Фармакологическое изучение лекарственного растительного сырья зверобоя продырявленного

Размещено на http://www.allbest.ru/

23

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

САРАТОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ

Кафедра общей биологии, фармакогнозии и ботаники

Курсовая работа

на тему:

Фармакологическое изучение лекарственного растительного сырья зверобоя продырявленного

Выполнила студентка 3 курса

2 группы

фармацевтического ф-та

Кузнецова И.А.

Саратов 2009

Содержание

Ведение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Ботаническая характеристика Зверобоя продырявленного. Распространение, местообитание, заготовка и сушка. Сравнительная характеристика возможных примесей

1.2 Данные о химическом составе зверобоя

1.3 Фармакологические свойства зверобоя, применение его в медицине. Лекарственные препараты на основе зверобоя

1.4 Обзор методов, используемых при анализе сырья травы зверобоя

1.4.1 Макроскопический и микроскопический анализ

1.4.2 Определение содержания флавоноидов в лекарственном растительном сырье

Глава 2. Экспериментальная часть

2.1 Анализ сырья фильтр-пакетов ООО ЗАО АПФ «Фито-ЭМ»

2.2 Анализ сырья фильтр-пакетов ОАО «Красногорсклексредства»

2.3 Анализ сырья фильтр-пакетов ПКФ«Фитофарм»

2.4 Анализ сырья фильтр-пакетов ЗАО «Здоровье»

2.5 Анализ сырья фильтр-пакетов ООО «КФХ «Кентавр»

Заключение

Введение

Ботаники описали около двухсот видов зверобоя, в России растет 50 видов. В медицине используют лишь один вид -- зверобой продырявленный, или обыкновенный.

Несмотря на многолетнюю историю изучения зверобоя, постоянно появляются новые данные об еще недостаточно изученных его свойствах, например в последнее время зверобой получил широкое применение в косметологии и психиатрии, как антидепрессант. В связи с этим дальнейшее изучение этого лекарственного растения, в том числе и фармакогностическое, является очень перспективным.

Цель данной работы: провести полное фармакогностическое изучение зверобоя продырявленного.

Задачи:

1. Провести анализ литературных данных в области фармакогностического изучения зверобоя продырявленного.

2. Провести фармакогностический анализ фильтр-пакетов травы зверобоя разных фирм производителей.

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Ботаническая характеристика Зверобоя продырявленного. Распространение, местообитание, заготовка и сушка. Сравнительная характеристика возможных примесей

Многолетнее травянистое корневищное растение высотой 30-60 см. Стебли супротивно-ветвистые, цилиндрические, с двумя продольными ребрами, голые. Листья сидячие, супротивные, длиной 0,7-3,5 см, шириной до 1,4 см, голые, с притупленной верхушкой по форме продолговато-овальные, тупые, цельнокрайние, с рассеянными по листовой пластинке просвечивающими, а по краям черными (пигментированными) точечными вместилищами. Они кажутся проколотыми иглой - отсюда и название "продырявленный".

Цветки свободнолепестные, правильные, с пятилистной нсопадающей чашечкой, пятилепестным венчиком; лепестки ярко-желтые, продолговато-овальные, с черно-бурыми точками (с нижней стороны). Тычинок 50-60, сросшихся при основании в три пучка. Семена мелкие, цилиндрические, темно-коричневые.

Соцветие - щитковидная метелка. Плод - трехгнездная многосемянная коробочка, раскрывающаяся тремя створками. Цветет с июня до августа, плоды созревают в сентябре[10].

Распространение. Зверобой продырявленный--евро-азиатский вид. Широко распространен в европейской части страны (кроме Крайнего Севера), на Кавказе, в Западной Сибири, некоторых районах Средней Азии. К востоку от Енисея замещен близким видом -- зверобоем оттянутым N. attenuatum Choisy[1].

