Исследование регионального рынка современных диагностикумов – тестов для определения беременности

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Курсовая работа

Исследование регионального рынка современных диагностикумов - тестов для определения беременности

Введение

В настоящее время продолжается рост объемов производства и продаж лекарственных средств с изученной фармакологической активностью, эффективностью и безопасностью. Известно, что многие препараты обладают определенными побочными эффектами и противопоказаниями, которые ограничивают их применение у ряда пациентов. Именно для этого необходимо контролировать чистоту и присутствие примесей в лекарственных формах. Присутствие примесей в лекарственных веществах снижает не только их фармакологическое действие, но и часто делает их опасными для здоровья человека.

Фармакопейные статьи на лекарственные формы включает в себя те или иные методы контроля чистоты наряду с методами идентификации и методами количественного определения.

Объектом данного исследования была выбрана лекарственная форма пирацетама. Препарат увеличивает энергетический потенциал организма за счет ускорения оборота АТФ, повышения активности аденилатциклазы и ингибирования нуклеотид фосфатазы. Улучшение энергетических процессов под влиянием пирацетама приводит к повышению устойчивости тканей мозга при гипоксии и токсических воздействиях.
Пирацетам является мало токсичным препаратом, но, несмотря на это, необходимо контролировать количественное содержание примесей в нем. Одним из методов определения примесей в лекарственных формах пирацетама может служить метод тонкослойной хроматографии.
По нашим данным, на сегодняшний день нет разработанных методик по определению состава пирацетама и его составляющих методом ТСХ. Этот метод позволяют надежно оценивать качество лекарственных веществ и пригодность их для применения в медицине. Поэтому разработка и оптимизация методики качественного и количественного определения пирацетама и его препаратов является актуальной задачей.

Цель данной работы - разработать методику качественного определения пирацетама методом тонкослойной хроматографии.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Провести анализ литературных данных о существовании методик качественного определения производных пиррола;

2. Изучить растворимость пирацетама в различных растворителях;

3. Подобрать оптимальную подвижную фазу для анализа пирацетама методом ТСХ;

4. Апробировать разработанную методику на лекарственные препараты, содержащие пирацетам.

1. Литературный обзор

1.1 Анализ производных пирролидина

Пиррол - это пятичленный гетероцикл с одним гетероатомом азота, обладает слабыми основными свойствами.

Рис. 1.1. Пиррол

Применяемые в медицине производные пиррола представляют собой соединения пирролидина и 2-оксопиррилодина (2-пирролидона). Пирролидин - это гидрированный пиррол.

пирролидин 2-пирролидон

Рис. 1.2. Структурные формулы производных пиррола

Структуру пиррола предложил в 1870 г. Байер, а впервые был открыт F. Рунге в 1834 в каменно-угольной смоле основываясь на его окислении хромовой кислотой в малеинимид и образовании его при перегонке сукцинимида с цинковой пылью.

Строение и свойства пиррола

Электронное строение молекулы пиррола объясняет его свойства как слабой кислоты и ароматического соединения.



Рис. 1.3. Электронное строение пиррола

пирацетам органический медицина хроматография

Атомы углерода и азота находятся в состоянии sp2-гибридизации. у-Связи C-C, C-H и C-N образованы гибридными орбиталями. Цикл имеет плоское строение. На негибридной р-орбитали азота находится неподеленная пара электронов, которые вступают в сопряжение с четырьмя р-электронами атомов углерода. Таким образом, в циклической системе сопряжения находится 6 электронов, что определяет ароматические свойства пиррола.

Пиррол значительно активнее бензола в реакциях электрофильного замещения, т.к. Атом азота, предоставляя в систему сопряжения два электрона (+М-эффект), повышает электронную плотность в цикле.

