по устройству и принципу действия аналогичны стерилизатору ГП-280. В хозрасчетных аптеках I--III групп находят широкое применение горизонтальные паровые стерилизаторы ГК-ЮО, в сельских аптеках, не имеющих централизованного электроснабжения, -- ВКО-75, ВКО-50 и ВКО-16. Последние рассчитаны на использование источника нагрева. (ВК -- вертикальный круговой электрический, ГП -- горизонтальный прямоугольный электрический односторонний, ГПД -- горизонтальный прямоугольный электрический двусторонний. Цифры обозначают диаметр стерилизационной камеры (см).

Вертикальные паровые стерилизаторы ВК-15 и ВК-30 отличаются емкостью стерилизационной камеры. Стерилизационная и водопаровая камеры объединены в единую конструкцию, но разобщены функционально, в результате чего возможно перекрывать поступление пара в стерилизационную камеру во время загрузки, эжекции и разгрузки стерилизатора, а также автоматически поддерживать рабочее давление в водопаровой камере для выполнения последующей стерилизации. Обе камеры сделаны из нержавеющей стали. Максимальное давление пара в стерилизационной камере составляет 2,5 кгс/см.

В последние годы созданы новые паровые стерилизаторы с принудительным охлаждением стерилизуемых объектов: ГК-ЮО (горизонтальный круглый) и ГП-400 (горизонтальный прямоугольный). Горизонтальный паровой стерилизатор ГХ-ЮО рассчитан на работу при максимальном давлении пара 2 кгс/см. Основными частями его являются стерилизационная и водопаровая камеры, парообразователь с электронагревательными элементами, система воздушного противодавления, система принудительного охлаждения объектов стерилизации и сигнализации режима стерилизации.

Новые стерилизаторы позволяют резко сократить время воздействия повышенной температуры на лекарственное вещество за счет принудительного охлаждения. В результате этого сохраняется химическая устойчивость растворов. Стерилизатор паровой ГП-400 (представляет собой прямоугольный шкаф, в нижней части которого размещен котел-парообразователь, в верхней -- горизонтально расположенная стерилизационная камера с дверцей, закрывающейся центральным затвором от штурвала. Управление осуществляется от выносного электрощита, соединенного со стерилизатором кабелем. Максимальное давление в рабочей камере 2 кгс/см.

Стерилизацию текучим паром проводят в стерилизаторах, представляющих собой металлические сосуды цилиндрической формы, закрывающиеся крышкой с двумя отверстиями -- для термометра и выхода пара. На дно сосуда наливают воду, поверх которой находится металлическая подставка с отверстиями. Иногда аппарат снабжается двойными стенками, и пар, выходя из паровой камеры, направляется в промежуток между стенками. Такая конструкция обеспечивает сохранение постоянства температуры при стерилизации.

Стерилизацию раствора текучим паром проводят в стерилизаторах ВКО-16, ВК-75, ВКО-75.(ВК -- вертикальный круглый электрический; ВКО - огневой.) Для этой цели стрелки контактного манометра устанавливают на 0,1 кгс/см", чтобы иметь возможность по звуковому сигналу отключения и включения стерилизатора (щелканию) контролировать начало кипения воды в водопаровой камере (когда стерилизатор подсоединен к водопроводной сети), так как контроль начала кипения воды по выходу пара в этом случае бывает затруднен. После доведения давления внутри водопаровой камеры стерилизатора до заданного открывается вентиль на трубе между источником пара и стерилизационной камерой, в которую впускается пар. Одновременно открывается вентиль для выпуска воздуха и конденсата из стерилизационной камеры. Для полного удаления воздуха из стерилизационной камеры выпуск пара в канализацию при открытых кранах необходимо проводить в течение 15 мин до появления густой струи пара из стерилизатора. После удаления воздуха во избежание утечки пара и охлаждения стерилизатора кран для выпуска пара слегка закрывается.

По достижении заданного давления в стерилизационной камере 0,1 кгс/см (100--102 °С) отмечают момент начала стерилизации и поддерживают это давление в течение заданного времени. По окончании стерилизации закрывают вентиль для ввода в стерилизационную камеру и выключают нагрев стерилизатора, открывают вентиль для выпуска пара и конденсата из стерилизатора. Выпускают пар из стерилизационной камеры в течение 5--7 мин. Затем, когда давление снизится до «0» по мановакууметру, отвинчивают прижимы крышки, открывают стерилизатор и разгружают.