Местообитание. Произрастает на сухих и освещенных участках. Распространен в лесной и лесостепной зонах, поднимается в горы до 2300 м над уровнем моря. Редко образует крупные заросли, чаще растет узкими полосками вдоль опушек леса и небольшими куртинами. В лесной зоне растет на суходольных лугах, лесных полянах, вдоль лесных опушек, на вырубках, в разрежённых сосновых иди сухих хвойно-мелколиственных лесах. В лесостепной зоне встречается в дубовых рощах и березовых колках, а также в луговых степях. В горных районах растет в предгорьях на каменистых склонах, редко поднимается до субальпийских лугов. Иногда как сорняк растет около дорог, среди посевов, чаще по окраинам полей. Удобны для заготовки молодые посадки леса, зарастающие вырубки и пары[5].

Заготовка. Основные заготовки сырья зверобоя производят на вырубках, пустырях, полянах и в молодых насаждениях с небольшой сомкнутостью крон. В качестве лекарственного сырья используется трава. Ее заготовляют во время цветения до появления незрелых плодов. Заготовляют цветущие верхушки, срезая ножом или серпами в период массового цветения, длиной 25-30 см, без грубых стеблей. При сборе травы недопустима примесь других видов зверобоя, кроме зверобоя пятнистого и обыкновенного. При заготовках необходимо оставлять часть растений нетронутыми для обсеменения, обеспечивающего возобновление заросли. Недопустимо вырывать растения с корнями, так как это приводит к быстрому уничтожению зарослей.Зверобой может возделываться как лекарственная культура. При дружной весне и теплом лете, когда зверобой собирают рано, ко второй половине влажного лета зверобой успевает дать еще один урожай ценной травы Периодичность заготовки 2 года[7].

Сушка. Сушат сырье на чердаках под железной крышей, под навесами с хорошей вентиляцией или в сушилках при температуре до 40°С, расстилая тонким слоем (5--7 см) на ткани, бумаге или решетах, часто помешивая. Небольшие количества связывают в рыхлые пучки, подвешивают для проветривания и сушки. Ввиду различного химического состава лучше сушку производить в сушилках с искусственным обогревом при температуре 35-40°С. В хорошую погоду сырье высыхает за 4-5 дней, а в сушилках - за 1-2 дня. Окончание сушки определяется по степени ломкости стеблей. В высушенном состоянии они не сгибаются, а ломаются[5].

Сравнительная характеристика возможных примесей. В некоторых районах европейской части и Сибири вместе со зверобоем продырявленным растут похожие на него зверобой пятнистый, зверобой жестковолосистый и зверобой изящный, медицинское использование которых не предусморено утвержденной технической документацией[10].

Название растения	Диагностические признаки
	стебли	листья	соцветия	цветки
Зверобой обыковенный - Hypericum perforatum L. (допущен к заготовке)	Голые, высотой 30-80 см, с двумя ребрами	Овальные, удиненно- эллиптические, длиной 1-3 см, голые	Почти щитковидные	Лепестки золотисто-желтые, чашелистики цельнокрайние, тонкозаостренные
Зверобой пятнистый - Н. maculatum Grantz. (H. quadrangulum L.) (допущен к заготовке самостоятельно)	Голые, высотой 30-70 см, четырехгранные	Эллиптические или овальные, длиной 0,5-3,5 см, голые	Кистевидные	Лепестки золотисто-желтые, чашелистики цельнокрайние, тупые
Зверобой изящный - Н. elegans Steph.	Голые, высотой 20-80 см с двумя ребрами	Ланцетовидные, длиной 1,5-2,5 см, голые	Широкая метелка	Лепестки светло-желтые, чашелистики по краю тонкозубчатые с черными железками
Зверобой горный - Н. montanum L.	Слабоопушенные, высотой 30-60 см, цилиндрические	Голые, яйцевидно- продолговатые, длиной 1,5-5 см	Редкая, короткая, овальная кисть	Лепестки бледно-желтые, чашелистики по краю черно- железисто-зубчатые
Зверобой жестковолосый (волосистый) - Н. hirsutum L.	Волосистые, высотой 50-100 см, цилиндрические	Волосистые, эллиптические, длиной 1,5-5 см	Длинная редкая кисть	Лепестки золотисто-желтые, чашелистики по краю черно- железисто-зубчатые

2.2 Данные о химическом составе зверобоя

Трава зверобоя содержит разнообразные биологически активные соединения. Основными действующими веществами травы зверобоя являются фотоактивные конденсированные антраценовые производные (до 0,4% гиперицина, псевдогиперицин, протопсевдогиперицин, гиперикодегидродиантрон, псевдодигиперикодегидродиантрон, франгулаэмодинантранол и др.).

