Обзор статей журнала "Фармация" по фармацевтическому анализу за 2006 год

Размещено на http://www.allbest.ru

ГОСУДАРСТВЕННОЕ бюджетное ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Кафедра фармацевтической химии

с курсами аналитической и токсикологической химии

Тема: «Обзор статей журнала «Фармация»

по фармацевтическому анализу за 2006 год»

Курсовая работа

студентки фармацевтического факультета заочного отделения группы 503 Б

Ахмадеевой Айгуль Замировны

Руководитель: зав. кафедрой, профессор Халиуллин Ф.А.

Уфа - 2012

Содержание

Введение

1.Методики определения фенотиазина

2.Новая методика получения растительных препаратов

3.Сравнительный анализ эфирного масла и СО2 -экстрактов полыни- эстрагон

4. Селективный метод определения лидокаина гидрохлорида

5. Тезиокристаллоскопия в идентификации качества лекарственного

препарата

Заключение

Список использованной литературы

Введение

Цель курсовой работы - изучение применения методов в фармацевтическом анализе лекарственных препаратов.

Задачи курсовой работы:

1.Провести литературный обзор статей из журнала «Фармация» за 2006 год по фармацевтическому анализу;

2. Описать методики определения различных веществ хроматографическими, УФ-и ИК-спектрофотометрическими и другими методами и основные сферы использования их в фармацевтическом анализе; Задача фармацевтической химии состоит в разработке методов исследования и оценке качества лекарственных средств, повышении эффективности контроля качества, устранении причин брака и появлении недоброкачественной фармацевтической продукции, а также фальсифицированных лекарственных средств. Эта задача решается с помощью углубления теоретических и практических знаний в области физических, химических, биологических, микробиологических и особенно инструментальных методов контроля лекарственных средств на всех этапах его производства. Важное практическое значение имеют методы, основанные на исследовании испускания и поглощения электромагнитного излучения в различных областях спектра. К ним относится спектроскопия (напр., люминесцентный анализ, спектральный анализ), нефелометрия и турбидиметрия и др. К важным физико-химическим методы анализа принадлежат электрохимические методы, использующие измерение электрического свойства вещества (вольтамперометрия, кондуктометрия, кулонометрия, потенциометрия и т. д.), а также хроматография (напр., газовая хроматография, жидкостная хроматография, ионообменная хроматография, тонкослойная хроматография). Успешно развиваются методы, основанные на измерении скоростей химической реакции (кинетические методы анализа), тепловых эффектов реакций, а также на разделении ионов в магнитном поле (масс-спектрометрия).При выполнении физико-химических методов анализа используют специальную, иногда довольно сложную, измерительную аппаратуру, в связи с чем эти методы часто называют инструментальными[1].Физические методы анализа основаны на измерении эффекта, вызванного взаимодействие с веществом излучения - потока квантов или частиц. Излучение играет примерно ту же роль, что играет реактив в химических методах анализа. Измеряемый физический эффект представляет собой сигнал. В результате нескольких или множества измерений величины сигнала и их статистической обработки получают аналитический сигнал. Он связан с концентрацией или массой определяемых компонентов.Исходя из характера используемого излучения, физические методы можно разделить на три группы: 1) методы, использующие первичное излучение, поглощаемое образцом; 2) применяющие первичное излучение, рассеиваемое образцом; 3) использующие вторичное излучение, испускаемое образцом. К примеру, масс-спектрометрия относится к третьей группе -первичным излучением здесь служит поток электронов, квантов света, первичных ионов или др. частиц, а вторичное излучение представляет собой ионы различных масс и зарядов. Достоинства физических методов: простота пробоподготовки (в большинстве случаев) и качественного анализа проб, большая универсальность по сравнению с химическими и физико-химическими методами (в т.ч. возможность анализа многокомпонентных смесей), широкий динамический диапазон (т. е. возможность определения основных, примесных и следовых составляющих), часто низкие пределы обнаружения как по концентрации (до 10-8 % без использования концентрирования), так и по массе (10-10 -10-20 г), что позволяет расходовать предельно малые кол-ва пробы, а иногда проводить неразрушающий анализ. Многие физические методы анализа позволяют выполнять как валовый, так и локальный и послойный анализ с пространственным разрешением вплоть до моноатомного уровня. Физические методы анализа удобны для автоматизации[2][4].

1.Методики анализа производных фенотиазина

В последнее время проблемы обеспечения качества лекарственных средств (ЛС) на международном, региональном и национальном уровне приобрели особое значение. Современные требования к качеству лекарств характеризуются тенденцией к получению новых или дополнительных объективных данных о свойствах и химических превращениях лекарственных соединений. Методики установления подлинности субстанций и препаратов, производных фенотиазина, относящихся к списку жизненно необходимых ЛС, с применением предлагаемых нами качественных реакций, методов ТСХ, УФ- и ИК-спектроскопии, могут быть использованы для выявления фальсифицированных ЛС. Такое сочетание позволяет с достаточной степенью достоверности подтвердить наличие или доказать отсутствие в ЛС действующего вещества, указанного на упаковке. Цель настоящей работы -- разработка методик анализа ЛС среди производных фенотиазина, позволяющих выявить фальсифицированные лекарственные препараты.

Экспериментальная часть.

В ходе исследований ЛС, производных фенотиазина, с применением цветных химических реакций предложена методика проведения реакции окислительно-восстановительного характера.Пример реакции: 0,01 г исследуемого лекарственного вещества помещают в пробирку, добавляют 2 мл 50% этилового спирта, затем -- 3 мл 10% свежеприготовленного щелочного раствора гидроксиламина гидрохлорида (1:2), далее -- 2 мл 16% раствора азотной кислоты. Появляется характерное окрашивание (табл. 1). Разработанные методики экспресс-анализа с применением высокочувствительных цветных химических реакций могут быть использованы для подтверждения подлинности ЛС, производных фенотиазина, и для выявления фальсифицированной продукции, не содержащей указанных на упаковке лекарственных веществ.

