Газовая хроматография при определении чистоты и подлинности лекарственных препаратов

Размещено на http://www.allbest.ru/

Газовая хроматография при определении чистоты и подлинности лекарственных препаратов

Теоретические предпосылки: Наиболее часто используемыми методами качественного анализа, применяемыми для идентификации лекарственных веществ, являются метод веществ-свидетелей и метод относительных удерживаний.

Метод веществ-свидетелей заключается в том, что непосредственно после анализа исследуемого образца в идентичных условиях проводят хроматографирование веществ, присутствие которых в исследуемой пробе вероятно. Совпадение времен удерживания любого из компонентов анализируемой пробы и вещества-свидетеля может служить доказательством идентичности обоих веществ. Можно ввести вещество-свидетель прямо в анализируемый образец. В этом случае критерием идентичности служит увеличение соответствующего пика на хроматограмме. Поскольку соединения различной структуры могут иметь совпадающие времена удерживания (удерживаемые объемы), для большей достоверности проводимой идентификации хроматограммы анализируемого образца и веществ - свидетелей должны быть сняты минимум на двух колонках с неподвижными жидкими фазами, отличающимися по полярности.

Для идентификации веществ по методу относительных удерживаний проводят анализ образца в условиях, указанных в конкретной методике, причем предварительно к пробе прибавляют определенное количество указанного в методике вещества сравнения. Относительное удерживание (ч) определяется по формуле:

где t - время газохроматографического удерживания R анализируемого вещества; t - время удерживания веществ сравнения;

Rср

t - время удерживания несорбирующегося вещества [1].

Газохроматографические характеристики:

1. Время удерживания на колонке характерно для каждого из разделяемых веществ, поэтому служит качественной характеристикой вещества.

Время удерживания (абсолютное) - это отрезок времени, который проходит с момента ввода вещества в колонку до появления максимума пика вещества на хроматограмме. На хроматограмме оно отображается как расстояние от точки ввода пробы до выхода максимума пика вещества.

Чаще приходится использовать другие характеристики.

Исправленное время удерживания рассчитывается как разность абсолютного времени удерживания вещества и времени удерживания несорбируемого компонента:

tиспр.=tабс.-tн.к.

Время удерживания может меняться в зависимости от условий хроматографирования, поэтому более надежной величиной является относительное время удерживания, которое рассчитывается как отношение абсолютного времени удерживания искомого вещества к времени удерживания вещества-метчика (стандарта):

tотн. = tабс. / tст.

Относительное время удерживания является величиной более постоянной, так как на него меньше влияют условия проведения хроматографического процесса.

2. Удерживаемый объем также является качественной характеристикой анализируемого вещества.

Удерживаемый объем V - это объем газа-носителя, необходимый для вымывания всего количества вещества из колонки, который численно равен произведению скорости газа-носителя U на время удерживания

t: V=U*t.

Скорость газа измеряется в мл/мин, время удерживания - в минутах.

В зависимости от того, какое используетс для расчета время удерживания - абсолютное или исправленное - получаем аюсолютный или исправленный (приведенный) удерживаемый объем.

Удерживаемый объем, как абсолютный, так и исправленный, может меняться с изменением хроматографических условий, поэтому более постоянным является относительный удерживаемый объем, который рассчитывается как отношение абсолютного (или исправленного) объема к удерживаемому объему вещества-стандарта:

лекарственный идентификация примесь хроматография

Vотн. = Vабс.(испр.) /Vст.

Качественный анализ проводят, сравнивая время удерживания искомых веществ с временами удерживания стандартных веществ (эталонов). При совпадении этих параметров делают вывод о возможной идентичности этих веществ. Хроматографирование ведут в одинаковых условиях для стандарта и искомого вещества, используя 2-3 колонки различной полярности, что повышает надежность метода. Можно добавить предполагаемое (искомое) вещество в анализируемую смесь, и если при этом произойдет увеличение высоты и площади пика на хроматограмме (но не изменение времени удерживания), то можно предположить их идентичность[3].