Устойчивость пиррола как ароматической структуры значительно меньше, чем бензола. Под действием сильных минеральных кислот электронная пара азота все же используется для солеобразования, и свойства пиррола резко меняются: ароматичность исчезает (в системе сопряжения остается всего 4 электрона). При этом проявляются свойства диена, например, способность к полимеризации. [1]

1.2 Производные 2-пирролидона

В результате поиска структурных аналогов г-аминомасляной кислоты (ГАМК), обладающих психотропным действием, получен пирацетам (ноотропил). Он представляет собой циклический аналог ГАМК - 2 - (2-Оксо-1-пирролидинил) ацетамид.



Рис. 1.4. Структурная формула пирацетама

Физико-химические свойства:

Пирацетам это белый или почти белый кристаллический порошок. Легко растворим в воде, растворим в этаноле, мало растворим в хлороформе, практически не растворим в эфире. рН водных растворов 5,0 - 7,0.

Подлинность пирацетама устанавливают с помощью ИК-спектра, снятого после прессования в таблетках с калия бромидом в области 4000-400 см ^-1. Кроме того, подлинность подтверждают по отсутствию выраженных максимумов поглощения в УФ-спектре 1%-ного водного раствора в интервале 230-350 нм [2,3].

Для идентификации и фотометрического определения пирацетама в лекарственных формах используют цветную реакцию, основанную на образовании индофенола.

Посторонние примеси (не более 0,5%) определяют методом ТСХ на пластинке со слоем силикагеля вместе со свидетелем (растворы в метаноле). Хроматографируют восходящим методом в камере со смесью растворителей хлороформ-метанол-раствор аммиака концентрированный (70:30:3). Проявляют в камере для хлорирования смесью 1,5%-ного раствора перманганата калия и хлороводородной кислоты концентрированной (1:1).

Оценка чистоты: Водный раствор пирацетама (20%) должен быть прозрачным и бесцветным.

Родственные примеси определяют методом жидкостной хроматографии. К родственным примесям относятся соединения следующей структуры:

, где

А. R = Н: пирродидин-2-он

В. R = СН₂-СО-О-СН₃: метил - (2-оксопирролидин-1-ил) ацетат

С. R = СН₂-СО-О-С₂Н₅: этил - (2-оксопирролидин-1-ил) ацетат

D. R = СН₂-СО₂Н: (2-оксопирролидин-1-ил) уксусная кислота

Допустимыми примесями в фармацевтической субстанции являются: ионы тяжелых металлов, сульфатная зола, летучие соединения[3].

1.3 Использование пирацетама в медицине

Пирацетам является родоначальником группы ноотропных лекарственных веществ.

Пирацетам хорошо всасывается при приеме внутрь. При введении в организм проникает в разные органы и ткани, в том числе в ткани мозга. Практически не метаболизируется. Выводится почками. Пирацетам оказывает положительное влияние на обменные процессы и кровообращение мозга. Стимулирует окислительно-восстановительные процессы, усиливает утилизацию глюкозы, улучшает регионарный кровоток в ишемизированных участках мозга. Препарат увеличивает энергетический потенциал организма за счет ускорения оборота АТФ, повышения активности аденилатциклазы и ингибирования нуклеотид фосфатазы. Улучшение энергетических процессов под влиянием пирацетама приводит к повышению устойчивости тканей мозга при гипоксии и токсических воздействиях. Препарат весьма мало токсичен (в острых опытах на животных летальная доза превышает 10 г./кг при введении в вену). Лечебные свойства пирацетама определяются его способностью улучшать интегративную деятельность мозга, способствовать консолидации памяти, улучшать процессы обучения, восстанавливать и стабилизировать нарушенные функции мозга. Применяют пирацетам у взрослых и детей при разных заболеваниях нервной системы, особенно связанных с сосудистыми нарушениями и патологией обменных процессов мозга, в том числе у людей пожилого и старческого возраста.

Пирацетам можно также применять в качестве вспомогательного средства при лечении больных с депрессивными состояниями, резистентных к антидепрессантам, а также при плохой переносимости нейролептиков и других психотропных средств, с целью устранения или предотвращения вызываемых ими соматовегетативных, неврологических и психических осложнений [4,5].