Для качественной оценки ЛС экспресс-анализ включал также метод ТСХ. Проведенные исследования по выбору оптимальных условий хроматографирова-ния позволили эффективно разделить и однозначно идентифицировать производные фенотиазина. Хрома-тографирование проводилось на пластинках «Силуфол УФ-254» или «Сорбфил» ПТСХ-АФ-В-УФ (сорбент -силикагель, флюоресцентный индикатор УФ-254). На линию старта пластин наносили микропипеткой по 0,01 мл спиртового 0,2% раствора

стандартного образца из производных фенотиазина и по 0,01 мл спиртового 0,2% раствора исследуемого препарата. Нанесение проб осуществляли с использованием нагревательного устройства для сушки пластин УСП-1. Пробег фронта растворителей составлял 12,5--13 см (силуфол) или 8--8,5 см (сорбфил). Сушку пластин проводили на воздухе. Проявление хро-матограмм осуществляли в УФ-свете при 254 нм (облучатель хромато-графический УФС-254/365) или обработкой 10% свежеприготовленным щелочным раствором гидроксиламина гидрохлорида с последующей обработкой 16% раствором азотной кислоты.

Наиболее оптимальное разделение и форма пятен 10-алкилпро-изводных фенотиазина наблюдались в подвижных фазах этилацетат -- этанол -- 25% раствор аммиака (17:2:1) -- система 1; и гептан -- хлороформ -- ацетон -- этанол -- 25% раствор аммиака (5:10:8:3:0,05) - система 2.

Для 10-ацилпроизводных фенотиазина наиболее оптимальное разделение и форма пятен наблюдались в подвижных фазах бутанол -- хлороформ -- 25% раствор аммиака (8:3:0,05) -- система 3; хлороформ -- изопропанол -- 25% раствор аммиака (9,8:1:0,1) -- сио тема 4. Пятна исследуемых веществ различаются по значениям Rf и форме, а также по интенсивности флюоресценции в УФ-свете или по окрашиванию обработкой гидроксиламина с раствором азотной кислоты (табл. 2, 3).

В дальнейшем для проведения исследований применяли методы УФ- и ИК-спектроскопии. УФ-спектры субстанций лекарственных препаратов получали на отечественном приборе СФ-103 в диапазоне длин волн 200--350 нм. Растворы исследуемых веществ и препаратов в воде очищенной готовили в концентрации 5 и 10 мкг/мл. В качестве раствора сравнения использовали соответствующий растворитель. Измерение проводили в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В ходе анализа установлено, что УФ-спектры 10-алкилпроиз-водных фенотиазина существенно отличаются от УФ-спектров 10-ацилпроизводных фенотиазина. Первые имеют по 2 характерных полосы поглощения (при 242--261 нм и при 279--315 нм), в то время как вторые -- лишь 1 полосу поглощения (при 258--269 нм).

Наблюдаются батохромные сдвиги максимумов поглощения ацилпроизводных фенотиазина по сравнению с алкилпроизводными.

ИК-спектры получали на приборе «ИНФРАФЛЮМ ФТ-02» (ЛЮМЭКС) в вазелиновом масле (качества для ИК) в диапазоне 4000--400 см-1, содержание действующего вещества в пробе -- 5 мг, спектры образцов снимали относительно воздуха. ИК-спектры производных фенотиазина имеют ряд характерных полос поглощения и в целом характеризуют структуру исследуемых веществ. Как в УФ-, так и в ИК-спектроскопии проводили сравнение исследуемых образцов со спектрами рабочих стандартных образцов (р < 0).

Найдены общие характеристические полосы поглощения производных фенотиазина в областях 3375-- 3620 см-1, 2910-2940 см-1,1600-2420 см~1, 145-1470 см-1 и 740--780 см~1, обусловленных ароматической

структурой препаратов. Основное отличие 10-ацилпроизводных фенотиазина (флуацизин, азаклор-зин, морацйзин и этацизин) от 10-алкилпроизводных заключается в наличии характеристических полос поглощения с максимумами поглощения при 1680, 1675, 1665 и 1660 см-1, обусловленных амид-ным карбонилом в 10 положении. ИК-спектры препаратов, содержащих во 2 положении трифторме-тильную группу, характеризуются высокоинтенеивными колебаниями в областях 1000 и 1245 см-1, 1170 и 1245 см-1, 1160 и 1260 см~1 (триф-луоперазин, флуфеназин и флуацизин). Органически связанный атом хлора в хлорпромазине, азаклорзи-не, перфеназине обусловливает наличие максимумов поглощения в областях 750 и 770 см-1 (рис.3, 4)[4].

Выводы

Разработаны методики экспресс-анализа производных фенотиазина с применением качественных химических реакций и метода ТСХ-анализа.

Разработаны методики УФ-и ИК-спектроскопии для подтверждения подлинности лекарственных препаратов, производных фенотиазина.

Предложенные методики могут быть использованы для установления подлинности лекарственных препаратов, производных фенотиазина и для выявления фальсифицированной продукции, не содержащей указанного на упаковке лекарственного вещества[4].

2 .Новая методика получения растительных препаратов

Фитопрепараты (ФП), содержащие комплекс биологически активных веществ (БАВ), характеризуются широким спектром фармакологического действия, эффективностью и малой токсичностью, что позволяет использовать их длительное время для профилактики и лечения многих заболеваний без риска возникновения побочных явлений. По данным ВОЗ, около 80% населения мира при первичной медико-санитарной помощи пользуются, в основном, традиционными медикаментами природного происхождения. Потребность населения в препаратах природного происхождения удовлетворяется не полностью, в частности, это происходит из-за дефицита лекарственного растительного сырья (ЛРС). Номенклатура и объем предложений на рынке ЛРС не соответствуют потребности, рост которой отмечается в последние годы.

