Организация лабораторно–производственной деятельности

Размещено на http://www.allbest.ru/

Реферат

По предмету Химия

На тему «Организация лабораторно - производственной деятельности»



Оглавление



Введение

Актуальность. В условиях интенсификации отраслей животноводства и широкого развития отечественного и международного рынка сырья и продукции животноводства, международной торговли увеличивается риск снижения качества продуктов питания, и как следствие, возможность заражения человека и животных особо опасными инфекционными и инвазионными болезнями. В обеспечении качественными и безопасными продуктами животного и растительного происхождения важная роль отводится ветеринарной службе, в частности государственным лабораториям ветеринарно-санитарной экспертизы на продовольственных рынках и ведущим лабораториям субъектов Российской Федерации. В перечисленных учреждениях необходимо тщательно изучить организацию деятельности ветеринарно-санитарных экспертов и практику использования ими федеральных и международных нормативно-правовых документов, осуществлять анализ рационального использования рабочего времени и повышения производительности труда. В связи с вышесказанным, проведение исследований с целью диагностики, предупреждения и ликвидации инфекционных, инвазионных и незаразных болезней животных, обеспечения безопасности в ветеринарно-санитарном отношении продуктов животноводства и растениеводства, защиты населения от болезней общих для человека и животных представляет особую актуальность.

Цель - изучить организацию лабораторно-производственной деятельности.

Задачи:

- рассмотреть технику безопасности при работе в лаборатории;

- исследовать деятельность ветеринарных лабораторий;

- изучить оборудование и методы;

- проанализировать материал для исследования;

- рассмотреть бактериологическую диагностику;

- изучить постановку биопробы;

- проанализировать серологическую диагностику;

- изучить аллергическую диагностику;

- проанализировать дифференциацию от исходного микроорганизма;

- рассмотреть применение ПЦР;

- изучить препараты, используемые в ветеринарных лабораториях.

Объект - лабораторная деятельность.

Предмет - деятельность ветеринарной лаборатории.

Теоретическая и практическая значимость работы. Научный анализ деятельности биохимических, химико-токсикологических и отделов ветеринарно-санитарной экспертизы республиканских ветеринарных лабораторий, разработка и усовершенствование норм труда при оценке качества продукции животного и растительного происхождения, а также биохимических и химико-токсикологических исследований, позволяют совершенствовать организацию работы ветеринарных специалистов в условиях аккредитованных лабораторий (центров), объективно устанавливать потребность в ветеринарных работниках, разработать научно-обоснованные расценки на ветеринарные услуги и рекомендовать меры по совершенствованию лабораторной диагностики болезней животных.

Методы исследования в работе - сравнение и анализ.

Структурно работа состоит из введения, двух глав, заключения и списка литературы.



1. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЛАБОРАТОРНО-ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ

1.1 Техника безопасности при работе в лаборатории

Существуют определенные требования безопасности перед началом работы.

Перед началом работы необходимо надеть спецодежду, обмундируйтесь, проветрите помещение, включите вентиляцию на 5-10 минут.

Проверить исправность всех необходимых для работы устройств, наличие и состояние средств коллективной и индивидуальной защиты, целостность заземления, наличие средств пожаротушения.

Продезинфицировать поверхность рабочих столов 3% раствором хлорамина. В ящиках включить бактерицидные лампы на 30 минут.

Обо всех выявленных нарушениях и неисправностях оборудования (приборов, приспособлений, инструмента), средств защиты, авариях, внезапном ухудшении состояния работника необходимо сообщать инженеру или начальнику ЛХБ, в выходные и праздничные дни - сменном мастеру [2].

Для безопасной организации работы лаборант должен знать приемы и методы безопасного выполнения работ, знать правила пользования используемым оборудованием, приборами, реактивами. Каждый электроприбор должен иметь инструкцию по эксплуатации, а также на каждом рабочем месте должны быть таблички с предупреждениями о возможных опасных и неправильных методах и приемах работы, применение которых запрещено.

