Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа: роль в регуляции энергетического обмена, индукции апоптоза и агрегации белков
Разобщение окисления и фосфорилирования в гликолизе. Связывание окисленной глицеральдегид–3–фосфатдегидрогеназа с нуклеиновыми кислотами. Вовлечение фермента в индукцию апоптоза. Взаимодействие шаперонина с ненативными свернутыми формами фермента.
| Рубрика | Химия |
| Вид | автореферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 26.12.2017 |
| Размер файла | 2,7 M |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Рис. 13. Термоагрегация ГАФД и ренина в присутствии синетического поликатиона и протаминов. 10 мМ калий-фосфатный буфер, рН 9,0, содержащий 0,5 мМ ЭДТА. Концентрация ГАФД 0,7 мкМ, концентрация ренина 2,5 мкМ, концентрация заряженных групп поликатионов 5 мМ, концентрация протаминов 1 мг белка в мл, температура 60°С.
Таким образом, можно предположить, что наряду с применением молекулярных шаперонов для ренатурации белков и предотвращения их агрегации в простейших случаях можно использовать искусственные шапероны, созданные как на основе синтетических полиионов, так и на основе природных полимеров, в том числе и положительно заряженных протаминов.
5. ПОЛУЧЕНИЕ АНТИТЕЛ, ИНАКТИВИРУЮЩИХ ГЛИЦЕРАЛЬДЕГИД-3-ФОСФАТДЕГИДРОГЕНАЗУ
Одним из малоизученных свойств антител является их потенциальная способность изменять конформацию белков, связывающихся с ними. Мы предположили, что антитело, выработанное на ненативную конформацию антигена, при связывании с нативным белком может индуцировать его превращение в аналогичные ненативные структуры. Одной из задач настоящей работы была экспериментальная проверка такой возможности на примере антител к ненативным формам ГАФД. Выбор ГАФД в качестве объекта исследования был продиктован как обширной информацией о роли этого фермента в функционировании клетки (особенно при патологических изменениях), а так и большим опытом работы с этим белком в наших исследованиях. Нами была получена кроличья антисыворотка, содержащая антитела против ГАФД из B. stearothermophilus, а затем проведено выделение фракций поликлональных антител, специфически реагирующих с различными формами ГАФД. Суть подхода отбору антител, способных оказывать инактивирующее воздействие на антигены-ферменты, заключается в следующем. Если белок может существовать в двух конформациях (например, активный и неактивный фермент и т.д.), то антитела, выработанные на одну конформацию, при взаимодействии с белком, находящимся в другой конформации, могут вызывать изменения его свойств в процессе образования комплекса фермент-антитело. Мы предположили, что можно выделить из поликлональной антисыворотки антитела, эффективно связывающиеся с определенными конформационными состояниями антигена-фермента. Если такие антитела будут связываться (пусть и с меньшим сродством) с другими конформациями белка, то в процессе окончательного формирования многоточечного контакта между активным центром антитела и антигенной детерминантой могут происходить такие нарушения исходной конформации фермента, которые должны вызывать снижение или потерю его каталитической активности. В принципе благодаря такому подходу можно было бы с помощью антител задавать белкам "нужную" конформацию". Для того чтобы проверить высказанное предположение мы приготовили аффинный сорбент на основе неактивных иммобилизованных тетрамеров ГАФД, ковалентно связанных с сефарозой за одну из 4 субъединиц.
На рисунке 14 представлено влияние двух типов антител на активность ГАФД B. Stearothermophilus.
При инкубации холоГАФД с антителами на неактивную апоформу, активность фермента снижалась на 80-85% (кривая 1). При этом те же антитела инактивировали апоформу ГАФД не более чем на 25% от исходной активности (кривая 2). При инкубации апо- и холо-ГАФД с антителами на денатурированную форму активность ферментов практически не изменялась.
