Исследование системы крови

Размещено на http://www.allbest.ru/

Исследование системы крови

1. Получение, стабилизация и схемы исследования крови у животных

Потребность в исследовании крови определяется, прежде всего, ее физиологической ролью, а также изменениями, наступающими в ней при различных патологических состояниях. Дело в том, что кровь тесно связана со всеми органами и тканями. Вместе с эндокринной и нервной системами она обуславливает единство и целостность организма, обеспечивая его гомеостаз.

Кровь - это ткань организма, состоящая из жидкой части (плазмы) и взвешенных в ней клеточных (форменных) элементов. Кровь осуществляет транспорт химических веществ (в том числе кислорода), благодаря которому происходит интеграция биохимических процессов, протекающих в различных клетках и межклеточных пространствах. Основная функция крови - транспортная, т.е. перенос различных веществ, в том числе тех, с помощью которых организм защищается от воздействия окружающей среды или регулирует функции отдельных органов.

В зависимости от характера переносимых веществ различают следующие функции крови:

1. Дыхательная функция - транспорт кислорода от легочных альвеол к тканям и углекислоты от тканей к легким.

2. Трофическая (питательная) функция - перенос во все клетки организма питательных веществ (глюкозы, аминокислот, жиров, витаминов, минеральных веществ, воды).

3. Экскреторная функция - перенос конечных продуктов обмена веществ (мочевины, креатинина, мочевой кислоты и т.д.) в почки, и другие органы (например, кожу, желудок) и участие в процессе образования мочи.

4. Регуляторная функция - перенос гормонов, вырабатываемых железами внутренней секреции, и других биологически активных веществ, при помощи которых осуществляется регуляция функций отдельных клеток тканей.

5. Терморегуляторная функция - охлаждение кровью энергоемких органов и согревание органов, теряющих тепло, благодаря ее высокой теплопроводности и теплоемкости.

6. Гомеостатическая функция - достижение постоянства внутренней среды организма, благодаря перемещению крови и смыванию ею всех тканей.

7. Защитная функция крови прежде всего представлена функционированием системы иммунитета. Током крови удаляются и обезвреживаются образующиеся при повреждении тканей продукты их деструкции.

Исследование крови, в комплексе с клиническим исследованием животного, позволяет: 1) выявить скрытые изменения в органах и тканях, т.е. диагностировать субклиническую форму болезни (серологически: бруцеллез, лептоспироз, пуллороз птиц, вирусные респираторные и др. болезни; биохимически: нарушения обмена веществ); 2) определить возникшие осложнения; 3) дифференцировать сходные заболевания; 4) судить о тяжести болезни; 5) оценить функциональное состояние отдельных органов и систем; 6) контролировать эффективность лечебных и профилактических мероприятий; 7) прогнозировать исход заболевания.

Исследования крови проводят в республиканской, областных, районных и других производственных ветеринарных лабораториях, а также в ВГАВМ, БелНИИЭВ, БелНИИЖ и некоторых др. научно-исследовательских учреждениях. Районные лаборатории в состоянии и обязаны проводить общий клинический анализ крови (ОКА), который включает в себя определение СОЭ, концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, выведение лейкограммы. Также в ОКА крови включены рассчитываемые показатели: цветовой показатель (ЦП) и среднее содержание гемоглобина в эритроците (СГЭ). В отельных случаях у животных производят дополнительные исследования крови, такие как подсчет ретикулоцитов, сидероцитов, плазмоцитов и др. Обычно эти показатели исследуют при заболеваниях, сопровождающихся значительными нарушениями со стороны гемопоэза или когла возникает необходимость его достоверной оценки (например, в НИР).

Поэтому, приступая к рассмотрению исследования системы крови мы должны более-менее четко представлять схему кроветворения. Современный ее вариант предложен советскими гематологами И.Л. Чертковым и А.И. Воробьевым в 1973. В ней выделено 6 классов клеток. При этом 1-й класс представляют родоночальные полипотентные стволовые клетки-предшественницы гемопоэза. Второй класс представлен частично детерминированными полипотентными клетками-предшественницами. Среди них уже различают клетки-предшественницы миелопоэза и лимфопоэза.

