Обнаружение феназепама

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Обнаружение феназепама, выделенного из биологических жидкостей, методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Высокоэффективная жидкостная хроматография (жидкостная хроматография высокого давления) является вариантом колоночной жидкостной хроматографии. Подвижная фаза - элюент проходит через заполняющий колонку сорбент с большой скоростью за счет значительного давления на входе в хроматографическую колонку.

В статье рассмотрена методика выделения феназепама из биологических жидкостей и его исследование с помощью современного метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Для этого в делительную воронку вместимостью 100 мл вносили 10 мл крови (или 50 мл мочи), прибавляли 5 мг феназепама, растворенного в 5 мл этилового спирта. Смесь крови (мочи) и феназепама оставляли на 5 часов. По истечении определенного времени в воронку наливали 10 мл хлороформа и в течение часа перемешивали. Через час хлороформное извлечение сливали. Экстракцию проводили трехкратно. Хлороформные извлечения объединяли, фильтровали через безводный сульфат натрия и упаривали под вытяжкой при комнатной температуре. Сухой остаток после упаривания хлороформа растворяли в 3 мл этилового спирта (трехкратно по 1 мл).

Спиртовую вытяжку концентрировали до 1 мл упариванием и наносили на линию старта пластинки Silufol UV-254. Хроматографировали в системе растворителей бензол-хлороформ-этилацетат-метанол (5:4:0,5:0,5) +пары концентрированной СН3 СООН. После поднятия растворителей на 10 см пластинку вынимали, высушивали 30 мин при 110°С, затем хроматографировали в перпендикулярном направлении в системе растворителей бензол-этанол-диэтиламин (9:1:1) + пары 25% NН4ОН, проявляли в УФ-лучах. Пятно с координатами 0,0Ч0,21, которое светилось сиреневым цветом, очерчивали карандашом, соскабливали с пластинки и элюировали 3 мл этилового спирта. Очищенный таким образом спиртовый экстракт феназепама из крови (мочи) анализировали методом ВЭЖХ.

Для исследования использовали высокоэффективный жидкостной хроматограф фирмы Agilent Technologies АТ 1100 Series, снабженный дегазатором, четырехградиентным насосом, автосамплером, термостатом колонок, диодно-матричным детектором и обращено-фазовой колонкой (размеры 125 мм при внутреннем диаметре 2 мм). Материал насадки - Hypersil BDS C18 для ВЭЖХ; диаметр частиц - 5 мкм; подвижная фаза: метанол - ацетонитрил (30:70); скорость потока - 0,4 мл/мин; температура термостата колонок - 30°С; детектирование: УФ-лучи при длинах волн от л = 210 до 300 нм.

Разделение проводили по методу Drug. 11M1, при объеме проб 5 мкл.

Полученные хроматограмма и УФ-спектр феназепама приведены на рис.

Рис. 1. Хроматограмма феназепама

Рис. 2. УФ-спектр феназепама

феназепам хроматография жидкостной растворитель

Анализ полученных хроматограммы и спектрограммы свидетельствует о том, что из биологических жидкостей феназепам проявляется в виде индивидуального пика со стабильным показателем времени удерживания, который имеет характерный УФ-спектр (таблица).

Спектрально-хроматографические характеристики феназепама

Таким образом, показана возможность использования метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для обнаружения феназепама, выделенного из биологических жидкостей. Такие признаки, как время удерживания, максимум светопоглощения в УФ-области спектра, рекомендуется использовать при определении феназепама в биологических жидкостях.

Размещено на Allbest.ru