Для получения достаточно стабильной конформации тетрамера "закрепили" такую конформацию с помощью поперечно-сшивающего реагента - глутарового альдегида. Фракцию иммуноглобулинов G наносили на иммуносорбент, а элюцию сорбировавшихся антител проводили буферным раствором с рН 2,3. Эту фракцию антител мы будем называть "антитела на неактивную апоформу ГАФД". Иммуносорбент для выделения антител, специфичных к денатурированной форме ГАФД, получали путем денатурации иммобилизованной ГАФД в буферном растворе с рН 2,3 Антитела, несвязавшиеся с предыдущим иммуносорбентом (неактивными тетрамерами ГАФД) наносили на иммобилизованные денатурированные мономеры ГАФД, проводили элюцию при рН 2,3 и получали "антитела на денатурированную форму". С помощью метода иммунопреципитации антител иммобилизованным Protein G было показано, что уровень перекрестной реакции между двумя фракциями антител составляет приблизительно 15 %, причем антитела на неактивную апоформу ГАФД достаточно эффективно связываются с нативными холотетрамерами ГАФД.
Апо- (2 и 4) или холоГАФД (1 и 3) (0,5 мг/мл) инкубировали с антителами на неактивную апоформу (1 и 2) или на денатурированную форму (3 и 4) в эквимолярном соотношении.
С помощью метода иммунопреципитации с Protein G было показано, что антитела на неактивную апоформу связываются с апоферментом практически так же, как и холоферментом. При этом антитела на денатурированную форму слабо взаимодействовали как с апоферментом, так и с холоферментом. Были также получены комплексы антитело-антиген в изолированном состоянии, определена стехиометрия связывания двух белков и полученные комплексы исследованы методом дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК). Из данных седиментационного анализа следует, что в комплексе антиген-антитело на один тетрамер ГАФД (апо или холоформа с мол. массой 144 000 Да, Sw,20 около 6,5 ) связывается только одна молекула антитела с мол. массой 150 000 Да. На рис. 15 продемонстрированы полученные с помощью ДСК графики избыточного теплопоглощения апо- и холоГАФД Bacillus stearothermophilus, антител на неактивную апоформу и комплекса ГАФД с этими антителами. Видно, что кофактор NAD обладает сильным стабилизирующим эффектом на структуру молекулы фермента - Tmax холофермента сдвигается в теплую область примерно на 15 градусов по сравнению с Tmax апофермента.
Но температура термоденатурационного перехода (Tmax) комплекса антиген-антитело и в присутствии и в отсутствие кофактора NAD практически одинакова и близка к Tmax апоформы ГАФД Bacillus stearothermophilus. Таким образом, антитела на апо-форму, взаимодействуя с холоферментом, элиминируют стабилизирующий эффект кофактора и дестабилизируют молекулу фермента. Для апофермента конформационные различия между свободным и связанным с антителом ферментом минимальны.
Рис. 15 Кривые избыточного теплопоглощения апо- (1) и холоГАФД (2)
B.stearothermophilus, антител на неактивную апоформу (3,4), а также комплекса апо- и холоГАФД Bacillus stearothermophilus:Ат на неактивную апоформу (5 и 6, соответственно
Как говорилось выше, апофермент имеет такое же, как и холофермент сродство к данной фракции антител, причем в обоих случаях связывается только одна молекула антитела на тетрамер фермента. Это означает, что в случае апоформы ГАФД взаимодействие антитела инактивирует полностью только ту субъединицу фермета, с которой она связана. Иная ситуация наблюдается для холоформы фермента - связывание антитела только с одной субъединицой приводит к постепенной инактивации всех остальных субъединиц и к снижению стабильности молекулы в целом. Вероятно, если в составе холофермента даже одна субъединица изменяет свою конформацию, то и соседние субъединицы уже не могут эффективно функционировать.
Нами было исследовано влияние двух типов антител на процесс реактивации ГАФД. Необходимо было выявить, с какими формами ГАФД связываются разные типы антител, то есть через процесс реактивации исследовать свойства самих антител. Было показано, что спонтанная реактивация ГАФД B. stearothermophilus достигала 85 % (рис.16, кривая 1).
Реактивация в присутствии антител на неактивную апоформу ГАФД достигала 70 % через 10 мин., далее активность начинала постепенно уменьшаться (до 15% от исходной активности) (кривая 3). В присутствии антител на денатурированную форму активность достигала только 18 % и больше не изменялась (кривая 2). Следовательно, в присутствии антител на неактивную апоформу ГАФД на первой стадии белок беспрепятственно сворачивается, но, как только возникает нативная конформация, антитела начинают связываться с таким ферментом и инактивировать его.
