Энцефалитогенные Т-клетки в развитии эксперементального аутоиммунного энцефаломиелита

Удаление ЭГ Т-клеток на преклиническом этапе развития ЭАЭ приводит к существенному ослаблению инфильтрации ЦНС макрофагами, неспецифическими Т и В-клетками. Количество ЭГ Т-клеток в ЦНС уменьшается более чем на 96%, в то время как инфильтрация макрофагами, CD4 лимфоцитами и В-клетками снижается только на 45, 50 и 30% соответственно. Следовательно, даже незначительное число Т-клеток, преодолевающих ГЭБ, привлекает достаточное количество клеток иммунной системы, образующих инфильтраты и способствующих развитию патологических процессов. Хотя клинические симптомы при этом значительно снижены, тем не менее, они проявляются (Рис. 10). Данное наблюдение полностью подтверждает предположение о роли ЭГ Т-клеток как провокаторов и дирижеров аутоиммунного воспаления в ЦНС. Таким образом, полученные нами данные дают возможность заключить, что ЭГ Т-клетки играют ключевую роль в инициации аутоиммунного воспаления в ЦНС, но не имеет существенного значения в развитии патологических процессов на клинической и восстановительной стадиях апЭАЭ.

3.6 Влияние удаления T_MBP-GFPTK⁺ клеток на активность T_MBP-RFP клеток при апЭАЭ

Система индуцированного клеточного самоубийства (СИКС) на основе HSV1-TK/GCV нашла широкое применение как в лабораторной, так и в клинической практике. Например, СИКС применяется при клеточной терапии с целью обезопасить пациента от возникновения нежелательных эффектов, сопряженных с введением клеток.

Рисунок 10 - Ослабление клинических симптомов и уменьшение воспаления в ЦНС при инъекции GCV

Клинические симптомы (А) и изменение веса (Б) у животных, получивших инъекцию T_MBP-GFPTK⁺ или T_MBP-GFP лимфоцитов. GCV вводили ежедневно в течение 4 дней с момента введения клеток.

Количество клеток в GFP, CD45, CD11b, CD4, CD8a и OX33 позитивных популяциях в спинном мозге через 96 часов после введения T_MBP-GFP (В) или T_MBP-GFPTK⁺ (Г) лимфоцитов при каждодневной в/б инъекции GCV (черные столбики) или физиологического раствора (белые столбики). *:р?0.05.

Низкая токсичность субстрата HSV1-TK для организма и высокая избирательность легли в основу создания стратегии генной фермент-продраг опосредованной терапии рака, включающей методы генной терапии для доставки активности HSV1-tk в опухолевые клетки и провокацию самоубийства последних системным введением GCV (Fillat, Carrio et al. 2003). Высокая эффективность терапии раковых опухолей с применением системы HSV-TK/GCV обусловлена наличием «эффекта свидетеля» (bystander effect - анг.), в результате которого гибнут не только клетки, экспрессирующие HSV1-tk, но и клетки, находящиеся в непосредственной близости от них.

Для того чтобы исключить возможность сопутствующего негативного влияния гибнущих T_MBP-GFPTK⁺ клеток на другие клетки, вовлеченные в развитие ЭАЭ, мы изучили влияние удаления T_MBP-GFPTK⁺ клеток на активность T_MBP-RFP энцефалитогенных клеток в эксперименте с их комбинированным введением. Под комбинированным введением Т-клеток подразумевается совместное введение чувствительных и толерантных к GCV энцефалитогенных Т-клеток, экспрессирующих различные флуоресцирующие белки, необходимые для их дальнейшего распознавания. Введение T_MBP-GFPTK⁺ и T_MBP-RFP клеток проводили на фоне ежедневного введения GCV с последующим подсчетом количества флуоресцирующих «красных» (RFP) и «зеленых» (GFP) клеток в ЦНС. Удаление «зеленых» T_MBP-GFPTK⁺ клеток не сказывалось на энцефалитогенном потенциале оставшейся популяции «красных» T_MBP-RFP клеток, и не влияло на другие клетки иммунной и нервной систем, участвующие в развитии патологии, что подтверждено динамикой проявления клинических симптомов (Таблица 2). Удаление «зеленых» T_MBP-GFPTK⁺ клеток не только не оказывало ингибирующего влияния на способность «красных» T_MBP-RFP клеток мигрировать в ЦНС, но, неожиданно для нас, приводило к увеличению числа мигрировавших в ЦНС «красных» клеток (Рис. 11 А и Б). То есть наблюдался эффект замещения «красными» T_MBP-RFP клетками удаленных «зеленых» T_MBP-GFPTK⁺ клеток. Объяснение этого феномена кроется в предположении о наличии двух волн миграции ЭГ Т-клеток в ЦНС в процессе развития апЭАЭ. Согласно этому предположению, незначительное число введенных активированных ЭГ Т-клеток (клетки «пионеры») мигрируют в ЦНС в течение первых часов после введения и посредствам секреции провоспалительных цитокинов создают возможность для массовой миграции клеток иммунной системы со второй волной их поступления в мозг.