В настоящее время синтезирован целый ряд его непосредственных аналогов и гомологов (этирацетам, оксирацетам и др.), сходных с ним по действию, однако пирацетам продолжает оставаться основным препаратом этой группы. Предложен ряд комбинированных препаратов, основой которых является пирацетам: фезам (Fezam, Болгария), содержит пирацетам с циннаризином; ороцетам (Orocetam) - пирацетам с оротовой кислотой; диапирам (Diapiram) - пирацетам с диазепамом (сибазоном) и др.

1.4 Метод тонкослойной хроматографии

Хроматографический процесс в тонком слое сорбента, нанесенном на инертную твердую подложку (стеклянную, металлическую или полимерную), называется тонкослойной хроматографией или хроматографией в тонком слое сорбента (ТСХ).

Разделение может осуществляться по нескольким механизмам: адсорбционному, распределительному, ион-парному, ионообменному, эксклюзионному (гель-проникающему), хиральному или какой-либо их комбинации.

Метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) основан на различии скоростей перемещения компонентов анализируемой смеси в плоском слое сорбента при движении растворителя (элюента). Растворитель перемещается под действие капиллярных или гравитационных сил. В ТСХ слой сорбента наносят на подложку (пластинку, пленку) тонким слоем. В качестве сорбента могут быть использованы: оксид алюминия, силикагель, целлюлоза и др. Пластинки для хроматографии производятся промышленным способом.

Преимущество ТСХ заключается в том, что при небольших затратах можно быстро и эффективно разделять различные смеси.

Хроматографическое разделение в плоскостных видах хроматографии, как и в колонке, обусловлено переносом компонентов подвижной фазы вдоль слоя неподвижной фазы с различными скоростями в соответствии с коэффициентами распределения разделяемых компонентов. Разделяемые компоненты на пластинке или на полоске бумаги образуют отдельные зоны (пятна), положение которых на хроматограмме характеризуется величинами R_f - относительной скоростью перемещения компонентов в тонком слое или по бумажной полоске. В планарной хроматографии аналогом времени удерживания является фактор удерживания:

R_f = a/b,

где: a - расстояние от точки нанесения пробы до центра пятна;

b - расстояние от линии старта до линии фронта элюента.

На экспериментально определяемые значения R_f заметно влияют условия хроматографирования. Оценкой хроматографической подвижности, менее чувствительной к влиянию отклонений в условиях проведения эксперимента, является величина R_s, представляющая собой отношение величины R_f одного вещества к величине R_f другого, принятого за стандарт. Величины R_f и R_s используют для идентификации веществ. Обычно выбор стандарта осуществляется так, чтобы значение R_s анализируемого вещества было в пределах от 0,5 до 2,0. Схема определения этих величин приведена на рис. 1.5. [5,6]

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис. 1.5. Схема определения значений R_f и R_s

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

- место нанесения образца на линию старта

Получение и анализ плоскостных хроматограмм

Хроматограммой называют последовательность пятен, зон или пиков, соответствующих компонентам исходной смеси после их хроматографического разделения.

Качественный анализ:

Если на хроматограмме образуются окрашенные зоны, то проводят визуальное наблюдение. Невидимые хроматограммы проявляют соответствующими реагентами, как правило, групповыми. По характерной окраске образующихся цветных зон судят о составе анализируемой пробы. Для обнаружения компонентов используют также метод основанный на измерении величины R_F для стандартного и исследуемого растворов в одной камере, на одинаковых полосках бумаги или на одной и той же полоске. После проявления общих хроматограмм определяют R_F иследуемого и стандартного растворов. Сопоставляя их, делают заключение о наличии в исследуемом растворе тех или иных компонентов.