Рис. 16. Влияние антител на неактивную апоформу (3) и на денатурированную форму фермента (2) на реактивацию ГАФД B. stearothermophilus . 1 - спонтанная реактивация ГАФД
В присутствии антител на денатурированную форму мы видим небольшое увеличение активности до 20% , но на этом процесс реактивации прекращается. Мы полагаем, что антитела на развернутую форму еще на раннем этапе рефолдинга связываются с интермедиатами ГАФД и не дают им возможности продолжить сворачивание.
Таким образом, полученные результаты позволяют нам заключить, что фракция антител на ненативную апо-форму способна инактивировать фермент и не препятствует процессу ренатурации. Фракция антител, специфичная к денатурированной ГАФД, способна блокировать процесс ренатурации, но не может выступать, как инактивирующий агент.
Подробное исследование температурной и временной зависимости инактивации разных форм ГАФД антителами позволило предположить, что связывание антител на неактивную апоформу способно индуцировать развивающуюся во времени инактивацию фермента согласно приведенной на рис. 17 схеме.
Извлеченные на иммобилизованных неактивных тетрамерах ГАФД антитела неактивную апоформу (I) связываются не только с антигенными детерминантами, характерными для неактивной формы, но и с антигенными детерминантами, присутствующими в холо- и апоГАФД.
Вероятно, связывание этих антител с холо- или апоформами индуцирует образование такой конформации ГАФД, которая близка к конформации неактивного фермента, сшитого глутаровым альдегидом, т.е. конформации, на которую было отобрано данное антитело (Рис. 15, II и III).
В том случае, если такая возможность близка к истине, поведение антитела типа 1 можно рассматривать в рамках концепции, согласно которой антитело способно индуцировать некоторое искажение (или «напряжение») структуры партнера, образующего с ним комплекс, изменяя его конформацию в соответствии с конформацией антиген-связывающего центра.
Рис. 17. Схематическое изображение взаимодействия на неактивную апоформу с разными формами ГАФД и их влияния на активность фермента.
I - связывание антител неактивную апоформу с иммобилизованной на BrCN-активированной сефарозе неактивной ГАФД, сшитой глутаровым альдегидом. II - связывание антител типа 1 с нативной апоформой ГАФД, вызывающее инактивацию только одной субъединицы. III - связывание антител типа 1 с нативной холоформой ГАФД, вызывающее инактивацию нескольких субъединиц ГАФД. Символы разной формы обозначают различные конформационные состояния ГАФД.
гликолиз глицеральдегид нуклеиновый фермент
Предлагаемая нами интерпретация полностью объясняет экспериментальные данные о влиянии антител на неактивную апоформу на активность апоформы ГАФД. При связывании одной молекулы антитела с одной из субъединиц тетрамера апоГАФД происходит постепенная инактивация этой субъединицы без изменения активности остальных (падение активности на 25%) (Рис. 17, II). Иная ситуация наблюдается при связывании тех же антител с холоГАФД. Несмотря на одинаковую стехиометрию образующихся в обоих случаях комплексов (одна молекула антитела на тетрамер ГАФД), степень инактивации холоГАФД значительно выше - до 80%. Следовательно, инактивации подвергается не только связанная с антителами субъединица, но и соседние, которые не контактирует непосредственно с антителом. Таким образом, в случае холофермента антитело изменяет конформацию одной субъединицы, а затем конформационные изменения распространяется по межсубъединичным контактам, приводя к инактивации соседних мономеров (Рис. 15, III). Особенности воздействия антител на апо- и холоГАФД, очевидно, обусловлены разной прочностью межсубъединичных взаимодействий в этих формах - хорошо известно, что междимерные и межмономерные контакты в холоформах ГАФД из различных источников значительно прочнее, чем в апоформах. Следует отметить, что изучение механизмов формирования "неправильной" конформации одного белка при его взаимодействии с измененным партнером приобретает особое значение в связи с появлением данных о том, что сходные процессы лежат в основе образования инфекционных прионов (Sparrer, H.E. et al. 2000).