По ГО X (в ГФ XI этот метод стерилизации не включен) стерилизация текучим паром при температуре 100 °С проводится в течение 30--60 мин в зависимости от свойств лекарственных веществ объема стерилизуемого раствора. Установлено, что при нагревании стерилизатора температура раствора во флаконах отстает от температуры паровой камеры. Для небольших объемов отставание невелико (2--3 мин), но для объемов более 500 мл оно достигает значительных размеров. Поэтому при стерилизации растворов объемом более 100 мл увеличивают продолжительность стерилизации. Объемы до 100 мл стерилизуют 30 мин, 101--500 мл -- 45 мин, 501 -- 1000 мл -- 60 мин. Стерилизация растворов объемом более 1 л запрещается.

Дробная стерилизация. При дробной стерилизации объект (обычно водный раствор) нагревают текучим паром при 100е в течение 30 мин, затем раствор выдерживают при комнатной температуре в течение 24 ч, после чего снова стерилизуют в тех же условиях (30 мин при 100°). Описанный цикл повторяют 3--5 раз. При первом нагревании погибают вегетативные формы микроорганизмов, при последующих -- вновь появившиеся вегетативные формы. Вследствие длительности этот способ в аптеках применяется редко.

Пастеризация-- однократное нагревание объекта при температуре 60е в течение 1 ч или при температура 70--80® в течение 30 мин. Позволяет уничтожить вегетативные формы микробов (кроме термофильных), но не споры.

Тиндалиэация (дробная пастеризация). При тиндзлизации объект нагревают при температуре 60--65° по 1 ч ежедневно в течение 5 дней или при 70--80° в течение 3 дней. Это надежный и бережный способ стерилизации термолабильных лекарственных веществ. Однако вследствие длительности он мало пригоден для аптек и в последних почти не используется. [5, 16, 17]

3.2 Радиационная стерилизация

Лучистая энергия губительно действует на клетки живого организма, в том числе на различные микроорганизмы. Принцип стерилизующего эффекта этих излучений основан на способности вызывать в живых клетках при определенных дозах поглощенной энергии такие изменения, которые неизбежно приводят их к гибели за счет нарушения метаболических процессов. Чувствительность микроорганизмов к ионизирующему излучению зависит от многих факторов: наличия влаги, температуры и др.

Облучение объектов в конечной упаковке производят на гамма--установках, ускорителях электронов и других источниках ионизирующего излучения дозой 25 кГр (2,5 Мрад) или другими дозами в зависимости от конкретных условий (микробная обсемененность продукции до стерилизации, радиорезистентность контаминатов, величина коэффициента надежности стерилизации). Стерилизацию проводят в соответствии со "Сводом правил, регламентирующих проведение в странах - членах СЭВ радиационной стерилизации материалов и изделий медицинского назначения" и "Сводом правил, регламентирующих проведение в странах - членах СЭ8 радиационной стерилизации лекарственных средств" и утвержденными инструкциями на каждый вид изделия.

Радиационный метод стерилизации может быть рекомендован для изделий из пластмасс, изделий одноразового использования в упаковке, перевязочных материалов, некоторых лекарственных средств и других видов медицинской продукции.

Радиоактивная стерилизация является высокоэффективной для крупных производств. [5, 17]

3.3 Стерилизация фильтрованием

Микробные клетки и споры можно рассматривать как нерастворимые образования с очень малым (1--2 мкм) поперечником частиц. Подобно другим включениям, они могут быть отделены от жидкости механическим путем -- фильтрованием сквозь мелкопористые фильтры. Этот метод стерилизации включен в ГФ XI для стерилизации термолабильных растворов. Такими фильтрами могут быть перегородки из неглазурованного фарфора (керамики), асбеста, стекла, пленок, пропитанных коллодием, и другого пористого материала. По конструкции их подразделяют на глубинные и мембранные фильтры с размерами пор не более 0,3 мкм. В настоящее время используют различные фильтры.