В процессе дальнейшей дифференциации образуются унипотентные клетки-предшественницы, составляющие 3-й класс. Эти клетки способны существовать в течение 10-15 митозов, после чего погибают. К этому классу относятся эритропоэтинчувствительные клетки, лейкопоэтинчувствительные клетки и тромбопоэтинчувствительные клетки, которые способны к дифференциации только в определенный вид клеток. Названные первые три класса клеток морфологически в световой микроскоп не распознаются.

А вот уже клетки 4-го класса морфологически узнаваемы и к ним относят: плазмобласты, лимфобласты, миелобласты, эритробласты, мегакариобласты, миелоциты). Здесь следует иметь ввиду, что рассмотренные первые 4 класса клеток не обнаруживаются в крови у здоровых животных и их наличие свидетельствует о значительном нарушении гемопоэза.

Клетки же 5-го класса, к ним относят созревающие клетки, и 6-го класса, зрелые клетки, присутствуют в периферической крови как здоровых, так и больных животных. К созревающим относятся клетки, потерявшие способность к делению, но не достигшие морфо-функциональной зрелости: оксифильные нормоциты, метамиелоциты, палочкоядерные нейтрофилы, базофилы и эозинофилы. А к зрелым клеткам периферической крови относят тромбоциты, эритроциты, сегменоядерные нейтрофилы, базофилы и эозинофилы, лимфоциты, а также моноциты.

Биохимическое исследование крови предполагает определение в сыворотке содержание общего белка, глюкозы, кальция, неорганического фосфора, каротина и щелочного резерва. В лабораториях более высокого класса определяют, кроме того, содержание различных микроэлементов, витаминов, фракций белка, липидов, активность целого ряда ферментов и проводят другие более сложные исследования.

Кроме ОКА и биохимического исследования в ветеринарных лабораториях часто проводят серологические, бактериологические, иммунологические и др. исследования, для которых необходима или стабилизированная кровь, или ее сыворотка.

2. Получение и стабилизация крови

кровь животное иммунологический серологический

Кровь, смешанная с каким-либо антикоагулянтом, постепенно разделяется на два слоя: нижний - состоящий из форменных элементов крови, главным образом эритроцитов, и верхний - образованный плазмой. Скорость такого разделения не одинаковая у животных разных видов и значительно изменяется при некоторых заболеваниях. Это и предопределило, что данный тест нашел довольно широкое применение в лабораторной диагностике болезней животных.

Прежде всего, эритроциты оседают под действием собственной силы тяжести. Вместе с тем, на скорость оседания влияют многие факторы: концентрация белков в крови, соотношение их фракций, количество эритроцитов и величина их отрицательного заряда, содержание минеральных веществ и некоторые другие.

Так, при увеличении количества глобулинов и фибриногена, холестерина, кальция и бария, уменьшения числа эритроцитов СОЭ возрастает. Замедляется же скорость при увеличении количества альбуминов, концентрации желчных пигментов, натрия и калия, при увеличении числа эритроцитов. На СОЭ влияет и температура (при снижении СОЭ замедляется), количество антикоагулянта (чем больше - тем быстрее), некоторые препараты (особенно содержащие белок - сыворотки, вакцины).

Определяют СОЭ сразу же после взятия крови (не позднее 2-х часов). В ветеринарной практике наиболее часто используют два метода: макрометод (Неводова) и микрометод (Панченкова).

А.П. Неводов в свое время предложил метод определения СОЭ только для лошадей. Сущность метода: в эритроседиометр (градуир. пробирка высотой 15 см, объем 10 мл) вносят 0,02 г. натрия оксалата и до верхней метки набирают из яремной вены кровь. Учет ведут через 15; 30; 45; 60 мин. Средняя в норме составляет 38-48 (43). Если высота эритроцитов в эритроседиометре менее 38 - говорят о замедлении, а более 48 - об ускорении СОЭ.

Метод Панченкова подразумевает использование одноименного аппарата, который состоит из штатива и набора градуированных капилляров. В капилляр набирают 5%-й раствор натрия цитрата до метки Р, выдувают на часовое стекло, затем два раза кровь до метки К (0,2 мл) и также выдувают на стекло. Кровь тщательно перемешивают и набирают в тот же капилляр до метки О. Учет ведут через 1 ч или через сутки, результат выражают в мм. Должен отметить, что если пипетку разместить не вертикально, а под углом в 50 градусов, то оседание эритроцитов происходит значительно быстрее. Связано это с изменением поверхностного натяжения крови, находящейся в пипетке.