Рис.3. Гиперицин.

Найдены также флавоновые соединения: гликозид гиперозид (в траве - 0,7%, в цветках - 1,1%), рутин, кверцитрин, изокверцитрин и кверцетин.

Рис.4. Изокверцитрин.

В траве содержится эфирное масло, в состав которого входят терпены, сесквитерпены, сложные эфиры изовалериановой кислоты. Обнаружены также дубильные вещества (до 10%), смолы (до 10%), антоцианы, сапонины, каротин (до 55 мг%), витамин Р, цериловый спирт, холин, следы алкалоидов. Из неспецифических действующих веществ в траве зверобоя находятся аскорбиновая кислота, каротиноиды, холин, никотиновая кислота. Сок из свежей травы зверобоя содержит в 1,5 раза больше действующих веществ, чем настойка.

Надземная часть содержит: макроэлементы (мг/г) - калий - 16,8, кальций - 7,3, магний - 2,2, железо - 0,11; микроэлементы (мкг/г) - марганец - 0,25, медь - 0,34, цинк - 0,71, кобальт - 0,21, молибден - 5,6, хром - 0,01, алюминий - 0,02, селен - 5,0, никель - 0,18, стронций - 0,1 кадмий - 7,2, свинец - 0,08, бор - 40,4; концентрирует молибден, селен, кадмий, может накапливать марганец.

Известно только восемь видов лекарственных растений, которые концентрируют кадмий и к этим растениям относится зверобой продырявленный. Полезных свойств этого элемента не установлено, напротив имеются сообщения о вредном влиянии его на организм человека. Причиной повышенного поступления кадмия в растения, очевидно, могут быть техногенные загрязнения. Поэтому заготовку лекарственного сырья, особенно растений сверхконцентраторов кадмия, необходимо производить вдали от дорог и интенсивного промышленного производства.

Молибден (один из элементов, который концентрирует зверобой продырявленный) - является кофактором ряда ферментов. Установлено, что этот элемент препятствует развитию кариеса зубов, задерживая фтор[8].

2.3 Фармакологические свойства зверобоя, применение его в медицине. Лекарственные препараты на основе зверобоя

Фармакологические свойства. Зверобой обладает многосторонними фармакологическими свойствами. Препараты зверобоя применяют как спазмолитическое, вяжущее, дезинфицирующее, противовоспалительное средство, обладает антидепрессивной активностью. Лечебные свойства зверобоя сочетаются с нерезким горьковато-вяжущим и приятным бальзамическим запахом. Наличие витаминов дополняет лечебный эффект[10].

Основной фармакологический эффект зверобоя - его спазмолитическое действие, связанное с наличием в растении флавоноидов. Это действие проявляется на гладкомышечных элементах желудка, кишечника, желчных путей, кровеносных сосудов.

В связи с содержанием в траве фотосенсибилизирующего вещества гиперицина зверобой повышает чувствительность кожи к действию света и ультрафиолетовых лучей, что особенно выражено у животных-альбиносов. Препараты зверобоя, обладающие фотосенсибилизирующими свойствами, используют для устранения депигментации при витилиго.

Экстрагированные из зверобоя вещества (смесь высших спиртов, каротин, токоферолы) в эксперименте оказывают противовоспалительное действие. При воспалительных заболеваниях почек, мочевого пузыря, при мочекаменной болезни, а также при снижении фильтрационной способности почек, задержке жидкости и электролитов в организме, отвары и настои зверобоя применяют как мочегонное средство.

Водные настои и отвары зверобоя назначают при гастритах, при острых и хронических энтеритах и колитах небактериального происхождения и как вспомогательное средство при бактериальных заболеваниях кишечника, при дискинезиях желчных путей, холециститах, желчнокаменной болезни, гепатитах, метеоризме. Зверобой в комплексе с другими лекарственными растениями применяют в период реконвалесценции.