Глубинные фильтры: керамические и фарфоровые (размер пор 3--4 мкм), стеклянные (около 2 мкм), бумажно-асбестовые (1 --1,8 мкм), а также мембранные (ультра) фильтры и «Владипор» (0,3 мкм) и др.

Глубинные фильтры характеризуются сложным механизмом задержания микроорганизмов (ситовым, адсорбционным, инерционным). Ввиду большой толщины фильтров удерживаются и частицы меньшего размера, чем размер пор фильтра.

К фильтрам из керамики (свечам) относятся «Бактериальные фильтры ГИК И» типа Л-5 и Ф-5, отличающиеся величиной пор. Изготовляются обычно в виде полых цилиндров, которые с одного конца закрыты, а с другого имеют отверстия. Фильтрование растворов осуществляется под давлением или чаще при помощи вакуума.

В первом случае предварительно профильтрованный раствор

вводят внутрь бактериологического фильтра. Раствор, просачиваясь через стенки, вытекает в стерильный сосуд (свечи Шамберлена). Во втором случае жидкость просачивается через стенки внутрь свечи и оттуда выводился наружу (свечи Беркефельда). Диаметр пор свечей составляет 3--4 мкм.

Фильтры из фарфора (свечи), до начала работы должны быть простерилизованы термическим методом (ГФ XI).

Способ стерилизации характеризуется медленностью работы (продолжительность фильтрования не должна превышать 8 ч и значительными потерями раствора в порах толстого фильтра. Очистка свечей затруднена.

Стеклянные микропористые фильтры изготавливают из сваренных зерен стекла с диаметром до 2 мкм. Фильтры имеют вид пластинок или дисков, закрепленных в стеклянных сосудах. Стеклянные фильтры по сравнению с другими мелкопористыми фильтрами более удобны для применения в аптечной практике. [5, 6, 18]

Для стерилизации фильтрованием применяют мембранные фильтры, фильтры из волокнистых материалов и керамические свечи.

Мембранные фильтры применяют для достижения высокой стерильности. Фильтрующей частью является мембрана -- пористый диск, изготовляемый из эфиров целлюлозы или фторопласта, толщиной около 100 мкм с порами размером от 0,2 до 3 мкм. Они устойчивы к действию воды, разбавленных щелочей и кислот. После высушивания мембранные фильтры становятся хрупкими (особенно целлюлозные), поэтому в перерывах между использованием их хранят в дистиллированной воде с добавлением антимикробного средства. К группе фильтров из волокнистых материалов -- бактериальных фильтров-- относятся фильтры Зейтца и фильтры Сальникова (СФ). Основными частями фильтра СФ являются корпус, состоящий из крышек с входными штуцерами и рам (три или семь штук) с сетками и штуцерами. Для фильтрации служат асбестовые пластины, имеющие диаметр до 300 мм. Пластины вкладывают между рамами и крышками, которые соединяются друг с другом с помощью шпилек и гаек-барашков. Фильтруемая жидкость проходит через асбестовые пластины, попадает в межрамное пространство и выходит наружу через выходные штуцеры рам. Фильтр Сальникова, как и другие бактериальные фильтры, работает под давлением. Перед работой собранный фильтр подвергают тепловой стерилизации.

Стерилизация фильтрованием через мембранные и глубинные фильтры, задерживающие микроорганизмы и их споры, используется для растворов веществ, нестабильных при термической или других видах стерилизации.

Глубинные фильтры изготовляют из волокнистых материалов (хлопок, шерсть, стекловолокно, смесь целлюлозы и асбеста и др.). Эти фильтры имеют толщину 2--6 мм и удерживают микроорганизмы и частицы за счет адсорбционного, ситового и инерционного механизмов. Они устойчивы к воздействию высоких температур, органических растворителей и имеют обычно высокую производительность фильтрации.

Глубинные фильтры могут быть использованы для стерилизации растворов, в том числе содержащих микробные тела размером 0,3 мкм.

Однако размер их пор больше размеров улавливаемых частиц, что может привести к проскоку микрофлоры при нарушении температурного режима, колебании величины давления и pH, вызывающих снижение адсорбции микроорганизмов, длительной (более 8 часов) фильтрации.

