Новые подходы к количественному определению дубильных веществ

Размещено на http://www.allbest.ru/

СПХФА

Кафедра фармакогнозии

Курсовая работа на тему

«Новые подходы к количественному определению дубильных веществ»

Выполнила: студентка 3 курса ФФ

Королева А.О.

Проверила: Повыдыш М.Н.

2011

Оглавление

1. Введение

1.1 История изучения

1.2 Распространение. Классификация

1.3 Физико-химические свойства

1.4 Факторы, влияющие на накопление дубильных веществ. Качественные реакции

1.5 Методы, применяемые для количественного определения

1.6. Биологическая роль. Заготовка

1.7 Применение. Способы получения

2. Описание некоторых дубильных веществ

2.1 Танин

2.2 Эллагогендубильная кислота

3. Количественное определение дубильных веществ в лекарственном растительном сырье

3.1 Титриметрия (по ГФ 10,11 издание)

3.2 Весовой метод определения дубильных веществ

3.3 Хроматографический анализ дубильных веществ

4. Заключение

1. Введение

количественное определение дубильное вещество

Дубильные вещества -- группа весьма разнообразных и сложных по составу растворимых в воде органических веществ ароматического ряда, содержащих гидроксильные радикалы фенольного характера. Дубильные вещества широко распространены в растительном царстве, обладают характерным вяжущим вкусом. Они способны осаждаться из водного или водно-спиртового раствора раствором клея, а с солями окиси железа давать различных оттенков зелёные или синие окрашивания и осадки (чернильного свойства).

1.1 История изучения

Несмотря на то, что дубильные вещества стали известны уже давно (таннин был впервые получен Дейе и независимо Сегеном в 1797 г. и в руках Берцелиуса в 1815 г. имелся уже в довольно чистом состоянии) и много изучались, к началу XX века они были недостаточно исследованными, и не только химическая натура и строение почти всех их оставалось невыясненными, но даже и эмпирический состав очень многих из них разными исследователями делался различно. Объясняется это легко, с одной стороны, тем, что, будучи в большинстве веществами, не способными кристаллизоваться, они трудно получаются в чистом виде, а с другой -- малою их стойкостью и легкою изменяемостью. Глазивец (1867), как и многие другие, считал все Д. вещества за глюкозиды или тела, им подобные; однако позднейшие исследования показали, что таннин хотя, по-видимому, и встречается в соединении с глюкозой в альгаробиллах и мироболанах (Zollfel, 1891), но сам по себе не есть глюкозид (H. Schiff 1873), также и Д. кислоты дубовой коры (Etti 1880, 83, 89, Lowe 1881), равно как и очень многие др. Д. вещества, ничего общего с глюкозидами не имеют, а получение из некоторых из них сахаристых веществ обусловливалось исключительно нечистотою исследовавшихся препаратов. В настоящее время можно с достаточной уверенностью судить лишь о строении таннина, представляющего ангидрид галловой кислоты (см. и ниже). Собственно Д. вещества выделяются в особую группу органических соединений, обладающих некоторой совокупностью общих признаков, лишь благодаря именно неизвестности их строения. Весьма возможно, что по выяснении последнего они распределятся со временем по различным классам органических соединений, и тогда не представится более надобности и в особом общем названии для них, а нынешнее название "Дубильное вещество", согласно недавнему предложению Рейнитцера, придется, пожалуй, удержать только для тех из них, которые на самом деле способны дубить кожи.]. Деление их по окрашиванию, производимому с солями окиси железа, на железосинящие (Eisenblauende) и железозеленящие (Eisengrunende) ныне оставлено, потому что одно и то же Д. вещество может давать иногда синее, а иногда зелёное окрашивание, смотря по тому, какую взять соль железа, а сверх того, окрашивание может изменяться от прибавки, например, малого количества щелочи. Деление Д. веществ на физиологические (см. выше), дубящие кожу и вместе с тем дающие при сухой перегонке пирокатехин и не дающие галловой кислоты при кипячении с слабой серной кислотой, и патологические, для дубления менее пригодные (хотя и осаждающиеся раствором клея), при сухой перегонке дающие пирогаллол, а при кипячении со слабой серной кислотой -- галловую кислоту, также не вполне отвечает фактам, ибо, как в настоящее время известно, и патологические Д. вещества могут, хотя и не столь успешно, служить для дубления, а кроме того, таннин, например, являясь по преимуществу патологическим Д. веществом, встречается, по-видимому, и как нормальный продукт (сумах, альгаробилла, мироболаны). Как кислоты, Д. вещества образуют металлические производные -- соли, из которых свинцовые, представляющие нерастворимые в воде аморфные осадки, нередко применяются для извлечения Д. вещества из водных экстрактов Д. материалов, а также при анализе.

