Токсикологическая химия

Количественное определение

Количественное определение производных фенотиазина проводится без предварительной хроматографической очистки и разделения только в случае, когда установлено отсутствие в биообъекте других веществ основного характера. При их наличии для количественного определения производных фенотиазина проводят хроматографическую очистку методом ТСХ. Для этого на хроматографическую пластинку на стартовую линию, наносят в виде сплошной полосы шириной 1 см всю аликвоту экстракта для количественного определения к хроматографируют в системе 2. По окончании хроматографирования в УФ-свете отмечают зону соединения с соответствующим RЈ параллельно метчикам, снимают слой сорбента, содержащего соединение скальпелем в пробирку. Элюирование проводят 10 мл раствора 25% аммиака в этаноле (1:1) элюат отделяют фильтрованием через стеклянный фильтр № 4, упаривают досуха в токе холодного воздуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл 0,1 н раствора НС1, затем добавляют 4 мл 0,01 н НО.

В случае отсутствия других веществ основного характера вторую часть гептанового извлечения (кровь, моча) реэкстрагируют 5 мл 0,1 н. НС1, а затем 4 мл 0,01 н НС1. Солянокислые растворы объединяют.

К объединенному солянокислому раствору добавляют 12 мл ацетатного буферного раствора (рН 3,5), 2 мл насыщенного раствора метилоранжа и 5 мл хлороформа. Полученная смесь взбалтывается в делительной воронке - при наличии производных фенотиазина хлороформный слой окрашивается в желтый цвет (гелиантаты производных фенотиазина, извлекаемые хлороформом). Хлороформный слой отделяется и определяется оптическая плотность окрашенного раствора (фотоэлектроколориметр ФЭК-56 и др., кювета 10 мм, светофильтр синий с максимумом пропускания при 400 нм).

Для построения калибровочной кривой готовят стандартные растворы в 0,01 н НС1 производных фенотиазина с содержанием 12-10 мкг/мл производных: фенотиазина и исследуют их вышеприведенной процедурой. На основании результатов определения оптической плотности строится калибровочный график. Вышеприведенным методом изолируется до 60% производных фенотиазина из крови и до 80% из мочи.

Количественное определение аминазина и его метаболитов.

1. Фотоколориметрическое определение основано на реакции с концентрированной-серной кислотой. Фотометрирование проводят при X = 508 нм в кювете 5,105; эталон сравнения - контроль реактивов. Расчет содержания аминазина и его метаболитов производится по калибровочному графику.

2. Спектрофотометрическое обнаружение. Ультрафиолетовый спектр снимается в диапазоне длин вол 220-400 нм на СФ-4, СФ-4А и др. при концентрации 10 мкг/мл в пересчете на основание.

Максимумы абсорбции неизмененного аминазина при X = 254-255 нм (макс.) и X = 300-305 нм (мин). Неизмененный аминазин обычно обнаруживается в желудке и желудочно-кишечном тракте и их содержимом. Основной метаболит - сульфоксид - имеет максимумы абсорбции при длинах волн 238-240, 273; 298 и 340 нм. Химико-токсикологическим анализом по описанной методике обнаруживается 53-60% аминазина, добавленного к органам. Граница обнаружения 0,2 мг, граница определения 0,5 мг аминазина в 100 г органов.

Обнаружение фенотиазинов.

Фенотиазины часто обнаруживают с помощью тонкослойной хроматографии щелочных экстрактов мочи, но при пероральном поступлении в организм специфическая идентификация этого соединения может оказаться невозможной, если для анализа имеется только моча. Фенотиазины, принимаемые в низких дозах, например флуфеназин, невозможно обнаружить в моче ни одним из известных методов.

Качественный анализ

а) Реакции осаждения + общеалкалоидные осадающие реактивы (часто реактив Драгспдорфа) + соль, Рейнеке, Bi, Au.

б) Микрокристаллические реакции

+5% раствор хлорного золота дает характерные кристаллические осадки + соль. Рейнеке дает характерные кристаллические осадки

в) Реакции окрашивания

1) Дегидрирование в присутствии кислот (+ к H2S04):

Элениум - малиновое окрашивание; Тиоридазин - голубое; Левомепромазин фиолетовое.