ВЫВОДЫ
1. Получены экспериментальные доказательства существования разобщения окисления и фосфорилирования в гликолизе на стадии гликолитической оксидоредукции. Разобщение стимулируется перекисью водорода, окисляющей сульфгидрильные группы активного центра глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы и индуцирующей у фермента новую ацилфосфатазную активность. Появление у глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы ацилфосфатазной активности приводит к расщеплению 1,3-дифосфоглицерата и вызывает ускорение гликолиза при недостатке или отсутствии АDP. Разобщение окисления и фосфорилирования в гликолизе может быть также индуцировано добавлением в систему нефосфорилирующей глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы. Индуцированное окислителями ускорение гликолиза, сопровождающееся уменьшением выхода АТР, является новым важным элементом регуляции энергетического обмена при функционировании клеток в условиях окислительного стресса.
2. Предложена и экспериментально доказана гипотеза, согласно которой способность глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы связываться с нуклеиновыми кислотами (РНК и ДНК) регулируется окислением сульфгидрильной группы 149 цистеинового остатка активного центра фермента. При окислении этой сульфгидрильной группы уменьшается сродство фермента к кофактору NAD и образующийся апофермент эффективно связывается с РНК и ДНК.
3. С целью выяснения роли глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы в индукции апоптоза методом иммунофлуоресцентной микроскопии с использованием моноклональных антител против ненативных форм глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы изучено изменение внутриклеточной локализации этих форм при индукции апоптоза. Было показано, что в клетках HeLa ненативные формы глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы сосредоточены в основном в ядрах, а также колокализованы с актиновыми филаментами. При индукции апоптоза в клетках HeLa под действием фактора некроза опухолей или перекисью водорода ненативные формы дегидрогеназы выходят из ядра и равномерно распределяются в цитоплазме. Установлено, что перемещение ненативных форм из ядра в цитоплазму может служить индикатором возникновения апоптоза на ранних стадиях.
4. Установлено, что полипептидные цепи, неспособные свернуться в нативную конформацию (химически модифицированные или мутантные), прочно связываются с шаперонином GroEL, блокируя тем самым шаперонин-зависимое сворачивание белков. На основании этих результатов высказана гипотеза о том, что блокирование шаперонов «неправильно» свернутыми белками, образующимися в результате химической модификации и окислительного стресса, может стимулировать агрегацию белков при различных нейродегенеративных заболеваниях.
5. Разработан новый метод получения поликлональных антител к различным ненативным формам глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, основанный на иммунизации животных нативным антигеном и последующей иммуноаффинной хроматографии на разных иммобилизованных формах белка.
6. Показано, что антитела, специфичные к денатурированной форме глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, блокируют сворачивание фермента и могут быть использованы для изучения процессов его денатурации и ренатурации.
7. Показано, что антитела, специфичные к неактивным тетрамерам глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, обладают способностью связываться с нативной дегидрогеназой и вызывать развивающиеся во времени дестабилизацию и инактивацию фермента. Инактивирующее воздействие антител в апоферменте распространяется только на одну субъединицу, непосредственно вовлеченную в связывание с антителом, а в холоферменте передается через субъединичные контакты, приводя практически к полной потере ферментативной активности. Обнаруженный механизм инактивирующего воздействия на белки антител, специфичных к ГАФД в неактивной конформации, создает предпосылки для получения принципиально нового типа антител, вызывающих конформационные изменения структуры белков-антигенов.
Список работ, опубликованных по теме
Работы, опубликованные в ведущих рецензируемых журналах, определенных ВАК РФ:
Плетень А.П., Учитель И.А., Мазо В.К., Никуличева С.И., Волкова Л.И., Шатерников В.А., Выделение ренина из почек человека//Вопросы медицинской химии.-1979.-№4.-С.441-444.
Исаева И.В., Ковалева С.В., Патрики Е.В., Сеничева Н.А., Плетень А.П., Прохоров Б.С., Плохой В.И. Физико-химические свойства и антигепариновая активность протаминов лососевых и осетровых рыб//Химико-фармацевтический журнал.-1989.- № 6.- С.686-691.
Даньшина П.В., Шмальгаузен Е.В., Арутюнов Д.Ю., Плетень А.П., Муронец В.И., Ускорение гликолиза нефосфорилирующей и окисленной фосфорилирующей глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназами// Биохимия.-2003.- Т.68, № 5.-С.725-733.
Arutyunova E.I., Danshina P.V., Domnina L.V., Pleten' A.P., Muronetz V.I., Oxidation of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase enhances its binding to nucleic acids//Biochem. Biophys. Res. Commun.- 2003.- Vol.307, N3.-P.547-552.
