Мечение этамбутола термически активированным тритием

Размещено на http://www.allbest.ru/

МЕЧЕНИЕ ЭТАМБУТОЛА ТЕРМИЧЕСКИ АКТИВИРОВАННЫМ ТРИТИЕМ

Б.Х. Ярматов, A.A. Ким, Г.Т. Джураева

Использование меченных тритием фармакологических препаратов для исследований фармакокинетики и фармакодинамики лекарственных препаратов является эффективным и наиболее информативным методом. Известно, что эффективность и безопасность фармакотерапии прежде всего определяется особенностью клинических и фармакологических свойств лекарственных средств. Определение связывающей емкости транспортных белков крови человека может оказаться весьма важной для определения эффективного переноса лекарственного препарата в крови и определения оптимальной дозы лекарственного препарата, что, в свою очередь, может играть весомую роль в обеспечении эффективности и безопасности проводимой лекарственной терапии [1,2]. Одним из актуальных вопросов практического здравоохранения является изучение транспортной системы белков крови при туберкулезе. Важность таких исследований обусловлена в первую очередь тем, что препараты, применяющиеся для лечения туберкулеза, обладают гепатотоксичными свойствами. Использование меченных тритием фармакологических препаратов для определения связывающей емкости транспортных белков крови человека позволяет наиболее точно определить количественные характеристики связывания. Ранее нами был разработан метод получения меченного тритием противотуберкулезного препарата этамбутола [3]. Для более полной оценки связывающей способности транспортной системы белков крови необходимо расширить спектр исследуемых фармакологических препаратов.

В данной работе была решена задача разработки метода получения меченного тритием фармакологического препарата этамбутола для дальнейшего использования в медико-биологических исследованиях. Этамбутол относится к основным препаратам для лечения туберкулеза и является на сегодняшний день одним из основных хорошо изученных противотуберкулезных препаратов [4]. Химическое название этамбутола:(D-(R,R)-N,N'-этилен-бис (2-аминобутан-1-ол)) дигидрохлорид, C10H24N2O2 ? 2 HCl, молекулярная масса 277,2.

Мечение термически активированным тритием. Фармакологический препарат этамбутола метили термически активированным тритием на установке, разработанной в лаборатории биологической радиохимии [5]. Процедура мечения включает в себя приготовление раствора этамбутола в этиловом спирте. Затем раствор этамбутола (5 мг) в этаноле наносили на внутреннюю поверхность реакционной колбы, покрытую силикагелем, и высушивали при комнатной температуре до полного удаления растворителя. Затем реакционную колбу охлаждали в жидком азоте и вакуумировали до 5х10-3мм рт. ст. Мечение проводили циклами, состоящими из наполнения системы газообразным тритием до давления 1х10-1 мм. рт. ст. и активации трития нагретой вольфрамовой спиралью в течение 20 секунд с минутными перерывами между разогреванием спирали.

Между циклами реакционную колбу размораживали, этамбутол растворяли этанолом, отбирали аликвоту на измерение и снова высушивали. После окончания мечения этамбутол растворяли этанолом снимали со стенок реакционной колбы многократным ополаскиванием колбы небольшими порциями этанола. Полученный раствор высушивали до полного удаления этанола, затем снова растворяли в этаноле и повторно высушивали для удаления несвязавшегося и лабильного трития.

Очистка тонкослойной хроматографией. Очистку меченного препарата этамбутола от побочных продуктов проводили тонкослойной хроматографией на пластинах с Silufol (Чехословакия). Система аммиак концентрированный (25%): ацетон: метанол: этилацетат (1:1:1:7). В этой системе Rf этамбутола составлял 0,36

Измерение радиоактивности фракций меченного препарата. После проведения тонкослойной хроматографии из пластины вырезали участок с пятном а, снимали с него силикагель и элюировали этамбутол этанолом. Кроме того, вырезали полосу старта и пятно с фронта хроматограммы. Фракции элюировали этанолом, высушивали и взвешивали.

Радиоактивность фракций этамбутола определяли жидкостно-сцинтилляционном счетом на счетчике РЖС-05 в толуольном сцинтилляционном коктейле (в 1л толуола 4г РРО и 0,05 г РОРОР) [6].

Нами было обнаружено изменение цвета препарата этамбутола. Исходный этамбутол - это кристаллы белого цвета. В ходе мечения появилось коричнево-желтое окрашивание препарата, что свидетельствует об интенсивной деструкции или трансформации вещества.

тритий этамбутол фракция белок

Рисунок 1 - Зависимость суммарной активности меченного тритием препарата этамбутола от длительности процедуры мечения

При очистке меченного препарата тонкослойной хроматографией нами было обнаружено появление дополнительной полосы на тонкослойной хроматограмме, которая продвигалась с фронтом растворителя.

Рисунок 2 - ТСХ хроматограмма меченного препарата этамбутола

Распределение радиоактивности фракций этамбутола показано в таблице 1.

Таблица 1 - Анализ меченных тритием фракций этамбутола

Выход меченого тритием этамбутола с удельной активностью 43,83МБк/ммоль составил 23,53%.

После очистки сделали контрольную ТСХ хроматограмму очищенного меченного тритием этамбутола

Рисунок 3 - ТСХ хроматограмма очищенного меченного тритием препарата этамбутола в системе аммиак концентрированный (25%): ацетон: метанол: этилацетат (1:1:1:7). 1 - немеченый препарат этамбутола (контроль) (детекция УФ), 2 - меченый препарат этамбутола (радиоавтография)

Таким образом, нами были подобраны оптимальные условия мечения этамбутола. Была разработана система очистки меченного тритием этамбутола тонкослойной хроматографией на силикагеле в системе аммиак концентрированный (25%):ацетон: метанол: этилацетат (1:1:1:7). Нами было получено 1,18 мг меченного тритием этамбутола с удельной весовой активностью 5.850.847 Бк/мг (5,85 МБк/ мг) и удельной молярной активностью 1621,85 МБк/ммоль (43,83 мКи/ммоль).

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Каримов Х.Я., Зуева Е.Б., Рахимов М.М., Усманов Ш. Р. Сывороточный альбумин. Медицинский журнал Узбекистана-1998-№6, стр.111-112.

2. Мокашова В.В., Солнцева В.И., Рослый И.М. Интоксикационный синдром у больных при остром вирусном гепатите В. Эпидемиология и инфекционные болезни, 1996, №1, с. 49-52.

3. Ярматов Б.Х., Ким A.A., Джураева Г.Т. Мечение изониазида термически активированным тритием. Доклады Академии Наук РУз, 2012, №2, с. 23-25.

4. Якубов М.Р. Стандартизация и контроль качества противотуберкулезных лекарственных средств. Автореферат канд.дисс., Москва - 2007.

5. Kim A.A., Djuraeva G.T., Zinovev P.V., Sadikov I.I., Rylov A.A. A new technique for tritium labeling of complex technical mixture of PCB congeners. Journal of Radioanalytical and Nuclear Chemistry, 2007, vol.272, № 3, p.483-489.

6. Рысьев О.А., Жарков А.В., Долгирев Е.И. Сцинтилляционный метод измерения трития в биологии и медицине. М., «Атомиздат», 1978, стр.15.

Размещено на Allbest.ru