На полоске хроматографической бумаги или на тонком слое сорбента проводят острым карандашом стартовую линию на расстоянии 1 см от нижнего края бумаги (пластинки). Пробу наносят микрошприцом на линию старта. Диаметр пятна не должен превышать 2-3 мм; чем меньше пятно, тем лучше разделение. В ТСХ используют восходящий способ получения хроматограмм. Для этого применяют стеклянные, металлические или пластмассовые пластинки, покрытые тонким слоем сорбента (неподвижная фаза) обычно толщиной 100-300 мкм. Исследуемое вещество наносят микропипеткой на стартовую линию и помещают пластинку в камеру, содержащую растворители (подвижная фаза) для разделения компонентов.
Хроматографирование в ТСХ продолжают до тех пор, пока растворитель не пройдет от линии старта (? 10 см) до линии финиша. После этого хроматограмму вынимают из камеры и подсушивают на воздухе. Если образуются невидимые зоны хроматограммы проявляют.

Количественный анализ:

Количественный анализ осуществляют непосредственно на хроматограмме (на слое сорбента или на бумаге) или анализируемое вещество (пятно) вымывают из слоя сорбента (с бумажной полоски) после вырезания зоны, и полученный раствор анализируют каким-либо методом.
Непосредственно на хроматограммах количественный анализ можно осуществлять по размеру пятна (полуколичественное определение), спектрофотометрическим методом по спектрам поглощения (фотоденсиметрия) и по спектрам отражения, а также флуориметрическим, рентгенофлуорисцентным и радиометрическим методами. Определение компонентов после смывания можно выполнить, например, спектрофотометрическим, флуориметрическим, атомно-абсорбционным методами. Предел обнаружения дается в виде количества, приходящегося на 1 г сорбента, но лучше всего в виде концентрации в анализируемой пробе. Относительные стандартные отклонения при использовании спектрофотометрических методов анализа не превышают 1%. В настоящее время плоскостная хроматография, главным образом ТСХ, интенсивно развивается [7,8].

Хроматографические камеры

Используют хроматографические камеры для вертикального или горизонтального элюирования с герметичными крышками. Камеры для горизонтального элюирования снабжены также устройствами для подачи элюента на пластинку. Перед проведением анализа обычно внутренние стенки камеры обкладывают фильтровальной бумагой, смоченной подвижной фазой. Для вертикального элюирования применяют камеры с перегородкой в центре дна.

Использование камеры для горизонтального элюирования позволяет осуществлять одновременное элюирование с противоположных сторон пластинки, что увеличивает производительность анализа в два раза по сравнению с использованием камеры для вертикального элюирования. при этом также уменьшается расход подвижной фазы приблизительно в 10 раз. В горизонтальной камере движение подвижной фазы по пластинке происходит только за счет капиллярных сил, вклад гравитации при этом отсутствует, что повышает эффективность разделения по сравнению с камерами для вертикального элюирования.

Подвижные фазы (ПФ)

Подвижные фазы (элюенты) должны быть предпочтительно малотоксичными, содержать минимум компонентов, не вступать в химические реакции ни с сорбентом (НФ, неподвижной фазой), ни с компонентами разделяемой смеси. ПФ должны также достаточно быстро испаряться с поверхности хроматограмм после элюирования.

Для подавления диссоциации полярных молекул компонентов разделяемой смеси к ПФ добавляют вещества кислого или основного характера (модификаторы).

Способы элюирования

Используют следующие способы элюирования: восходящее элюирование (одно- и многоступенчатое, одномерное и двумерное - с поворотом пластинки на 90 или 180) и горизонтальное.

Восходящая хроматография

Если не указано иначе в частной фармакопейной статье, пластинку с нанесенными пробами помещают вертикально в камеру, предварительно насыщенную парами ПФ в течение 1 ч при 20-25°С. уровень ПФ должен быть расположен ниже линии старта. Камеру закрывают и проводят процесс при 20-25°С в защищенном от света месте. После прохождения фронта ПФ расстояния, указанного в частной фармакопейной статье, пластинку вынимают из камеры, сушат и проявляют в предписанных условиях.

При проведении двумерной хроматографии пластинку высушивают после хроматографирования в первом направлении и хроматографируют в направлении, перпендикулярном первому.