1.2 Распространение

В природе многие растения (особенно двудольные) содержат дубильные вещества. Среди низших растений они встречаются в лишайниках, грибах, водорослях, среди споровых - во мхах, хвощах, папоротниках. Богаты дубильными веществами представители семейств сосновых, ивовых, гречишных, вересковых, буковых, сумаховых. Семейства розоцветных, бобовых, миртовых насчитывают многочисленные роды и виды, в которых содержание дубильных веществ доходит до 20-30% и более. Больше всего (до 50-70%) дубильных веществ найдено в патологических образованиях - галлах. Наиболее богаты дубильными веществами тропические растения. Дубильные вещества содержатся в подземных и надземных частях растений: накапливаются в клеточном соке. В листьях дубильные вещества, или танниды, обнаружены в клетках эпидермы и паренхимы, окружающих проводящие пучки и жилки, в корневищах и корнях - накапливаются в паренхиме коры и сердцевинных лучах. К основным растения содержащим дубильные вещества относятся:

1. Quercus robur (дуб обыкновенный)

Сем.: Fagaceae (Буковые)

Сырье: Cortex Quercus (Кора дуба)

2.Polygonum bistorta (горец змеиный)

Сем.: Polygonaceae (Гречишные)

Сырье: Rhizomata Bistortae (Корневища змеевика)

4. Potentilla erecta = Potentilla tormentilla

(лапчатка прямостоячая = колган)

Сем.: Rosaceae (Розоцветные)

Сырье: Rhizomata Tormentillae (Корневища лапчатки)

4.Sanguisorba officinalis (кровохлебка лекарственная)

Cем.: Rosaceae (Розоцветные)

Сырье: Rhizomata et radices Sanguisorbae

Корневища и корни кровохлебки

5.Alnus incana, glutinosa (ольха серая, клейкая)

Сем.: Betulaceae (Березовые)

Сырье:Fructus Alni (Соплодия ольхи)

6. Bergenia crassifolia (бадан толстолистный)

Сем.: Saxifragaceae (Камнеломковые)

Сырье: Rhizomata Bergeniae (Корневища бодана)

7.Vaccinium myrtillus (черника обыкновенная)

Сем.: Vacciniaceae (брусничные)

Сырье:Fructus Myrtilli (Плоды черники)

8.Padus avium (черемуха обыкновенная)

Сем.: Rosaceae (Розоцветные)

Сырье: Fructus Padi (Плоды черемухи)

9.Cotinus coggygria (скумпия кожевенная)

Сем: Anacardiaceae (Сумаховые)

Сырье:Folia Cotini coggygriaе (Листья скумпии)

10.Rhus coriaria (сумах дубильный)

Сем.: Anacardiaceae (Сумаховые)

Сырье: Folia Rhoеs coriaria (Листья сумаха дубильного)

11.Hamamelis virginiana (гамамелис)

Сем.: Hamameliaceae (Гамамелисовые)

Сырье: Folia Hamamelidis (Листья гамамелиса)

Классификация.