Отвар зверобоя используют при рентгенологическом исследовании толстого кишечника. Для этого бариевую контрастную смесь готовят на отваре травы (15 г на 100 мл воды). При этом уменьшается вязкость бариевой взвеси, что позволяет получить более четкое изображение рельефа слизистой оболочки. Бариевая взвесь на отваре зверобоя легче продвигается по кишечнику, что сокращает время исследования.

В отоларингологической практике в настоящее время широко используют растительные антимикробные препараты. В эксперименте отмечена более высокая чувствительность микробной флоры к настойкам трав, чем к ряду синтетических антибиотиков. Настойку зверобоя (1:5 на 40% спирте) применяют при хронических гнойных отитах в виде капель или вводят в слуховой проход турунды, смоченные настойкой. Для полоскания при хроническом тонзиллите, ангине, гингивитах, стоматитах применяют 30-40 капель настойки на стакан воды.

Зачастую депрессия у человека появляется от недостатка света. Такой вывод был сделан на основе южных стран, в которых солнечных дней в году на порядок больше. Депрессия для жителей этих стан - явление редкое. Если у человека не хроническая стадия депрессии, а просто сезонное недомогание, то, прибегнув к народной медицине, он сможет улучшить тем самым своё состояние. Для такого случая больше всего подходят препараты, сделанные на основе зверобоя продырявленного, который влияет на организм человека как антидепрессант. Это выражается в том, что он увеличивает содержание серотонина в клетках мозга, недостаток которого вызывает депрессивное состояние[8].

Лекарственные средства: трава зверобоя, брикеты, настои, зверобойное масло (масляный экстракт), препарат "Новоиманин", “Иманин”, “Пефлавит” (уменьшает проницаемость капилляров), гелариум гиперикум. Входит в состав сборов.

Зверобойное масло очень полезно для лечения различных заболеваний. Оно обладает фитонцидным действием, которое получают за счёт наличия в траве производных диантрона, гиперицина и псевдогиперицина, а также флавоноидов, эфирного масла и смолистых веществ. Зверобойное масло хорошо использовать при ожогах, незаживающих ранах и язвах, нарывах, гнойных воспалениях слизистой оболочки рта, укусах собаки или кошки, высыпании на теле после простуды. Оно хорошо заживляет раны, действует как антидепрессант, помогает в борьбе с курением и алкоголизмом. А так как в состав зверобойного масла входит гиперицин, то он помогает лечить раковые заболевания.

Масло из зверобоя можно получить за счёт соединения травы зверобоя с растительным маслом. После чего эту смесь нагревают на водяной бане в течение трёх часов, масло сливают, а траву зверобоя сильно отжимают и фильтруют само масло[9].

Новоиманин (0,1% раствор) применяют наружно при воспалительных заболеваниях кожи и подкожной клетчатки, длительно незаживающих ранах, язвах. При лечении ожогов используют 0,1% раствор, полученный путем разведения 1% спиртового раствора 0,25% раствором анестезина. Новоиманин назначают также при бронхитах, абсцессах легких, при пневмониях, гнойных плевритах, пиопневмотораксе, абсцедирующих пневмониях в виде ингаляций 0,1% раствора[4].

Иманин обладает противомикробными свойствами, главным образом по отношению к грамположительным бактериям, стимулирует процессы регенерации поврежденной ткани. 1:го применяют в хирургии при инфицированных ранах, карбункулах, панарициях, фурункулах; в акушерской и гинекологической практике при маститах, трещинах сосков; в стоматологии - при язвенных стоматитах. В отоларингологической практике - при острых ринита, фарингитах, ларингитах, гайморитах, хронических тонзиллитах, хронических и острых отитах, воспалительных процессах кожи и подкожной клетчатки. Применяю при длительно не заживающих язвах и ожогах 11 и III степени[2].

Лекарственный препарат гелариум гиперикум выпускают в форме драже по 30 и 60 штук в упаковке. Одно драже содержит 255-285 мг сухого экстракта травы зверобоя (что соответствует 0,9 мг гиперицина).

