Главная Коллекция "Otherreferats" Медицина Препараты сердечных гликозидов

Препараты сердечных гликозидов

Характеристика гликозидов: понятие и структура, история исследования, классификация и типы, образование в растениях и выделение, характерные реакции, пути количественного определения. Особенности сердечных гликозидов, их применение и хранение, препараты.

Рубрика Медицина
Вид курсовая работа
Язык русский
Дата добавления 25.04.2011
Размер файла 5,1 M

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Страница:

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Вступление

Гликозидами называют обширную группу органических веществ, встречающихся в растительном (реже в животном) мире и получаемых синтетическим путем. Под влиянием кислот, щелочей, ферментов, а иногда и воды они расщепляются на два или несколько компонентов. Многие из них обладают сильным физиологическим действием, например гликозиды наперстянки, строфанта и др.

Свое название гликозиды получили от греческих слов «гликис» - сладкий и «эйдос» - вид, поскольку они при гидролизе распадаются на сахаристую и несахаристую компоненты (агликон). Чаще всего гликозиды встречаются в листьях и цветах растений, реже в других органах. В их состав входят углерод, водород, кислород, реже азот (амигдалии) и только некоторые содержат серу (синальбин, мирозин и др.).

Сердечные гликозиды объединяют группу веществ, оказывающих в малых дозах возбуждающее действие на сердце; в больших дозах они являются сердечными ядами. Соединения эти встречаются в ряде ядовитых семейств растений кутровых (Аросупасеае), норичниковых (Scrophulariaceae), лилейных (Liliaceae) и лютиковых (Ranunculaceae). Отдельные представители этих веществ применяют в медицине со времен глубокой древности.

В связи с этим идентификация препаратов сердечных гликозидов и проверка их подлинности является важной задачей фармацевтической химии.

1. Характеристика гликозидов

1.1 История изучения гликозидов

Растения, содержащие гликозиды, привлекали к себе внимание еще со времен глубокой древности. Так, египтяне и римляне применяли морской лук (Scilla maritima) для возбуждения сердечной деятельности. Препараты из семян и коры строфанта (Strophantus hispidus) использовались не только для возбуждения сердечной деятельности, но и для отравления стрел. Применение наперстянки (Digitalis purpurea) для лечения водянки было известно уже в 1785 г.

Первые попытки изучения веществ, выделенных из листьев наперстянки, относятся к 1809 г. В 1841 г. из той же наперстянки была выделена смесь веществ, названная дигиталином; еще ранее из миндаля Робике (1830 г.) выделил амигдалии.

В 1869 г. Нативелл выделил из наперстянки достаточно чистый диги - токсин. В 1889-1892 г. Е.А. Шацкий опубликовал ряд работ, относящихся к гликозидам и алкалоидам. Особое развитие химия гликозидов, однако, получила с 1915 г., когда были опубликованы исследования Виндауса, Джекобса, Штоля и Чеше и др. в области сердечных гликозидов.

Из отечественных работ известны исследования Н.Н. Зинииа о масле горьких миндалей, Лемана о периплоцине, Куррота о ряде гликозидов, А.Е. Чичибабина, впервые получившего в 1913 г. синтетический амигдалии, и др.

Широкие синтетические исследования в области гликозидов и сапонинов проведены Ружичка, Платтнером, Физером и др. Из отечественных ученых современного периода, работающих в области гликозидов, известны работы В.В. Феофилактова с сотр., Д.Г. Колесникова с сотр., Н.К. Абубакирова, П.И. Оницева, М.А. Ангарской и составивших интересный обзор по химии сердечных гликозидов С.И. Каневской и О.С. Мадаевой, а также научных сотрудников ВИЛАРа, занимающихся исследованиями в области выделения гликозидов и получения новых неогаленовых препаратов.

С химической стороны гликозиды представляют собой эфиры сахаров, не дающие карбонильных реакций, из чего следует, что карбонильная группа сахаров у них связана с агликоном, аналогично алкилгликозидам синтетических гликозидов.

В состав агликонов входят большей частью гидроксильные производные алифатического или ароматического рядов. Строение многих гликозидов недостаточно изучено, напротив, при взаимодействии сахаров со спиртами, меркаптанами, фенолами и др. в присутствии соляной кислоты или хлористого водорода получены синтетические гликозиды. Такого рода соединения особенно легко образуются при взаимодействии гидроксильных или иных производных с ацетохлор- или ацетобромглюкозой.

В том случае, когда при гидролизе гликозидов образуется глюкоза, такие соединения принято называть глюкозидами, при образовании других сахаров - гликозидами.

Гликозиды представляют собой твердые, не летучие, большей частью хорошо кристаллизующиеся, реже аморфные вещества, легко растворимые в воде и в спирте, нейтральной реакции. Они различно относятся к химическим агентам. Хотя расщепление их на сахара и агликоны происходит очень легко, известны и такие гликозиды (сапонины), которые не разлагаются даже разбавленными кислотами (Н2SО4) при длительном нагревании. При расщеплении гликозидов ферментами наблюдается известная избирательность; только определенный фермент способен разлагать тот или иной гликозид. Реже один фермент расщепляет несколько гликозидов, например, эмульсин расщепляет не только амигдалин, но и салицин, эскулин, кониферин и др., но не расщепляет синигрина. Фермент дрожжей расщепляет амигдалин (I) до пруиозина (II), напротив, эмульсин разлагает его до бензальдегидциангидрина (III):

Гидролизующее действие ферментов тесно связано со строением молекулы гликозида и асимметрией углеродных атомов сахаров. Так, например, правовращающий б-метилглюкозид расщепляется инвертином, в то время как его левовращающий изомер при этом не изменяется, напротив, в-метил - глюкозид расщепляется эмульсином, не действуя на б-изомер. Интересно, что природные гликозиды, расщепляемые эмульсином, обладают левым вращением.

Частичное расщепление гликозидов происходит отчасти в самом растении, поскольку энзим, находящийся в нем (хотя и в разных клетках), приходит иногда с ним в тесное соприкосновение. То же, при известных обстоятельствах, происходит при высушивании растений или изолировании из них гликозидов. Поэтому часто гликозиды, полученные из высушенных растений, резко отличаются от гликозидов, находящихся в свежем растении. Следует отметить, что в высушенном растении ферменты обычно не проявляют своего гидролитического действия, но при увлажнении водой, особенно при 35-50°, происходит интенсивная реакция гидролиза. При низкой температуре, в присутствии влаги, действие ферментов замедляется, а при 0° почти не обнаруживается. Выше 70°, напротив, происходит инактивация и разрушение ферментов.