При промышленном производстве суммарных ФП эффективность извлечения комплекса БАВ в ряде случаев достигает лишь 40--50 % из-за недостаточности истощения шрота по всем группам действующих веществ.

Последовательное извлечение БАВ из плодов, шрота и семян шиповника различными экстрагентами позволяет производить препараты аскорбиновой кислоты, концентрат витаминов группы Р, каротиноидный препарат Каротолин и препарат, содержащий витамин Е.

Использование свежих листьев крапивы двудомной позволяет на первой технологической стадии получать сок растений, на основе которого изготовляют 10% мазь, предложенную в качестве кровоостанавливающего и ранозаживляющего средства. Из высушенного шрота выделяют максимально очищенный хлорофилл, который вводят в 2% мазь на липофильной основе, рекомендованную как противовоспалительное, антимикробное и ранозаживляющее средство.

В технологии ФП известны так называемые полиэкстракты (полифракционные экстракты) -- суммарные препараты, полученные путем последовательного экстрагирования ЛРС несколькими растворителями, например, с повышающейся полярностью. Из полученных извлечений экстрагент отгоняют, остатки сушат, порошки смешивают и выделяют полиэкстракт. Последовательное использование спиртоводных смесей различной концентрации, органических экстрагентов и растительных масел позволяет из одного вида ЛРС получать несколько ФП -- настойки, густые и сухие экстракты и медицинские масла (масляные экстракты).

В последнее время особенно актуальна разработка безотходных технологий, включающих переработку шротов, остающихся в значительном количестве после стадии экстрагирования ЛРС. До последнего времени шрот от производства суммарных ФП применялся в сельском хозяйстве на корм животным. Однако, как показали многочисленные исследования, в шроте часто остается большое количество БАВ, которые могут служить основой для производства лекарственных препаратов и биологически активных добавок (БАД) к пище. Особенно перспективными с этой точки зрения являются шроты, полученные после экстрагирования ЛРС сжиженными газами (диоксид углерода, пропан, бутан, хлор- и фторсодержащие углеводороды, так называемые хладоны). На основе шротов плодов шиповника, травы зверобоя и череды после изготовления соответствующих медицинских масел экстракцией сжиженными газами были разработаны технологии водных и водно-спиртовых извлечений, содержащие БАВ полярной природы: флавоноиды, полисахариды, кислоту аскорбиновую.

Еще одно направление использования шрота -- разработка на его основе сорбентов различного действия. Например, технология комплексной переработки семян сосны кедровой сибирской, получение препаратов-энтеросорбентов Гинсорб и Панасорб из шрота корней женьшеня.

В настоящее время во всех технологиях комплексной переработки ЛРС применяется либо продолжительный процесс экстрагирования (несколько стадий), либо в шроте остается значительное количество БАВ гидрофильного или липофильного характера в зависимости от химической природы используемого экстрагента. Таким образом, назрела необходимость рационального использования растений, совершенствования и разработки новых прогрессивных ресурсосберегающих комплексных технологий переработки ЛРС, обеспечивающих максимальное извлечение БАВ[2].

Экспериментальная часть.

В результате проведенных исследований нами предложен способ экстрагирования ЛРС системами несмешивающихся растворителей различной полярности -- двухфазными системами экстрагентов (ДСЭ) . Наиболее важной особенностью двухфазной экстракции (ДЭ), отличающей ее от других методов экстрагирования, является то, что в контакт с ЛРС одновременно вступают два экстрагента, каждый из которых в отдельности способен извлекать либо гидрофильные, либо липофильные соединения. Такая технология, как показали результаты исследований, позволяет быстро и с высокой эффективностью проводить комплексную переработку сырья и получать за одну технологическую стадию два продукта (извлечения) с высоким содержанием БАВ.

В качестве компонентов двухфазных систем использовали растительные масла и водно-органические смеси различных концентраций. В состав водно-органической фазы входил растворитель, смешивающийся с водой (этанол, пропиленгликоль, полиэтиленоксиды, диметилсульфоксид). Для исследований выбрали ЛРС, содержащее различные группы БАВ и отличающееся по анатомо-морфологическому строению. Объекты изучения: трава зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L), трава сушеницы топяной (Gnaphalium uliginosum L. s.Y.), цветки календулы (Calendula officinalis L), цветки ромашки (Chamomilla recutita L (Rauschert)), плоды рябины (Sorbus aucuparia L) и плоды шиповника (Rosa sp. L), а также бурые водоросли рода Laminaria sp.L.

При исследовании процесса экстрагирования перечисленных видов сырья установлено значительное увеличение концентрации липофильных БАВ в масляных извлечениях по сравнению с экстракцией только маслом, для производных хлорофилла -- в 5--6 раз и более, для суммы каротиноидов -- в 2--3 раза. При этом выход липофильных БАВ в масляные извлечения достигает в случае производных хлорофилла 80--85% и суммы каротиноидов -- 60--70% (см. рисунок), что имеет большое практическое значение, так как именно в технологии масляных экстрактов трудно достигаются такие высокие выходы. При этом длительность процесса экстракции сокращается в 1,5 --2 раза.

Изучен процесс ДЭ ЛРС. Согласно его результатам независимо от вида сырья на массоперенос липофильных веществ в масляную фазу в значительной мере влияют соотношение объемов водно-органической и масляной фаз, а также природа полярной фазы.

При предложенном нами механизме интенсификации при ДЭ выхода липофильных веществ полярная составляющая в ДСЭ обеспечивает процессы, предшествующие массопередаче липофильных веществ из сырья, а именно -- проникновение экстрагента в сырье, смачивание и десорбцию.