Таблица 2 - Энцефалитогенный потенциал T_MBP-RFP клеток при специфическом удалении T_MBP-GFP TK⁺ клеток введением GCV

АпЭАЭ индуцировали введением 3x10⁶ T_MBP-RFP клеток (TK^-), 3x10⁶ T_MBP-GFPTK⁺ клеток (TK⁺), или 3x10⁶ T_MBP-RFP клеток совместно с 3x10⁶ T_MBP-GFPTK⁺ клеток (TK^-/TK⁺). Начиная со дня введения клеток, животные получали ежедневные инъекции физ.р-ра или GCV (20мг/кг).

Рисунок 11 - Количество ЭГ Т-клеток в ЦНС при неинвазивном удалении части популяции введением ганцикловира (20 мг/кг веса)

А - Количество RFP⁺ и Б - GFP⁺ клеток в ЦНС на 4-е сутки после введения ЭГ Т-клеток: без или в комбинации с ежедневным введением GCV. * (p?0.05) t-test.

Ранее нами было показано, что для эффективного удаления T_MBP-GFPTK⁺ клеток введением GCV требуется не менее 24-48 часов, что вполне достаточно для активации резидентных клеток ЦНС клетками «пионерами». Таким образом, к началу второй волны экспансии ЭГ Т-клеток в ЦНС создается ситуация, при которой уровень перестроек в ЦНС, сформированный клетками «пионерами», соответствует введенному количеству ЭГ Т-клеток (6х10⁶ ЭГ Т клеток = 3х10⁶ T_MBP-GFPTK⁺ + 3х10⁶ T_MBP-RFP клеток), в то время как количество ЭГ Т-клеток на периферии, к этому времени, сокращается вдвое, вследствии гибели «зеленой» популяции T_MBP-GFPTK⁺ клеток. Образовавшийся дисбаланс между изменениями, сформированными клетками «пионерами» в ЦНС, и количеством клеток во второй волне миграции позволяет «красным» T_MBP-RFP клеткам занимать места удаленных «зеленых» T_MBP-GFPTK⁺ клеток. Таким образом, нам удалось описать феномен, подтверждающий важную роль клеток «пионеров» обеспечивающих базис для второй волны экспансии ЭГ Т-клеток в миграционным фенотипом в ЦНС в патогенезе ЭАЭ (Носов М.А. и др. 2010).

3.7 Способы инициации суицида лимфоцитов

Индукция гибели клеток, экспрессирующих HSV-TK после обработки GCV происходит, главным образом, вследствии блокирования репликации в процессе деления клеток, и, следовательно, должна иметь место в культуре активно делящихся, пролиферирующих клеток. Восприимчивость медленно пролиферирующих Т_MBP-GFP TK⁺ клеток к обработке GCV определило необходимость изучения путей гибели лимфоцитов (Рис. 12).

Рисунок 12 - Специфическое удаление T_MBP-GFPTK⁺ клеток после обработки GCV in vitro

Специфическое удаление бластных T_MBP-GFPTK⁺ (А) и покоящихся T_MBP-GFPTK⁺ (Б) клеток после инкубации с GCV (1 мкМ/мл). *:р?0.001 относительно к количеству T_MBP-GFP клеток.