То обстоятельство, что жидкость Фелинга или аммиачный раствор окиси серебра восстанавливает при нагревании многие гликозиды, связано с частичным их гидролизом.

В близкой связи с глюкозидами, т.е. эфирами глюкозы, находятся пентозиды или рамнозиды, которые при гидролизе, наряду с агликонами, образуют рамнозу (например, франгулин, кверцитин и др.), рамноглюко - зиды, которые при гидролизе образуют рамнозу, глюкозу и др. (например, рутин, гесперидин и др.).

1.2 Классификация гликозидов

Классификация гликозидов привлекала к себе внимание многих исследователей. Ранее, весьма распространенная ботаническая классификация используется в настоящее время лишь для гликозидов неустановленного строения. Фармакологическая классификация, основанная на биологическом действии гликозидов, также не удержалась. Наиболее целесообразна химическая классификация, основанная на химическом строении агликонов или сахаров, образующихся при гидролизе гликозидов. В этом случае гликозиды получают название сахаров с прибавлением суффикса «ид». Так, гликозиды, отщепляющие пентозу, называются пентозидами, отщепляющие гексозу - гексозидами. Последние, в свою очередь, делятся на подгруппы, например, отщепляющие глюкозу называются глюкозидами, отщепляющие фруктозу или галактозу-фруктозидами, галактозидами и др.

Химическая классификация, основанная на природе наиболее характерных группировок агликонов, выражается в следующем:

а) цианогенные или цианофорные гликозиды - образующие при гидролизе цианистоводородную кислоту; например амигдалин, пруна - зин и др.,

б) фенолгликозиды - содержащие фенольную группу, или образующие ее при гидролизе;

в) гликозиды группы кумарина; строение их определяется наличием структуры:

Гликозиды эти широко распространены в природе; к ним относится кумариновый гликозид, скиммин, эскулин, дафнин, фраксин и др. Все они при гидролизе распадаются на кумарин и сахар;

г) оксиантрахиноновые гликозиды - широко распространены в природе; они большей частью окрашены в красный или желтый цвета. К ним относятся многие слабительные, например ревень, сенна, крушина, алоэ и др., содержащие производные оксиантрахинона. При гидролизе они распадаются на ди-, триоксиантрахиноны и сахар;

д) гликосинапиды - гликозиды, содержащие серу. Большей частью они встречаются среди крестоцветных. При гидролизе они при участии Фермента мирозина образуют горчичное (эфирное) масло, имеющее следующую группировку атомов:

R-N=С=S

К ним относится синигрин, содержащийся в горчице, строения:

е) сердечные гликозиды, содержащие в агликоне пергидроциклопентанофенантреновую структуру и характерный для данных гликозидов пятичленный (лактонный) цикл, наряду с ангулярной метильной или альдегидной группой при С10:

ж) цереброзиды. получаемые из мозгов животных; они являются d-галактозидами сфингозина:

а) фитостеролины - являющиеся гликозидами стеринов (они широко распространены в природе, но мало исследованы).

1.3 Образование гликозидов в растениях и их роль

Роль и значение гликозидов в растениях выяснена недостаточно. Некоторые исследователи, как, например, А.В. Благовещенский, рассматривают гликозиды как одну из форм отложения сахаров, поскольку агликоны тесно связаны с последними. Хотя гликозиды обладают различным химическим составом, все же соединения с меньшим молекулярным весом значительно чаще встречаются в природе. Так, например, фазеолюнатин (или лимарин), содержащийся в фасоли, имеющий строение:

найден среди семейств лютиковых, лилейных, молочайных и др.

Еще более распространены в природе гликозиды ароматической природы, являющиеся фенолами или эфирами фенолов, например арбутин (IV), метиларбутин (V), кониферин (VI) и др., имеющие строение:

Близок кониферину и гесперидин, который можно рассматривать как халкон, генетически связанный с антоцианами и флавонами. Образование простейшего халкона можно рассматривать как конденсацию ацетофенона с бензальдегидом:

Под влиянием окислителей халкон способен циклизоваться с потерей двух атомов водорода и образованием флавонов, например:

Последние в виде соединений с d-глюкозой или рамнозой встречаются в клеточном соке многих растений; они способны поглощать ультрафиолетовые лучи и предохранять хлорофилл или плазму растений от разрушения.

Из других классов органических соединений известны производные ализарина, образующие с двумя частицами глюкозы руберитриновую кислоту, являющуюся красящим веществом марены:

Сюда же относится и франгулин (рамнозид), являющийся производным аглюкона эмодина (1,6,8-триокси-З-метилантрахинона).

Что касается других гликозидов, то за исключением стероидных (сердечных гликозидов) их роль выяснена недостаточно. Среди односемянодольных найдены представители, обладающие токсическим действием, например авенеин - С14Н10О8, акорин - С36Н60О8 и др.; среди двусемянодольных - гликозиды перца, водяного перца и др., некоторые из них, как, например, сем. Leguminosae, обладают токсическим действием.

Некоторые гликозиды, например семейства Loganiceae, содержат азот и представляют как бы переход к алкалоидам. В их состав входят пуриновые и пиримидиновые производные, играющие важную роль во внутритканевых дыхательных процессах; к ним относится и d-рибозид гуанина, известный под названием вернина. Он обнаружен в ростках различных растений, в соке сахарной свеклы, в пыльце лесного ореха и сосны и др.

Можно, таким образом, предположить, что гликозиды не рассеяны беспорядочно, а подобно алкалоидам или эфирным маслам играют важную роль в жизнедеятельности растений. Исследование флавонов с этой точки зрения показало, что они ускоряют реакцию между перекисью водорода, пероксидазой и аскорбиновой кислотой, превращая последнюю в дегидроаскорбиновую кислоту.

Найдено, что флавоны катализируют реакцию окисления в 50-100 раз энергичнее, нежели пирокатехин.

Выделяющаяся при дыхании растений энергия потребляется в различных эндотермических процессах синтеза; за счет этой энергии и происходит синтез органических кислот у суккулентов.