Показано, что способ ДЭ по эффективности извлечения гидрофильных БАВ не уступает экстракции водно-спиртовыми и водно-органическими растворителями, традиционно применяемыми в производстве суммарных фитопрепаратов. Так, при экстракции ДСЭ травы зверобоя и цветков календулы полученные спирто-водные извлечения по показателям качества не отличались от настоек, изготовленных в промышленных условиях, и соответствовали требованиям нормативной документации НД (таблица). Выход действующих веществ составлял 60--70%. Аналогичные результаты были получены при экстракции ДСЭ плодов рябины и шиповника, травы сушеницы. При переработке бурых водорослей выход и качественный состав гидрофильных продуктов (маннита и альгината натрия), получаемых по промышленной технологии и при экстракции ДСЭ, практически не отличались.

Кроме того, разработан метод экстрагирования ЛРС двухфазными системами растворителей в присутствии поверхностно-активных веществ (ПАВ). Это одно из перспективных направлений в развитии теории и практики двухфазной экстракции. Установлено, что, создавая определенное соотношение используемых ПАВ в составе ДСЭ, можно осуществлять направленный процесс экстрагирования комплекса действующих веществ из ЛРС. Такая технология переработки ЛРС при определенном соотношении ПАВ позволяет получить эмульсионные экстракты, которые могут использоваться как основа для мягких лекарственных форм и косметических средств или как готовая лекарственная форма.Простое аппаратурное оформление, невысокая трудоемкость и экономичность обусловливают перспективность внедрения ДЭ в производство ФП.На основе масляного экстракта зверобоя, полученного методом ДЭ, разработан и выпускается промышленностью лечебно-косметический крем Зверобойный, обладающий противовоспалительным, ранозаживляющим действием. Метод комплексной переработки сухого сырья бурых водорослей путем экстракции ДСЭ позволил получить новый продукт -- масляный экстракт ламинарии (патент РФ RU 2142812), который используется при производстве кремов серии Марина. На основе водно-спиртовых извлечений, полученных при экстракции травы зверобоя и цветков календулы ДСЭ, разработаны технологии гранул сухого экстракта зверобоя и гранул сухого экстракта календулы. Предложены технологии косметического крема и лечебного геля, содержащих БАВ травы зверобоя и сушеницы, полученные методом эмульсионной экстракции[2].

3.Сравнительный анализ эфирного масла и СО2 -экстрактов полыни- эстрагон

Цель исследования -- определение состава и сравнительная оценка СО2-экстрактов 2 сортов полыни эстрагон («Французский» и «Грибовский»), культивируемых на территории России, и эфирного масла полыни эстрагон сорта «Грибовский».

Надземная часть полыни эстрагон, или тархун (Artemisia dracunculus L. сем. Asteraceae) издавна применяется в народной медицине в качестве лечебного и косметологического средства, а также в быту и в пищевой отрасли как пряность, ароматический и консервирующий компонент. В состав эстрагона входят такие важнейшие классы биологически активных веществ, как эфирное масло, кумарины, флавоноиды. Основное внимание исследователи уделяют эфирному маслу, динамике его накопления и изменчивости состава. Эфирное масло эстрагона не имеет ограничений к применению, так как относится к числу нетоксичных, не вызывающих раздражения и сенсибилизации веществ. Известно несколько способов выделения из растительного сырья эфирного масла и сопутствующих веществ липофильного характера. В большинстве случаев в промышленности используется перегонка с водяным паром. Экстракция сжиженными газами имеет ряд преимуществ, в том числе относительно остаточного растворителя, но для большинства растительных объектов остается малоизученной.

Экспериментальная часть.

Растительное сырье для исследования заготавливали на опытных участках зональной станции ВИР (Дербентский район) и сушили в тени при температуре 25--30°С. Экстракцию липофильной фракции из листьев, измельченных до размера частиц 0,5--1,0 мм, осуществляли сжиженным оксидом углерода (IV) в сверхкритическом флюидном (СКФ) состоянии на опытной лабораторной установке Горного ботанического сада при рабочем давлении 10 атм и температуре 20°С. Эфирное масло получали методом паровой перегонки на собранной для этого лабораторной установке. Экстракты после регенерации экстрагента и эфирное масло сразу извлекали из приемников и герметично упаковывали. Анализ полученных образцов проводили методом газо-жидкостной хроматографии с масс-спектральной- и УФ-детекцией на приборе «Saturn-2000» (Varian) с колонкой «Stabilvax» длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм и толщиной неподвижной фазы 0,5 мк. Идентификацию соединений осуществляли с помощью базы данных специализированной компьютерной программы.Согласно результатам анализа, во всех образцах доминируют ароматические соединения, что соответствует данным литературы. Однако в эфирном масле преобладает метилэвгенол, в СО2-экстракте полыни сорта «Грибовский» (далее -- тархун) -- эстрагол, в СО2-экстракте полыни сорта «Французский» (далее -- эстрагон) -- сумма азарона и метилэвгенола. Существуют различия и в качественном составе СО2-экстрактов: состав условно «легкой» фракции (вещества 1--22, см. таблицу) у эстрагона разнообразнее, но ее суммарная доля составляет 19,224%, в то время как у тархуна ей принадлежит 35,670%, а содержание эстрагола [1-метокси-4-(2-пропенил)-фенола или метилхавикола], характерного для данного вида, у тархуна оказалось в 100 раз больше, чем у эстрагона. Значительно богаче и разнообразнее СО2-экстракт эстрагона по составу «тяжелой» фракции (вещества 23--48), определяющей основные различия между эфирными маслами и СО2-экстрактами. Сумма кумариновых производных в СО2-экстракте эстрагона составляет 16,591%, в СО2-экстракте тархуна -- 25,370%, в эфирном масле тархуна кумарины не обнаружены. В эфирном масле, как и предполагалось, значительная доля (72,012%) принадлежит «легкой» фракции, почти половину в нем составляет метилэвгенол (46,550%). Доля насыщенных углеводородов в эфирном масле по сравнению с СО2-экстрактами выше в 4--5 раз, возможно, вследствие воздействия острого пара, способного вызвать деструкцию крупных молекул с образованием алканов.

