Использование специфической фагоцитарной реакции клеток крови для оценки напряженности адаптивного иммунного ответа при БЦЖ-вакцинации

Размещено на http://www.allbest.ru/

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ФАГОЦИТАРНОЙ РЕАКЦИИ КЛЕТОК КРОВИ ДЛЯ ОЦЕНКИ НАПРЯЖЕННОСТИ АДАПТИВНОГОИММУННОГО ОТВЕТА ПРИ БЦЖ-ВАКЦИНАЦИИ

Фокина Л.А., Горовиц Э.С.,

Фельдблюм И.В., Санакоева Л.П.

Особенностью современной эпидемической ситуации является не только рост инфицированности, заболеваемости и смертности от туберкулёза взрослых, но и детей - именно той части населения, в которой закладывается, формируется, а, следовательно, и должен контролироваться, протективный противотуберкулезный иммунитет. Одним из приоритетных методов борьбы с этой опасной инфекцией является вакцинация. Однако оценка эффективности вакцинной профилактики встречает определённые трудности. Наиболее сложной задачей остается способ контроля длительности сохранения и напряжённости прививочных реакций, обеспечивающих формирование защитных механизмов против вирулентных штаммов микобактерий. Единственными критериями индивидуальной оценки состоятельности проведённой вакцинации остаются размер кожного знака и туберкулиновые пробы, но в отдалённые сроки после введения БЦЖ они утрачивают своё абсолютное значение, особенно в случаях отсутствующего рубчика и отрицательной пробы Манту с 2 ТЕ ППД-Л. В этой связи поиск и апробация иных, дополнительных методов регистрации пост вакцинального иммунного ответа представляется насущной задачей. Известно, что в против инфекционной защите организма человека главная роль принадлежит фагоцитозу патогена с последующим его киллингом. Участие фагоцитирующих клеток в адаптивных реакциях опосредовано процессом их активации.

Поэтому целью наших исследований было изучение возможности использования специфической фагоцитарной реакции лейкоцитов для оценки динамики развития иммунной реакции после БЦЖ-вакцинации.

Материалы и методы исследования:

Экспериментальный раздел работы выполнен на 10 неполовозрелых кроликах породы «Шиншилла» (4 из них служили контролем). Опытным животным БЦЖ-вакцину вводили внутрикожно в области внутренней поверхности левого уха в дозе 0,05мг. В контрольной группе вместо БЦЖ кроликам инъецировали физиологический раствор натрия хлорида в той же дозировке. Через 1, 3, 5, 7, 10, 14, 17, 21, 28, 39, 53, 70 и 85 суток после введения вакцины и физраствора определяли характер изменений фагоцитарной активности лейкоцитов (ФАЛ) в сравнении с таковой в исходном фоне. Кроме того, развитие вакцинального процесса оценивали визуально по эволюции развития кожного знака в зоне введения БЦЖ. Цикл развития специфических местных реакций составил 12 недель. По истечении этого срока у всех привитых животных определялся четкий пост вакцинальный рубчик, средний размер которого составил 4 мм в диаметре. В серии специальных клинических наблюдений изучали также ФАЛ у 44 БЦЖ-вакцинированных детей, которые на основании данных проведённого анализа историй развития и результатов их клинического осмотра, с использованием необходимых лабораторных исследований, считались здоровыми, неинфицированными микобактериями туберкулёза. При этом особое внимание придавали оценке реакции Манту с 2 ТЕ ППД-Л и величине пост вакцинального рубчика. В зависимости от срока, прошедшего с момента вакцинации, среди них было выделено 3 подгруппы. В первую вошли малыши возрастом от 1 года до полутора лет (16 человек); во вторую - 15 детей в возрасте от 2-х до 2 лет 6 мес.; третью подгруппу составили дети 3-х летнего возраста (13 человек). Контролем служили показатели, полученные в подгруппе здоровых неинфицированных микобактериями детей (10 человек): из них 1 не был вакцинирован, 9 - имели отрицательную реакцию Манту перед первой ревакцинацией. ФАЛ определяли по оригинальной методике. В качестве объектов фагоцитоза (ОФ) одновременно использовали 2 вида коммерческих эритроцитарных диагностикумов (ЭД): формалинизированные эритроциты барана, сенсибилизированные фосфатидным антигеном микобактерий туберкулёза (опытный ЭД) и липополисахаридом шигелл Зонне (контрольный). В мазках крови подсчитывали фагоцитарное число (ФЧ) - среднее число поглощенных ОФ различной специфичности, приходящихся на один потенциальный фагоцит из 100 сосчитанных лейкоцитов. Для объективизации оценки полученных результатов использовали унифицированный относительный показатель - индекс специфического изменения фагоцитоза (ИСФ), который рассчитывали по формуле:

Где:

ФЧ сп, несп - фагоцитарное число специфического и неспецифического ОФ у обследуемых (БЦЖ-вакцинированных кроликов и детей);

- среднее значение фагоцитарного числа со специфическими и неспецифическими объектами фагоцитоза у животных и детей контрольных групп.

ИСФ позволяет определить во сколько раз относительная величина фагоцитоза специфического объекта выше или ниже соответствующей величины фагоцитоза неспецифического объекта. Нами были установлены нормативные значения ИСФ до БЦЖ-вакцинации кроликов. Они соответствовали 0,23-1,98 (т. е., приблизительно, 0,2-2,0). Определен также физиологический диапазон колебаний значений индекса у детей контрольной группы исследований; он составил 0,60 - 1,50. «Выход» за указанные пределы расценивали как диагностически значимый результат, характеризующий наличие специфических изменений фагоцитарной активности клеток крови после БЦЖ-вакцинации.