Работы в ТШБЛ следует проводить только при наличии надлежащей вентиляции. Приточно-вытяжная вентиляция включается за 30 минут до начала работ. Все работы с опасными веществами следует проводить только в вытяжном шкафу и в средствах защиты. При работе в лаборатории следует соблюдать правила безопасного обращения:

а)с реагентами:

- работать в спецодежде, использовать средства защиты;

- используйте только те флаконы с реагентами, на которых есть этикетки с указанием реагента, даты изготовления и маркировки.

б)степени чистоты;

- хранить едкие вещества в вытяжном шкафу в количестве, не более 5 ежедневных поставок;

- храните отравляющие вещества отдельно в шкафу, ключи от которого находятся во главе ХБЛ.

в) с растворами:

- все растворы следует готовить только в хорошо вымытой посуде;

- не путать пробки от посуды, содержащей растворы разных веществ;

- растворы, портящиеся под действием света, следует хранить в темных колбах;

- все флаконы должны иметь этикетки с указанием даты приготовления;

- в пробках колб с растворами щелочей должны быть хлоркальциевые трубки, заполненные поглотителями углекислого газа;

- быть осторожны с растворами, оказывающими вредное воздействие на кожу, одежду, обувь;

- при приготовлении растворов в органических жидкостях использовать только чистые растворители;

- не пробовать никакие вещества и растворы веществ, нюхать осторожно, не наклоняясь над сосудом и не вдыхая глубоко, а направляя рукой на себя пары или газы;

- работать с легковоспламеняющимися веществами вдали от огня и включенных отопительных приборов;

- все работы с ядовитыми жидкостями проводить в исправном вытяжном шкафу и соблюдать следующие меры предосторожности:

- работать в резиновых перчатках, не использовать поврежденные перчатки;

- недопустимо набирать ядовитые жидкости в пипетку ртом, использовать только сифон или грушу;

- не оставлять на столе бутылки с ядовитыми веществами;

- перед тем, как вылить ядовитое вещество в раковину, его необходимо обезвредить (обезвредить);

- нагревать ядовитые вещества только в круглодонных колбах на водяной или песочной бане, нагревание на открытом огне недопустимо [6];

в)с кислотами и щелочами:

- концентрированные кислоты для текущей работы хранятся под колпаком;

в количестве не более 1 кг каждого наименования, в таре с притертой пробкой, всего хранить не более 3-4 кг;

- переливание кислот и щелочей из бутылей следует проводить в защитных очках, резиновых перчатках, сапогах, прорезиненном фартуке с фартуком с использованием опрокидывающихся специальных штативов или сифонов с грушами;

При обращении с серной кислотой строго соблюдайте следующие меры предосторожности, кроме перечисленных выше:

- при разбавлении серной кислоты запрещается подливать в кислоту воду.

Влить кислоту в воду, очень осторожно и вдоль стенок сосуда и при тщательном перемешивании раствора;

- не оставлять флакон с кислотой открытым;

- при смешивании серной кислоты с другими кислотами вливать серную кислоту в другую;

- работать только на тягу, помните, что серная кислота сжигает одежду;

При работе с азотной кислотой:

- хранить азотную кислоту в темном, прохладном месте;

- не допускать попадания на древесные материалы, так как при попадании на солому, опилки, стружку они легко воспламеняются;

- не оставлять флакон с кислотой открытым;

- спирт и скипидар взрываются при добавлении азотной кислоты;

При обращении с аммиаком:

- при переливании раствора аммиака необходимо носить очки, работать только на вытяжение.

По окончании работы необходимо закрыть водопроводные краны, выключить электроприборы и другое оборудование.

Необходимо привести в порядок свое рабочее место, убрать мусор, отходы, остатки горючих и легковоспламеняющихся веществ, отработанные жидкости.

Растворы, реактивы и посуду следует размещать в специально отведенных местах. По окончании работы необходимо снять рабочую одежду, убрать средства индивидуальной защиты в специально отведенное место [8].

Обо всех несчастных случаях, внезапных заболеваниях, обнаруженных неисправностях оборудования, приборов, приспособлений, средств защиты и других опасных факторах, угрожающих жизни и здоровью работников, следует немедленно сообщать начальнику ХБЛ, инженеру или мастеру смены.