Различия в технологии получения СО2-экстракта и эфирного масла тархуна разительные. Перегонка с водяным паром, помимо воздействия острого пара, связана с присутствием воды в конце процесса; конденсат после полного охлаждения имеет нескольких фаз: твердую, состоящую из «смолистых» веществ; водную, растворяющую ряд полярных соединений; эфирномасличную, состоящую из малополярных веществ -- терпеноидов, ароматических соединений, сложных эфиров и др. Экстракция сжиженным СО2 позволяет сохранить разнообразие веществ, составляющих липофильную фракцию перерабатываемого сырья, так как ведется при комнатной температуре инертным экстрагентом, защищающим продукт от воздействия кислорода (это видно по наличию в СО2-экстрактах альдегидных соединений). Большинство СО2-экстрактов характеризуется повышенными показателями кислотных чисел, что связано, по-видимому, с карбоксипроизводными углеводородами. Так, в составе СО2-экстракта эстрагона карбоновые кислоты (насыщенные и непредельные) занимают 17,855%, в СО2-экстракте тархуна их 11,374%, в то время как в эфирном масле -- всего 1,183%. Одним из механизмов их образования может являться гидролиз высокомолекулярных эфиров (восков), входящих в состав кутикулы и липидов мембран растительных клеток с участием угольной кислоты, которая образуется из СО2 и остаточной воды из сырья, а под высоким давлением становится реагентом. Известно, например, что в процессе СКФ-стерилизации угольная кислота служит активным стерилизующим компонентом, который, проникая внутрь микробных клеток, инактивирует их путем резкого сдвига рН. В экстракционных процессах угольная кислота также предотвращает контаминацию конечных продуктов, консервирует и стабилизирует их[1]. Выводы.

Как показал анализ, СО2-экстракты значительно отличаются от эфирного масла, полученного из того же сырья перегонкой с водяным паром. Так как в пищевой промышленности и косметологии СО2-экстракты активно используются в качестве заменителей эфирных масел и пряностей, вопросы их фармакологической активности особенно актуальны. К примеру, если эфирное масло тархуна можно считать практически нетоксичным, то присутствие кумаринов в СО2-экстракте тархуна требует более глубокого изучения возможных побочных действий. Большое разнообразие липофильныхбиологически активных веществ, входящих в состав СО2-экстрактов полыни эстрагон, может служить основанием для их дальнейших исследований[1].

4.Селективный метод определения лидокаина гидрохлорида

Лидокаина гидрохлорид -- 2-диэтиламино-2',6'-ацетоксилидида гидрохлорид моногидрат -- сильное местноанестезирующее средство,вызывающее местную анестезию следующих видов: терминальную, инфильтрационную, проводниковую. В настоящее время лидокаина гидрохлорид применяется в офтальмологической, стоматологической и хирургической практике, а также в видеглазных капель и инъекционных растворов. При анестезии лидокаином гидрохлоридом у пациентов нередковозникают побочные эффекты (головокружение, сонливость, потеря со-знания), которые обусловлены токсичными продуктами разложения препарата (диэтиламиноуксусная кислота, 2,6-диметиланилин). В литературе описан неселективный метод неводного титрования лидокаина гидрохлорида , но с его помощью нельзя определить препарат в присутствии продуктов его разложения, которые также обладают основными свойствам и титруются хлорной кислотой наряду с неразложившимся лекарственным веществом. Цель настоящего исследования -- разработка селективного метода количественного определения лидокаина гидрохлорида в присутствиипродуктов разложения на основе реакции с салицилатным комплексом меди (II).Выбор реактивов объясняется их доступностью, нетоксичностью,устойчивостью при хранении. Реакция с салицилатным комплексом меди (II) использовалась ранее разными авторами в количественном анализе органических лекарственных веществ.

Экспериментальная часть.

В работе использовали 1 моль/л раствора сульфата меди (II), 1 моль/л раствора салицилата натрия, которые готовили растворением соответствующих солей квалификации "Х.Ч." в очищенной воде. 1% раствор лидокаина гидрохлорида готовили из субстанции, отвечающей требованиям нормативной документации. рН среды создавали разбавленными растворами хлороводородной ки-

слоты и гидроксида натрия. Кислотность раствора контролировали с помощью иономера универсального ЭВ-74. Спектр светопоглощения соединения снимали на СФ-46. Оптическую плотность измеряли на КФК-2 при светофильтре -- 9 (750 нм), L = 5 мм. Оптическая плотность экстракта является результатом трехкратного измерения. Раствором сравнения служил хлороформ. Порядок сливания реактивов не влияет на оптическую плотность экстрактов. Экстракцию проводили в делительной воронке 5 мл хлороформа в течение 1 мин. После расслоения жидкости (1 мин) хлороформный слой сливали в кювету. Объем водной и органической фаз равен 5 мл.Органический растворитель очищали перегонкой при Ткип = 62°С (хлороформ).Состав продукта реакции устанавливали методом изомолярных серий. Исследования показали, что лидокаина гидрохлорид взаимодействует с ионами меди (II) и салицилат -- с ионами в молярном соотношении 1:1:2. Максимум светопоглощения салицилатного комплекса меди (II) с лидокаина гидрохлоридом находится в области 720 нм. Молярный коэффициентсветопоглощения равен 3449.Найдены оптимальные концентрации сульфата меди (II) (0,20--0,32 моль/л) и салицилата натрия (0,25--0,40 моль/л), при которых в органическую фазу экстрагируется комплексное соединение одного состава. В ходе исследований установлено, что максимальный выход продукта реакции наблюдается при значениях рН = 3,7--4,0. Исследования показали, что время экстракции изучаемого комплексного соединения хлороформом при соотношении водной и органической фаз 1:1 составляет 1 мин. Оптическая плотность извлечения остается неизменной в течение 60 мин. Повторная экстракция реакционного раствора хлороформом не обнаруживает в экстракте продукта реакции оптическая плотность экстракта равна нулю, что дает возможность проводить его экстракцию однократно.Экстракты продукта реакции подчиняются закону Бугера--Ламберта--Бера в пределах концентрации лидокаина гидрохлорида 2--14 мг/5 мл. Коэффициент корреляции калибровочного уравнения равен 1,000.Для доказательства предположения о том, что продукты разложения изучаемого вещества не экстрагируются в хлороформ в виде тройных комплексов, лидокаи-на гидрохлорид в субстанции определяли экстракционно-фотометрическим методом на основе реакции с салицилатным комплексом меди (II) после хранения в течение 60 сут при температуре 70°С и в субстанции с просроченным на 1 год сроком ее годности. Параллельно измеряли оптическую плотность продукта реакции салицилатного комплекса меди (II) с субстанцией лидокаина гидрохлорида (Д), хранившегося в соответствии с требованиями нормативной документации.Исследования показали (табл.1), что оптическая плотность экстрактов продуктов реакции понижается после хранения лидокаина гидрохлорида в течение 60 сут при 70°С и в субстанции с просроченным сроком годности по сравнению с препаратом, хранившимся в соответствии с требованиями нормативной документации.