Schmalhausen E.V., Pleten A.P., Muronetz V.I. "Ascorbate-induced oxidation of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase"//Biochem. Biophys. Res. Commun.- 2003.-Vol.308, N3.-Р.492-496.
Arutyunova E.I., Arutyunov D.Y., Pleten A.P., Nagradova N.K., Muronetz V.I., Antibodies specific to modified glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase induce inactivation of the native enzyme and change its conformation//Biochim. Biophys. Acta.-2004.-Vol.1700, N1.-Р.35-41.
Арутюнова Е.И., Плетень А.П., Наградова Н.К., Муронец В.И., Антитела к неактивным конформациям глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы инактивируют апо- и холоформу фермента//Биохимия.- 2006.-т.71.-№6.-С.847-855.
Плетень А.П., О возможном влиянии алиментарных факторов на механизм развития нейродегенеративных заболеваний - болезни Альцгеймера и губчатой энцефалопатии у людей//Вопросы питания.-2007.-т.76.-№2.-С.39-44.
Плетень А.П., «Получение разных типов антител после одновременной иммунизации животных двумя антигенами»//Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2007.-т.143.-№6.-С.718-720.
Статьи, опубликованные в других изданиях:
Муронец В.И., Плетень А.П., Налетова И.Н., Шмальгаузен Е.В. Изменение структуры и термодинамических параметров шаперонина GroEL при его взаимодействии с ненативными формами белка//Известия национальной академии наук Беларуси, Серия химических наук. 2004, №2.-C.81
В.И. Муронец, А.П.Плетень. Нобелевская премия получена - загадки остались//Природа.- 2005.-№4.-С.44-47.
Muronetz V.I., Pleten A.P., Schmalhausen E.V., Polyakova O.V., Naletova I.N., Shalova I.N., Saso L.,. Amiloidoses and oxidative stress. International alumni seminar on «Biotechnology and Health»//Armenia.-Erevan,-2005.-Р.55-61.
Налетова И.Н., Шмальгаузен Е.В., Шалова И.Н., Плетень А.П., Цирюльников К., Эртль Т., Муронец В.И., Стимулирование агрегации белков нефункционирующим шаперонином GroEL//Биомедицинская химия.- 2006.-т.52.-№5.-С.518-524.
Муронец В.И., Плетень А.П.. Нобелевская премия получена - загадки остались. История открытия инфекционных прионов.//В сб. научно-популярных статей РФФИ под ред. В.И.Конова «Российская наука: мечта светла».- М.: Октопус - природа, 2006.- С.239-245.
Muronetz V.I., Pleten' A.P., Schmalhausen E.V., Asryants R.A., Naletova I.N., Shalova I.N., Saso L., Oxidized proteins block chaperones irreversibly (Role in the induction of amyloidoses)//Neurodegenerative Diseases.-2007.-4 (suppl. 1).-Р. 62.
Плетень А.П., Устойчивость к протеиназам различных типов амилоидных структур, формируемых из пептидов в-амилоида1-42//Известия национальной академии наук Беларуси, серия медицинских наук.-2008.-т.1.-С.43-47.
V.Muronetz, A.Pleten, E.Schmalhausen, I. Naletova, T.Haertle, Pathogenic protein nanostructures while neurodegenerative disorders: identification and new approaches for their destraction//Сб. материалов международной конференции «Биотехнология и здоровье-2» и семинара членов общества DAAD Армении.- Ереван, 2008.- С.76-82.
Материалы научных конференций
Yasykova M.Y., Arutyunov D.Y., Danshina P.V., Pleten A.P., Schmalhausen E.V., Muronetz V.I. Role of phosphorylating and non-phosphorylating glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase in an uncoupling of the process of oxidation and phosphorylation in glycolysis//Abstracts of the International conference "BIOCATALYSIS-2002.-fundamentals and applications".-Moscow.-2002.-Р.148-149.
Muronetz V.I., Polyakova O.V., Pleten' A.P., Roitel O., Branlant G. Misfolded forms of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase interact with GroEL and inhibit chaperonin-assisted folding// Abst. International Conference «Biocatalisis-2002. Fundamentals and applications».-Moscow.-2002.-Р.25.