У здоровых животных СОЭ по Панченкову, при вертикальном расположении капилляра, составляет в мм за 1 ч: крупный рогатый скот - 0,5-1,5; овца - 0,5-1; коза - 0,3-1; лошадь - 40-70; свинья - 2-9; собака - 2-6.

СОЭ не является специфической для какого-либо заболевания, однако ускорение всегда указывает на наличие патологического процесса и наблюдается при различных формах анемии (особенно ИНАН), инфекционных и инвазионных заболеваниях, воспалительных процессах, злокачественных новообразованиях и др. Замедление СОЭ - утомление, гипергидроз, диарейном синдроме, механической и паренхиматозной желтухах и др.

4. Определение гемоглобина и клиническая интерпретация результатов

Для определения концентрации гемоглобина предложено довольно большое количество различных методик. Наибольшее распространение получили колориметрические, основанные на колориметрии производных гемоглобина. Кроме этих иногда применяют газометрические методы (Hb насыщают кислородом или углекислым газом и по их количеству определяют концентрацию Hb). Также существует метод, основанный на определении железа в гемоглобине, который содержит 0,347% элемента.

В качестве унифицированного и даже стандартного метода в медицине принят цианметгемоглобиновый метод с применением ацетонангидрина. Принцип методики основан на том, что гемоглобин окисляется в метгемоглобин (гемиглобин) под действием железосинеродистого калия (красной кровяной соли). Образующийся с ацетонангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемоглобинцианид) определяют на фотоэлектроколориметре, спектрофотометре или гемоглобинометре.

При определении гемоглобина этим методом 0,02 мл (20 мкл) крови (стабилизированной или свежеполученной) вносят в 5 мл трансформирующего раствора, который состоит из ацетонциангидрина, железосинеродистого калия и гидрокарбоната натрия. Раствор хорошо перемешивают, оставляют на 10 мин, после чего колориметрируют при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) против «холостой пробы» (трансформирующий раствор). Расчет производят по калибровочному графику.

Наиболее простым и также достаточно широко распространенным в лабораторной практике является колориметрия солянокислого гематина, на котором основан метод Сали (1895 г.). Для этого необходим гемометр, представляющий собой штатив, в котором имеются три пробирки. В крайних пробирках находится стандарт и они запаяны, средняя пробирка имеет градуировку. В нее, до нижней метки наливают 0,1 н раствор соляной кислоты, затем вносят 0,02 мл стабилизированной крови. Для того, чтобы эритроциты полностью разрушились, ждут 5 мин. (при исследовании крови млекопитающих) или 10 мин. (при исследовании крови птиц). Гемоглобин, взаимодействуя с HCl, превращается в солянокислый гематин, имеющий темно-коричневый цвет. Затем в пробирку приливают по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока проба по цвету не будет соответствовать стандарту. Результат считывают по шкале, нанесенной на пробирку.

Метод чрезвычайно прост и быстро выполним, но недостаточно точен. При суммировании различных погрешностей этого метода ошибка составляет +30%. Поэтому в настоящее время метод не может быть рекомендован для лабораторной практики.

У здоровых животных концентрация гемоглобина составляет (г/л): крупный рогатый скот - 100-130; овца - 90-133; коза - 100-150; лошадь - 80-140; свинья - 90-110; собака - 110-170.

Увеличение концентрации гемоглобина называется гиперхромемия. Наблюдается при диарее, рвоте, гипергидрозе, образовании экссудатов и транссудатов, миоглобинурии, эмфиземе легких. Гипохромемия (олигохромемия) или уменьшение количества гемоглобина чаще регистрируется при анемии. При этом следует иметь ввиду, этот симптом является типичным для т.н. дефицитных форм анемии (недосточность железа, витамина В₁₂, ферментов и др.).

Определение концентрации гемоглобина имеет также прогностическое значение. Прекращение снижения или постепенное повышение концентрации гемоглобина является благоприятным симптомом, уменьшение же его количества до 50 г./л - это неблагоприятный признак.

Размещено на Allbest.ru