Задержанные в глубине фильтра микроорганизмы могут прорастать в процессе длительной фильтрации и попадать затем в фильтруемый раствор. Кроме того, возможен отрыв волокон фильтра и загрязнение ими фильтрата. Особенно опасны в этом отношении фильтры из асбеста и стекловолокна.

Ранее для стерилизации растворов широко использовались также фильтры из сплавленных частиц стекла или фарфора. Однако они имеют малое количество пор и вследствие этого -- низкую производительность. В последнее время глубинные фильтры вытесняются мембранными фильтрами.

Мембранные фильтры сетчатой структуры изготовляются из эфиров целлюлозы (ацетилцеллюлозы, этилцеллюлозы, нитроцеллюлозы) и их смесей, регенерированной целлюлозы, а также из политетрафторэтилена (тефлона), поливинилхлорида, акрила, нейлона и других полимеров. Их получают методом спекания, отливки, растягивания или выщелачивания.

Кроме того, выпускаются так называемые трековые или ядерные мембраны, получаемые облучением пленок полимеров, ускоренными тяжелыми ионами или продуктами радиоактивного распада, с последующим выдерживанием в протравливающем растворе до образования сквозных отверстий в следах (треках) прохождения радиоактивных частиц.

Выпускаются также составные фильтры, у которых мембрана располагается на пористой механически прочной подложке из бумаги или нейлона.

Главным требованием, которое предъявляется к стерилизующим мембранам, является удаление из фильтруемой жидкости всех жизнеспособных микроорганизмов, т. е. их вегетативных и споровых форм. Исходя из размеров различных микроорганизмов, в подавляющем большинстве случаев это требует применения мембран с размером пор 0,2 мкм. [18]

Следует учесть, что существует несколько видов бактерий, например, определенные виды микоплазм, которые проникают через мембраны с порами 0,2 мкм. Для их задержки требуются мембраны с размерами пор 0,1 мкм. Поскольку жизнеспособные микроорганизмы столь малых размеров редко содержатся в жидкостях, подлежащих стерилизационной фильтрации, а скорость фильтрации через мембраны с размером пор 0,1 мкм очень мала, то эти мембраны применяют лишь в специальных случаях.

Мембранные фильтры изготовляются в виде тонких дисков и фильтр- патронов. Диски мембран могут иметь диаметр от 13 до 293 мм, толщину от 10 до 300 мкм, а размеры пор от 0,1 до 10 мкм. Они используются в заводской и аптечной технологии, микробиологии, для аналитических целей при работе с малыми пли средними объемами жидкостей. Фильтр- патроны, содержащие в цилиндрическом каркасе складчатую мембрану с большой поверхностью, используются при объеме фильтруемой жидкости более 400 л.

Достоинством мембранных фильтров является то, что они задерживают все частицы, размеры которых превышают размер пор. Они имеют четко выраженную микропористую структуру, вследствие чего отфильтрованные микроорганизмы, споры и другие частицы остаются на их поверхности и могут быть затем подвергнуты микробиологическому или микроскопическому исследованию или использоваться для других целей. Мембранные фильтры не выделяют в фильтрат волокна, стабильны при нагревании до 130°С, но чувствительны ко многим растворителям.

Производительность по фильтруемой жидкости у них несколько меньше, чем у глубинных фильтров. В отличие от последних, они практически не поглощают фильтруемую жидкость.

Многочисленными фирмами-изготовителями выпускаются мембранные фильтры из различных материалов многих типоразмеров, предназначенные для применения в самых разнообразных отраслях производства и научных исследованиях. Наиболее известна продукция фирм «Миллипор» (США) и «Сарториус» (Германия). Много лет слова «мембрана» и «миллипор» использовались как синонимы.

Мембраны фильтрационные ацетатные МФА-А (по ТУ 6--05--1924--82) предназначены для очистки воды, спиртов, водных и спиртовых растворов лекарственных веществ от микроорганизмов и механических включений. Выпускаются 2 марки мембран в виде дисков с диаметром 142 и 293 мм и толщиной от 120 до 180 мкм. Мембраны марки МФА-А № 1 задерживают частицы размером 0,2 мкм и более; марки МФА-А № 2 -- размером 0,5 мкм и более. Температура фильтруемой жидкости может быть от +3°С до +70°С, величина pH среды -- от 1 до 10.