Горизонтальная хроматография

Пластинку с нанесенными пробами помещают в камеру и направляют поток ПФ из лотка в камеру согласно инструкции к прибору для горизонтального элюирования. Процесс проводят при 20-25°С (если это указано в частной фармакопейной статье, одновременно с противоположных сторон пластинки). Когда ПФ пройдет расстояние, указанное в частной фармакопейной статье, пластинку вынимают, сушат и проявляют в предписанных условиях.

Двумерную хроматографию выполняют как указано в разделе «Восходящая хроматография».

Способы обнаружения

Обнаружение (детектирование) хроматографических зон после проведения качественной и полуколичественной ТСХ осуществляют следующими способами:

- наблюдением под УФ-светом;

- опрыскиванием растворами обнаруживающих реагентов;

- выдерживанием в парах обнаруживающего реагента;

- погружением в растворы обнаруживающих реагентов в специальных камерах [9,10].

2. Экспериментальная часть

Объектами исследований являлись субстанция и лекарственные формы пирацетама: капсулы Пирацетама (производства «Северная звезда») и капсулы Фезама (производства Actavis).

Оборудование: субстанция пирацетама, аналитические весы, градуированная пипетка на 1 мл и 10 мл, мерная колба на 50 мл, шпатель, вода, диоксан, ацетон, четыреххлористый углерод, 96% этиловый спирт, 0,1М раствор натрия гидроксида, водный раствор аммиака, сухой порошок нингидрина, пробирки с притертыми пробками, хроматографические пластинки, хроматографическая камера, пульверизатор для опрыскивания, градуированные пипетки на 1, 2, 5 и 10 мл, микрошприц, 5% щелочной раствор пирацетама, 1% спиртовой раствор нингидрина, фильтровальная бумага.

2.1 Определение растворимости субстанции пирацетама в органических растворителях

Для определения растворимости субстанции пирацетама мы использовали фармакопейную таблицу растворимости веществ. Нами было проведено растворение пирацетама в выбранных растворителях [10].

1. 0,1 г субстанции пирацетама помещали в мерную колбу на 50 мл, затем по мере растворимости градуированной пипеткой отмеривали 1 мл, 3 мл и 10 мл диоксана.

2. 0,1 г субстанции пирацетама помещали в мерную колбу на 50 мл, затем по мере растворимости градуированной пипеткой отмеривали 1 мл, 3 мл, 10 мл, 20 мл ацетона.

3. 0,1 г субстанции пирацетама помещали в мерную колбу на 50 мл, затем по мере растворимости градуированной пипеткой отмеривали 1 мл, 3 мл, 10 мл, 20 мл четыреххлористого углерода.

В ходе работы было выявлено, что пирацетам умеренно растворим в диоксане и мало растворим в ацетоне и четыреххлористом углероде.

Таблица №1. Растворимость субстанции пирацетама

Степень растворения 0,1 г вещества	Объем растворителя	Растворимость субстанции пирацетама в растворителе
Легко растворим	0,1-1 мл	Вода, NaOH
Растворим	1-3 мл	Этанол
Умеренно растворим	3-10 мл	Диоксан
Мало растворим	10-100 мл	Ацетон, четрыххлористый углерод, хлороформ

2.2 Приготовление 5% щелочного и спиртового растворов пирацетама

Для приготовления 5% щелочного раствора пирацетама мы отвешивали на аналитических весах 2,5 г субстанции пирацетама, переносили в колбу на 50 мл и доводили 0,1 М раствором натрия гидроксида до метки. Перемешивали до полного растворения.

Для приготовления 5% спиртового раствора пирацетама мы отвешивали на аналитических весах 2,5 г субстанции пирацетама, переносили в колбу на 50 мл и доводили 96% этанолом до метки. Перемешивали до полного растворения.

Приготовление 0,1 М NaOH:

8,0 натрия гидроксида, отвешенного на аналитических весах, растворяли в мерной колбе на 1000 мл водой, свободной от углерода диоксида[10].