Это свидетельствует об уменьшении содержания действующего вещества в лекарственном препарате. Можно предположить, что продукты разложения лекарственного вещества (диэтиламиноуксусная кислота, 2,6-диметиланилин) в отличие от вещества, сохранившего первоначальную химическую структуру, не экстрагируются в виде тройных комплексов в хлороформ, потому что имеют в своей структуре гидрофильные группы(-NH2, -СООН).На модельных смесях, содержащих продукты разложения, доказано, что предлагаемый метод определения лекарственного вещества селективен в присутствии продуктов деструкции. Этого нельзя сказать о методе неводного титрования, приведенном в нормативной документации [1,5], где продукты разложения лидокаина гидрохлорида титруются хлорной кислотой наряду с неразложившимся веществом (табл. 2).На основании проведенных исследований разработана методика экстракционно-фотометрического определения лидокаина гидрохлорида в субстанции в присутствии продуктов разложения, которая позволяет объективно оценивать количественное содержание его в субстанции.

Методика.

Готовили 1% раствор лидокаина гидрохлорида из субстанции. Для этого 0,5 г субстанции помещали в мерную колбу на 50 мл, добавляли 25 мл воды, взбалтывали, доводили объем раствора водой очищенной до метки. Брали микропипеткой 1 мл приготовленного раствора, помещали в делительную воронку, прибавляли 1 мл 1 моль/л раствора сульфата меди (II) и 1,5 мл 1 моль/л раствора салицилата натрия; создавали оптимальное значение рН среды. Доводили объем водной фазы до 5 мл.Смесь экстрагировали 5 мл хлороформа в течение 1 мин.После расслоения жидкости (1 мин) хлороформный слой сливали в кювету с рабочей длиной 5 мм. Измеряли оптическую плотность экстракта с помощью фотоэлектроколориметра КФК-2 при светофильтре 9 (750 нм). Раствором сравнения служил хлороформ.Параллельно измеряли оптическую плотность окрашенного экстракта, полученного при проведении реакции с 1 мл раствора стандартного образца (СО) лидокаина гидрохлорида (1% раствор в воде).

Содержание лидокаина гидрохлорида в субстанции в процентах (Х) рассчитывали по формуле:

X=D1*V*a0/D0*V1*a1*100,

где D1 -- оптическая плотность испытуемого раствора; D0 -- оптическая плотность раствора стандартного образца; а1 -- навеска субстанции, г; а0 --содержание лекарственного вещества в 1мл 1% раствора стандартного образца (0,01г); V -- объем мерной колбы, мл;V1 -- объем испытуемого раствора, взятый для фотометрирования, мл.

Результаты определения содержания лидокаина гидрохлоридав субстанции приведены в табл.3.Метрологическая характеристика результатов количественного определения лидокаина гидрохлоридав субстанции приведена в табл. 4.Относительная ошибка определения не превышает Ѓ}1,23%[5].

Выводы.

1. Установлены оптимальные условия проведения реакции салицилатного комплекса меди (II) с лидокаина гидрохлоридом (рН среды,концентрация реактивов, время и степень однократной экстракции). Экстракты продукта реакции подчиняются основному закону светопоглощения Бугера--Ламберта--Бера в пределах концентрации лидокаина гидрохлорида 2--14 мг/5 мл.

2. Экспериментально доказано, что продукты разложения лидокаина гидрохлорида (диэтиламиноуксусная кислота, 2,6-диметиланилин) не мешают количественному определению его в субстанции.

3. Разработан метод экстракционно-фотометрического определения лидокаина гидрохлорида в субстанции в присутствии продуктов его разложения; относи-тельная ошибка не превышает Ѓ}1,23%[5].

5.Тезиокристаллоскопия в идентификации качества лекарственного препарата

Проблема фальсификации лекарственных средств(ЛС) обусловливает необходимость разработки и последующего внедрения экспресс-методов скрининга состава тестируемого ЛС, которые основаны на косвенном физико-химическом анализе. Существующие в настоящее время методы, способствуя достаточно точному определению, в большинстве случаев требуют значительных материальных затрат, дорогостоящего оборудования и сложных реактивов. Поэтому целесообразно использование кристаллографических методов исследования, которые позволяют изучить широкий спектр характери-стик исследуемого субстрата путем кристаллогенеза.

Комплексная оценка результатов кристаллообразования позволяет выделить большой объем информации о составе и свойствах субстрата. Данный подход ранее использовался в технике и судебной медицине, сейчас он получает значитель-ное распространение в медико-биологических исследованиях .

Цель настоящего исследования -- изучение особенностей кристаллизации препарата "Энтеросан".

Экспериментальная часть.