Высокая эффективность, безопасность, практически полное отсутствие побочных реакций, хорошая переносимость и сочетаемость с другими лекарственными средствами позволяют рекомендовать гелариум гиперикум для лечения пациентов с депрессией легкой и средней тяжести. Аналогом гелариума гиперикума является лекарственный препарат немецкой фирмы Негрустин. Негрустин® представляет собой экстракт травы зверобоя, стандартизированный по комплексу действующих веществ. Негрустин отличается высоким содержанием гиперицина, гиперфорина и их производных, что обеспечивает высокую эффективность и экономичность лечения[6].

Противопоказания и возможные побочные эффекты: Трава зверобоя может вызвать неприятные ощущения в области печени и чувство горечи во рту, запоры, понижение аппетита. Поскольку зверобой повышает артериальное давление, желательно назначать его лицам, страдающим гипертонической болезнью, только в составе сбора[3].

1.4 Обзор методов, используемых при анализе сырья травы зверобоя

зверобой продырявленный фармакологический анализ

1.4.1 Макроскопический и микроскопический анализ

Макроскопический анализ

По ГФ XI стебли супротивноветвистые, цилиндрические, с двумя продольными ребрами, голые, длиной 23-30 см, облиственные, с цветками, бутонами и отчасти недозрелыми плодами. Листья сидячие, супротивные, длиной 0,7-3,5 см, шириной до 1,4 см, голые, продолговатые, цельнокройные, с притупленной верхушкой, многочисленными просвечивающими вместилищами в виде светлых точек; заметны и темные (пигментированные) вместилища. Стебли и листья матово-зеленого цвета. Цветки золотисто-желтые, собраны в щитковидную метелку. Плод - трехгранная многосемянная коробочка. Семена мелкие, цилиндрические, темно-коричневые. Запах сырья слабый, ароматный. Вкус горьковатый, слегка вяжущий.

Микроскопический анализ

Согласно статье 52 ГФ ХХ издания при микроскопическом исследовании травы зверобоя продырявленного на микропрепарате обнаруживаются следующие характерные признаки: при рассмотрении листа с поверхности видны клетки эпидермиса с извилистыми стенками; вся пластинка содержит многочисленные эфирно-масличные вместилища 2х типов: бесцветные расположенные по всей поверхности листа (они содержат эфирное масло и смолу или только эфирное масло) и пигментированные - по краю листа (кроме эфирного масла и смолы содержат красно-фиолетовый пигмент); устьица с 3-4 околоустьичными клетками, расположены только на нижней стороне листа.

1.4.2 Определение содержания флавоноидов в лекарственном растительном сырье

Учитывая растворимость агликонов и гликозидов флавоноидов в спирте, проводят экстракцию флавоноидов из сырья метанолом или этанолом. Спиртовое извлечение упаривают и разбавляют водой, после охлаждения неполярные вещества (белки, жирные масла, стерины, хлорофилл) выпадают в осадок, который отделяют. Часто для удаления сопутствующих веществ сырье сначала обрабатывают хлороформом, т.е. "обезжиривают", а затем уже экстрагируют спиртом различной концентрации. Спиртовое извлечение исследуют. Проводят качественный и количественный анализ[5].

Качественный анализ

Для установления подлинности используют в анализе качественные реакции и хроматографическое исследование.

Качественные реакции

1. Проба Синода (цианидиновая проба)- восстановление цинковой пылью в кислотной среде. Для постановки реакции берут 1 г порошка сырья, заливают 10 мл 95% этанола, нагревают на водяной бане до кипения и настаивают 3-4 часа. Спиртовое извлечение фильтруют, упаривают до объема 2 мл, делят пополам и разливают в 2 пробирки; в каждую пробирку прибавляют по 3 капли концентрированной хлористоводородной кислоты. В 1-ю пробирку добавляют 0,03-0,05 г цинковой пыли и нагревают на водяной бане до кипения. Жидкость окрашивается в красный цвет. Во 2-й пробирке окрашивание отсутствует. Халконы и ауроны при помощи цианидиновой реакции не обнаруживаются.

Реакция основана на способности окисленных форм флавоноидов восстанавливаться водородом в момент выделения до антоцианидинов. В кислой среде образуются оксониевые соли, окраска которых зависит от структуры флавоноида.