2.3 Приготовление спиртового и щелочного растворов нингидрина

1. Приготовление 0,02% спиртового раствора нингидрина: на аналитических весах отвешивали 0,1 г нингидрина, помещали в колбу на 50 мл и доводили 96% этанолом до метки. Тщательно перемешивали до полного растворения.

2. Приготовление 0,02% щелочного нингидрина: на аналитических весах отвешивали 0,1 г нингидрина, помещали в колбу на 50 мл и доводили до метки 0,1 М раствором натрия гидроксида. Тщательно перемешивали до полного растворения.

3. Приготовление 1% спиртового раствора нингидрина: на аналитических весах отвешивали 0,5 г нингидрина, помещали в колбу на 50 мл и доводили до метки 96% этанолом. Тщательно перемешивали до полного растворения.

4. Приготовление 1% щелочного раствора нингидрина: на аналитических весах отвешивали 0,5 г нингидрина, помещали в колбу на 50 мл и доводили до метки 0,1 М раствором натрия гидроксида. Тщательно перемешивали до полного растворения.

2.4 Разработка методики определения подлинности пирацетама с использованием цветных реакций

Химические методы могут применяться для качественного и количественного анализа лекарственных средств.

Для определения подлинности пирацетама нами были проведены возможные групповые химических реакций, такие как, реакция идентификации с раствором натрия гидроксида, гидроксамовая реакция на амидную связь пептидных производных и нингидриновая проба на аминогруппу. Опыты были проведены с целью подбора оптимальной качественной реакции, которая была бы устойчива во времени, максимально чувствительна, и обладала характерной окраской.

Реакция идентификации:

0.05 г. препарата нагревали с 1 мл раствора гидроксида натрия, выделялся аммиак, обнаруживаемый по запаху и посинению красной лакмусовой бумаги.

Гидроксамовая реакция:

К 4-5 каплям 1% раствора пирацетама добавляли 0,5 мл щелочного раствора гидроксиламина и 3 капли раствора хлорида железа (III), перемешивали, через 1-2 минуты добавляли 10 капель разведенной хлороводородной кислоты, появлялось фиолетово-красное окрашивание.

На аминогруппу - нингидриновая проба:

К 2 мл 1% раствора пирацетама добавляли 0,5 мл спиртового раствора нингидрина. Нагревали в пламени горелки, при этом происходило интенсивное выделение аммиака. Спустя 3-5 минут появлялось красное окрашивание.

Приготовление щелочного раствора гидроксиламина:

На аналитических весах отвешивали 5,0 г гидроксиламина гидрохлорида, помещали в колбу на 50 мл и доводили 0,1М раствором натрия гидроксида до метки. Тщательно перемешивали до полного растворения.

Определение взаимодействия раствора пирацетама с раствором нингидрина

Реакция основана на взаимодействии пирацетама и нингидрина при нагревании с непосредственным выделением аммиака, который можно обнаружить по посинению лакмусовой бумажки. При положительной реакции взаимодействия раствор пирацетама должен приобрести фиолетовый цвет. В результате исследования нами был выбран раствор нингидрина, как реагент, для обработки при реакции идентификации пирацетама методом ТСХ.

Таблица №2. Взаимодействие раствора пирацетама с раствором нингидрина

№ опыта	Взаимодействующие компоненты	Эффект реакции
1	5% щелочной раствор пирацетама + 0,02% спиртовой раствор нингидрина	-
2	5% щелочной раствор пирацетама + 0,02% щелочной раствор нингидрина	-
3	5% щелочной раствор пирацетама + 1% спиртовой раствор нингидрина	+
4	5% спиртовой раствор пирацетама + 1% спиртовой раствор нингидрина	-

Исходя из полученных результатов, нами была выбрана рабочая концентрация щелочного раствора пирацетама - 5% и спиртового раствора нингидрина - 1%.