Существует несколько классификаций дубильных веществ. Одна из них, наиболее старая, но не потерявшая своего значения и в настоящее время, основана на способности дубильных веществ разлагаться при нагревании.

Таблица 1. Классификация дубильных веществ
Разновидность дубильных веществ	Нагревание до 180-200°С	Действие раствором солей окисного железа
Пирогаллоловая группа	Выделяется пирогаллол	Черно-синее окрашивание
Пирокатехиновая группа	Выделяется пирокатехин	Черно-зеленое окрашивание

По классификации Фрейденберга (более поздней) дубильные вещества делятся на гидролизуемые и конденсированные. Обычно в сырье содержатся разные группы дубильных веществ, но преобладает одна из них.

Некоторые авторы делят дубильные вещества на 3 группы:

Гидролизуемые (галлотанины);

Частично гидролизуемые (эллаготанины);

Конденсированные (катехины).

Гидролизуемые таниды подвергаются гидролизу ферментами (таназой) или кислотами с выделением фенольных соединений. Имеют гликозидный характер. Содержат эфиры ароматических оксикарбоновых кислот (галловой, эллаговой и др.) и сахарный компонент. С солями окисного железа образуют черно-синие осадки. Примером гидролизуемых дубильных веществ является танин. Конденсированные танниды негликозидного характера. Бензольные ядра соединены друг с другом посредством углеродных связей С-С; они являются производными главным образом катехинов и лейкоантоцианидов, с солями железа дают черно-зеленое окрашивание.

Составной частью конденсированных дубильных веществ является простейшее соединение этой группы - эпикахетин.

Дуб, бадан, лапчатка содержат дубильные вещества смешанной группы - конденсированные и гидролизуемые. Дубильные вещества легко извлекаются водой и водно-спиртовыми смесями.

1.3 Физико-химические свойства

Дубильные вещества обычно аморфные; многие хорошо растворяются в воде и спирте, имеют вяжущий вкус. В растворе дают слабокислую реакцию. В кристаллическом состоянии известны только катехины, они плохо растворимы в холодной воде, лучше в горячей. Многие дубильные вещества оптически активны. Большинство таннидов сильно гигроскопичны. В лекарственных смесях их нельзя смешивать с солями тяжелых металлов, белковыми веществами и алкалоидами, так как образуются осадки. Дубильные вещества с белками создают непроницаемую для воды пленку (дубление). Вызывая частичное свертывание белков, они образуют на слизистых оболочках и раневых поверхностях защитную пленку. При соприкосновении с воздухом (например, резке свежих корневищ) дубильные вещества легко окисляются, превращаясь во флобафены или красени, которые обусловливают темно-бурую окраску многих кор и других органов, настоев.

Флобафены нерастворимы в холодной воде, растворяются в горячей воде, окрашивая отвары и настой в бурый цвет.

1.4 Факторы, влияющие на накопление дубильных веществ

Содержание дубильных веществ в растении зависит от возраста и фазы развития, места произрастания, климатических и почвенных условий. На накопление дубильных веществ оказывает большее влияние высотный фактор. Растения, произрастающие высоко над уровнем моря (бадан, скумпия, сумах), содержат больше дубильных веществ. Освещение не является решающим фактором - повышенная освещаемость у одних содержание таннидов увеличивает, у других - уменьшает. Растения, произрастающие в сырых местах, содержат больше дубильных веществ, чем растущие в сухих местах. В молодых растениях дубильных веществ больше, чем в старых. В утренние часы (от 7 до 10) содержание таннидов достигает максимума, в середине дня доходит до минимума, а к вечеру вновь повышается. Выявление закономерности в накоплении дубильных веществ в растениях имеет большое практическое значение для правильной организации заготовки сырья.

Качественные реакции.