Флавоны дают оранжево-красные, флавонолы от розовой до малиновой окраски соли.

Антоцианидины, халконы и ауроны в кислой среде сразу дают окрашенные оксониевые соли.

2. Проба Брианта. Проводится в случае положительной цианидиновой пробы. Эта реакция дает возможность сделать заключение о присутствии в сырье гликозидов и агликонов.

В пробирку, где проводилась проба Синода, добавляют октанол и встряхивают, при этом если:

- окраска перешла в октанол, то в сырье содержатся только агликоны,которые растворимы в октаноле;

- окраска осталась в водной фазе - в сырье только гликозиды;

- окрасились оба слоя - в сырье присутствуют флавоноиды как в видегликозидов, так и в виде агликонов.

3. Реакция с солями железа (хлоридом окисного железа) -образуются комплексные соединения, окрашенные в черно-синий цвет, если флавоноиды -триоксипроизводные и в зеленый, если диоксироизводные.

4. Реакция с 2-5%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида. Образуются хелатные комплексы желтого цвета с желто-зеленой флюоресценцией за счет водородных связей, возникающих между карбонильной и оксигруппой. Эта реакция приведена в ГФ XI для подтверждения подлинности сырья зверобоя.

5. Реакция с 1%-ным раствором основного ацетата свинца.Антоцианидины дают синий аморфный осадок, а флавоны, халконы и ауроны

- осадки ярко-желтого цвета.

6. Реакция с 10%-ным спиртовым раствором щелочи с образованием фенолятов желтого цвета - на флавоны и флавонолы.

Антоцианидины образуют со щелочами соли от синего до оливково-зеленого цвета.

7. Реакция азосочетания с диазосоединениями. Образуется азокрасительоранжевого, красного или вишнево-красного цвета.

8. Борно-лимонная реакция с реактивом Вильсона (по 0,5 г борной и лимонной кислот в метаноле).Реакция отличия флавоноидов от фуранохромонов. Флавоноиды дают комплексы с борной кислотой желтой окраски с ярко-желтой флюоресценцией, которые не разрушаются лимонной кислотой.

Хроматографическое исследование

Для идентификации и разделения флавоноидов используют метод бумажной, колоночной хроматографии и хроматографии в тонком слое сорбента. Для этого используют различные системы растворителей:

- бумажная хроматография - чаще всего БУВ (бутанол - уксусная кислота -вода) 4:1:5; 4:1:2

- тонкослойная хроматография - хлороформ-метанол 8:3; 8:2 Идентифицируют флавоноиды по характерному свечению на хроматограм-мах в УФ-свете и после проявления хромогенными реактивами. Катехины и лейкоантоцианидины не флюоресцируют. Гликозиды флавонов и изофлавонов флюоресцируют голубым или синим светом, флавонолов - темно-коричневым или черным, агликоны флавонов - коричневым, флавонолов -желтым, халконы и ауроны имеют желтую или оранжевую флюоресценцию. Для проявления флавоноидов на хроматограммах используют:

1) Пары аммиака 25%-ного. Происходит усиление окраски пятен в УФ-свете или изменение окраски до желтой.

2) 2-5%-ный спиртовой раствор алюминия хлорида - желто-зеленая флюоресценция в УФ-свете, в видимом свете - желтое окрашивание.

3) Катехины проявляют 1%-ным раствором ванилина в концентрированной хлористоводородной кислоте, в видимом свете наблюдается красное окрашивание.

Реже используют реактив Вильсона, 2%-ный метанольный раствор хлорокиси циркония, раствор пятихлористой сурьмы в хлороформе, диазореактив[10].