2.5 Подбор подвижной фазы

Для подбора оптимальной подвижной фазы были проведены скрининговые исследования с использованием следующих растворителей: вода, хлороформ, этанол (96%), водный раствор аммиака, ледяная уксусная кислота, ацетон, раствор четыреххлористого углерода, изопропанол, н-бутанол в различных соотношениях (табл. 3). Использовали пластину Sorbfil ПТСХ-АФ-А 10x10 см на алюминиевой подложке.

На пластинке острым карандашом проводили стартовую линию на расстоянии 1 см от нижнего и верхнего краев пластинки. На линию старта микрошприцом наносили 5 мкл исследуемого 5% щелочного раствора пирацетама и помещали пластинку в камеру, содержащую растворители (подвижная фаза) для разделения компонента.
Хроматографирование продолжали до тех пор, пока растворитель не прошел от линии старта (? 10 см) до линии финиша. После этого хроматограмму вынимали из камеры и подсушивали на воздухе. Затем высушенную пластинку обрабатывали сначала 0,1 М раствором натрия гидроксида, после полного высыхания последнего, на пластинку наносили групповой реагент -1% спиртовой раствор нингидрина и пластинку оставляли сохнуть под вытяжным шкафом. Далее нагревали пластину в течение 10 минут и определяли образующиеся цветные зоны. После проявления хроматограммы определяли R_F исследуемого раствора.

Таблица 3. Соотношение растворителей в подвижной фазе

№ п/п	Компоненты системы	Соотношение компонентов (мл)	Значение RF
1	Этанол (96%) - ацетон	1:1	0
2	Этанол (96%) - ацетон	2:1	0
3	Этанол (96%) - ацетон	1:2	0
4	Этанол (96%) - ацетон - водный раствор аммиака	1:1:0,1	0
5	Этанол (96%) - ацетон - ледяная уксусная кислота	1:1:0,1	0,1
6	Этанол (96%) - ацетон - водный раствор аммиака	2:1:0,1	0
7	Этанол (96%) - ацетон - ледяная уксусная кислота	2:1:0,1	0,1
8	Этанол - ацетон - водный раствор аммиака	1:2:0,1	0
9	Этанол - ацетон - ледяная уксусная кислота	1:2:0,1	0
10	Хлороформ - этанол (96%) - водный раствор аммиака	7:3:0,3	0,5
11	Этанол (96%) - ацетон - ледяная уксусная кислота	5:1:0,1	0
12	Этанол (96%) - ацетон - ледяная уксусная кислота	5:1:0,5	0
13	Вода - ацетон	2:1	0
14	Вода - ацетон	3:1	0
15	Вода - ацетон - ледяная уксусная кислота	2:1:0,1	0
16	Вода - четыреххлористый углерод	2:1	0
17	Вода - четыреххлористый углерод - ледяная уксусная кислота	2:1:0,1	0
18	Этанол (96%) - четыреххлористый углерод	2:1	0
19	Этанол (96%) - четыреххлористый углерод - ледяная уксусная кислота	2:1:0,1	0
20	Хлороформ - ацетон - этанол (96%)	7:1:10	0
21	Изопропанол - водный раствор аммиака	50:1	0
22	Бутанол - водный раствор аммиака	50:1	0

После проведения анализа 22 систем, оптимальных результатов удалось добиться только в изократическом режиме при комнатной температуре в подвижной фазе: хлороформ - этанол (96%) - водный раствор аммиака (7:3:0,3), которая и была взята нами для определения пирацетама в лекарственных формах.

При проведении ТСХ для субстанции пирацетама был определен коэффициент подвижности R_f, равный 0,5 (табл. 3).

Следующим этапом стала апробация методики для лекарственных препаратов пирацетама.

В качестве препаратов пирацетама для исследования были взяты:

1. Твердая дозированная лекарственная форма - капсулы Пирацетама, производства «Северная звезда».

2. Твердая дозированная лекарственная форма - капсулы Фезама, производства «Actavis».