Для обнаружения дубильных веществ используют следующие реактивы:

Раствор желатина - к 2-3 мл испытуемого раствора добавляют по каплям раствор желатина; появляется муть, исчезающая при добавлении избытка желатина;

Бромная вода - к 2-3 мл испытуемого раствора прибавляют по каплям бромную воду (5 г брома в 1 л воды) до появления в растворе запаха брома; в случае присутствия конденсированных дубильных веществ образуется осадок.

1.5 Методы, применяемые для количественного определения

Проводится весовым способом и по методу Левенталя, указанному в ГФ Х (путем окисления перманганатом калия в присутствии индигокармина или индигосульфокислоты). Используются и другие методы.

Заготовка.

Производится в период наибольшего содержания в растениях дубильных веществ. После сбора сырье необходимо быстро высушить, так как под влиянием ферментов происходят окисление и гидролиз дубильных веществ. Рекомендуется сушить сырье при температуре 50-60°С. Хранят в сухом помещении в плотной упаковке, желательно в целом виде, так как в измельченном состоянии сырье подвергается быстрому окислению вследствие увеличения поверхности соприкосновения с кислородом воздуха.

1.6 Биологическая роль дубильных веществ

Роль таннидов для растений окончательно не выяснена. Предполагают, что они являются запасными веществами (накапливаются в подземных частях многих растений) и, обладая бактерицидными и фунгицидными свойствами (фенольные производные), препятствуют гниению древесины, то есть выполняют защитную функцию в отношении возбудителей патогенных заболеваний.

1.7 Применение. Способы получения

Дубильные вещества денатурируют белки клеток с образованием защитной альбуминатной пленки, оказывая на микроорганизмы бактерицидное или бактериостатическое действие. Лекарственное сырье, содержащее дубильные вещества, проявляет вяжущие свойства, поэтому используется для полосканий, при ожогах в виде присыпки, внутрь при желудочно-кишечных расстройствах, а также отравлениях тяжелыми металлами и растительными ядами.

Для получения дубильного вещества в чистом состоянии природные дубильные материалы экстрагируют водой или другими растворителями: крепким или слабым спиртом, чистым эфиром или в смеси со спиртом, уксусным эфиром и т. п.; экстракты выпаривают, и получаемые в остатке дубильные вещества очищают с помощью обработки их теми или другими из указанных растворителей. Чаще, приготовив водный или водно-спиртовый экстракт, извлекают из него дубильное вещество взбалтыванием с уксусным или простым эфиром или с их смесью или же осаждают (лучше фракционированно) уксуснокислым свинцом и, отфильтровав, разлагают осадки свинцовых соединений сернистым водородом. Пользуются иногда для осаждения дубильных веществ из водных экстрактов уксуснокислым хинином, уксуснокислою медью, рвотным камнем, поваренною солью, соляной кислотой и др. Для очищения прибегают иногда к помощи диализа, дающего с таннином хорошие результаты (Lowe, Biedel).

2. Описание некоторых дубильных веществ

2.1 Танин

Танин, галлодубильная кислота (Gallapfelgerbsaure, Gallusgerbsaure, acide gallotannique), находится в различных сортах чернильных орешков, патологических кнопперсах, сумахе, альгаробилле, мироболанах; имеет состав C14H10O9; представляет вяжущего вкуса аморфный порошок, растворимый в воде, спирте и уксусном эфире, нерастворимый в эфире, бензоле и др.; оптически недеятелен; даёт с хлорным железом в водном растворе чёрно-синий осадок, что применяется как качественная реакция на соли окиси железа; легко окисляется, поглощая в присутствии щелочей кислород из воздуха и восстанавливая закись меди из солей её окиси и соли серебра; осаждается из водных растворов (в отличие от галловой кислоты) клеем, сырой кожей, алкалоидами, альбуминатами, слабыми соляной и серной кислотами и многими солями (напр., поваренной). По Бёттингеру (1888), соединение танина с клеем содержит около 34 % танина. Танин разлагает углекислые соли, обнаруживая ясно кислотные свойства. Его соли аморфны, в основном нерастворимы и своим составом указывают на присутствие в его частице лишь одного карбоксила (H. Schiff). При нагревании до 210° танин дает пирогаллол; при кипячении с слабой серной кислотой или едким кали превращается нацело в галловую кислоту Различные сорта продажного танина дают при этом также изменчивые количества глюкозы, что и дало повод Штреккеру и др. рассматривать танин как глюкозид галловой кислоты. Однако вполне чистый танин, полученный, например, экстрагированием уксусным эфиром, не образует ни следов глюкозы (Lowe), при кипячении с водным аммиаком распадается на галламид и галловокислый аммиак (Etti, 1884), подобно тому как ангидрид молочной кислоты даёт амид этой кислоты и её аммиачную соль; при кипячении с уксусным ангидридом образует пятиацетильный эфир C14H5(C2H3O)5O9. Эти реакции определяют строение танина как дигалловой кислоты, представляющей ангидрид галловой