Несмотря на то, что СИКС на основе HSV-TK/GCV получило широкое распространение как в экспериментальной так и в клинической практике, механизм цитотоксичности GCV, опосредованный HSV-TK, изучен далеко не исчерпывающе. Типичные морфологические изменения и фрагментация ДНК, индуцированные GCV в Т_MBP-GFP TK⁺ клетках свидетельствуют об апоптотическом пути клеточной гибели. В данном случае важно упомянуть, что токсический эффект GCV высоко специфичен. Количество Т_MBP-GFP клеток в культуре при обработке GCV не сокращалось, и эти клетки не проявляли никаких признаков апоптоза, хотя оставались восприимчивы в стауроспорину, как и Т_MBP-GFP TK⁺ клетки.

Рисунок 13 - Апоптоз T_MBP-GFPTK⁺ клеток, вызванный GCV

А - Фрагментация хромосомальной ДНК в T_MBP-GFPTK⁺ (TK+) (5-8) и T_MBP-GFP (TK-)(1-4) клетках. Фрагментация геномной ДНК из необработанных клеточных линий (1 и 5), после 6 часов инкубации со стауроспорином (2 и 6), после 6- ти часов (3 и 7) или 24 - х часов (4 и 8) инкубации в присутствии GCV. М: маркеры молекулярного веса. Представлены результаты одного из трех независимых экспериментов.

(Б) Результаты Вестерн Блот анализа белков р53, р21, Puma и BAX в T_MBP-GFPTK⁺ бласт-лимфоцитах и T_MBP-GFPTK⁺ покоящихся лимфоцитах после 6 -ти и 20-ти часов инкубации с GCV. В качестве позитивного контроля индукции апоптоза использовали инкубацию с доксирубицином (Doxorubicin - Dox) в концентрации 0,2 мкг/мл в течение 24 часов. Бета- актин использовали как контроль загрузки геля.

Ранее было показано, что р53 и Bcl2 пути апоптоза могут быть вовлечены в обеспечение клеточной гибели, индуцированной HSV-TK/GCV (Huang, Xia et al. ; van Dillen, Mulder et al. 2005). Следует заметить, что пути апоптоза могут значительно варьировать в зависимости от типа клеток, а возможно и от вида и линии животных. Полученные нами результаты подтверждают вовлечение р53 в механизмы гибели Т_MBP-GFP TK⁺ клеток, индуцированной GCV, так же как и вовлечение Bax и PUMA в этот процесс (Рис. 13). Активация белка Puma характерна для покоящихся Т-клеток, а р21 - для бластных, активно пролиферирующих клеток. CD95 вовлечен в механизмы гибели клеток нейробластомы человека, спровоцированной системой HSV-TK/GCV, через р53 опосредованную аккумуляцию CD95 и образование сигнального комплекса с последующей активацией каскада каспаз (Glaser, Castro et al. 2001). Сигнальный каскад, запускаемый Fas-рецептром (CD95), как известно, играет важную роль и в контроле выживания Т-клеток, и возможно, вовлечен в апоптоз Т_MBP-GFP TK⁺ клеток, индуцированный GCV, хотя отсутствие активации каспазы 3 у Т_MBP-GFP TK⁺ клеток после обработки GCV не укладывается в данную схему (Рис. 14). Цитотоксический эффект GCV на покоящиеся ЭГ Т-клетки может быть объяснен продолжающимся процессом репарации, который требует синтеза ДНК de novo в ЭГ Т-клетках и при котором GCV-трифосфат может встраиваться в ДНК и запускать программированную клеточную гибель. На возможность данного сценария указывает накопление р53 в покоящихся Т_MBP-GFP TK⁺ клетках.

Рисунок 14 - Активность каспазы 3 в T_MBP-GFPTK⁺ лимфоцитах (А) и в экспрессирующих HSV-TK фибробластах (Б)

В эксперименте был использован флуоресцентный субстрат каспазы 3 - Ac-DEVD-AMC после инкубации клеток с физ. р-ром (ромбики), пуромицином (квадратики) или с GCV (треугольники). Длительность наблюдения - 12 часов.