Мембраны стерилизуют насыщенным паром при 121 вС (0,1 МПа) в течение 30 мин. или антисептиками.

ПО «Тасма» выпускает также ряд других видов мембран. Для технологии лекарств представляют интерес также мембран «Владипор» типа МФА-МА, предназначенные для микробиологического, санитарно-гигиенического анализа воды, биологических, вирусологических, физико-химических анализов в лабораторных условиях. Эти мембраны выпускаются десяти номеров, начиная от размера пор в пределах 0,050 - 0,150 мкм (МФА-МА № 1) до размера 0,951 -- 1,050 мкм (МОА-МА №10).

Для фильтрации разнообразных органических растворителей и водных растворов лекарственных веществ производятся также мембраны «Владипор» типа мфц на основе регенерированной метилцеллюлозы. В зависимости от назначения и производительности выпускаются 4 марки мембран для очистки от частиц размером не менее 0,15, 0,20, 0,45, 0,60 мкм.

В последнее время показано, что серийно выпускаемые в Институте физико-органической химии АН БССР микрофильтрационные капроновые мембраны «Мифил» с размером пор 0,2 мкм по своей стерилизующей эффективности, безвредности, механической прочности, устойчивости к автоклавированию н производительности не уступают лучшим зарубежным мембранным фильтрам.

Перед мембранными фильтрами для задержки крупных частиц и предотвращения быстрого забивания фильтра помещают предфильтры с более крупными порами. Для этих целей могут быть использованы и асбесто-целлюлозные фильтры, специальные сорта картона, фильтровальная бумага, фильтры из полимерных материалов и др. [6, 7]

Устройства и установки мембранной фильтрации.

Фильтрация растворов через дисковые мембраны может осуществляться под вакуумом или под давлением.

При фильтрации растворов под давлением можно одновременно проводить расфасовку фильтрата во флаконы. При вакуумной фильтрации расфасовка проводится после окончания фильтрации.

В первом случае установка включает фильтродержатель, воронку с уплотнителем, специальный зажим, пробку и колбу Бунзена (рис. 6), собранная установка может быть простерилизована с мембраной и без нее. Фильтрация под вакуумом (оптимально при 0,4--0,6 кгс/см ) используется для малых объемов хорошо фильтрующихся жидкостей и непригодная для вспенивающихся растворов.

Чаще стерилизацию фильтрованием проводят под давлением. Устройство для фильтрации под давлением -- фильтродержатель -- содержит два диска из нержавеющей стали. Снаружи верхнего диска ввинчен входной штуцер и предохранительный клапан, на нижнем диске закреплены выходной штуцер и три ножки. Между дисками помещена дренажная сетка, а на ней -- опорная сетка с мембраной. Диски скреплены быстро съемными креплениями. Для уплотнения используются кольцевые прокладки из тефлона или силиконовой резины.

Контроль качества мембранных фильтров осуществляется следующим образом. Перед началом стерилизующего фильтрования и после него проверяют герметичность собранной установки и целостность мембранного фильтра, для чего чаще всего используют тест «точка пузырька».

Поры в мембранах можно рассматривать как тонкие однородные капилляры. Тест «точка пузырька» основан на том, что жидкость в этих капиллярах удерживается силой поверхностного натяжения, и минимальное давление, требуемое для вытеснения жидкости из капилляров, обратно пропорционально диаметру пор.

Тест проводится следующим образом. Мембранный фильтр смачивают жидкостью и постепенно увеличивают давление газа на смоченную мембрану, отмечая давление, при котором появляются пузырьки, что указывает на прохождение воздуха через капилляры мембраны.

Появление пузырьков при давлении более низком, чем указано в паспорте для данного фильтра, указывает на наличие повреждений мембраны или утечки в собранной системе. Совпадение давления с указанным в паспорте подтверждает не поврежденность фильтра. Так, для «Владипор» типа МФА-А № 1 оно должно быть не менее 0,4 МПа (4,0 кгс/см2) для МФА-А № 2 -- 0,32 МПа (3,2 кгс/см2).