Что касается стероидных гликозидов, то, по мнению Розенгейма, они образуются из углеводов. Виланд, напротив, считает, что материнским веществом стеринов является олеиновая кислота, которая при биологических процессах превращается в цибетон, окисляющийся и одновременно формирующийся в диметилгексагидроцибетон. Робинзон связывает стерины со скваленом, который близок терпенам и каротиноидам. Нейберг допускает образование стеринов из углеводов; при биохимических расщеплениях из них выделен ликопин и продукты его моно- и бициклической конденсации. Поскольку асафрон, образующийся при расщеплении каротина при циклизации и гидрировании превращается в тетрациклическую кислоту, родственную холановой, можно допустить, что стерины действительно образуются из углеводов.

1.4 Выделение гликозидов из растений

Методы выделения гликозидов из растений весьма разнообразны и зависят от природы гликозидов и их отношения к растворителям. Часто выделение связано с большими трудностями ввиду их легкой разлагаемости. Обычно при выделении гликозидов исключают применение кислот и щелочей, а также ферментов, разлагающих гликозиды. Для этой цели растение подвергают обработке спиртом в присутствии щелочных агентов (соды, поташа и др.) и затем извлечению подходящими растворителями (водой, спиртом, эфиром, хлороформом, дихлорэтаном, этилацетатом и др.) при соответствующей температуре. Иногда гликозиды переводят в нерастворимые, легко поддающиеся очистке соединения и затем их разлагают с целью выделения в чистом виде.

В производственных условиях выделение гликозидов из растений ведут в аппаратуре, аналогично выделению алкалоидов. Измельченный растительный материал подвергают экстракции в диффузорах (перколяторах) и затем очистке, с целью удаления дубильных, красящих, слизистых, белковых и др. веществ, получивших название «балластных».

Ввиду обычно малого содержания гликозидов в растениях, часто ограничиваются выделением не индивидуальных веществ, а их смесей в виде водных растворов, стандартизованных по биологическому действию на животных. Такие препараты получили название неогаленовых или новогаленовых. Обычно в 1 мл такого раствора содержится определенное количество гликозидов, выраженных в единицах действия (ЕД). Так, например, активность гликозидов сердечной группы выражают в лягушечьих (ЛЕД) или кошачьих (КЕД) единицах, характеризующих наименьшее количество вещества, проявляющее биологическое действие на животных. Естественно, в случае возможности выражения активности гликозидов в весовых единицах последние выражаются в граммах (или миллиграммах).

Особенно большие трудности возникают при исследовании растений с целью поисков гликозидов. При этом используют два основных направления: «свинцовый метод» или дифференциальную последовательную экстракцию. «Свинцовый метод» основан на выделении составных частей растения в виде свинцовых солей и разделении последних по их различной растворимости в тех или иных растворителях.

При дифференциальной экстракции производят последовательное извлечение растительного материала различными растворителями и химикатами и изучение каждого из экстрактов.

1.5 Реакции гликозидов

Гликозиды различно относятся к химическим агентам. В отличие от алкалоидов они обычно не дают специфических реакций; они не восстанавливают ни раствора Фелинга, ни аммиачного раствора окиси серебра. Исключение составляют те гликозиды, агликоны которых содержат редуцирующие группы. После гидролиза гликозида кипячением водного раствора с разбавленным раствором серной кислоты образующийся сахар обнаруживают по редуцирующей способности раствором Фелинга.

Более общим является ферментативное расщепление, позволяющее не только установить присутствие гликозида, но и доказать идентичность его сравнением с заведомо известным. Чаще всего это производят с помощью фермента эмульсина. Все такие гликозиды обладают в водных растворах левым вращением, в то время как глюкоза, образующаяся в результате гидролиза, обладает правым вращением. На основании этих двух положений каждый гликозид характеризуют свойственным ему энзимолитическим индексом восстановления. Под этим индексом подразумевают содержание глюкозы, выраженное в миллиграммах в 100 мл испытуемого раствора, образующейся при расщеплении гликозида в количестве, требуемом для изменения вращения вправо на 1° в трубке длиной 20 см.

Энзимолитический индекс восстановления определяют по уравнению:

где q - молекулярный вес глюкозы;

А - удельное вращение гликозида;

М - молекулярный вес гликозида.

Как следует из уравнения, q может быть вычислено для любого гликозида на основании его молекулярного веса и удельного вращения. Эту величину устанавливают и на основании определения изменения вращения и увеличения редуцирующей способности за счет глюкозы. В тех случаях, когда освобождающийся при расщеплении агликон также обладает редуцирующими свойствами, ц определяют опытным путем. Метод пригоден и для определения гликозидов в присутствии сахаров. В таких случаях сначала после инверсии под действием инвертазы определяют содержание сахара, а затем после расщепления эмульсином - содержание гликозида.

Цветные реакции гликозидов обычно пригодны лишь при отсутствии свободных сахаров. Так, многие гликозиды с очищенной бычьей желчью и серной кислотой дают красное окрашивание, равным образом спиртовой 20%-ный раствор б-нафтола с концентрированной серной кислотой дает синее, фиолетовое или красное окрашивание. Подобная окраска возникает и в случае применения в-нафтола или резорцина. Гликозиды, содержащие в качестве агликона фенол или соединения с фенольным гидроксилом, дают окраску с хлорным железом. С некоторыми гликозидами реакция протекает более отчетливо при применении спиртовых растворов реактива.

Гликозиды, агликоны которых содержат карбонильную группу, идентифицируют в виде гидразонов, семикарбазонов или оксимов. При осторожном ацетилировании уксусным ангидридом многие глюкозиды дают характерные ацетильные производные. Действие ацетилирующей смеси иногда используют и для открытия глюкозы как сахарного компонента гликозида. Открытие ее основано на превращении полученной при ацетилировании пентаацетилглюкозы в пентаацетилглюкозил-п-толуидид при действии п-толуидина. Это соединение не растворимо в спирте, имеет левое вращение и обладает резкой температурой плавления.

Помимо указанных, известны специальные реакции, свойственные отдельным гликозидам; последние будут приведены далее при описании отдельных химико-фармацевтических препаратов.

1.6 Методы количественного определения гликозидов

Количественное определение гликозидов имеет значение при исследовании растительного материала и главным образом лекарственного сырья.