Анализ веществ:

1. Согласно Фармакопее США, метод газовой хроматографии может быть использован при анализе Лозартана Калий на предельное содержание циклогексана и изопропилового спирта.

Стандартный раствор - готовят раствор, содержащий точные концентрации циклогексана (около 0,05 мг/мл) в диметилформамиде.

Испытуемый раствор - помещают 500 мг препарата в мерную колбу вместимостью10 мл, растворяют в 5 мл диметилформамида на мешалке Vortex, доводят диметилформамидом до метки и перемешивают.

Хроматографическая система - газовых хроматограф, оснащенный пламенно-ионизационным детектором, с колонкой 0,53 мм х 30 м, заполненный сорбентом G27 с толщиной пленки 1,5 мкм. Газ-носитель - гелий, скорость подачи - около 6мл/мин. Хроматограф программируют следующим образом. Вначале температура колонки поддерживается на уровне 50 С в течение 5 мин, затем повышается со скоростью 30 град/мин до 200С и поддерживается на этом уровне в течение 5 мин. Температура инжектора и детектора - 220С. Хроматографируют стандартный раствор и регистрируют параметры пиков, как указано в методике: время удерживания около 2 мин для изопропилового спирта и около 4 мин для циклогексана; разрешение (R) пиков циклогексана и изопропилового спирта - не менее 4,0Ж относительное стандартное отклонение - не более 8,0%.

Методика: Вводят в газовый хроматограф равные объемы (около 1 мкл) испытуемого раствора и стандартного раствора, регистрируют хроматограммы, измеряют площади основных пиков. Рассчитывают процентное содержание циклогексана и изопропилового спирта по формуле:

100 х (C/I) х (ru/rs)

Где: С - концентрация циклогексана и изопропилового спирта в стандартном растворе, мг/мл; I - концентрация лозартана в испытуемом растворе, мг/мл; ru, rs - площади пиков циклогексана и изопропилового спирта на хроматограммах испытуемого раствора и стандартного раствора соответственно: не более 0,1% циклогексана и не более 0,2% изопропилового спирта.

Хроматографическая чистота:

Раствор А - готовят 0,1% раствор фосфорной кислоты в воде.

Раствор В - Ацетонитрил.

Подвижная фаза - используют смеси Раствора А и Раствора В в соотношениях, указанных в разделе «Хроматографическая система». Производят корректировку при необходимости.

Раствор для проверки пригодности систему - растворяют точные навески Лозартана калия СО и трифенилметанола в метаноле и количественно разбавляют до получения расвора, содержащего 0,3 мг/мл и 0,002 мг/мл веществ соответственно.

Испытуемый раствор - помещают точную навеску (около 30 мг) препарата в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в метаноле, доводят до метки тем же растворителем и перемешивают.

Хроматографическая система - жидкостной хроматограф, оснащенный УФ-детектором (рабочая длина волны - 220 нм), с колонкой 4,0 мм х 25см, заполненной сорбентом L1. Скорость потока элюента - около 1 мл/мин. Прибор программируют следующим образом:

Хроматографируют раствор для проверки пригодности системы и регистрируют параметры пиков, как указано в методике: относительное время удерживания - около 1,0 для лозартана и 1,9 для трифенилметанола; фактор ассиметрии пика лозартана - не более 1,6. Время удерживания трифенилметанола - около20 мин.

Методика: вводят в хроматограф около 10 мкл испытуемого раствора, регистрируют хроматограммы, измеряют площадь всех пиков. Рассчитывают процентное содержание каждой примеси в препарате по формуле:

100 х (r/rs)

где: r - площадь пика примеси; rs - суммарная площадь всех пиков: не более 0,2% индивидуальной примеси; не более 0,5% всех примесей.

2. Монооксид углерода (Угарный газ). Метод газовой хроматографии используется как при определении подлинности, так и при определении чистоты этого вещества. [5]

Опытный образец: Угарный газ. Получают молекулярный кислород, затем вводят в реакцию химически чистый активированный уголь, при температуре около 950 С, в течение 1 часа. Полученный газ очищают пропусканием через диоксид углерода, пропитанного, например, натриевой известью.