Важнейшей характеристикой мембранного фильтра является его производительность, определяемая обычно по скорости фильтрации дистиллированной воды. Для мембран типа «Владипор» МФА-А (49 1 она составляет от8 до 14 мл/см"-мин при давлении 0,05 МПа (0,5 кгс/см"), для мембран МФА-А № 2, имеющих большие размеры пор (0,5 мкм), она выше --от 17 до 25 мл/см“-мин при том же давлении. «Владипор» типа мфц при тех же величинах пор имеют примерно вдвое большую производительность. [8, 11]

Мембраны не должны быть токсичными по отношению к лекарственным веществам, не должны содержать каких-либо вымывающихся в фильтрат веществ, выдерживать стерилизацию

насыщенным паром при 121 0С. Время стерилизации (15, 30 или 45 мин) собранного фильтродержателя с мембраной зависит от диаметра фильтра (25, 142 или 293 мм, соответственно).

В последние годы широкое распространение получили фильтродержатели, которые используются совместно со шприцами и иглами для подкожных инъекций. Эти устройства, которые называют шприц - насадками, очень удобны для быстрой стерилизации небольших объемов растворов и широко применяются в медицине, фармации, различных лабораториях. Шприц - насадки выпускаются диаметрами 13, 25 и 47 мм, изготовляются из нержавеющей стали или пластмасс.

Фильтродержатели имеют на входе охватывающую часть люеровского соединения, в которую вставляется шприц, а на выходе -- входящую его часть для присоединения иглы.

Различными фирмами выпускаются два основных типа шприц-насадок: разъемные многократного использования, а также предварительно простерилизованные шприц-насадки разового использования с мембранами, имеющими размеры пор 0,22 или 0,45 мкм. Эти устройства очень удобны, если они применяются вместе с предварительно простерилизованными иглами и пластмассовыми шприцами одноразового использования. С их помощью вручную можно быстро простерилизовать растворы небольших объемов, используя одновременно несколько шприц-насадок.

В ряде шприц-насадок мембрана имеет подложку с двух сторон, поэтому с их помощью фильтрацию можно проводить в обоих направлениях. Так, используя эти насадки, можно либо засасывать раствор из флакона в шприц, либо, вводить его шприцем во флакон или другой сосуд. Выпускаются также одноразовые шприц-насадки в патронном исполнении с норами 0,22 мкм.

При проведении так называемой асептической инъекции вначале заполняют шприц лекарственным раствором, затем из стерильной упаковки аккуратно извлекают шприц-насадку и присоединяют ее к шприцу. После этого шприц располагают вертикально, мембраной вверх, и медленно подают поршень вверх до полного выхода воздуха из шприца.

В результате мембрана увлажняется. Такая операция позволяет исключить воздушные пробки.

Возможна и обратная процедура, т. е. засасывание нестерильного раствора в стерильный шприц через стерильную шприц-насадку. По заполнении шприца снимают фильтродержатель, в шприц

вставляют новую стерильную иглу, после чего можно осуществлять инъекцию уже стерильного раствора.

Недавно показано, что при использовании разъемных шприц-насадок многократного использования фирмы «Сарториус» в сочетании с микрофильтрами «Владипор» типа МФА-можно эффективно освобождать инъекционные растворы как от мелких частиц, так и от возможной микрофлоры. Объем жидкости, которую можно пропустить через шприц-насадку, зависит от количества частиц в этой жидкости. Так, через шприц-насадку с диаметром 47 мм можно профильтровать 500--600 мл дистиллированной, 300--400 мл водопроводной воды или 4--8 мл сыворотки.

Эффективно освобождать инъекционные растворы как от мелких частиц, так и от возможной микрофлоры. Объем жидкости, которую можно пропустить через шприц-насадку, зависит от количества частиц в этой жидкости. Так, через шприц-насадку с диаметром 47 мм можно профильтровать 500--600 мл дистиллированной, 300--400 мл водопроводной воды или 4--8 мл сыворотки.

При внутривенном введении лекарств мембранные фильтры в качестве окончательных можно размещать также на аппарате для внутривенных введений. Такие устройства, имеющие мембрану с порами 0,22 мкм, выпускаются, например, фирмой «Миллипор».

Вторая область широкого использования шприц-насадок -- стерилизация и освобождение от механических примесей небольших объемов растворов лекарственных веществ (антибиотиков, гормонов, витаминов и др., добавляемых к большим объемам инфузионных растворов, что широко используется за рубежом.