Определение гликозидов весовым путем после извлечения его растворителями весьма затруднительно, так как необходимо предварительное его выделение из растительного материала в достаточно чистом виде. Поэтому в ряде случаев целесообразно определение количества агликона, образующегося при гидролизе. Так, количество синигрина в горчице или горчичниках определяется аргентометрически или йодометрически по количеству отщепленного и отогнанного аллилгорчичного масла.

Гликозиды, содержащие цианистый водород, также могут быть определены по количеству последнего после расщепления и отгонки.

Во многих случаях количество гликозида может быть определено на основании изменения угла вращения после ферментативного расщепления.

В некоторых случаях определяют флуоресценцию, характерную для того или иного гликозида, в этом случае определение проводят в фотоколориметре, путем сравнения с заведомо известным гликозидом.

2. Особенности сердечных гликозидов

2.1 Строение и классификация сердечных гликозидов

Сердечные гликозиды - биологически активные вещества, содержащиеся в некоторых видах растений и обладающие способностью в весьма малых дозах оказывать специфическое действие на сердечную мышцу. Источниками получения сердечных гликозидов являются различные виды наперстянки (наперстянка крупноцветковая, наперстянка пурпуровая, наперстянка ржавая, наперстянка шерстистая), горицвет весенний, олеандр, ландыш майский, обвойник, различные виды желтушника, строфанта, морозника и другие растения.

В растениях обычно содержатся первичные (генуикные) гликозиды. Это очень лабильные вещества, легко разлагающиеся (под влиянием энзимов, кислот, щелочей, при нагревании) с образованием вторичных гликозидов. Последние также легко могут гидролизоваться на агликоны и сахарный компонент.

По химической структуре сердечные (как и другие) гликозиды представляют собой эфиры, в молекулах которых гликозидной связью связаны между собой агликон и остатки моно-, ди-, три- или тетрасахарида. У некоторых первичных гликозидов к сахарному компоненту присоединен остаток уксусной кислоты. Сахара, входящие в состав сердечных гликозидов, за исключением глюкозы и рамнозы специфичны для данной группы веществ и представляют собой 6-дезоксигексозы или их 3-О-метиловые эфиры.

Важнейшими моносахаридами, входящими в состав сердечных гликозидов, являются:

Агликоны (генины) сердечных гликозидов имеют стероидную структуру, т.е. являются производными циклопентанофенан - трена. По химическому строению агликоны можно разделить на две группы, отличающиеся структурой присоединенного в положении 17 лактонного цикла. Пятичленный лактонный цикл входит в структуру агликонов карденолидов, а шестичленный - буфадиенолидов. Общие формулы этих групп гликозидов:

Карденолиды содержатся в различных видах наперстянки, строфанта, ландыша, желтушника, олеандра, горицвета весеннего и др. Буфадиенолиды входят в состав морозника, морского лука, а также найдены у животных (жабы).

Между химической структурой и фармакологическим действием сердечных гликозидов существует определенная взаимосвязь. Носителем биологической активности является агликон. Сахарный компонент, присоединенный в положении 3 к агликону, влияет на скорость всасывания, а следовательно, на продолжительность действия. Чем больше остатков моносахаридов в молекуле гликозида, тем активнее он действует.

Специфическое действие гликозида на сердце обусловлено наличием в молекуле агликона пяти- или шестичленного лактонного цикла, присоединенного в положении 17, и гидроксила в положении 14.

На кардиотоническое действие большое влияние оказывает заместитель в положении 10. Большая часть агликонов в этом положении имеет метильную или альдегидную группу. Окисление альдегидной группы до карбоксильной значительно ослабляет действие на сердечную мышцу.

Замена стероидного цикла агликонов производными бензола, нафталина, так же как замена лактонного цикла другими радикалами и даже изменение характера связи между стероидным ядром и лактоном, приводит к потере физиологической активности.

2.2 Химическая структура и способы получения сердечных гликозидов

Большинство препаратов сердечных гликозидов по химическому строению представляют собой карденолиды. Агликоны этих препаратов имеют общую формулу

и отличаются друг от друга радикалами R, Х1, Х2, Х3:

Молекула сердечного гликозида включает один, два или три остатка Сахаров, соединенных в положении 3 с агликоном б- или в-гликозидной связью.

Несколько более сложной является химическая структура гликозидов наперстянки. В наперстянке пурпуровой и шерстистой содержатся первичные гликозиды:

При гидролитическом расщеплении, а также при хранении и высушивании сырья под действием энзимов первичные гликозиды разрушаются с образованием вторичных гликозидов и других продуктов гидролиза.

Вторичные гликозиды наперстянок состоят из агликонов и сахарной части, причем последняя у всех трех вторичных гликозидов одинакова:

На основе данных таблиц, а также сведений о химическом составе агликонов можно написать формулы первичных и вторичных гликозидов наперстянок.

Формула дигитоксина:

Формула дигиланида С (целанида):

Первичный гликозид наперстянки шерстистой - дигиланид С под названием целанид (Celanidum) и вторичный гликозид наперстянки пурпуровой - дигитоксин (Digitoxinum) включены в ГФ.

В ГФ включен также препарат строфантин К (Strophantinum К).Его получают из семян строфанта Комбе. Препарат содержит в основном два гликозида, состав которых приведен ниже:

К-строфантин-в можно рассматривать как вторичный гликозид К-строфантозида. Последний, теряя молекулу глюкозы, превращается в К-строфантин-в.

Формула К-строфантозида:

Источником получения сердечных гликозидов является растительное сырье. Процесс выделения очень сложен, так как в растении содержатся ферменты, способные необратимо изменить химическую структуру гликозидов. Такие изменения могут также произойти под влиянием кислот, щелочей, температуры и т.д.

В растении обычно содержится несколько сердечных гликозидов и целый ряд сопутствующих веществ. Общая схема получения сердечных гликозидов заключается в предварительном обезжиривании растительного сырья с помощью эфира или лигроина. Затем обезжиренное сырье настаивают с 70%-ным этиловым спиртом, спирт отгоняют под вакуумом и из остатка извлекают первичные гликозиды теплой водой, вторично настаивая несколько дней. Из полученной смеси неочищенных гликозидов удаляют смолы (эфиром) и сапонины (раствором ацетата свинца). Гликозиды осаждают, насыщая смесь водным раствором сульфата аммония. Разделение смеси гликозидов основано на различии их растворимости в органических растворителях. Для разделения используют хроматографические методы.