Суммируя результаты по изучению пути развития апоптоза, индуцированного GCV, можно выделить 2 основных сценария, характерных для бластных и покоящихся лимфоцитов. Активация р53 пути в бласт - лимфоцитах ведет к блокированию клеточной пролиферации через активацию ингибитора циклин-зависимых киназ с последующей активацией белка Bax, в то время как апоптоз у покоящихся лимфоцитов преимущественно затрагивает активацию Puma. Эти процессы лежат в основе механизмов гибели лимфоцитов, индуцированной с помощью СИКС.

3.8 Неинвазивное сканирование

Способность клеток, экспрессирующих HSV1-tk, специфически аккумулировать радиоактивно меченные аналоги ГЦВ позволяет отслеживать их локализацию и миграцию in vivo с помощью гамма-камеры или позитрон - эмиссионной томографии (ПЭТ) (Tjuvajev, Stockhammer et al. 1995; Tjuvajev, Finn et al. 1996; Larson, Tjuvajev et al. 1997; Tjuvajev, Avril et al. 1998). В данной работе сравнили две системы визуализации Т-клеток in vivo при помощи гамма-камеры, основанные на экспрессии HSV1-tk или гена, кодирующего белок - переносчик норепинефрина/норадреналина (hNET) (Doubrovin, Doubrovina et al. 2007).

Рисунок 15 - Результаты гамма сканирования животных спустя 2 часа после введения [¹²³I]FIAU (250 µСi), осуществленного через один (А) или три (Б) дня после адоптивного переноса T_MBP-GFP или T_MBP-GFP TK клеток и 2 часа после введения [¹²³I]MIBG (250 µСi) осуществленного на третий день после адоптивного переноса T_MBP-GFP hNET или T_MBP-GFP TK клеток (В). Стрелками показана область локализации селезенки, линиями - мочевого пузыря и щитовидной железы

Сканирование в гамма камере не выявило специфической локализации Т-клеток через 2 часа после введения радиоактивного трейсера, а через 20 часов, позволило обнаружить аккумулированную клетками радиоактивность в селезенке, как в случае введения T_MBP-GFP TK, так и при введении T_MBP-GFP hNET клеток (Рис. 15).

3.9 Цитотоксический эффект радиоактивно меченных аналогов GCV на ЭГ Т-клетки

В процессе определения локализации ЭГ Т-клеток при развитии ЭАЭ с помощью гамма-сканирования, нами обнаружен токсический эффект аккумуляции радиоактивно меченных аналогов GCV на ЭГ Т-клетки, что представляется особенно важно всвязи с использованием данного метода не только в экспериментальной, но и в клинической практике. Известно, [¹²³I]FIAU имеет большее сродство к HSV1-tk, чем [¹⁸F]FHBG, который, в свою очередь, является субстратом для мутированной тимидин киназы HSV1-sr39tk (Alauddin and Conti 1998; Gambhir, Bauer et al. 2000). В соответствии с этим, используемые нами лимфоциты накапливали преимущественно [¹²³I]FIAU, поскольку экспрессировали HSV1-tk дикого типа, и именно [¹²³I]FIAU имел выраженное супрессивное влияние на интенсивность процесса пролиферации лимфоцитов в ответ на присутствие антигена (Рис. 16).

Рисунок 16 - Действие накопленного клетками радиоактивного субстрата на их функциональную активность in vitro

(А) Блокирование пролиферации T_MBP-GFP TK клеток специфическим субстратом тимидин киназы in vitro. По оси абсцисс - отношение количества T_MBP-GFP к T_MBP-GFP TK клеток, инкубированных один час в присутствии [¹²³I]FIAU или [¹⁸F]FHBG, рестимулированных и подсчитанных на второй день после стимуляции специфическим антигеном.

(Б) Дозозависимое изменение количества T_MBP-GFP или T_MBP-GFP TK клеток, инкубированных в отсутствии или с 0,25; 2,5 или 25 µСi [¹²³I]FIAU. *р?0.05 по отношению к количеству клеток в контроле.