С6H2(OH) 3 СО--О--С 6H2 (ОН) 2 СОНО.

В подтверждение такого строения танина Г. Шиффом (1873) получена из галловой кислоты при нагревании её с хлорокисью фосфора, а также при выпаривании её водного раствора с мышьяковой кислотой, дигалловая кислота по уравнению

2C6H2(OH)3COHO -- H2O = С 6H2 (OH) 3 СО--О--С 6H2 (OH) 2 СОНО

по своим свойствам, реакциям и производным тождественная с танином.

танин находит обширное применение в медицине, в производстве чернил, красильном деле, для получения галловой кислоты и пирогаллола, но для дубления кож не применяется). Кроме дигалловой кислоты, Шиффом получены искусственно ангидриды и других многоатомных фенолокислот, а также сульфофенолокислот, со свойствами Д. веществ и близкие к танину. Сюда относятся: динитрогалло- и дифлороглюцинкарбоновые кислоты, полученные (1888) при действии хлорокиси фосфора на соответствующие изомеры галловой кислоты и имеющие состав C14H10O9.

При кипячении протокатеховой кислоты с мышьяковой получена (1882) дипротокатеховая кислота

C14H10O7 = 2C7H6O4 -- H2O,

показывающая все реакции, свойственные танину, также при кипячении с минеральными кислотами дающая обратно протокатеховую кислоту, с аммиаком её амид и аммиачную соль, но с хлорным железом в отличие от танина дающая зелёное окрашивание. При действии хлорокиси фосфора протокатеховая кислота образует ещё тетрапротокатеховую кислоту

C28H18O13 = 4С7H6O4 -- 3Н2O,

по окрашиванию с хлорным железом и др. свойствам сходную с предыдущей.

2.2 Эллагогендубильная кислота

Стоит в близком отношении к таннину, являясь, как и он, производным галловой кислоты, и часто встречается вместе с ним в растениях. Она составляет главную массу Д. вещества мироболанов, альгаробилл, диви-диви и, вероятно, коры корней граната (Lowe 1875, Zollfel 1891), а также найдена вместе с дубодубильной кислотой C16H14O9 в древесине черешчатого дуба (Etti 1889). Высушенная при 100°, она представляет состав C14H10O10 и вид буроватой аморфной массы; растворима в воде, спирте и уксусном эфире; образует чёрно-синий осадок с уксуснокислым железом и осадки с клеем, белком, алкалоидами и рвотным камнем; при нагревании с водой до 110° переходит в эллаговую кислоту, теряя при этом 2Н2О, и образует с уксусным ангидридом пятиацетильный эфир. Zollfel приписывает ей строение, выражаемое формулой

С6Н2(ОН) 3 СО--О--О--С 6 Н2 (ОН) 2 СООН = 2C 6H2(OH) З COHO -- H2

Эллаговая кислота C14H6O8 +2Н2О добывается из предыдущей или непосредственно из диви-диви; найдена во многих Д. материалах, где, быть может, образуется на счет эллагогендубильной кислоты, получается искусственно из галловой кислоты при разнообразных условиях по уравнению:

2C7H6O5 = C14H6O8 + 2H2O + H2,

напр., при нагревании её с мышьяковой к. (Lowe 1868, H. Schiff 1873), при нагревании её этилового эфира с раствором соды (Н. Schiff 1879) и мн. др. Она представляет желтоватый кристаллический порошок; трудно растворима в воде и спирте, нерастворима в эфире; теряет при 100° всю кристаллизационную воду, поглощая её обратно во влажном воздухе, если не была нагрета выше 120°; с хлорным железом даёт сперва зелёное и затем чёрно-синее окрашивание, а с азотной и азотистой кислотами в присутствии воды -- кроваво-красное (характерно); образует четырёхацетильный (H. Schiff, Zollfel) и такой же бензольный (Goldschmidt u. Jahoda 1892) эфиры; хотя ей и отвечают разнообразного состава труднорастворимые микрокристаллические или аморфные соли, однако кислотные её свойства выражены слабо, и угольную кислоту из углекислых солей она вытесняет с трудом; при восстановлении амальгамой натрия даёт как конечный продукт г-гексаоксидифенил С12Н4(ОН)6, который образуется из неё также вместе с в-гексаоксидифенилом при плавлении с едким натром; при кипячении с концентрированным раствором едкого кали превращается в гексаоксидифениленкетон C13H8O7, а при перегонке с цинковой пылью во флуорен С13Н10. Строение её не вполне выяснено.

3. Количественное определение дубильных веществ в лекарственном растительном сырье

В литературе описано около 100 различных способов количественного определении дубильных веществ, которые можно подразделить на следующие основные группы.

1. Гравиметрические -- основаны на количественном осаждении дубильных веществ желатиной, ионами тяжелых металлов или адсорбцией гольевым порошком.

2. Титриметрические -- на окислительных реакциях, прежде всего с применением перманганата калия (метод ГФ X).

3. Фотоколориметрические -- на реакциях с солями окисного железа, фосфорновольфрамовой кислотой, с реактивом Фолина -- Дениса и др.

4. Методы кефелометрические, хроматоспектрофотометрические в основном используются в исследованиях.

3.1 Титриметрия (по ГФ 10,11 издание)

В ГФ X входит титриметрический метод Левенталя в модификации А. Л. Курсанова, основанный на способности дубильных веществ быстро окисляться перманганатом калия.

Методика.

Около 2 г (точная навеска) измельченного сырья ,просеянного сквозь сито с диаметром отверстиий3 мм ,помещают в коническую колбу вместимостью 500 мл, заливают 250 мл нагретой до кипения воды и кипятят с обратным холодильником на электрической плитке с закрытой спиралью в течение 30 мин при периодическом перемешивании. Жидкость охлаждают до комнатной температуры и процеживают около 100 мл в коническую колбу вместимостью 200-250 мл через вату так, чтобы частицы сырья не попали в колбу. Затем отбирают пипеткой 25 мл полученного извлечения в другую коническую колбу вместимостью 750 мл, прибавляют 500 мл воды, 25 мл раствора индигосульфокислоты и титруют при постоянном перемешивании раствором перманганата калия (0,02 моль/л) до золотисто-желтого окрашивания.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл раствора перманганата калия (0,02 моль/л) соответствует 0,004157 г дубильных веществ в пересчете на танин. Содержание дубильных веществ в процентах в пересчете на абсолютное сухое сырье вычисляют по формуле :

X= (V-V1)*0,004157*250*100*100/m*25*(100-W)

Где V-объем раствора перманганата калия,израсходованного на титрование извлечения , в миллилитрах; V1-объем раствора перманганата калия израсходованного на титрование в контрольном опыте; 0,004157- количество дубильных веществ соответствующее 1 мл раствора перманганата калия (в пересчете на танин); m-масса сырья в граммах; W-потеря в массе при высушивании; 250-общий объем извлечения в миллилитрах; 25-объем извлечения взятого для титрования в миллилитрах.