1.2 Деятельность ветеринарных лабораторий

В своей деятельности специалисты лаборатории используют требования в части ветеринарно-санитарной экспертизы, Ветеринарного законодательства, Закона «О ветеринарии», ГОСТов, Правил ветсанэкспертизы разных продуктов, Санитарных правил для продовольственных рынков, законов РФ «О качестве и безопасности продуктов» и «О защите прав потребителей», Правил торговли на рынках и других нормативных документов, а также Устава рынка и должностных обязанностей ветврачей, лаборантов и санитаров.

В своей деятельности лаборатория является независимой от администрации рынка, торгующих граждан, потребителя продукции. При выполнении обязанностей ее работники находятся под защитой государства.

Задачами лаборатории ветеринарно-санитарной экспертизы являются:

Организация и проведение мероприятий по предупреждению распространения зоонозных и зооантропонозных болезней при торговле животными, птицей.

Обеспечение благополучия в ветеринарно-санитарном отношении реализуемой на рынке продукции животного и растительного происхождения.

Организация мероприятий по предупреждению распространения заразных болезней животных через продукцию, подлежащую ветеринарно-санитарной экспертизе [4].

Лаборатория несет ответственность за правильность проведения экспертизы, санитарное благополучие и доброкачественность пищевых продуктов, допускаемых к продаже на рынке, а также за действенность контроля по соблюдению санитарных условий при их продаже.

Функции лаборатории (в соответствие с Положением о государственной лаборатории ветеринарно-санитарной экспертизы на продовольственных рынках):

Государственный ветеринарный надзор за соблюдением правил торговли животными, птицей, мясом, мясопродуктами, рыбой, раками, молоком, молочными продуктами, яйцами, медом, растительными и другими пищевыми продуктами на продовольственном рынке.

Проведение проверок на наличие и правильность оформления ветеринарных сопроводительных документов на животных, птицу, продукцию животного и растительного происхождения, реализуемые на рынке.

Осуществление постоянного контроля за поступлением, хранением и реализацией мяса и мясопродуктов торгово-закупочными предприятиями, расположенными на территории рынка.

Проведение клинических и других обследований животных (птицы), поступающих для продажи на рынок, а при установлении болезни - направления их в государственное лечебное ветеринарное учреждение.

Организация и проведение радиологического контроля продукции животного и растительного происхождения в соответствии с "Положением о ветеринарном радиологическом контроле".

Проведение осмотра и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и других продуктов убоя всех видов сельскохозяйственных и промысловых животных, битой домашней птицы и пернатой дичи, рыбы, молока, молочных продуктов, меда, яиц и других разрешенных к реализации пищевых продуктов, в том числе растительного происхождения, согласно порядку, установленному действующими правилами ветеринарно-санитарной экспертизы и другими нормативными документами.

Организация и проведение обязательной трихинеллоскопии свиных туш, кабанов, барсуков, медведей, нутрий и других животных, подверженных заболеванию трихинеллезом, а также частей их туш (полутуш, четвертин), шпига, независимо от результатов проведенных исследований до поступления продуктов на рынок [9].

Проведение, при наличии показаний, отбора проб на бактериологические, биохимические, гистологические, радиологические и другие исследования мяса, мясопродуктов, рыбы, молока, молочных продуктов, меда и других пищевых продуктов и направление их в ветеринарную лабораторию района (города), а в необходимых случаях - в республиканскую, краевую, областную ветеринарные лаборатории.

Клеймение туш (полутуш, четвертин, тушек птицы и др.) и субпродуктов в соответствии с Инструкцией по ветеринарному клеймению мяса.

Выдача заключения и других ветеринарных документов установленной формы (талоны, этикетки, квитанции), удостоверяющих ветеринарно-санитарное благополучие выпускаемой продукции и разрешающих продажу ее на рынке.