Арутюнов Д.Ю., Шмальгаузен Е.В., Даныпина П.В., Языкова М. Ю., Плетень А.П., Муронец В.И. Роль глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназ в регуляции гликолиза//Труды Всероссийской конференции "Проблемы медицинской энзимологии. Современные технологии лабораторной диагностики на рубеже нового столетия" и Международного симпозиума "Пиридоксальфосфат-зависимые ферменты: структура, молекулярная патология и медицина//Москва.- 2002.-С.21-22.
Арутюнова Е.И., Полякова О.В., Плетень А.П., Муронец В.И. Получение и разделение антител при одновременной иммунизации двумя антигенами//Труды Всероссийской конференции "Проблемы медицинской энзимологии. Современные технологии лабораторной диагностики на рубеже нового столетия" и Международного симпозиума "Пиридоксальфосфат-зависимые ферменты: структура, молекулярная патология и медицина"//Москва.-2002.-С.22-23.
Плетень А.П., Шмальгаузен Е.В., Муронец В.И. Ферментативная система для тестирования антиоксидантов//Труды Всероссийской конференции "Проблемы медицинской энзимологии. Современные технологии лабораторной диагностики на рубеже нового столетия" и Международного симпозиума "Пиридоксальфосфат-зависимые ферменты: структура, молекулярная патология и медицина"//Москва.-2002.-С.172.
Муронец В.И., Шмальгаузен Е.В., Даныпина П.В., Арутюнов Д.Ю., Плетень А.П. Индукция разобщения окисления и фосфорилирования в гликолизе окислителями//Тезисы научных докладов III съезда Биохимического общества РАН. Санкт-Петербург.- 2002.-С.95-96.
Плетень А.П., Арутюнова Е.И., Домнина Л.В., Муронец В.И. Изменение внутриклеточной локализации глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы при перекисном и TNF-индуцированном апоптозе//Материалы международной конференции "Рецепция и внутриклеточная игнализация"//2003.-Пущино.-РАН.-С.108-109.
Муронец В.И., Шмальгаузен Е.В., Арутюнова Е.И., Плетень А.П. Перекисные соединения индуцируют разобщение окисления и фосфорилирования в гликолизе на стадии глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназной реакции//Материалы международной конференции "Рецепция и внутриклеточная сигнализация".-2003.-Пущино.-РАН.-С.260-261.
Arutyunova E.I., Pleten' A.P., Muronetz V.I. The influence of two types of polyclonal antibodies on the folding of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase. Аbstract Book//Conference for young scientists, PhD students and students on molecular biology and genetics.-2003.-Vol.1 (B-2).-P.142.
Naletova I.N., Pleten' A.P., Muronetz V.I. The influence of bacterial chaperonin GroEL on the folding of homologous olygomeric proteins. Аbstract Book//Conference for young scientists, PhD students and students on molecular biology and genetics.-2003.-Vol.1 (M-67).-P.108.
I.N. Naletova, I.N. Shalova, L.Saso, E.V. Schmalhausen, V.I. Muronetz, A.P. Pleten'. The role of oxidation of glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase in the induction of apoptosis and in formation of amiloid structures//Тезисы юбилейной конференции посвященной 70-летию В.П.Скулачева «Российская биоэнергетика: от молекул к клетке»//Москва.-МГУ.- 2005. с. 21-23.
Muronetz V.I., Polyakova O.V., Naletova I.N., Shalova I.N., Asryants R.A., Pleten A.P., Saso L., Izumrudov V.A., Schmalhausen E.V., Mechanisms of protein denaturation and design of new Inhibitors of protein aggregation for the treatment of condensation diseases. Abstracts of international conference «Fundamentals and Application» dedicated to 250th anniversary of Moscow State University. neurodegenerative diseases.//Conference Proceedings. International Conference. Biotechnology and Medicine//Moscow-2006.-P.194-195
Муронец В.И., Плетень А.П., Шмальгаузен Е.В., Асриянц Р.А., Шалова И.Н., Налетова И.Н., Сасо Л., Эртль Т. Окислительный стресс и амилоидозы.//Тезисы докладов II Международной конференции Химия, Структура и Функция.-Минск.-2006.- C.99.
Плетень А.П. Механизм действия кверцетина при профилактике болезни Альцгеймера//Сборник материалов XIV российского национального конгресса «Человек и лекарство», Москва,-2007.-C.507-508.