Для количественного определения танина в листьях скумпии и сумаха предложен метод осаждения дубильных веществ сульфатом цинка с последующим комплексонометрическим титрованием.

Для количественного определения катехинов в листе чая М. Н. Запрометовым разработан фотоколориметрический метод с использованием бумажной хроматографии для разделения катехинов и реакции катехинов с 1 % ванилином в концентрированной HCI, в результате которой образуется окрашенный раствор.

3.2 Весовой метод определения дубильных веществ

В основу этого метода положено осаждение дубильных веществ солью алкалоида -- цинхонинсульфатом -- и взвешивание промытого и доведенного до постоянной массы осадка. Этот метод прост и достаточно точен.

Методика опыта. Около 10 г хорошо измельченного растительного материала (например, хмеля) помещают в коническую колбу на 750 мл, наливают в нее 400 мл кипящей воды и экстрагируют 2 ч на кипящей водяной бане, часто перемешивая. Смесь охлаждают до комнатной температуры и количественно переносят в мерную колбу емкостью 500 мл, доводят водой до метки, сильно встряхивают и фильтруют через сухой складчатый фильтр.

В небольшой химический стакан отмеряют пипеткой Мора 50 мл фильтрата и упаривают (можно на сетке или на слабом огне) до 15 мл. Затем стакан помещают в смесь льда с водой. После охлаждения в стакан наливают 50 мл тоже охлажденного, свежеприготовленного 1%-ного раствора цинхонинсульфата и оставляют в холодильнике на 2 ч.

Выпавший осадок количественно переносят на предварительно взвешенный сухой стеклянный фильтр № 3 и отфильтровывают (в начале фильтрования без отсасывания). Остатки содержимого стакана смывают небольшими порциями свежеприготовленного 0,2%-ного раствора цинхонинсульфата (1%-ный раствор разбавляют водой в 5 раз) и переносят на фильтр. После промывания начинают просасывать воздух через осадок до образования в нем трещин. Затем осадок -сушат сначала при 50--70° С, а потом при 100--105° С до постоянной массы.

Содержание дубильных веществ (в %) вычисляют по формуле:

X=(a-b)*0,6V*100/gV1

где а -- масса фильтра с осадком, г; Ъ -- масса фильтра, г; 0,6 -- коэффициент пересчета сухого осадка в дубильные вещества; v -- объем вытяжки, полученной из взятой навески, мл; g -- навеска исследуемого растительного продукта, г; v1 -- объем фильтрата, взятого для осаждения дубильных веществ, мл.

3.3 Хроматографический анализ дубильных веществ

Дубильные вещества можно также разделять методом нисходящей одномерной и двухмерной распределительной хроматографии. При одномерной хроматографии системой растворителей служит смесь «-бутилового спирта, уксусной кислоты (ледяной) и воды в соотношении (4:1: 3). При двухмерной нисходящей хроматографии в качестве первой системы растворителей применяют: смесь фенола, уксусной кислоты и воды в соотношении (50 : 4) и воду до насыщения. Эта система растворителей поступает по длине волокон бумаги. Второй системой является смесь я-бутанола, уксусной кислоты и воды в соотношении (4 : 12 : 29). Хроматограммы подсушивают при комнатной температуре и проявляют, опрыскивая их из пульверизатора раствором железо-аммонийных квасцов или ванилиновым реактивом (1%-ный раствор ванилина в концентрированной НС1).