Результаты исследования и их обсуждение:

У всех вакцинированных животных уже через 1 сут. появилась местная реакция в виде гиперемированного пятна. В последующем кожный процесс протекал в несколько фаз. Инфильтративно-экссудативная (папула, инфильтрат, пустула) наблюдалась с 5-х по 28 сут. с максимальной выраженностью воспаления через 3 недели. Продуктивная фаза (рассасывание инфильтрата с одновременным формированием узелка) начиналась у большинства кроликов через месяц, с нарастанием реакции к 39 - 53 дням. И, наконец, фаза фиброза (образование рубчика) развивалась через 2,5месяца после вакцинации. Что касается оценки изменений фагоцитарной активности лейкоцитов после введения кроликам БЦЖ, то достоверное повышение средних значений ИСФ наблюдали на 7 день. При этом, по сравнению с 5 сут., индекс достоверно увеличивался в 2 раза. На 10 сут. показатели ИСФ продолжали нарастать, и были в 6 раз больше контрольных величин и в 2,6 раза выше, чем на 7 день исследования. В последующем до 21 сут. увеличение индекса специфического фагоцитоза у иммунизированных животных было достоверным относительно контрольных показателей. К концу 3-й недели наблюдали 10-кратное превышение величины индекса специфического фагоцитоза над соответствующим значением не вакцинированных кроликов (10,70±5,60 - против 1,16±0,02 - в контроле). В последующем показатели ИСФ периодически снижались или увеличивались.

Стойкое их падение происходило лишь после 53 дня. Однако и в это время индекс оставался стабильно высоким по отношению к контрольным величинам, превышая их в 3-7 раз.

При анализе индивидуальных значений ИСФ у всех вакцинированных кроликов выявлено специфическое изменение ФАЛ крови в виде прогрессивного повышения индекса специфического фагоцитоза в течение всего наблюдаемого периода. Наибольшее количество диагностически значимых результатов у животных отмечено через 10 сут. (100%) и через 3 недели (83,3%). И хотя в инфильтративно-экссудативную фазу изменения фагоцитарной реакции носили волнообразный характер, тем не менее, они всегда были выше контрольных величин. При этом постоянно имелась положительная корреляционная связь между значениями ИСФ и размером кожного знака (r=+0,87).

Таблица 1. - Показатели специфической фагоцитарной активности лейкоцитов крови кроликов в динамике после БЦЖ-вакцинации:

К концу развития этой фазы (28 сут.) показатели ИСФ снизились более чем в 4,5 раза по отношению к 21 дню. В продуктивную фазу воспаления происходило очередное повышение фагоцитарной активности лейкоцитов крови. В частности, ИСФ на 39 и 53 сут. исследования достоверно превышал контрольные его значения в 7,7 и в 7,9 раза (соответственно). К концу сроков исследования, когда формировался рубчик, наблюдали снижение ФАЛсп. Так, по отношению к соответствующему контролю, ИСФ даже на 85 сут. составлял еще 3,94±0,65 (1,10±0,29 - в контроле). При клинических исследованиях было установлено, что специфические изменения фагоцитарной активности клеток крови у вакцинированных детей выявлялись на протяжении трёх лет после БЦЖ-вакцинации (табл.2). Единственной формой реакции при этом было повышение ФАЛ в отношении специфических объектов (ИСФ более 1,50) фагоцитоза.

В целом, по данным ИСФ, в первой подгруппе в 93,7% случаев отмечали специфическое повышение ФАЛ. Во второй - 80% положительных значений, а в третьей подгруппе лишь у 31% обследуемых детей ИСФ имел диагностически значимый результат.

При этом у большинства малышей пост вакцинальная местная реакция была в фазе формирующегося или сформированного рубчика, поэтому корреляционной зависимости между специфической фагоцитарной активностью лейкоцитов и размерами кожного знака в указанные сроки наблюдений не установлено.

Таким образом, изменение специфической фагоцитарной активности лейкоцитов при БЦЖ-вакцинации свидетельствовало об иммунологических сдвигах в организме привитых детей и животных, а выраженность этой реакции, оцениваемой по величине ИСФ, интегрально отражала интенсивность формирующегося адаптивного противотуберкулезного иммунитета.

Таблица 2. - Показатели специфической фагоцитарной активности лейкоцитов у здоровых БЦЖ-вакцинированных детей различных возрастных подгрупп:

Выводы

1. Специфическое изменение фагоцитарной активности лейкоцитов крови позволяет оценить в динамике напряженность и длительность формирующегося противотуберкулезного иммунитета.

2. Использование ИСФ дает возможность более объективно, с учетом индивидуальных особенностей организма, оценить фагоцитарную активность лейкоцитов при БЦЖ-вакцинации.

3. Включение данного метода в комплекс уже существующих тестов может значительно расширить возможности регистрации пост вакцинального иммунитета и качества проведенной вакцинации в условиях массового обследования детей.

противотуберкулезный иммунитет вакцинация

Литература

1. Долгушин И.И., Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин. - Екатеринбург: Изд-во УрО РАН, 2001. - 278 с.

2. Каплин В.Н., Нетрадиционная иммунология инфекций - Пермь: Изд-во Перм. гос. мед. академии, 1996. - 160 с.

3. Хаитов Р.М. Современные представления о защите организма от инфекции / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология, 2000. - №1. - С. 61-64.

Размещено на Allbest.ru