Денатурация и уничтожение отобранных и отработанных проб сырья и продуктов после проведения ветеринарно-санитарной экспертизы, необходимых испытаний (исследований) и составление соответствующего акта. Организация и контроль за утилизацией или уничтожением мяса и других продуктов, признанных после проведения ветеринарно-санитарной экспертизы не пригодными в пищу. Оформление заключений и составление актов на забракованные продукты.

Организация и контроль за обеззараживанием мяса и других продуктов.

Учет выявленных болезней, регистрация проводимой работы в журналах установленной формы, ведение и составление ветеринарной отчетности.

Пропаганда ветеринарно-санитарных знаний среди работников рынка, торгующих граждан и покупателей.

Особое внимание уделяется соблюдению Правил ветсанэкспертизы животноводческой и растительной продукции.

Лаборант лаборатории при ветеринарной клинике -- это должность повышенной опасности, к которой предъявляются дополнительные требования охраны труда, включающие в себя специальные требования по обучению, аттестации, допуску к самостоятельной работе, инструктажу по охране труда и периодической проверке знаний по должности и безопасности труда.

К выполнению работы в ветеринарной клинике допускаются работники не моложе 18 лет, имеющие необходимую теоретическую и практическую подготовку, прошедшие медицинский осмотр и не имеющие противопоказаний по состоянию здоровья, прошедшие вводный и первичный на рабочем месте инструктажи по охране труда, обучение по специальной программе, прошедшие стажировку на рабочем месте, аттестованные квалификационной комиссией и получившие допуск к самостоятельной работе [7].

Лаборант ветеринарной клиники должен периодически, не реже одного раза в год, проходить обучение и проверку знаний требований охраны труда и получать допуск к работам повышенной опасности.

Лаборант ветеринарной клиники, независимо от квалификации и стажа работы, не реже одного раза в три месяца должен проходить повторный инструктаж по охране труда; в случае нарушения требований охраны труда, а также при перерыве в работе более чем на 30 календарных дней, он должен пройти внеплановый инструктаж.

Лаборант ветеринарной клиники, допущенный к самостоятельной работе должен знать: стандарты, методики, инструкции и другие документы по проведению лабораторных анализов и испытаний. Химические реагенты, реактивы, применяемые в работе. Назначение и условия применения контрольно-измерительных приборов. Конструкцию, назначение и принцип работы лабораторного оборудования, его механизмов и агрегатов. Способы обеспечения исправного состояния установок, приборов, инструмента и другого лабораторного оборудования. Правила безопасности при эксплуатации и техническом обслуживании лабораторного оборудования, пользовании инструментом, приборами, приспособлениями. Требования безопасности при работе с химическими веществами. Правила работы с патологическим материалом. Методы дезинфекции, обеззараживания и стерилизации различных материалов. Правила, нормы и инструкции по охране труда и пожарной безопасности. Правила пользования первичными средствами пожаротушения. Способы оказания первой помощи при несчастных случаях. Правила внутреннего трудового распорядка организации. ветеринарный лабораторныйя биопрепарат микроорганизм

Лаборант ветеринарной клиники, кроме того, должен знать правила хранения химических веществ и правила группового хранения различных материалов с учетом их совместимости.

Для того чтобы лаборант ветеринарной клиники был допущен к самостоятельной работе, он должен пройти стажировку под руководством более опытного работника для приобретения практических навыков работы с вредными химическими веществами и патологическим материалом [6].

Лаборант, показавший неудовлетворительные навыки и знания правил эксплуатации лабораторного оборудования и требований безопасности при работе с химическими веществами и патологическим материалом, к самостоятельной работе не допускается.

1.3 Оборудование и методы

Характерной чертой современного этапа развития клинической ветеринарной медицины является постоянное возрастание роли лабораторной диагностики. Результаты лабораторных исследований приобретают действительную ценность только при их целенаправленном назначении и корректной оценке результатов наряду с клиническими данными. Задачей клинической лабораторной диагностики является разработка методов объективного исследования клеточного и химического состава тканей, биологических жидкостей и использование сведений, полученных с помощью рекомендованных методов, для выявления отклонений от нормы; постановка диагноза, прогноза заболеваний, оценка эффективности проводимого лечения, контроль за осуществлением медикаментозной терапии и профилактики расстройств здоровья. Клиническая лабораторная диагностика включает в себя клиническую биохимию, клиническую гематологию, общеклинические методы исследования, а также клиническую лабораторную паразитологию [1].

