Определение показателей белкового обмена, иммуноглобулинов и некоторых цитокинов в крови больных сахарным диабетом типа 2

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Определение показателей белкового обмена, иммуноглобулинов и некоторых цитокинов в крови больных сахарным диабетом типа 2

Гусейнова Гюнель Рашид кызы,

аспирант кафедры биохимии Азербайджанского медицинского университета.

Научный руководитель - доктор биологических наук, профессор, зав. кафедрой биохимии

Ариф М. Эфендиев.

Несмотря на то, что число больных сахарным диабетом (СД) во всем мире больше 100 млн. и тяжесть настоящего социально-экономического положения приводит к васкулярным осложнениям, этиология СД до сих пор не изучена до конца [8].

Исследования последних 10 лет показывают, что воспаление, в особенности провоспалительные цитокины, являются определяющим элементом в развитии сосудистых диабетических осложнений [2].

Целью настоящей работы было исследование в сыворотке крови больных сахарным диабетом типа 2 содержания глюкозы, HbA1c (гликозилированный гемоглобин), показателей белкового обмена, иммуноглобулинов (A, G, M) и цитокинов - ИЛ-8 (интерлейкин-8), ФНО -б (фактор некроза опухоли), ТФР-в1 (трансформирующий фактор роста).

Материалы и методы

Исследования проводились в биохимической лаборатории Азербайджанского Медицинского Университета с кровью 76 больных сахарным диабетом типа 2. Кровь 20 здоровых доноров служила в качестве контроля.

Количество глюкозы определяли ферментативным глюкооксидазным методом готовым реактивным набором «Human» (Германия) [4].

Уровень HbA1с - гликозилированного гемоглобина определялся по цветной реакции с тио-барбитуровой кислотой. Принцип метода заключается в том, что эритроциты отмываются от белков плазмы и глюкозы; содержащийся в них гликозилированный гемоглобин гидролизуется нагреванием со щавелевой кислотой, при этом из остатков моносахарида образуется 5-оксиметил-фурфурол, количество которого определяется по цветной реакции с тио-барбитуровой кислотой. Одновременно определяют концентрацию гемоглобина в гемолизате, результаты выражают процентами молекул гемоглобина, которые гликозилированы [3].

Количество общего белка определяли биуретовым методом («Human» Германия). Принцип метода основан на том, что белки в щелочной среде с сульфатом меди образуют сине-фиолетовое окрашивание [5].

Для определения уровня альбумина использовали набор реактивов «Human» (Германия). Принцип метода основан на взаимодействии альбумина с бромкрезоловым зеленым с образованием соединения синего цвета [5].

Концентрацию креатинина в сыворотке крови определяли методом Поппер на основе цветной реакции Яффе с помощью набора реактивов фирмы «Lachema» производства Чехии. В щелочной среде креатинин образует с пикриновой кислотой соединение оранжево-красного цвета [1].

Определение в сыворотке крови мочевины проводили диацетилмонооксимным методом, используя набор реактивов «Lachema» (Чехия). В основе метода лежит способность мочевины образовывать красный комплекс при взаимодействии с диацетилмонооксимом в сильнокислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа [1].

Концентрацию иммуноглобулинов определяли методом турбидометрии с помощью тест-систем фирмы «Pars Azmun» (Иран).

Для определения уровня цитокинов в сыворотке крови проводили твердофазный иммуносорбентный анализ (ELISA) с помощью коммерческих наборов соответствующих реагентов фирмы «Bender Medsystems» (Австрия), согласно инструкциям производителей.

Статистическая обработка результатов исследований проведена с использованием программы STATISTICA 6.0. Полученные результаты были подвергнуты вариационному анализу с вычислением средней арифметической и ее ошибки для каждой группы. Достоверность различий между группой больных и контролем оценивали с помощью непараметрического U-критерия Манна-Уитни. При оценке различий показателей между группами взят порог доверительной вероятности не менее 0,95 с уровнем значимости р не более 0,05.

Результаты и обсуждение

Нами были исследованы некоторые биохимические и иммунологические показатели в сыворотке крови больных СД типа 2. Уровни глюкозы и гликозилированного гемоглобина приведены в таблице 1.

Таблица 1.

Уровень глюкозы и HbA1c в группах.

*р<0,001.

Таблица 2 отражает содержание показателей белкового обмена. Как видно из таблицы в крови больных СД типа 2 количество общего белка и альбумина уменьшается, а концентрация креатинина и мочевины наоборот повышается.

Таблица 2.

Уровни показателей белкового обмена у больных СД типа 2 и в контрольной группе.

*p<0,001.

Отклонения белкового обмена сказываются и на глюконеогенезе из белка, поскольку избыточная продукция глюкозы при диабете отчасти зависит от повышения утилизации образующихся из белка предшественников. У больных диабетом количество азотистых продуктов в мышцах после приема белковой пищи восстанавливается труднее, чем в норме. В процессе превращения белка в углеводы образуется аммиак, мочевина и другие продукты распада. В связи с этим, при нелеченном или декомпенсированном СД возникают процессы, обусловленные усиленным образованием аммиака, как в печени, так и в почках. Рисунок 1 показывает изменение показателей белкового обмена больных СД типа 2.