Справедливо заключить, что специфическое накопление радиоактивного субстрата в клетке, а не присутствие радиоактивности в культуральной среде, ведет к повреждающему эффекту. Следует заметить, что проявляющаяся токсичность [¹²³I]FIAU по отношению к T_MBP-GFPTK⁺ может быть объяснена непосредственным повреждающем действием присутствующего в ядре изотопа, а не блокированием транскрипции вследствие встраивания трифосфата FIAU во вновь синтезирующуюся цепь ДНК, как это происходит в случае обработки GCV, поскольку концентрация химической составляющей FIAU в десятки раз ниже требуемой для проявления токсического эффекта.

В работах Zanzonico и Koehne экспрессия HSV1-tk в лимфоцитах, сенсибилизированных к антигенам Эпштейн-Бар-ассоциированной лимфомы, применялась для выявления их локализации при клеточной терапии с использованием введения радиоактивно меченых аналогов тимидина - 2?-fluoro-2?-deoxy-1-в-D-arabinofuransyl-5-iodo-uracil (FIAU)-[¹³¹I]FIAU и [¹²⁴I]FIAU с последующей детекцией гамма камерой или ПЭТ (Koehne, Doubrovin et al. 2003; Zanzonico, Koehne et al. 2006). Специфическое накопление радиоактивных субстратов лимфоцитами, продуцирующими HSV1-tk, не вело к снижению цитотоксичности иммуноцитов по отношению к клеткам лимфомы, вызванной вирусом Эпштейн-Бара, то есть не влияло на функциональную активность Т-клеток.

Рисунок 17 - Функциональная активность ЭГ Т - клеток in vivo при накоплении ими радиоактивного субстрата

Клинические симптомы развития ЭАЭ (показаны столбцами) и динамики изменения веса животных (показаны линиями), при: А - адоптивном переносе T_MBP-GFP, введении физиологического раствора или [¹²³I]FIAU (250 µСi). Б - адоптивном переносе T_MBP-GFP TK, введении физиологического раствора или [¹²³I]FIAU (250 µСi). В - при ежедневном введении GCV (20мг/кг) или физиологического раствора. *р?0.01 по сравнению с соответствующими показателями у контрольных животных.

С другой стороны, полученные нами результаты подтверждают существование токсического действия радиоактивно меченых аналогов GCV на HSV1-tk продуцирующие Т-лимфоциты. Кроме того, удалось обнаружить дозозависимое токсическое действие радиоактивно меченого аналога ГЦВ - [¹²³I]FIAU на лимфоциты, экспрессирующие HSV1-tk in vitro и значительную потерю функциональной активности Т-клеток in vivo. По-видимому дело в том, что в экспериментах Koehne изучали изменение цитотоксической активности Т-клеток, сенсибилизированных к антигенам Эпштейн-Бар-ассоциированной лимфомы, после коинкубации их с радиоактивным субстратом (Koehne, Doubrovin et al. 2003). В настоящей работе показано ингибирование пролиферативной активности T_MBP-GFP TK клеток в ответ на действие антигена. Введение радиоактивного субстрата так же приводило к значительному ослаблению клинических проявлений. У животных, получивших инъекцию T_MBP-GFP TK и [¹²³I]FIAU, наблюдалось лишь незначительное ослабление тонуса хвоста. У крыс контрольных групп, которые получили инъекции только T_MBP-GFPTK⁺ или T_MBP-GFP в комбинации с [¹²³I]FIAU, развивается тетрапорез, что соответствует 4му уровню клинических проявлений (Рис. 17). Значительное ослабление тяжести заболевания при введении T_MBP-GFPTK⁺ и [¹²³I]FIAU может быть объяснено ингибирующим эффектом радиоактивного субстрата на пролиферацию T_MBP-GFPTK⁺ клеток, что соответствует результатам, полученным in vitro.

Поскольку радиоактивно меченные субстраты к HSV1-TK широко используются в экспериментах и клинике для неинвазивного контроля за вводимыми лимфоцитами при клеточной терапии, представленные данные необходимо учитывать, т.к. такие приемы анализа могут приводить как к ослаблению, так и к изменению функциональной активности этих клеток и соответственно к снижению эффективности терапии или риску развития побочных эффектов.