2) Каталитическое окисление (HClO4+NaNQ2, реактив Фреде, реактии Манделина): Элениум - малиновое окрашивание; Тиоридазин - зеленовато-голубое; Левомепромазин фиолетовое.

3) Конденсация с альдегидами в присутствии водоотнимающих средств (реактив Марки):

Элениум - розово-малиновое окрашивание; Тиоридазин цвет морской полны: Левомепромазин - фиолетовое.

4) окисление солями металлов, имеющих высшую степень окисления (FeCl3 и HPtCl4)

В основе теста лежит реакция многих из этих соединений с ионами трехвалентного железа в кислой среде. Предпринимается для исследования мочи, содержимого желудка и остатков веществ с места происшествия.

а) Реактив FPN (FeCl3+ НСlO4+ HN03). Цвета, варьирующие от розового, красного или оранжевого до фиолетового или синего, могут свидетельствовать о присутствии фенотиазинов или их метаболитов. Моча пациентов, регулярно принимающих в лечебных целях традиционные фенотиазины, например хлорпромазин, обычно дает положительную реакцию. Чувствительность Хлорпромазин, 25 мг/л.

б) Элениум + HPtCl4 --> фиолетовый осадок; Тиоридазин - серо-розовый осадок; Левомепромазин -ярко-зеленое окрашивание.

г) Газохроматографический анализ

Разделение ведут на среднеполярной фазе (OV-225 на хроматоне) в стеклянных микроколонках 1 = 1-2 м при температуре 200-250°С, температура инжектора 250-300°С. Детектор - азотно-фосфорный; для хлорсодержащих фенотиазинов - по захвату электрона. Внутренний стандарт-имизин.

д) Фотометрия в видимой области

В основе - получение окрашенного раствора (с кислотой H2S04, с реактивом Минделина, с 18% НС1 и 1М раствором мышьяковой кислоты).

е) Фогометрия в УФ области спектра.

Метод требует высокой очистки (сочетание с ТСХ). Измерение ведут в растворе 0.5 Н Н2SO4(x max=250-255 нм)

3. В палате психоневрологического диспансера обнаружен гр. М. в бессознательном состоянии, рядом обнаружено несколько упаковок таблеток «Сибазон», флакон «Валокордина». Представить схему химико-токсикологического анализа мочи пострадавшей на присутствие указанных препаратов. Состав «Валокордина» - фенобарбитал, этиловый эфир бромизовалериановой кислоты 10 мл мочи в делительной воронке подкисляют 2 М раствором соляном кислоты до рН 2, трижды экстрагируют хлороформом по 10 мл. Хлороформные фазы отделяют и объединяют, фильтруя через безводный сульфат натрия. Органический растворитель удаляют в токе теплого воздуха.

Хроматограафическая очистка и обнаружение Остаток растворяют в небольшом объеме (0,1-0,2 мл) хлороформа и количественно с помощью капилляра переносят ни стартовую линию хроматографической пластинки "Силуфол". На расстоянии 2 см oт анализируемой пробы в одну точку (диаметр не более 0,5 мл) последовательно вносят по 0,02 мл спиртовых растворов (1 мг/мл) барбитала, фенобарбитала и этаминала-натрия.

Пятна подсушивают, хроматографирование проводят в системе хлороформ - н бутанол - 25%-ный раствор аммиака (70 : 40 : 5). Камера предварительно насыщается системой растворителей в течение 20 минут. Длина пробега растворителей 10 см. После подсушивания при комнатной температуре или в токе теплого воздуха до полного удаления растворителей, пластинки опрыскивают соответствующими реагентами.

Реагенты, используемые для проявления пластинки.

1. Раствор сульфата ртути(ll), HgSO4, 5%-ный раствор.

2. Раствор дифенилкарбазона (ДФК), 0,02%-ный раствор (следует избегать избытки дифенилкарбазона).

Барбитураты обнаруживают в виде сине-фиолетовых или красных пятен на исчезающем сиреневом фоне.

Список литературы

1. Токсическая химия. Под редакцией проф. Т.В. Плетеневой.2008г.

2. Токсическая химия. Учебное пособие .часть 1.2009г.

3. В.Ф. Крамаренко

Размещено на Allbest.ru