Лаборатория оснащена новым современным высокочувствительным оборудованием. Проводятся - клинический, биохимический, иммуноферментный анализы крови, общий анализ мочи, соскоб с кожи на экто- и эндопаразитов, а также исследование шерстного покрова на различные грибковые заболевания.

Исследование крови является важнейшим диагностическим методом. В нашей лечебнице анализ крови проводится на полуавтоматическом гематологическом анализаторе, который дает много дополнительной информации, необходимой для качественной и грамотной интерпретации полученных данных. 15-канальный полуавтоматический биохимический анализатор позволяет выявить электролитные и кислотно-щелочные нарушения, нарушения функции желудочно-кишечного тракта, поджелудочной железы и печени, заболевания мочевыводящих путей, нарушения жирового, углеводного, белкового обменов и прочие патологические состояния организма животного [10].

Иммуноферментный анализатор позволяет исследовать сыворотку крови животных на наличие таких инфекций, как: микоплазмоз, токсоплазмоз, хламидиоз, ЦМВ, герпес-вирусные инфекции, чуму, туберкулез, лейкемию, вирусный иммунодефицит, лейкоз и панлейкопению. Помимо этого в ветеринарной лечебнице «Доктор Гав» проводятся исследования на гормоны щитовидной железы (ТТГ, Т3, Т4), гормоны надпочечников (кортизол) и половые гормоны (тестостерон, пролактин, фолликулостимулирующий гормон, лютеинизирующий гормон, прогестерон (для установления точных сроков вязки), эстрадиол, хорионический гонадотропин).

Большая часть спектра исследований выполняется в течение дня. Существует возможность срочного выполнения анализов за 1-2 часа. При необходимости можно получить консультацию врача лаборанта по назначению анализов и интерпретации результатов исследований.

Рассмотрим современное лабораторное оборудование, предназначенное специально для ветеринарных целей.

Клиническая химия BeckmanCoulter AU 480. «Шанс Био» выстраивает долговременное стратегическое сотрудничество с мировым лидером по производству диагностического лабораторного оборудования компанией Beckman Coulter. В настоящее время установлены четыре крупные диагностические системы, позволяющие свести возможные погрешности при биохимическом анализе к нулю [8].

Благодаря своей производительности - до 800 тестов в час и ёмкости реагентного ротора, позволяющему работать одновременно с 63 методиками, система Beckman Coulter AU480 является идеальным основным биохимическим анализатором.

Анализаторы используют исключительно малые объемы образцов и реагентов. Минимальный объем образца составляет 1 мкл, что идеально подходит для самых мелких домашних и лабораторных животных. Контроль внесения образца и реагентов осуществляется компьютером. В сочетании с детекцией сгустков и функцией предотвращения столкновения манипуляторов - это дополнительно обеспечивает надежную и безопасную работу системы.

Биохимическая система BioSystems BA 400. Автоматический биохимический анализатор ВА-400 является самой мощной и производительной машиной среди линии анализаторов, разработанных компанией BioSystems. ВА-400 - это уникальная система для проведения исследований в области биохимии и турбидиметрии, во многом не имеющая аналогов в своем сегменте. Инновационная оптика на базе долговечных светодиодов (LED), надежная механика, оригинальный подход к электронике, оптимизированная схема загрузки на борт реагентов и проб, наличие считывателя штрих-кода и ISE модуля, автономная подача воды, независимая система охлаждения. Все это делает работу с прибором простой, приятной и экономичной, а уверенность в высоком качестве полученных результатов позволяет удовлетворять всем нуждам пациента и поддерживать высокий статус лаборатории. Пропускная способность 640 тестов/час. Возможность проведения биохимических и турбидиметрических исследований 135 охлаждаемых позиций для проб (90 с возможностью считывания штрих-кода).