Заключение

Современные представления о патогенезе рассеянного склероза базируются на обширном материале, накопленном в ходе клинических и лабораторных исследований, и позволяют определить его как аутоиммунное нейродегенеративное заболевание, провоцируемое энцефалитогенными CD4⁺ лимфоцитами, несущими Т-клеточный рецептор, специфичный к антигенам ЦНС. В связи с важной ролью ЭГ Т-клеток в развитии РС, их изучению уделяется пристальное внимание, что становиться возможным при использовании модели РС - адоптивного переносного экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита.

В работе изучено поведение и роль ЭГ Т-клеток на различных этапах развития апЭАЭ и обсуждаются механизмы, обеспечивающие ЭГ Т-клеткам возможность их проникновения в ЦНС инициации развития патологического процесса. Полученные данные подтверждают высокую вероятность двухэтапной миграции ЭГ Т-клеток в ЦНС и описывают механизмы формирования «миграционного фенотипа», что предоставляет потенциальную возможность для поиска путей коррекции этого процесса. Впервые подробно описаны пути апоптотической гибели лимфоцитов в системе индуцированного клеточного самоубийства (HSV-TK/GCV) и обнаружен токсический эффект радиоактивных аналогов GCV, угнетающих функциональную активность Т-лимфоцитов, что существенно и следует учитывать при применении данного метода в клинике.

ВЫВОДЫ

На преклинической стадии развития адоптивного переносного экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита, инициированного в/в или в/б введением 5 миллионов Т-клеток, сенсибилизированных к основному белку миелина, аккумуляция энцефалитогенных Т-клеток (ЭГ Т-клеток) наблюдается в селезенке через 72 часа после их введения, после чего количество их в селезенке резко снижается и увеличивается в ЦНС.

ЭГ Т-клетки, сортированные из селезенки через 72 часа после введения, в экспериментах in vitro активно мигрируют через экстраклеточный матрикс в отличии от этих же клеток, сортированных из культуры in vitro непосредственно перед введением животному.

ЭГ Т-клетки, полученные из селезенки через 72 часа после их введения, характеризуются функциональными изменениями - снижением экспрессии маркеров активации Т-клеток (IFNг и CD25), активацией экспрессии транскрипционного фактора - Круппел-лайк фактор 2 (KLF2) и Активирующего Миграцию Рецептора к Гиалуронану (RHAMM), участвующих в регуляции подвижности клеток.

Добавление в культуральную среду высокомолекулярного гиалуронана - лиганда к RHAMM, и Матригеля активирует подвижность ЭГ Т-клеток in vitro, ингибирует их пролиферацию и активирует экспрессию гена klf2, что характерно для формирования «миграционного фенотипа» ЭГ Т-клеток.

Созданы трасгенные линии первичных MBP (основной белок миелина) специфичных Т-клеток, экспрессирующих суицидный (тимидин киназа вируса простого герпеса - HSV1-TK) и маркерный (зеленый флуоресцентный белок - GFP) гены, а также линии клеток, экспрессирующих GFP, RFP или белок - переносчик норэпинефрина (hNAT).

Провокация апоптоза энцефалитогенных Т-клеток, продуцирующих HSV1-tk, ганцикловиром (GCV) позволяет специфически удалять T_MBP-GFPTK клетки in vitro (до 90% за 24 часа) и in vivo (?95% после 2х кратной инъекции GCV и ? 99% после 4х кратной инъекции GCV).

Активация процесса апоптоза, спровоцированная системой HSV1-TK/GCV, вызывает гибель бластных и покоящихся энцефалитогенных лимфоцитов через активацию р53 зависимого пути апоптоза, но протекает без активации каспаз.

Удаление энцефалитогенных Т-клеток in vivo на преклиническом этапе апЭАЭ с использованием системы клеточного самоубийства (HSV-TK/GCV) снижает уровень экспрессии IFNг, IL-17 и IL-2R, количество инфильтратов в ЦНС, а также тяжесть клинических симптомов апЭАЭ.