Количественный анализ

Методика количественного определения флавоноидов. Около 1,0 г сырья помещают в колбу с притертой пробкой на 50 мл, заливают 20 мл 90% этанола с содержанием 2%-тов концентрированной хлористоводородной кислоты, экстрагируют с обратным холодильником на кипящей водяной бане и декантируют в мерную колбу на 50 мл. Извлечение повторяют еще дважды, заливая по 10 мл 90% подкисленного этанола. Объединенное извлечение доводят до метки 90% этанолом; 0,2 мл экстракта наносят на полоску хроматографи-ческой бумаги размером 45 и хроматографируют в системе 0,1М хлористоводородной кислоты хроматограмму высушивают, в УФ-свете отмечают пятна флавоноидов, вырезают и элюируют 96% этанолом три раза по 10, 5 и 5 мл в колбе с притертой пробкой с обратным холодильником на водяной бане. Полученное извлечение флавоноидов сливают в мерную колбу на 25 мл, доводят до метки 96% этанолом и снимают оптическую плотность элюатов с помощью спектрофотометра с толщиной слоя 1см при длине волны 353нм. Сумму флавоноидов пересчитывают на рутин (Е =387,5) по формуле:

С . Д У1-К У2-100

" Е I М (100 - В) -УЗ '

Д - оптическая плотность;

У1- объем первого извлечения, мл (50 мл);

У2- объем второго извлечения, мл (25мл);

УЗ- объем, пошедший на хроматографирование, мл (0,2 мл);

Е - удельный показатель поглощения;

М- масса навески, г; _^

В - влажность сырья, %;

I- толщина слоя, см;

К-поправочный коэффициент на неполное элюирование с бумаги (1,15).

Для количественного определения флавоноидов в лекарственном растительном сырье используют физико-химические методы анализа. Преимущественно применяют фотоэлектроколориметрические и спектрофотометрические методы.

Фотоэлектроколориметрический метод (ФЭК).

ФЭК основан на измерении оптической плотности окрашенных растворов, полученных по реакции флавоноидов с солями металлов и азосочетания с солями диазония.

Предварительно сырье очищают от хлорофилла хлороформом, получают спиртовое извлечение флавоноидов, затем проводят реакцию образования азокрасителя с диазотированным стрептоцидом и измеряют оптическую плотность окрашенного раствора с помощью ФЭК. Содержание суммы флавоноидов рассчитывают по калибровочному графику, построенному по стандартному образцу рутина.

Спектрофотометрический метод (СФМ).

СФМ основан на способности флавоноидов или их окрашенных комплексов поглощать монохроматический свет при определенной длине волны.

1. Получают спиртовое извлечение и измеряют собственное поглощение .

2. Получают спиртовое извлечение, затем проводят реакцию образования комплекса с 2%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида и измеряют оптическую плотность в траве зверобоя в пересчете на рутин с учетом оптической плотности ГСО рутина[5].

Глава 2. Экспериментальная часть

Целью нашего исследования было провести фармакогностический анализ сырья фильтр-пакетов разных фирм производителей и выявить сырье, наиболее соответствующее требованиям ГФ Х1 по макроскопическим и микроскопическим признакам.

Для анализа нами были закуплены препараты пяти фирм производителей: ПКФ«Фитофарм» ООО , ОАО «Красногорсклексредства», ЗАО АПФ «Фито-ЭМ», ЗАО «Здоровье»,ООО «КФХ «Кентавр» по 20 фильтр-пакетов в упаковке по 1,5 г

В качестве эталона для макроскопии и микроскопии препаратов было выбрано цельное сырье зверобоя с кафедры ботаники и фармакогнозии, подлинность его установлена, а так же соблюдены правила сбора, заготовки, сушки и хранения, предусмотренные статьей 52 ГФ Х1 издания.

При макроскопии и микроскопии сырья кафедры были выявлены характерные признаки (см. 2.4.1).

2.1 Анализ сырья фильтр-пакетов ЗАО АПФ «Фито-ЭМ»

При анализе препарата производителя ЗАО АПФ «Фито-ЭМ» Московская обл. Пушкинский район пос. Мамонтовка выявлено соответствие сырья в препарате заявленному

Сырье сильно измельчено, представляет собой бурую порошкообразную массу, местами пылеобразную в которой выявляются мелкие кусочки стеблей, листьев, цветков и не значительное количество плодов.

При микроскопии фрагмента листа обнаружено, что бесцветные эфирно-масличные вместилища имеют по краю бурое кольцо, это свидетельствует о том, что возможно нарушен какой-либо этап заготовки сырья. Пигментированные вместилища не найдены, так как не удалось обнаружить крайней части листа.