Гематологические исследования. Выполняются на автоматических ветеринарных гематологических анализаторах Celly (Бельгия), Mythic (Швейцария), Abacus Vet (Фирма Diatron, Австрия).
Производительность каждого анализатора более 70 проб в час, объем пробы 25 мкл. Анализаторы работает с пробирками любого типа, в том числе возможно прямое измерение из любых разовых систем взятия крови.
Проба -- цельная кровь с EDTA, либо предварительно разведенная. Хранение 15000 результатов измерений с гистограммами. Программы автоматического контроля качества измерений [9].

Коагуляционный гемостаз исследуется на анализаторе системы свёртываемости крови MC-4 (Фирма Merlin Medical, Германия).

Инновационная молекулярная лаборатория. Новый, повышенный уровень специфичности гарантирует точные и правильные результаты. Новая лаборатория молекулярной диагностики «Шанс Био» работает на пике современных технологий, обеспечивая высокоточную диагностику в соответствии с требованиями. Лаборатория оснащена суперпроизводительными ПЦР анализаторами (амплификаторами), работающими в режиме «реального времени» (Real-time PCR). Амплификатор Real-time BIO-RAD CFX96 Touch (США) использует передовые оптические технологии с долговечными светодиодами и твердотельными элементами, обеспечивающими максимальную надежность и гибкость системы. Сканирующая оптика с высокой точностью и без перекрестных помех считывает информацию с каждой отдельной лунки, обеспечивая оптимальные количественные результаты Запатентованная конструкция облегченного термоблока и уникальная оптическая система 6-канальной детекции обеспечивают беспрецедентно высокую скорость и удобство работы на приборе и по праву гарантируют CFX96 Touch лидирующее место на рынке ПЦР-диагностики. Rotor-Gene Q 5 Plex (Германия) сочетает в себе множество оптимизированных конструктивных особенностей, обеспечивающих выдающуюся производительность и надежные результаты. Rotor-Gene Q обеспечивает оптимизированный анализ для широкого спектра приложений (ветеринария, вирусология и клинические исследования), а наличие универсального программного обеспечения Q-Rex с возможностью расширения, которая позволяет добавлять новые задачи, не влияя на установленные рабочие процессы, позволяет оператору с легкостью воплощать стоящие перед ним задачи и цели.

Электрофорез. Капиллярный электрофорез Sebia Capillarys (Франция) Метод капиллярного электрофореза используется для электрофоретического разделения фракций белков сыворотки крови. Восемь сверхтонких капилляров, заполненных раствором электролита, функционируют одновременно, обеспечивая очень высокую производительность. Детекция осуществляется непосредственно при определенной длине волны, что позволяет достичь прекрасной воспроизводимости и точности результатов. Система CAPILLARYS полностью автоматизирована, то есть самостоятельно осуществляет все стадии от начала до конца исследования. CAPILLARYS подразумевает непрерывную подачу образцов -- пользователь должен лишь устанавливать первичные пробирки со штрих-кодами. Производительность -- 80 образцов в час [5].

Иммуноферментный анализ (ELISA). Инновационные автоматические иммунохимические (ИФА) системы Access 2 (Beckman Coulter, США) и Lasurite (Dynex Technologies Inc., США) выводят результаты исследований «Шанс Био» в ряд точнейших мировых лабораторий. Уникальный метод ИФА на парамагнитных частицах с ферментативно-усиленной хемилюминесценцией гарантирует высокую чувствительность метода и широкий диапазон определяемых концентраций с производительностью до 200 тестов в час. Обширное меню включает в себя уникальные маркеры и инновационный показатели, такие как тиреоидная панель, репродуктивная панель, кардиопанель, диагностика анемий, и другие.

Среди прочих видов исследовании используются анализаторы мочи IDEXX VetLab UA, компьютерные видеомикроскопы NIKON и MEJI TECHNO (Япония), ультразвуковые дезинтеграторы, ламинарные шкафы, аналитические весы, центрифуги фирм RAL, Eppendorf, Unico, и прочие приборы и оборудование.