Оценивались возможности идентификации качества препарата "Энтеросан" (фармакотерапевтическая группа -- пищеварительное средство [А09АА]). Препарат выпускается в виде капсул по 0,3 г.Энтеросан представляет собой природную высушенную гомогенную массу слизистой оболочки желудка птиц в форме порошка от светло-бежевого до бежевого цвета со специфическим запахом, заключенную желатиновую капсулу. Получают его путем лиофили-

зации. Поэтому предварительно проводилась регидратация биологического материала путем гомогенизации содержимого капсулы (0,3 г) с 1,0 мл дистиллированной воды в течение 15--20 мин.На предварительно обезжиреннное, промытое 6и просушенное предметное стекло наносят образцытанализируемого гомогената препарата "Энтеросан",приготовленного непосредственно перед кристаллографическим исследованием, в объеме 0,3 мл. Это - оптимальный объем, учитывающий площадь стеклаяф и количество кристаллических и аморфных структур, подлежащих последующему морфометрическому анализу.

Сушка полученного микропрепарата проводилась модифицированным способом в токе теплого воздуха. При этом горизонтальное положение стекла и соответствующее направление потока обеспечивали дегидратацию проб в одинаковых условиях, не допуская их объединения.

Результаты кристаллизации интерпретировали по оригинальному алгоритму, включающему использование идентификационной таблицы кристаллических и аморфных структур, а также системы дополнительных параметров (выраженность ячеистости, краевой и центральной зоны, равномерность распределения элементов, степень деструкции фации и т. д.). В расчет принимали данные по 3 полям зрения, по которым рассчитывалось среднее значение, округлявшееся при морфометрическом анализе (изучение качественной и количественной представленности моно- и поликристаллических структур, аморфных тел) до целых чисел.

Тезиграфический образец оценивали с помощью основных и дополнительных показателей. К первым относятся тезиграфический коэффициент Q -- соотношение между количеством кристаллов в смеси"биологическая жидкость -- базисное вещество"и в фации чистого вещества, и коэффициент поясности P -- соотношение между диаметром максимального и минимального пояса кристаллизации, ко вторым -- правильность конфигурации преобладающих и добавочных образований; выраженность ячеистости, равномерность распределения элементов.

В целях уточнения особенностей и медико-биологической значимости инициированного кристаллогенеза биосред применяли расчет производных коэффициентов и выполняли анализ тенденций инициации.Базисными веществами в тезиграфическом тесте служили 0,9 и 10% растворы хлорида натрия; 0,01 Н раствор соляной кислоты и 0,1 Н раствор гидроксида натрия. Кристаллоскопические и тезиграфические картины оценивались при суммарном увеличении микроскопа Ч 56.Статистическую обработку полученных результатов осуществляли с помощью электронных таблиц Microsoft ,Excel 2003._

Были рассмотрены кристаллоскопическая картина и тезиграфические особенности 25 образцов восстановленного нативного препарата "Энтеросан", полученных из различных капсул.

Проведенные исследования показали, что результат собственной кристаллизации всех оцениваемых проб практически идентичен. Это говорит о возможности выделения кристаллоскопического "паттерна" данного препарата.Путем расчета средних величин с их последующим округлением до цельных значений был сформированморфометрический "паттерн" кристаллогенеза препарата "Энтеросан" (табл. 1).

Очевидно, что кристаллоскопическая картина высушенного образца образована сравнительно небольшим "ассортиментом" кристаллических структур. Так,одиночно-кристаллический компонент включает фигуры типов "пирамида" и "октаэдр" в незначительных количествах. В спектр поликристаллических (дендритных) образований дегидратированной фации препарата входят структуры типов "пластинчатый прямоугольник" и "линейчатый дендрит", также занимающие лишь небольшую часть поля зрения, что, казалось бы,свидетельствует о слабой кристаллизуемости лекарства.

Однако в микропрепаратах высушенного "Энтеросана" большую часть поля зрения занимают редкие по выявляемости поликристаллические структуры, не имеющие четко определенного форматного строения и трактуемые по используемой рабочей классификации как особый класс кристаллических структур("дендритоподобные мелко- и крупноячеистые сетки"). Аморфный компонент сформирован телами некристаллического строения в среднем количестве, среднего размера. Преобладающий тип взаимоотношений крупных кристаллических структур и аморфных образований --налипание.Таким образом, морфометрические показатели рзультата дегидратации препарата "Энтеросан" формируют особый кристаллоскопический "паттерн", позволяющий идентифицировать данное ЛС и производить оценку его качества. В вышеуказанный "паттерн" нами также включалась совокупность дополнительных параметров оценки свободного кристаллогенеза изучаемого препарата. В абсолютном большинстве случаев фации препарата получали сходные оценки по используемым полуколичественным шкалам дополнительных критериевоценки.Так, результат свободного кристаллообразования образца обладает достаточно высокой степенью равномерности плотности распределения элементов фации и незначительной выраженности деструктивного процесса в отношении кристаллических и аморфных структур, что свидетельствует о правильности кристаллогенеза исследуемого субстрата (упорядоченности кристаллизации).

Высокий уровень ячеистости кристаллоскопической фации в данном случае связан с наличием дендритоидных поликристаллических сеток, фрагментирующих текстуру образца (табл. 2).

В данном препарате отмечено незначительное участие в кристаллогенезе белковых молекул, на что указывает слабо выраженная краевая зона Анализ результатов тезиграфического теста, который способствует раскрытию инициаторного потенциала исследуемого субстрата(табл. 3), также обнаружил сходные закономерности кристаллообразования различных образцов препарата "Энтеросан", проявляющиеся в однонаправленной модуляции кристаллогенеза, инициируемого рядом базисных веществ. Это позволило зафиксировать и математически (критериально) описать тезиграфический "паттерн", характерный для изучаемого препарата.Как установлено, инициаторный потенциал препарата "Энтеросан" настолько высок, что дендритоидные сетки различного калибра проявлялись и в тезиграфических фациях, занимая в них значительную часть поля зрения и выступая в качестве основного элемента.