Рис.1. Изменение показателей белкового обмена в сыворотке крови больных СД типа 2.

За последние годы показано, что в патогенезе СД типа 2 ведущую роль играют различные виды цитокинов. Под цитокинами понимают растворимые низкомолекулярные белковые или полипептидные гормоноподобные иммуномодуляторы, синтезируемые и секретируемые клетками иммунной системы: Цитокины являются основными межклеточными медиаторами иммунной системы, а также участвуют во многих физиологических и патологических реакциях организма [9].

Полученные в результате проведенных исследований уровни иммуноглобулинов и цитокинов приведены в таблице 3.

сосудистый диабетический белковый обмен

Таблица 3.

Иммунные показатели в крови больных СД типа 2.

*p<0,001.

При СД 2 типа выявляются многочисленные нарушения, характерные для острой фазы ответа организма, инициируемые цитокинами ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-б; эти процессы наиболее выражены при сосудистых осложнениях СД. ФНО-б выполняет регуляторные и эффекторные функции в иммунном ответе и воспалении. [9].

Также ФНО-б является индуктором ИЛ-8. ИЛ-8 низкомолекулярный цитокин воспаления, принадлежит к семейству хемокинов. Продуцируется под воздействием бактериальных эндотоксинов и цитокинов, главным образом ФНО-б и ИЛ-1. ИЛ-8 активирует нейтрофилы, в меньшей мере другие гранулярные лейкоциты, вызывает их хемотаксис в очаг воспаления. Повышенный уровень ИЛ-8 ассоциируется с хроническими и острыми воспалительными состояниями и коррелирует с тканевой инфильтрацией нейтрофилов [6].

Результаты нашего исследования (таб.3, рис.2) показывают что, содержание ИЛ-8 и ФНО-б в сыворотке крови достоверно повышается по сравнению с показателями контрольной группы, что свидетельствует о наличии глубокого воспалительного процесса у больных СД типа 2. Но надо учитывать тот факт, что повышенная концентрация ИЛ-8 может быть результатом и поздних осложнений диабета, а также субклинических (бессимптомных) инфекций. Рис.2 показывает изменение всех изученных иммунологических показателей в группе больных СД типа 2.

Рис. 2. Изменение иммунологических показателей в сыворотке крови больных СД типа 2.

ТФР-в1 - иммуносупрессор образуется Т-лимфоцитами и моноцитами, ассоциируется наличием диабетических микро- и макроваскулярных осложнений. Этот фактор роста как предполагают, участвует в развитии диабетической нефропатии, способствуя утолщению базальных мембран и экспансии мезангии почечных клубочков. Утолщение базальной мембраны клеток эндотелия сосудов приводит, в конечном итоге, к развитию иммунного воспаления сосудистой стенки. Одной из причин, способствующее повышению сывороточной концентрации ТФР-в1, может служить относительное состояние гипергликемии [7].

Таким образом, в настоящее время не вызывает сомнения тот факт, что активация системы иммунитета играет существенную роль в патогенезе СД типа 2. Эти иммунологические показатели могут быть успешными критериями в диагностике и лечении СД.

Литература

1. Архипова О.Г., Шацкая И.Н., Семенова Л.С. и др. Методы исследований в профпатологии (биохимические). М.: Медицина 1988, 208с.

2. Бондарь Т.П., Козинец Г.И. Лабораторно-клиническая диагностика сахарного диабета и его осложнений. Москва 2003, 87 с.

3. Князев Ю.А., Вахрушева Л.Л., Сергеев Н.А. и др. Значение определения гликолизированного гемоглобина и лактата плазмы для характеристики состояния детей и подростков, больных сахарным диабетом // Педиатрия, 1987, № 9, с. 62-64.

4. Колб В.Г., Камышников В.С. Справочник по клинической химии (2-ое издание), Минск, 1982, с. 117.

5. Меньшиков В.В., Делектерская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник. М.: Медицина 1987, 368 с.

6. Симбирцев А.С. Интерлейкин-8 и другие хемокины. Иммунология 1999;4;9-14.

7. A Pfeiffer, K Middelberg-Bisping, C Drewes and H Schatz Elevated plasma levels of transforming growth factor-beta 1 in NIDDM. Diabetes Care 1996, Vol 19, Issue 10, 1113-1117.

8. Joachim Spranger, Anja Kroke, Matthias Mohlig, Kurt Hoffman, Manuela Bergmann Inflammatory cytokines and the risk to develop type 2 diabetes. Diabetes vol.52, March 2003, p. 812-817.

9. Zhang M., Tracey KJ. Tumor necrosis factor. In: The Cytokine Handbook. Eds. A.W.Thomson. London: Acad. Press 1998;3;515-548.

Размещено на Allbest.ru