Плетень А.П. Шапероны и формирование устойчивых к протеазам амилоидных структур//Сборник материалов VI симпозиума «Химия протеолитических ферментов».-Москва.-2007.-C.17.
Плетень А.П. Устойчивость к протеиназам различных типов амилоидных структур, формируемых из пептидов бета-амилоида 1-42// Международная научная конференция Протеолиз, механизмы его регуляции и роль в физиологии и патологии клетки//-Беларусь.-Минск.-2007.-C.26-27.
Плетень А.П., Арутюнова Е.И., Получение антител, индуцирующих переход ферментов в неактивное конформационное состояние//IV съезд Российского общества биохимиков и молекулярных биологов, Новосибирск.-2008.- C.440.
Муронец В.И., Шмальгаузен Е.В., Эртль Т., Плетень А.П. О возможном влиянии пищевых добавок и продуктов питания на развитие нейродегенеративных заболеваний//Сборник материалов Научно-практической конференции «Пищевая и морская биотехнология. Проблемы и перспективы», Светлогорск.- 2008.- C.103 .
Размещено на Allbest.ru
Подобные документы
Природа фермента, его значение в практической деятельности человека. Методы культивирования продуцентов фермента. Приготовление и стерилизация питательных сред. Обработка культуральной жидкости, выделение, очистка и расфасовка препарата фермента.
курсовая работа [680,1 K], добавлен 13.06.2014Характеристика сущности ферментов, которые благодаря своим функциям обеспечивают быстрое протекание в организме огромного числа химических реакций. Особенности строения и функций фермента амилаза. Влияние ингибиторов и активаторов на активность амилазы.
курсовая работа [1,8 M], добавлен 12.01.2011Понятие об оксидазном типе окисления. Оксигеназный тип окисления. Роль микросомального окисления. Специфические превращения аминокислот в организме. Обезвреживание чужеродных веществ. Связывание в активном центре цитохрома. Восстановление железа в геме.
презентация [175,5 K], добавлен 10.03.2015История изучения ферментов, специфических белков, выполняющих роль биокатализаторов. Анализ химических реакций в биологических системах. Функциональные участки молекулы фермента. Аминокислотная последовательность в активном центре сериновых ферментов.
презентация [1,1 M], добавлен 21.01.2016Общая характеристика, классификация, строение и синтез белков. Гидролиз белков с разбавленными кислотами, цветные реакции на белки. Значение белков в приготовлении пищи и пищевых продуктов. Потребность и усвояемость организма человека в белке.
курсовая работа [29,7 K], добавлен 27.10.2010Разобщение дыхания и фосфорилирования, процесс ингибирования. Свободнорадикальное окисление. Процесс образования аденозинтрифосфорной кислоты в дыхательной цепи. Положения хемиосмотической теории Митчелла. Ферментативные и неферментативные антиоксиданты.
презентация [514,2 K], добавлен 09.12.2013Изучение источников, структуры и физико-химических свойств афлатоксинов, смертельно опасных микотоксинов, относящихся к классу поликетидов. Анализ их влияния на живой организм, взаимодействия с макромолекулами клетки, нуклеиновыми кислотами и белками.
реферат [43,1 K], добавлен 20.12.2011- Изучение кинетики реакций окисления 3,3’,5,5’-тетраметилбензидина, проводимых в тонком слое сорбента
Использование 3,3',5,5'-тетраметилбензидина в аналитической химии. Методика эксперимента и необходимые исходные вещества, посуда, оборудование. Расчет скорости реакций окисления ТМБ методом тангенсов на начальном участке кривых после периода индукции.
курсовая работа [264,0 K], добавлен 04.12.2011 Общие пути обмена аминокислот. Значение и функции белков в организме. Нормы белка и его биологическая ценность. Источники и пути использования аминокислот. Азотистый баланс. Панкреатический сок. Переваривание сложных белков. Понятие трансаминирования.
презентация [6,6 M], добавлен 05.10.2011Роль в живой природе. Состав и свойства белков. Классификация белков. Определение строения белков. Определение наличия белка. Идентификация белков и полипептидов. Синтез пептидов. Искусственное получение белка. Аминокислоты.
реферат [16,2 K], добавлен 01.12.2006