Все используемые аналитические приборы имеют функции контроля качества проводимых исследований (до 6 аппаратных уровней).

Используемые реактивы фирм Human, DyaSys, Medica, BioSystems, Cormay и других уважаемых фирм позволяют получать точные, достоверные данные исследований [1].

Контроль качества выполняется по стандартам фирм Bekman Coulter , Human, J.T.Baker, Medica. Взятие крови производится в одноразовую посуду Eurotubo, Venoject, фирм DeltaLab, Terumo.

Итак, качество и быстрота выполнения лабораторных исследований напрямую зависят от используемого оборудования и методов исследований. Все основные исследования выполняются на автоматических анализаторах, что позволяет избежать ошибок, связанных с человеческим фактором.



2. Лабораторная диагностика инфекционного ринита кур (гемофилеза кур)

2.1 Материал для исследования

Материал от каждой птицы отбирается отдельными инструментами в отдельные стерильные ёмкости. Забор крови: в объеме 2 мл в стерильные пробирки с 3% K2EDTA или K3EDTA (с фиолетовой крышкой). Закрытую пробирку с кровью необходимо аккуратно перевернуть несколько раз.

Забор сыворотки: Кровь забирается в вакуумную пробирку с красной или коричневой крышкой (с активатором свертывания) в объеме 2-4 мл. Цельную кровь необходимо подержать при комнатной температуре до момента, когда она свернется, затем убрать в холодильник. По возможности отделите сыворотку и переместите ее в пустую пробирку типа Эппендорф или шприц [2].

Отбор помета: отбирается в стерильную посуду в количестве 1-10 г.

Отбор соскобов, мазков со слизистых оболочек: материал отбирается стерильными зондами (урогенитальный зонд типа А) вращательными движениями, захватывая клетки эпителия. После забора конец зонда помещается в стерильную одноразовую микропробирку типа Эппендорф на 1,5 мл с 0,5 мл физ. раствора. Материал хранить при температуре от +4 до +8 °C.

Стерильно отбирают серозно-фибринозный экссудат из перитонеальной, плевральной, перикардиальной полостей, пораженных суставов, при наличии симптомов поражения -- ЦНС-фрагменты тканей головного мозга, при наличии пневмонии -- кусочки легких на границе пораженной и здоровой ткани. Материал транспортируют в термосе со льдом.



2.2 Бактериологическая Диагностика

2.2.1 Микроскопия

H.parasuis -- факультативный аэроб, температурный оптимум 37-38°С, рН 7,2-7,4 (см. Рисунок 2).

Рисунок 2. Рост возбудители гемофилеза на кровяном МПА с баккормилками

На обычных средах возбудитель не растет, требует добавления в среду готового фактора роста -- V-фактор (NAD-никотинамидаденин-динуклеотид или NAD-фосфат NADP). В качестве источника V-фактора используют дрожжевой экстракт, энзиматически чистой NAD (NADP), гретую кровь барана (лошади) или растущую культуру «бактерийкормилок», которая при этом выделяет в окружающую среду Vфактор, что обеспечивает возможность роста вокруг колоний «бактерий-кормилок» сателлитньгх мелких колоний H.parasuis. Стерильные дрожжевой экстракт и чистый NAD добавляют в МПА, МПБ, агар и бульон Хоттингера. Рост H.parasuis также зависит от наличия в среде сыворотки крови (барана, лошади, крупного рогатого скота), которую добавляют в питательную среду в количестве 8-10%. Для первичного выделения возбудителя лучше всего использовать кровяной агар (5- 10% дефибринированной крови барана, лошади, кролика) с «бактерией-кормилкой». При исследовании контаминированного материала применяют среды Controni. Кровяной агар слегка подсушивают. Исследуемый материал засевают шпателем (бактериологической петлей) по всей поверхности среды. Затем по диаметру чашки в виде двух прямых линий под углом 90° засевают бактериологической петлей культуру негемо- 6 литического штамма стафилококка или Е. coli («бактериякормилка»). На плотные и жидкие питательные среды, содержащие готовые ростовые факторы (NAD, дрожжевой экстракт, гретую кровь), материал засевают обычным способом [4].Посевы культивируют при 37- 38°С в течение 24 - 48 часов в аэробных условиях.