2.3 Синтетические исследования в области сердечных гликозидов

В то время как исследование химического состава и строения сердечных гликозидов привлекало к себе внимание исследователей чуть ли не с первых лет знакомства с этими соединениями, тотальный синтез гликозидов описан лишь в 1941 г., когда было изучено достаточное количество представителен. Интересный обзор, касающийся синтеза сердечных гликозидов, составлен С.И. Каневской и О.С. Мадаевой.

Исходя из того, что наиболее типичной составной частью молекулы агликона сердечного гликозида является лактонное кольцо енолизированной в-альдопропионовой кислоты:

где R - стероидный радикал, исследователи занимались синтезом простых моделей в-замещенных этой кислоты.

В качестве исходных веществ применялись в-замещенныеэфиры в-метоксиметилгидракриловых кислот, синтезированные по методу Реформатского, конденсацией щ-метоксиметилкетонов с бромуксусным эфиром:

где R бутил-, циклогексил-, фенил- и др. Предполагалось, что сложные эфиры при обработке кислотами или при сплавлении с бисульфатом калия будут разлагаться с образованием альдегидокислот, но оказалось, что при нагревании до 90-100°, например, этилового эфира 3-окси-3-циклогексил-4-метоксимасляной кислоты образуется в-циклогексил-Дб,в-бутенолид и насыщенный оксилактон, который при дальнейшем нагревании с кислотой переходит в ненасыщенный бутенолид. При нагревании до 150° образуется только лактон в-циклогексил-Дб,в-бутенолида:

При сплавлении же этилового эфира 3-окси-3-циклогексил-4-метоксимасляной кислоты с бисульфатом калия образуется равновесная смесь альдегидокислоты и изомерного бутенолида:

При проведении этой реакции с фенильным производным образуется ненасыщенный лактон в-фенил-Дб,в-бутенолида:

Еще легче протекает реакция Реформатского при конденсации ацетокси метилкетонов с бромуксусным эфиром:

промежуточный продукт - эфир кислоты - выделить не удается.

Синтезированные Дб,в-ненасыщенные лактоны дают реакции окрашивания, характерные для сердечных глюкозидов.

Что касается синтеза циклической системы, то использовались различные производные; из нафталиновых производных синтезированы в - (в-нафтил)-Дб,в-лактон (I), в - (б-нафтил)-Дб,в-лактон (II), в - (декагидронафтил)-Дб,в-лактон (III) и в - (6-окси-в-нафтил)-Дб,в-лактон (IV):

Из всех синтезированных Дб,в-лактонов только в - (в-нафтил)-Дб,в-лактон (I) обладал слабой физиологической активностью. Неактивными ока зались и более простые лактоны, содержащие в качестве в-заместителя гидроксилироваиные в разных положениях фенильные ядра, как в - (4-оксифенил) - и в - (3-оксифенил)-Дб,в-лактоны:

Интересными являются исследования, посвященные синтезу лактонов, содержащих в качестве в-замещенных циклопентанопергидрофенантреновое кольцо и являющиеся, следовательно, аналогами природных аглюконов.

Пользуясь вышеуказанной методикой, из этиохолановой и в-3-оксиэтиохолановой кислоты синтезироваьы Дб,в-лактоны 21-оксинорхоленовой и в-3,21-диоксинорхоленовой кислот:

где

І, II, III - R1 = ОН;

IV - R1 = ОН, Н;

V, VI - R1 = СОСНз.

Полученные лактоны по своим химическим и физическим свойствам оказались сходными с аглюконами сердечных гликозидов.

Аналогичным путем синтезированы также лактоны холанового типа из норхолановой кислоты (I), через хлорангидрид (II), диазокетон (III) и ацетоксиметилкетон (IV); при конденсации последнего с бромуксусным эфиром (по Реформатскому) получен в-норхоланил-Дб,в-бутенолид (V):

Фармакологические исследования в-норхоланил-Дб,в-бутенолида показали отсутствие активности; таким образом, внедрение между лак - тоном и ядром углеводородной цепи вызывает утрату физиологического действия.

Ряд синтезов стероидных аглюконов осуществлено, исходя из стероидного скелета, в различной степени гидроксилированного. Первым соединением этого типа был синтезированный в 1941 г. в-лактон-Д5,6,20,22-3-ацетокси-21-оксинорхоладиеновой кислоты (VII), по приведенной ниже схеме, исходя из Д5-3-окси-21-ацетоксипрегненона-20 (VIII):

Вводя в дальнейшем в реакцию разнообразные ацилоксиметилкетоны, отличающиеся количеством и расположением гидроксильных групп, а также принадлежностью к различным конфигуративным типам, получены аналоги природных аглюконов и их гомологи.

Из этиолитохолевой кислоты (IX) получен 3,21-диацетоксцпрегнанон-20 (Х), из которого затем конденсацией с этиловым эфиром бромацетоуксусной кислоты синтезирован лактон Д20,22-Зб-21-диоксинорхоленовой кислоты (XI), который по своему строению идентичен 14-дезоксидигитоксигенину (Ружичка с сотр.):

Из 3-б-ацетокси-алло-этиохолановой кислоты (XII) и из 3-в-ацетокси-алло-этиохол а новой кислоты (XIII) синтезированы аналогичным путем два эпи-изомера алло-ряда - XIV, XV (Платтнер, Ружичка с сотр.):

Из алло-этиохолановой кислоты (XVI) получен лактон, не содержащий гидроксильных групп (XVII):

Из 3-б-12-в-диоксиэтиохолановой кислоты (XVIII) получен изомер дигоксигенина (XIX) - 12-эпи-14-дезоксидигоксигенин (ХX):

Синтезированы также гомологи природных аглюконов, отличающиеся тем, что между ненасыщенным лактоном и циклопентано-фенантреновым ядром находится метиленовая группа.

В качестве исходного вещества использованы Д5-3-в-ацетоксипрегненовая-21-кислота (XXI) и ее гидрированное производное 3-в-ацетокси-алло-прегнановая кислота (XXII):

Полученные соединения (XXIII и XXIV) по физико-химическим свойствам оказались близкими природным аглюконам; их спектры поглощения в ультрафиолете совпадали со спектрами поглощения наиболее типичных аглюконов; все они дают реакцию Легаля.

На основании кратко изложенного материала можно сделать вывод, что синтетическая химия сделала большие успехи в области синтеза агликонов сердечных гликозидов; следующим этапом должны явиться синтезы самих гликозидов.