Удаление чувствительной к GCV популяции энцефалитогенных клеток (T_MBP-GFPTK) на преклинической стадии апЭАЭ ведет к увеличению инфильтрации ЦНС клетками оставшейся, не чувствительной к GCV, популяции энцефалитогенных Т-клеток (T_MBP-RFP) при их совместном введении.

Удаление энцефалитогенных Т-клеток in vivo на клиническом этапе развития апЭАЭ с использованием системы HSV-TK/GCV не влияет на тяжесть протекания апЭАЭ.

Специфическое накопление радиоактивно меченных аналогов GCV - [¹²³I]FIAU Т-клетками, экспрессирующими HSV-TK, ведет к потере ими пролиферативной и функциональной активности.

На преклиническом этапе развития апЭАЭ, вызванного введением ЭГ Т-клеток, сенсибилизированных к основному белку миелина, происходит комплекс функциональных изменений ЭГ Т-клеток, обусловливающих возможность последующего массивного проникновения ЭГ Т-клеток в ЦНС через гематоэнцефалический барьер, развития аутоиммунного воспаления в ЦНС и проявления клинических симптомов заболевания.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

Nosov M.A., Barabanova S.V., Glushikhina M.S., Kazakova T.B., Korneva E.A. Antigen-induced activation of hypothalamic cells (assessed by expression of the c-fos gene). Neurosci Behav Physiol. 2002 Sep-Oct;32(5):523-8.

Nosov M.A., Wekerle H., Flьgel A. Titration of autoaggressive T cells by HSV-TK suicide system reveals their important role during clinical EAE. Immunobiology , Volume 210, 6-8, 2005 Sep.

Odoardi F., Kawakami N., Li Z., Cordiglieri C., Streyl K., Nosov M., Klinkert W. E., Ellwart J. W., Bauer J., Lassmann H., Wekerle H., Flugel A. Instant effect of soluble antigen on effector T cells in peripheral immune organs during immunotherapy of autoimmune encephalomyelitis. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 Jan 16;104(3):920-5. Epub 2007 Jan 9

Lyakhovich A., Canals F., Nosov M., Surralles J. A DIGE-based approach to study interacting proteins. J Biochem Biophys Methods. 2007 Jun 10;70(4):693-5. Epub 2007 Mar

Grundtner R., Dornmair K., Dahm R., Flьgel A., Kawakami N., Zeitelhofer M., Knцfler M., Nosov M., Selzer E., Willheim M., Kiebler M., Wekerle H., Lassmann H., Bradl M. CNS inflammation in the myelin degenerative central nervous system is triggered by the presence of polyclonal T lymphocyte infiltrates and the local activation of T cells. Neurobiology of Disease. Neurobiol Dis. 2007 Dec;28(3):261-75. Epub 2007 Aug 3.

Flьgel A, Odoardi F, Nosov M, Kawakami N. Autoaggressive effector T cells in the course of experimental autoimmune encephalomyelitis visualized in the light of two-photon microscopy. J Neuroimmunol. 2007 Nov;191(1-2):86-97. Epub 2007 Oct 31.

М.А. Носов, M. Anton, W. Weber, С.В. Барабанова, H. Wekerle, Е.А. Корнева и A. Fluegel. Влияние радиоактивно-меченных субстратов к HSV1-TK, применяемых при неинвазивном сканировании, на функциональную активность антиген сенсибилизированных лимфоцитов. Медицинский академический журнал. 2010. Том 10. № 1. С. 24-30.

М.А. Носов, A. Fluegel. В поисках виновного: Анализ миграции энцефалитогенных Т клеток на преклиническом этапе развития адоптивного ЭАЭ при их внутривенном или внутрибрюшинном введении. Физиологический Журнал им. Сеченова. 2009. 95.N 12.2009, стр. 1416-1426

T. Ritter, M. Nosov, M. Griffin. Gene Therapy in Transplantation: Towards Clinical Trials. Opinion in Molecular Therapeutics. Curr Opin Mol Ther. 2009 Oct;11(5):504-12.

М.А. Носов, A. Fluegel. Вместимость ЦНС или симметричный ответ? Иммуномодуляция энцефалитогенных Т клеток в периферических органах. Медицинский академический журнал. В печати.