Эталонный газ: Азот смеси R.

Колонка:

Размеры: длина - 1,8 м; диаметр - 6,3 мм; радиус - 3,2 мм.

Неподвижная фаза: газохроматографическая колонка R.

Газ-носитель: гелий для хроматографии R.

Скорость потока: 65 мл/мин.

Температура: колонки - 40 С; инжектора -40 С; теплопроводного детектора - 70 С.

Время работы - 10 минут.

Время удерживания - кислород, азот и монооксид углерода элюируются во внутренней колонке около 0,4 мин; диоксид углерода элуируется 0,8 мин; кислород элюируется в наружной колонке 2,1 мин; монооксид углерода элюируется в наружной колонке около 6, 2 мин.

Эталонный газ: - на хроматограмме наблюдается 5 четко разделенных основных пиков.

- Расстояние: минимум 1,5 между пиками элюирования кислорода от внутренней колонки и от наружной.

Пределы: смотрят на хроматограмме, полученной радиоактивным детектором и рассчитывают процентное содержание немолекулярного кислорода (смотрят пики).

- Угарный газ: минимум 97 % от общего количества.

- Первый пик не учитывать, так как он соответствует компоненту, выходящему во время элюирования от внутренней колонны.

3. Аналогично ситуация обстоит с кислородом, газовая хроматография применяется как в анализе подлинности кислорода, так и в анализе его чистоты [5].

Опытный образец: Получают молекулярный кислород, добавляя кислород в носитель в количестве 0,2 до 1,0%. После чего газ, как правило, проходит через активированный уголь и поглотитель диоксида углерода, такой как: сода.

Эталонный газ: Азот смеси R.

Колонка:

Размеры: длина - 1,8 м; диаметр - 6,3 мм; радиус - 3,2 мм.

Неподвижная фаза: газохроматографическая колонка R.

Газ-носитель: гелий для хроматографии R.

Скорость потока: 65 мл/мин.

Температура: колонки - 40 С; инжектора -40 С; теплопроводного детектора - 70 С.

Время работы - 10 минут.

Время удерживания - кислород, азот и монооксид углерода элюируются во внутренней колонке около 0,4 мин; диоксид углерода элуируется 0,8 мин; кислород элюируется в наружной колонке 2,1 мин; азот элуируется 3,1 мин; монооксид углерода элюируется в наружной колонке около 6, 2 мин.

Эталонный газ: - на хроматограмме наблюдается 5 четко разделенных основных пиков.

- Расстояние: минимум 1,5 между пиками элюирования кислорода от внутренней колонки и от наружной.

Пределы: смотрят на хроматограмме, полученной радиоактивным детектором и рассчитывают процентное содержание немолекулярного кислорода (смотрят пики).

- Молекулярный кислород: минимум 97 % от общего количества.

- Первый пик не учитывать, так как он соответствует компоненту, выходящему во время элюирования от внутренней колонны.

4. Газовая хроматография может быть использована при определении примесей в анализе Камфоры рацемической [5].

Методика: расворяют 50 мг анализируемого вещества в гексане R, затем разбавляют до 50,0 мл тем же растворителем.

Эталонный раствор (А): растворяют 50 мг анализируемого вещества и 50 мг борнилацетата R в гексане R разбавляют до 50,0 мл тем же растворителем.

Эталонный раствор (Б): разводят 1,0 мл исследуемого раствора в 200, 0 мл гексана R.

Размеры колонки: длина - 2 м; диаметр - 2 мм.

Газ-носитель: азот для хроматографии R.

Скорость потока: 30 мл/мин.

Температура: колонка - 130 С; инжектор и детектор - 200 С.

Детектор - плазменно-ионизационный.

Время работы: 3 раза время удерживания камфоры.

- Разрешение: минимум 1,5 между пиками камфоры и этилацетата борного на хроматограмме с раствором (А).

- Сигнал: не менее 5 для главного пика на хроматограмме с раствором (Б).

- Пределы: отдельные примеси - не более 2 % площади основного пика; общие примеси - не более 4 % площади основного пика.

Размещено на Allbest.ru