2.2 Анализ сырья фильтр-пакетов ОАО «Красногорсклексредства»

При анализе препарата производителя ОАО «Красногорсклексредства» Московская обл. г Красногорск выявлено соответствие сырья в препарате заявленному.

Сырье более крупного измельчения, что позволяет дать заключение о подлинности еще на этапе визуального наблюдения. Представляет собой порошок с преобладанием кусочков стеблей, а так же кусков листьев, цветков и единичных плодов.

При микроскопии фрагмента листа выявлено полное соответствие требованиям ГФ Х1 издания.

2.3 Анализ сырья фильтр-пакетов ПКФ «Фитофарм» ООО

При анализе препарата производителя ПКФ «Фитофарм» ООО Краснодарский край г. Анапа выявлено соответствие сырья в препарате заявленному.

Сырье очень сильно измельчено, представляет собой бурую, пылеобразную массу в которой с трудом выявляются мелкие кусочки стеблей, листьев, цветков и недопустимо большое количество плодов, что свидетельствует о нарушении правил сбора сырья, предусмотренных ГФ Х1 издания (до начала плодоношения).

При микроскопии части листа видно, что бесцветные эфирно-масличные вместилища очень мелкие, содержимое имеет желтоватый оттенок, что опять же свидетельствует о том, что сырье было заготовлено в более поздние сроки, чем предписано. Пигментированные вместилища не найдены, так как не удалось обнаружить крайней части листа.

2.4 Анализ сырья фильтр-пакетов ЗАО «Здоровье»

При макроскопическом анализе препарата производителя ЗАО «Здоровье» Московская область Красногорский район, пос. Нахабино выявлено соответствие сырья в препарате заявленному.

Было установлено полное отсутствие плодов, что говорит о соблюдении сроков сбора сырья.

При микроскопии содержимого фильтр-пакетов ЗАО «Здоровье» на большей части микропрепаратов видно, что клетки эпидермиса листа имеют правильную круглую форму, так же не обнаруживаются эфирно- масличные вместилища, что свидетельствует о наличии в препарате примесей.

На микропрепаратах найденных фрагментов листьев зверобоя видим характерные вместилища округлые и вытянутые по жилкам.

2.5 Анализ сырья фильтр-пакетов ООО «КФХ «Кентавр»

При макроскопическом анализе препарата производителя ООО «КФХ «Кентавр» Самарская область Елховский район с. Елховка выявлено соответствие сырья в препарате заявленному.

Было установлено полное отсутствие плодов, что говорит о соблюдении сроков сбора сырья.

При микроскопии содержимого фильтр-пакетов ООО «КФХ «Кентавр» найдены не пигментированные и пигментированные эфирно-масличные вместилища.

Выводы

В результате анализа выявлена разнокачественность сырья разных производителей. На наш взгляд всем общепринятым требования наиболее соответствует препарат производителя ОАО «Красногорсклексредства» (г. Красногорск), так как при его анализе не выявлено не соответствий требованиям ГФ ХI издания.

Заключение

В данной работе были изучены методы анализа травы зверобоя продырявленного, а так же химический состав и фармакологические свойства этого лекарственного растения.

В нами было проведено фармакогностическое исследование препаратов травы зверобоя в фильтр-пакетах разных фирм производителей по макроскопическим и микроскопическим показателям. В ходе анализа было установлено, что наиболее качественным является сырье препарата производителя ОАО «Красногорсклексредства» (г. Красногорск).

Список литературы

1. А.Д Турова. Лекарственные растения СССР и их применение, издание второе переработанное. Москва, 1974[1]

2. Морозова Н.П. Применение иманина при ожогах. В кн.: Иманин - новый растительный антибиотик. Киев, 1954[2]

3. А.М Задорожный, С.Я. Соколов и др. Справочник по ЛР. Москва, 1988

4. Б.Г. Волынский, С.Л. Фрейдман и др. Растения в медицине. Издательство Саратовского университета, 1989[3]

5. М.Д. Машковский. Лекарственные средствa, издание пятнадцатое. Москва, 2007[4]

6. Фармакогнозия: учебное пособие. Под редакцией Г.П Яковлева. Санкт-Петербург, 2006[5]

Размещено на Allbest.ru