Подобный тип кристаллообразования, по-видимому, сказывался на течении процесса дегидратации, что нашло свое отражение в неполной гомогенизации системы "субстрат -- базисное вещество" в динамике высушивания и даже в дефинитивной фации.Высокий инициаторный потенциал четко просматривается при изучении основного тезиграфического коэффициента, указывающего на количественную характеристику кристаллогенеза -- кристаллизуемость.

Согласно полученным данным, относительно кристаллообразователей любой природы и химического состава (соли различной осмолярности, моделирование кислой и щелочной среды) наблюдается достоверное по сравнению с контрольным образцом (более чем в 2,09--5,25 раза; p<0,01) повышение кристаллообразования. Высокая степень упорядоченности кристаллообразования также проявляется при тезиграфическом анализе, что визуализируется повышенным уровнем равномерности распределения элементов в микропрепарате и высокой степенью ячеистости (за счет дендритоидных структур). Дополнительно это подчеркивается при исследовании степени выраженности деструктивных процессов (около 1 балла по шкале от 0 до 3 баллов).Таким образом, на основе метода дифференциальной тезиграфии сформирован инициаторный профиль препарата "Энтеросан".

Вывод.

Образован единый тезиокристаллоскопический"паттерн" показателей свободного и инициированного кристаллообразования препарата "Энтеросан". "Паттерн" может быть использован как способ мониторинга качества и идентификации данного лекарственного средства[3].

Заключение

Итак, мы провели литературный обзор статей журнала «Фармация» за 2006 год по фармацевтическому анализу и установили, что:

А) Образован единый тезиокристаллоскопический"паттерн" показателей свободного и инициированного кристаллообразования препарата "Энтеросан". "Паттерн" может быть использован как способ мониторинга качества и идентификации данного лекарственного средства;

Б) 1. Установлены оптимальные условия проведения реакции салицилатного комплекса меди (II) с лидокаина гидрохлоридом (рН среды,концентрация реактивов, время и степень однократной экстракции). Экстракты продукта реакции подчиняются основному закону светопоглощения Бугера--Ламберта--Бера в пределах концентрации лидокаина гидрохлорида 2--14 мг/5 мл.2. Экспериментально доказано, что продукты разложения лидокаина гидрохлорида (диэтиламиноуксусная кислота, 2,6-диметиланилин) не мешают количественному определению его в субстанции.3. Разработан метод экстракционно-фотометрического определения лидокаина гидрохлорида в субстанции в присутствии продуктов его разложения; относи-тельная ошибка не превышает Ѓ}1,23%.;

В)Как показал анализ, СО2-экстракты значительно отличаются от эфирного масла, полученного из того же сырья перегонкой с водяным паром. Так как в пищевой промышленности и косметологии СО2-экстракты активно используются в качестве заменителей эфирных масел и пряностей, вопросы их фармакологической активности особенно актуальны;

Г) Что способ ДЭ по эффективности извлечения гидрофильных БАВ не уступает экстракции водно-спиртовыми и водно-органическими растворителями, традиционно применяемыми в производстве суммарных фитопрепаратов. Метод комплексной переработки сухого сырья бурых водорослей путем экстракции ДСЭ позволил получить новый продукт -- масляный экстракт ламинарии (патент РФ RU 2142812), который используется при производстве кремов серии Марина. На основе водно-спиртовых извлечений, полученных при экстракции травы зверобоя и цветков календулы ДСЭ, разработаны технологии гранул сухого экстракта зверобоя и гранул сухого экстракта календулы. Предложены технологии косметического крема и лечебного геля, содержащих БАВ травы зверобоя и сушеницы, полученные методом эмульсионной экстракции.

Д)1. Разработаны методики экспресс-анализа производных фенотиазина с применением качественных химических реакций и метода ТСХ-анализа.

2. Разработаны методики УФ-и ИК-спектроскопии для подтверждения подлинности лекарственных препаратов, производных фенотиазина.

3. Предложенные методики могут быть использованы для установления подлинности лекарственных препаратов, производных фенотиазина и для выявления фальсифицированной продукции, не содержащей указанного на упаковке лекарственного вещества.

А также мы изучили применение хроматографических,УФ-спектрофотометрических и других методов в фармацевтическом анализе. Писали методики определения различных веществ и основные сферы использования данных методов в фармацевтическом анализе,сделали выводы по фармацевтическому анализу по каждой статье.В задачу фармацевтической химии входит разработка методов исследования и оценка качества лекарственных средств, повышение эффективности контроля качества, устранение причин брака и появление недоброкачественной фармацевтической продукции, а также фальсифицированных лекарственных средств. Эта задача решается с помощью углубления теоретических и практических знаний в области физических, химических, биологических, микробиологических и особенно инструментальных методов контроля лекарственных средств на всех этапах его производства. Лидирующее место в контроле качества лекарственных препаратов заняли хроматографические и уф-спектрофотометрические методы, позволяющие анализировать сложные смеси компонентов.

Цели и задачи курсовой работы достигнуты.

Список использованной литературы

вещество фармацевтический фенотиазин лидокаин

1.Агларова А.М.,Зилфикаров И.Н. «Сравнительный анализ эфирного масла и СО2 -экстрактов полыни эстрагон» // Фармация - № 3 - 2006, с. 12-14.

2.Каухова И.Е.«Новая методика получения растительных препаратов» //Фармация - №1 - 2006, с. 37-39.

3. Коллектив авторов: А.К. Мартусевич,О.Б. Жданова « Тезиокристаллоскопия

в идентификации качества лекарственного препарата»//Фармация №2- 2006,с.15-17.

4.Кувырченкова И.С. «Методики анализа производных фенотиазина» // Фармация - № 6 - 2006, с. 18-21.

5.Сараева О.А., Нохрин Д.Ф. «. Селективный метод определения лидокаина гидрохлорида»// Фармация №6-2006,с.13-15

Размещено на Allbest.ru