Шприц-насадки могут быть использованы для стерилизации при непрерывном розливе растворов. Для этих целей автоматический дозатор помещают между шприцем и фильтродержателем.

Оригинальная модификация шприц-насадки применяется в технологии глазных капель, изготавливаемых в аптеках Польши.

Мембранная стерилизующая фильтрация широко используется также при проверке лекарственных препаратов на стерильность, в особенности тех, которые содержат антимикробные агенты, ингибирующие рост микроорганизмов. Метод позволяет выделить микроорганизмы из препаратов, а затем определить возможное присутствие жизнеспособных микроорганизмов на самой мембране, поместив ее в питательную среду. Указанный метод недавно официально введен и в нашей стране. [17, 18]

Методу стерилизующей фильтрации наряду со многими достоинствами присущи некоторые недостатки, ограничивающие область и широту его применения. Главными из них являются следующие:

1. меньшая надежность стерилизации по сравнению с тепловой стерилизацией конечного, готового, продукта в герметичной упаковке;

2. высокая стоимость процесса, требующего жестких условий по микробной чистоте помещений;

3. трудности технического порядка (ограничение скорости фильтрации размерами пор, сравнительно небольшой срок службы мембран, проблемы контроля целостности фильтра и эффективности стерилизации).

Тем не менее это направление очень интенсивно развивается за рубежом и в нашей стране, многие недостатки преодолеваются, метод все шире используется на практике, в особенности когда нельзя применять методы тепловой или радиационной стерилизации, а также для освобождения от микрофлоры перед тепловой стерилизацией.

Заводы Шотта (ГДР) выпускают стеклянные бактериологические фильтры-воронки, впаянные в колокол. В качестве фильтрующего материала используются стеклянные пластины с диаметром пор 0,7--1,5 мкм. Фильтрование осуществляется при помощи вакуума. Склянка для сбора стерильного фильтрата помещается внутрь колокола под фильтр-воронку. Разрежение создается через трубку в боковой поверхности колокола. Стеклянные фильтры-воронки перед, употреблением стерилизуют паром при избыточном давлении при температуре 120+2вС в течение 20 мин или воздушным методом при температуре 180 °С в течение 1 ч.

Фильтрационные пластины сразу же после работы должны быть промыты струей воды дистиллированной для удаления механических частиц с поверхности. Если же пластины будут использоваться для растворов с разным составом, то их необходимо подвергнуть химической очистке. Для этого фильтрационные пластины заливают смесью равных частей 2 % раствора натрия или калия нитрата и перхлората в концентрированной кислоте серной, подогретой до температуры 100 °С, и оставляют на ночь. Затем пластины промывают горячей водой дистиллированной под вакуумом до отсутствия в промывных водах ионов сульфата, определяемых раствором бария хлорида. Продукты реакции при обработке фильтрационных пластин указанной смесью легко растворяются в воде и не адсорбируются фильтром. Нельзя использовать для очистки пластин смесь калия бихромата с кислотой серной, так как ионы трехвалентного хрома прочно адсорбируются фильтром.

Недостатками керамических и фарфоровых фильтров является продолжительность стерилизации, потеря раствора в порах толстого фильтра, образование микротрещин из-за хрупкости фильтров и, следовательно, ненадежность стерилизации. Кроме того, при длительной эксплуатации фильтры могут прорастать микроорганизмами. Очистка фильтров от остатка раствора весьма затруднительна, поэтому для каждого раствора необходимо иметь отдельный фильтр. [17, 18]

Бумажно-асбестовые фильтры в виде пластин применяют в качестве фильтрующей поверхности в фильтре Сальникова, который представляет собой металлическую раму, зажатую между двумя сферическими дисками. Другой разновидностью фильтров из волокнистых бумажно-асбестовых материалов является фильтр Зейца-- пластины из клетчатки и асбеста с размерами nop 1 --1,8 мкм. Эти фильтры часто применяют при изготовлении растворов для инъекций в заводских условиях, но они могут быть использованы и в крупных аптеках лечебно-профилактических учреждений.