2.4 Хранение и применение сердечных гликозидов

Препараты сердечных гликозидов хранят по списку А, в хорошо укупоренной таре, предохраняющей от действия света и влаги. Такие условия позволяют не допускать гидролитического расщепления препаратов.

Препараты сердечных гликозидов применяют в качестве кардиотонических средств. Отличаются они по силе, продолжительности, скорости проявления действия, влиянию на центральную нервную систему.

Наиболее эффективны препараты при внутривенном введении. Для этого их предварительно растворяют в 20-40%-ном растворе глюкозы или в изотоническом растворе. Высшие разовые дозы индивидуальных препаратов сердечных гликозидов составляют 0,5 мг, суточные - 1,0 мг. Передозировка вызывает резкое нарушение сердечной деятельности. Это обусловило необходимость отнесения препаратов к списку А. Необходимо учитывать способность сердечных гликозидов постепенно накапливаться в организме (степень кумуляции)

Наряду с лекарственными веществами, представляющими собой индивидуальные сердечные гликозиды, в медицине применяют также суммарные препараты. Например, коргликон (Corglyconum) представляет собой сумму гликозидов из листьев ландыша. Применяют водный раствор, содержащий в 1 мл 0,6 мг коргликона. Это прозрачная бесцветная жидкость горького вкуса, с запахом хлорбутанолгидрата (консервант). В 1 мл содержится 11-16 ЛЕД или 1,8-2,2 КЕД. Близок по характеру действия к строфантину, но оказывает более продолжительный эффект.

3. Препараты сердечных гликозидов

3.1 Гликозиды Наперстянки

Гликозиды наперстянки содержатся в растениях в небольших количествах, наряду со стероидными сапонинами. После извлечения измельченных высушенных листьев или семян петролейным эфиром (для удаления жиров) гликозиды экстрагируют метиловым или 70%-ным этиловым спиртом и полученную вытяжку концентрируют в вакууме до сиропообразной консистенции. Остаток растворяют в воде, смолистые вещества извлекают эфиром и далее водную вытяжку освобождают от дубильных и слизистых веществ с помощью раствора основного ацетата свинца. Из фильтрата избыток соли свинца удаляют сероводородом или фосфатом натрия После высаливания гликозидов сульфатом аммония выделяют близкие по составу: дигитоксин - С41Н64О13, гитоксин - С41Н64О14, дигоксин - С41Н64О14 и др. При более нежной обработке выделены истинные или природные гликозиды, названные соответственно дигиланидами (А, В и С).

Дигиланид А - С49Н76О19 - при действии фермента дигиланидазы отщепляет ацетильную группу и глюкозу; остальные сахара (три молекулы гликозидносвязанной дигитоксозы) остаются незатронутыми и образуют дигитоксин (X). Последний подвергают гидролизу в присутствии минеральных кислот с образованием агликона-дигитоксигенина (XI) и сахара-дигитоксозы:

Дигитоксигенин (XI), лишенный остатка сахара, уже не столь легко растворим в воде, как оба его гликозидных производных (с ацетильной группой и глюкозой) и вследствие этого он менее проникает через стенки клеток животного (и человека). Стерически дигитоксигенин (XI) является 3-б-оксипроизводным стерина типа цис-декалина. Отличительная особенность его строения состоит в наличии в боковой цепи в б- и в-положении ненасыщенного лактонного кольца. Присутствие этой группы устанавливается цветной реакцией Легаля (1883 г.), заключающейся в окрашивании агликона нитропруссидом натрия (Fе(CN)5NО) Nа2 * 2Н2O в красный цвет в присутствии пиридина и щелочи. Отрицательные результаты наблюдают, когда двойная связь лактонного кольца прогидрирована или разрушена.

Другой отличительной особенностью строения сердечных гликозидов является присутствие третичной гидроксильной группы при С14 в месте соединения колец С и D. При обработке агликона спиртовым раствором щелочи лактонное кольцо вступает во взаимодействие с С14 - гидроксильной группой с образованием изоагликона (XII). Это соединение содержит окисный (кислородный) мостик в молекуле и не обладает способностью возбуждать деятельность сердца; процесс этот связан с перемещением двойной связи из б-в в в-г-положение:

Два других истинных гликозида наперстянки - дигиланиды Б и С - построены аналогично; в результате гидролиза в присутствии фермента они превращаются в триозиды - гитоксин и дигоксин, гидролиз их под влиянием кислот приводит к агликонам - гитоксигенину (XI И) и дигоксигенину (XIV):

Эти соединения отличаются от дигитоксигенина наличием в их молекулах еще одной гидроксильной группы при С16 или при С12. Ацетилгликозид гитоксигенина (XIII), в котором С16-гидроксильная группа ацетилирована, известен под названием олеандрина.

Что касается взаимного расположения колец С и D, то доказательством цис-конфигурации служит необратимая изомеризация при С14, возникающая под влиянием спиртовой щелочи; именно, при наличии гидроксильной группы у С14 и лактонного кольца при С17 образуется изоагликон (XII). Последний, через ряд превращений, не затрагивающих центра асимметрии, переходит при окислении в этиохолановую кислоту (XV), для которой доказано наличие ангулярной метильной группы при С13 и карбоксила при С17

обе эти группы находятся в цис-положении друг к другу (Серини, Логеман, 1948). Следовательно, и гидроксильная группа при С14 находится в цис - положении к ангулярной метильной группе при С13, и кольца С и Б в дигитоксигенине (XI) обладают цис-конфигурацией. Окончательно это подтверждено синтезом 3-в-ацетокси-14-в-оксиэтиохолановой кислоты (XVI), полученной расщеплением дигитоксигенина (XI):

Конфигурация боковой цепи при С17 точно не установлена, но принято считать, что последняя в природных стероидах занимает в-положение. Пространственное расположение боковой цепи, однако, имеет решающее значение, так как соединения с 17 в-цепью активнее их 17 б-эпимеров. Ниже описаны наиболее важные сердечные гликозиды.

Дигитоксин - бесцветные кристаллы горького вкуса, т. пл. 240 - 242°, мало растворим в воде, хорошо в спирте; является наиболее активным гликозидом наперстянки. При смешении с ледяной уксусной кислотой и 0,05%-ным раствором хлорного железа в концентрированной серной кислоте возникает на границе слоев красное окрашивание, а над ней синевато-зеленое. Со спиртовым раствором пикриновой кислоты в присутствии едкого натра возникает оранжевое окрашивание, более интенсивное при нагревании.