2.6 Приготовление растворов лекарственных препаратов пирацетама

Приготовление 5% щелочного раствора Пирацетама:

На аналитических весах отвешивали 2,5 г пирацетама, переносили в колбу на 50 мл и доводили 0,1 М раствором натрия гидроксида до метки. Тщательно перемешивали. Затем через фильтровальную бумагу в мерную посуду фильтровали полученный раствор.

Приготовление5% щелочного раствора Фезама:

На аналитических весах отвешивали 2,5 г Фезама, переносили в колбу на 50 мл и доводили 0,1 М раствором натрия гидроксида до метки. Тщательно перемешивали. Затем через фильтровальную бумагу в мерную посуду фильтровали полученный раствор.

Исследования методом ТСХ были проведены на пластинках Sorbfil ПТСХ-АФ-А 10x10 см на алюминиевой подложке. На линию старта микрошприцом наносили по 5 мкл исследуемого 5% щелочного раствора пирацетама (раствор сравнения), 5% щелочного раствора Фезама и 5% щелочного раствора пирацетама и помещали пластинку в камеру, содержащую подвижную фазу. После прохождения растворителем от линии старта до линии финиша, хроматограмму вынимали из камеры и подсушивали на воздухе. Высушенную пластинку обрабатывали сначала 0,1 М раствором натрия гидроксида, после полного высыхания последнего, на пластинку наносили групповой реагент -1% спиртовой раствор нингидрина. Далее нагревали пластину в течение 3-5 минут и определяли образующиеся цветные зоны. После определяли R_F исследуемого раствора.

Таблица 4. Расчеты R_F для лекарственных форм пирацетама

Лекарственный препарат	RF
Пирацетам (СО)	0,6
Фезам	0,5
Пирацетам	0,6

Заключение

В результате проведенной курсовой работы по разработке методики качественного определения пирацетама методом тонкослойной хроматографии получены следующие результаты:

1. Проведен анализ литературных данных о методиках качественного определения производных пиррола;

2. Изучена растворимость субстанции пирацетама в различных растворителях;

3. Для качественного анализа производных пирацетама была подобрана оптимальная подвижная фаза: хлороформ-этанол (96%) - водный раствор аммиака 7:3:0,3, и экспериментально рассчитана величина R_F равная 0,5;

4. Данная методика апробирована на лекарственных препаратах пирацетама - Фезаме (производства «Actavis») и Пирацетаме (производства «Северная звезда») в системе подвижной фазы хлороформ-этанол (96%) - водный раствор аммиака 7:3:0,3, и экспериментально рассчитаны величины R_F равные 0,5.

Список использованной литературы

пирацетам органический медицина хроматография

1. Тюкавкина Н.А. Органическая химия М.: «Медицина», 1998 г. - 496 с.

2. Беликов В.Г. Фармацевтическая химия. В 2 ч. Ч. 2. Специальная фармацевтическая химия. - Пятигорск. 1996. - С. 357-358. 592-597. Ч. 1. Общая фармацевтическая химия. - М.: Высш. школа. 1993. - С. 233-247. 263-267.

3. Арзамасцев А.П., Печенников В.М., Родионова Г.М. и др. Анализ лекарственных смесей. - М.: Компания Спутник +. 2000. - 275 с.

4. Д.А Харкевич. Фармакология. / М.: «Медицина», 1980 г.

5. Р.Н. Аляутдин. Фармакология. / М.: 2004 г.

6. Г.А. Мелентьева. Фармацевтическая химия, Т. 2 / М.: «Медицина», 1976 г.

7. Аксенова Э.Н., Андрианова О.П., Арзамасцев А.П. и др. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии. - М.: Медицина, 2000.

8. М.П. Максютина. Методы идентификации лекарственных препаратов. / Киев «Здоровье», 1978 г.

9. Г.А. Мелентьева. Фармацевтическая химия, Т. 2 / М.: «Медицина», 1976 г.

10. ГФ IX / М.: «Медгиз», 1961 г.

11. Б.А. Райсберг. Руководство по количественному анализу лекарственных препаратов / М.: «Медицина», 1978 г.

Размещено на Allbest.ru