Бумажно-асбестовые фильтры не рекомендуют для стерилизации инъекционных растворов, поскольку они состоят из волокнистых материалов, имеется угроза отрыва волокон от фильтра. Попадая в организм с раствором, волокна могут вызывать различные патологические реакции.

Получившие в последние годы большое распространение для стерилизации фильтрованием микропористые мембранные фильтры лишены этих недостатков. Мембранные фильтры представляют собой тонкие (100--150 мкм) пластины из полимерного материала, характеризующиеся ситовым механизмом задержания микроорганизмов и постоянным размером пор. Принято считать, что средний размер пор фильтра, гарантирующего получение стерильного фильтра А, составляет 0,3 мкм. Во избежание быстрого засорения фильтра мембраны используют в сочетании с предфильтрами, имеющими более крупные поры. При стерилизации больших объемов растворов оптимальным является применение фильтров обоих типов.

Разрабатываются микропористые фильтры на основе различных полимеров. Мембранные фильтры «Владипор» из ацетата целлюлозы типа МФА могут быть использованы для очистки от механических примесей и микроорганизмов растворов лекарственных веществ, имеющих pH в пределах от 1,0 до 10,0. Фильтры «Владипор» имеют 10 номеров or 0,05 до 0,95 мкм. Для стерилизации растворов лекарственных веществ предназначены фильтры МФА-3 и МФА-4 со средним размером пор соответственно 0,25--0,35 и 0,35--0,45 мкм. Выпускаются они в виде пластин и дисков разного диаметра. Фильтры типа МФА до фильтрования стерилизуют насыщенным водяным паром при избыточном давлении, температура 120+2 °С или сухим горячим воздухом при температуре 180°С, обработкой формальдегидом, этанолом, водорода пероксидом, окисью этилена, УФ или радиационным методом.

Перспективными являются также полимерные пленки с цилиндрическими порами -- ядерные фильтры.

Стерилизующее фильтрование осуществляют в установках, основными частями которых являются фильтродержатель и фильтрующая среда. Используют два типа держателей: пластинчатые, в которых фильтр имеет форму круглой или прямоугольной пластины, и патроны, содержащие один или больше трубчатых фильтров. Перед фильтрованием производят стерилизацию фильтра в держателе и емкости для сбора фильтрата насыщенным водяным паром при температуре 120+2 °С или горячим воздухом при температуре 180 °С.

Стерилизующая фильтрация с помощью фильтров имеет преимущества по сравнению с методами термической стерилизации. Для многих растворов термолабильных веществ (апоморфина гидрохлорида, викасола, барбитала натрия и др.) он является единственно доступным методом стерилизации. Стерилизующая фильтрация перспективна для стерилизации глазных капель, особенно с витаминами, которые готовят в условиях аптек в больших количествах. Использование мембранных фильтров обеспечивает чистоту, стерильность и апирогенность растворов.

Во ВНИИФ успешно прошла испытание установка для стерилизующего фильтрования (УСФ-293-7). Производительность установки: за 20 мин происходит фильтрование и розлив 20 л раствора во флаконы по 400 мл. Метод стерилизации фильтрованием является перспективным для использования в условиях аптек. Этот метод можно использовать для стерилизации инъекционных растворов, глазных капель, концентратов для бюреточной установки, жидких лекарственных форм для новорожденных и детей до 1 года. [12, 15]

3.4 Стерилизация ультрафиолетовой радиацией

Несмотря на то, что метод стерилизации УФ-радиацией не включен в ГФ XI, использование его имеет большое значение для создания условий асептики и стерилизации многих объектов. УФ- радиация является мощным стерилизующим фактором, способным убивать и вегетативные, и споровые формы микроорганизмов. В настоящее время ультрафиолетовая радиация широко используется в различных отраслях народного хозяйства для обеззараживания воздуха помещений, воды и других объектов. Использование их в аптеках имеет большое практическое значение и существенные преимущества по сравнению с применением дезинфицирующих веществ, так как последние могут адсорбироваться лекарственными средствами приобретая резкие запахи.

УФ-радиация -- невидимая коротковолновая часть солнечного света с длиной волны меньше 300 нм. Предполагают, что она вызывает фотохимическое нарушение ферментных систем микробной клетки, действует на ее протоплазму с образованием ядовитых органических пероксидов, а также приводит к фотодимеризации тиаминов.