Чистоту препарата устанавливают до отсутствию хлоридов и тяжелых металлов выше допустимых норм. Активность определяют биологическим путем. Применяют при хронической недостаточности деятельности сердца по 0,3-0,6 мг в день. Хранят под замком (список А) в сухом месте, защищенном от действия света.

Гитоксин - белый мелкокристаллический порошок горького вкуса, т. пл. 263-265°. Не растворим в воде и мало в спирте. По фармакологическим свойствам близок дигитоксину, но менее активен. 1 КЕД соответствует 1 мг; дигитоксина - 0,42 мг. Обладает кумулятивным действием. Дает те же реакции, что и дигитоксин.

Отличается от дигитоксина наличием при С16 гидроксильной группы.

Хранят под замком (список А) в сухом, защищенном от света месте. Применяют внутрь по 0,3-0,4 мг в сутки.

Кордигит - Приготовлен Харьковским научно-исследовательским химико-фармацевтическим институтом (ХНИХФИ) из листьев наперстянки; является новогаленовым препаратом, 0,8 мг которого соответствуют 0,1 г листьев. Получают настаиванием листьев наперстянки с 2,5%-ным раствором ацетата свинца. После отделения растительного материала и промывки его водой водную вытяжку обрабатывают сульфатом натрия для отделения свинца и фильтрат извлекают дихлорэтаном. После удаления большей части извлекателя отгонкой в вакууме остаток промывают раствором гидрокарбоната натрия и дихлорэтановый раствор высушивают над прокаленным сульфатом натрия.

Для выделения препарата дихлорэтановый раствор смешивают с бензином, осадок растворяют в воде, извлекают хлороформом и из последнего выделяют бензином; высушивание производят при температуре не выше 60°.

Кордигит - слегка желтоватый, аморфный порошок горького вкуса, т. пл. 150°, мало растворим в воде (1: 600), легко растворяется в спирте, хлороформе, ацетоне; не растворим в бензине. С ледяной уксусной и серной кислотами в присутствии раствора хлорного железа дает коричнево-красное окрашивание с верхней сине-зеленой зоной; постепенно возникает синее окрашивание. Спиртовый раствор препарата (1: 1,5) при встряхивании с водон выделяет кристаллический осадок, т. пл. 75°, мало растворимый в воде и в спирте.

Хранят с предосторожностью (список Б), в защищенном от света месте.

Применяют вместо настоя наперстянки по 0,4 мг 2-4 раза в день.

Из наперстянки шерстистой - Digitalis lanata Ehrh - травянистого растения, введенного в СССР в культуру, выделены дигиланиды А (ланатозид), В и С. В процессе хранения и высушивания растения наблюдается гидролитическое расщепление дигиланида А с отщеплением уксусной кислоты и глюкозы. Дигиланид В в процессе гидролиза переходит в гитоксин, а дигиланид С в дигоксин.

Препарат, названный абицином (Abicinum), представляет собой белый кристаллический порошок, т. пл. 235° (с разл.), [a]D 33-34,5° почти не растворим в воде, мало растворим в этиловом спирте и хлороформе; растворим в метиловом спирте. С нитропруссидом натрия, в присутствии раствора едкого натра, спиртовой раствор дает постепенно исчезающее красное окрашивание; с хлорным железом в присутствии ледяной уксусной и серной кислот возникает на границе слоев темно-коричневое окрашивание; верхний слой постепенно окрашивается в сине-зеленый цвет. При хроматографировании на бумаге хлороформно-метанольного раствора 5 мг препарата в 1 мл данных растворителей (1:1), высушенную хроматограмму опрыскивают 10%-ным раствором м-динитробензола в бензоле и после высушивания в вытяжном шкафу вновь опрыскивают спирто-водным раствором едкого натра. Синие, быстро исчезающие пятна (обводимые карандашом) обнаруживают дигиланиды А, В и С со следующими значениями: Rf дигиланида А - 0,80, Rf дигиланида - 0,56 и Rf дигиланида С - 0,40 (на хроматограмме допускается появление дополнительных пятен с Rf 0,17 и менее).

Количественное определение производят биологическим путем и по ГФ IХ; 1 г препарата должен соответствовать 14000-16500 ЛЕД.

Хранят под замком (список А) в сухом месте, защищенном от действия света; после одного года препарат подвергают повторному анализу.

Из наперстянки ржавой (Digitalis ferruginea L.), произрастающей на Кавказе, готовят неогаленовые препараты Digalen-neo, Satiturani и Succus foliorum Digitalis (суккудифер - Succudifer), путем извлечения листьев водой с последующей очисткой от балластных веществ.

Дигален-нео-прозрачная, слегка желтоватая жидкость, горького вкуса, нейтральной реакции. Для инъекций консервируют 96%-ным спиртом (в количестве 20%); препарат для внутреннего применения консервируют таким же количеством спирта и 0,3% хлорэтона. В 1 мл препарата для подкожного введения содержится 3 ЛЕД, для внутреннего применения - 6 ЛЕД. Под кожу вводят взрослым по 0,5-1 мл 1-2 раза в день; детям до 1 года по 0,05-0,1 мл, от 2 до 5 лет по 0,25-0,4 мл, от 6 до 12 лет по 0,4-0,75 мл. Внутрь назначают по 5-15 капель 2-3 раза в день. Высшие дозы под кожу взрослым 1 мл, суточная 3 мл, внутрь - 20 капель, суточная - 60 капель.

Хранят с предосторожностью (список Б), в защищенном от света месте.

Сатитурани применяют в таблетках по 3 ЛЕД по 1-2 таблетки в день. Суккудифер - сок из свежих листьев ржавой наперстянки консервируют 15% 96° этилового спирта и 0,3% хлорэтона. Содержит в 1 мл 5-6 ЛЕД, что соответствует примерно активности 0,1 г листьев наперстянки. Прозрачная красно-бурого цвета жидкость горького вкуса кислой реакции.

Применяют по 10-15 капель 2-3 раза в день. Хранят с предосторожностью (список Б), в защищенном от света месте.

Из реснитчатой наперстянки (Digitalis ciliata), произрастающей на Кавказе, готовят новогаленовый препарат Digicilenum (дигицилен), представляющий водный раствор суммы гликозидов, консервированный 15% 96° этилового спирта. Дигицилен почти бесцветная, прозрачная жидкость горького вкуса, содержит в 1 мл 6 ЛЕД, что соответствует активности 0,1 г листьев наперстянки.