Методика опыта. Для хроматографирования берут полоски бумаги длиной 45--55 см, шириной 12--18 см. Полученный экстракт дубильных веществ и раствор «свидетелей» наносят микропипеткой на бумагу в количестве 5--10 мкг на расстоянии 6 см от конца бумаги с соблюдением интервалов между пятнами 1,5--2 см. Длительность хроматографирования составляет 16--24 ч (в зависимости от сорта бумаги). В качестве хроматографической камеры применяют обыкновенный цилиндр высотой 60 см, диаметром 20 см. Растворитель помещают в ванночку, закрепленную внутри цилиндра. Воздух в цилиндре насыщают водой и закрывают герметично стеклом. Хроматографирование проводят при 15° С. Параллельно получают хроматограмму с раствором эталонов, или «свидетелей», которые наносят на ту же полосу бумаги рядом с исследуемым образцом. В качестве эталонов берут отдельные катехины или стандартный препарат чайного таннина с заранее известным составом катехина. Этим методом получены довольно четкие хроматограммы индивидуальных веществ. Метод используют также для качественного анализа.

4. Заключение

Количественное определение дубильных веществ, имеющих огромное значение в технике, представляет немалые трудности. Методов, отвечающих требованиям научной точности, строго говоря, не существует. Из приемов, дающих достаточно удовлетворительные результаты для технической практики, наиболее употребительны объемно-титриметрический способ Левенталь-Шредера и весовые способы Симанда и Вейса и Шредера. Способ Левенталь-Шредера основан на окислении Дубильные вещества веществ в водном растворе хамелеоном в присутствии индиго-сернокислого натра, служащего индикатором. Так как Дубильные вещества экстракты содержат в растворе, кроме Дубильные вещества веществ, еще и другие легко окисляющиеся тела, то одну часть раствора титруют хамелеоном прямо, а другую -- по осаждении из нее Дубильные вещества вещества порошком кожи; тогда разность обоих титрований покажет, какое количество хамелеона расходуется собственно на окисление Дубильные вещества вещества. Титр хамелеона, т. е. количество вещества, окисляемого одним куб. см. его раствора, устанавливается также в присутствии индиго по чистому танину. При этом из всего потраченного количества хамелеона вычитается то, которое идет на окисление индиго и которое определяется отдельным опытом. Получая по этому способу процентные содержания вещества, не следует смешивать их с числами процентов, находимыми весовым путем. 10%, например, полученные по Левенталю, означают лишь, что вещество, извлекаемое из данного материала, восстановляет столько же хамелеона, как если бы этот материал содержал 10% таннина.

При определении вещества весовым путем поступают так. Обработав материал при нагревании водой и отфильтровав по охлаждении, часть раствора выпаривают, остаток высушивают при 100°, взвешивают и затем сжиганием определяют в нем количество золы. Вес сухого остатка за вычетом золы, перечисленный на весь раствор, дает количество вещества + растворимое недубильное органическое вещество. Осаждают в другой части раствора вещество порошком кожи, фильтруют, часть фильтрата выпаривают и т. д. по предыдущему. Перечислив на весь раствор, получают таким образом количество вещества, перешедшего в раствор недубильного вещества.

Крайнею простотою отличается и для приблизительной оценки материалов достаточно удовлетворителен способ, предложенный Гаммером (1860). Определяется удельный вес водной вытяжки материала до и после осаждения порошком кожи, и по уменьшению удельного веса, пропорциональному процентному содержанию вещества в растворе, последнее (содержание) находится с помощью соответственной эмпирически составленной таблицы. Для упрощения Гаммер устроил ареометр, который непосредственно дает процентные содержания. Зная же процентный состав и вес вытяжки, легко получить и содержание вещества в самом материале.

Список литературы

1. Петров К.П.//Методы биохимии растительных продуктов (стр.207).

2. Государственная фармакопея 10 издание (стр.121).

3. Государственная фармакопея 11 издание (т.I,стр.137).

4. Н.И. Гриякевич, Л.Н. Сафронич //Химический анализ лекарственных растений (стр.506).

5. Коренская И.М. //Учебно-методическое пособие “Фармакогностический анализ лекарственного растительного сырья”(стр.145).

6. Councler'y Bockmann // Chemisch technische Untersuchungsmethoden (Bd. II, p. 517).

Размещено на Allbest.ru