Вводят под кожу и в мышцы по 0,5-1 мл 1-2 раза в день; выпускают в ампулах по 1 мл.

Хранят с предосторожностью (список Б), в защищенном от света месте.

Дигицилен применяют также в таблетках, соответствующих 0,1 г листьев наперстянки (5,6-6 ЛЕД). Новогаленовый препарат, содержащий сумму гликозидов, представляет собой светло-коричневый порошок.

3.2 Препараты Олеандра

Олеандр (Nerum oleander L.) является вечнозеленым кустарником сем. кутровых (Аросупасеае), разводимым на Кавказском и Крымском побережьях Черного моря, а также в Азербайджане в качестве декоративного растения. Листья олеандра содержат гликозиды: олеандрин (фолинерин), адинерин и нериин. Активным сердечным действием обладает олеандрин, состоящий из агликона олеандригенина (16-ацетилгитоксигенина) и сахара олеандрозы.

Впервые олеандр исследован Лукомским в 1861 г.; на терапевтическое его действие обратил внимание Е.В. Пеликан (1866 г.) в Петербургском университете. Гликозиды олеандра выделены и исследованы Виндаусом и Вестфалем (кристаллический нериолин) в 1925 г. и ранее Шмидебергом (олеандрин и нериин - аморфные) в 1883 г. Флюри и Нейман (1935 г.) цазвали выделенный ими из листьев кристаллический гликозид фолинерином; Чеше и Нейман (1937 г.) показали, что фолинерин идентичен олеандрину. Из листьев олеандра 3. В. Долгиной (1939 г.), М.Я. Тропп (1940 г.) и Е.С. Заболотной под руководством В.В. Феофилактова (1952 г.) также выделен олеандрин; строение его установлено Нейманом (1937 г.).

Для медицинского применения олеандрин выпускают под названием нериолин:

Получают извлечением листьев 25%-ным спиртом, с последующей его отгонкой и осаждением балластных веществ раствором ацетата свинца. После удаления из фильтрата избытка последнего сульфатом натрия фильтрат концентрируют при 40-60 мм рт. ст., остаток растворяют в 70%-ном спирте при нагревании до 50-60° и выделившиеся кристаллы перекристал - лизовывают из 50%-ного спирта.

Олеандрин - бесцветные игольчатые кристаллы без запаха, горького вкуса, т. пл. 235° (предварительно высушенного в вакууме при 60-80°), легко растворяется в спирте, хлороформе, мало растворим в метиловом спирте, не растворим в воде, в эфире, в бензоле. Удельное вращение [б] D20 49-50° (с=2, метанол). Подобно другим стероидным гликозидам спиртовой раствор его окрашивается нитропруссидом натрия, в присутствии едкой щелочи, в постепенно исчезающий красный цвет. При прибавлении к уксуснокислому раствору хлорного железа и концентрированной серной кислоты на границе слоев возникает лилово-красное окрашивание; верхний слой постепенно окрашивается в сине-зеленый или синий цвет.

Биологическую активность определяют на кошках и стандартных лягушках в разведении 1:15.000. Вначале готовят раствор 1:5000 на 75%-ном спирте, разбавляемый водой (1:2). Биологическую активность рассчитывают по формуле 15000 / а, где а - наименьшая доза (в мл) испытуемого стандартного препарата в разведении 1: 15000.

Для испытания на кошках используют раствор в 75%-ном спирте 1:1000; в день опыта раствор разбавляют изотоническим раствором натрия хлорида до концентрации 1:70000.

Биологическую активность 1 г стандартного препарата при испытании на кошках рассчитывают по формуле 7000 * т / а, где т - вес кошки, а - смертельная доза (в мл) испытуемого раствора, разведенного в 70000 раз. 1 г препарата должен содержать 3600-4500 КЕД или 34000-40000 ЛЕД.

Хранят под замком (список А), в хорошо закупоренных склянках, в сухом месте, защищенном от действия света. Высшая разовая доза - 0,0002 г., суточная - 0,0004 г.

Применяют в виде таблеток или раствора при острой и хронической недостаточности кровообращения по одной таблетке (0,1 мг) 3 раза в день или по 20-25 капель 0,02%-ного спиртового (70%-ного) раствора 2 раза в день.

Выводы

Сердечные гликозиды - сложные безазотистые соединения растительной природы, обладающие избирательным воздействием на сердце, которое реализуется, главным образом, через выраженный кардиотонический эффект.

Препараты данной группы повышают работоспособность миокарда, обеспечивая наиболее экономную и, вместе с тем, эффективную деятельность сердца.

Вследствие этого оправдано применение этих средств для лечения больных с сердечной недостаточностью различной этиологии.

В медицинской практике наиболее широко применяют препараты сердечных гликозидов, получаемых из следующих растений:

- наперстянка пурпурная (красная), Digitalis purpurea.

Сердечный гликозид - дигитоксин.

- наперстянка шерстистая, Digitalis lanata. Препараты сердечных гликозидов - дигоксин, целанид (изоланид, лантозид).

Кроме того, сердечные гликозиды могут быть получены из других растений:

- из семян африканской многолетней лианы, Strophanthus gratus и Strophanthus Kombe) получают строфантин (-G или - К соответственно);

- из ландыша майского (Convallaria majalis) получают препарат коргликон, содержащий конваллязид и конваллятоксин;

- из горицвета весеннего (Adonis vernalis) получают препараты (адонизид, настой травы горицвета), в состав которых входит сумма гликозидов (цинарин, адонитоксин и др.)

Все сердечные гликозиды в химическом отношении родственны друг другу: это сложные органические соединения, молекула которых состоит из несахаристой части (агликон или генин) и сахаров (гликон). Основой агликона является стероидная циклопентанпергидрофенантреновая структура, связанная у большинства гликозидов с ненасыщенным лактонным кольцом.

Гликон (сахаристая часть молекулы сердечных гликозидов) может быть представлен разными сахарами: D-дигитоксозой, D-глюкозой, D-цимарозой, L-рамнозой и др. Число сахаров в молекуле варьирует от одного до четырех.

Страница:


Подобные документы

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.

© 2000 — 2023, ООО «Олбест» Все права защищены