2.2.2 Выделение чистой культуры

Возбудитель -- факультативный анаэроб, температурный оптимум 37-38°С, рН 7,2-7,6, проявляет потребность при культивировании в NAD, сыворотке крови (лучше использовать куриную сыворотку), повышенном содержании СО2 в атмосфере. Исследуемый материал высевают на 10%-ный кровяной агар в чашках Петри (кровь овцы, кролика, курицы, крупного рогатого 9 скота) с последующим посевом «культуры-баккормилки» (стафилококк, кишечная палочка). Можно использовать кровяной агар Левинталя, сывороточно-дрожжевой агар. Поскольку материал обычно контаминирован сопутствующей микрофлорой, целесообразно применять селективные пи-тательные среды. Посевы инкубируют при 37-38° С в течение 24-48 часов в эксикаторах в атмосфере 10% СО2. На кровяном агаре с «баккормилкой» возбудитель формирует вокруг штриха питающей культуры мельчайшие сателлитные, негемолитические колонии. На «шоколадном агаре», агаре Левинталя и сывороточно-дрожжевом агаре через 48 часов культивирования возбудитель формирует круглые, выпуклые, с гладкой поверхностью, полупрозрачные, сероватые, диаметром до 1 мм колонии. В жидких питательных средах возбудитель растет со слабым равномерным помутнением питательной среды [7].

Последующие исследования окончательно показали, что серотип В является самостоятельным и не имеет ничего общего с серотипами А и С [3]. По результатам исследования большого количества изолятов инфекционного ринита кур было установлено, что в Германии циркулируют преимущественно серотипы А и В, в Испании - А, В и С, в Австралии, Южной Африке и Индонезии - А и С, а в Малайзии - А. Недостатком данной схемы является то, что около трети всех изолятов не типируются, возможно, из-за отсутствия агглютиногена.

Вторая схема типирования, разработанная K. Кумэ на основе реакции торможения гемагглютинации, предусматривала наличие 7 серотипов (НА-1-НА-7), распределенных по 3 серогруппам (I, II, III) [10]. Преимуществом данной схемы является то, что большинство изолятов, не типируемых в реакции агглютинации, были типированы в реакции торможения гемагглютинации. Однако данная схема не нашла широкого практического применения в связи техническими сложностями постановки теста.

Для удобства классификации A. paragallinarum по антигенным свойствам П. Блэкл совместил результаты исследований Л. Пейджа и К. Кумэ и предложил новую схему, включающую 3 серогруппы по агглютинину и 9 серотипов по гемагглютинину. В настоящее время по модифицированной схеме к серогруппе А относятся 4 серотипа (А-1, А-2, А-3 и А-4), к серогруппе В - 1 серотип (В-1), к серогруппе С - 4 серотипа (С-1, С-2, С-3 и С-4) [6].

Как показывают результаты исследований, серотиповой профиль возбудителя в разных странах мира разнообразен и имеет значительные различия. Так, в Австралии наибольшее распространение имеют серотипы А-4, С-2, С-4, в Африке - А-1, А-2, С-2, С-3, в Бразилии - А-3, в Германии - А-1, А-2, В-1, С-2, в Израиле - С-3, в Мексике - А-1, А-2, В-1, С-2, в США - А-1, В-1, С-2, в Японии - А-1, С-1 [9]. Третий метод типирования возбудителя основан на использовании моноклональных антител в иммуноферментном анализе [11].

Несмотря на ряд сообщений о достаточной специфичности и приемлемом уровне чувствительности, данный метод не нашел широкого применения в связи с наличием высокого потенциала изменчивости у A. paragallinarum и необходимостью создания широкой панели моноклональных антител. Четвертая схема типирования основана на выявлении термостабильных антигенов в реакции диффузионной преципитации в агаровом геле. Недостатком этого метода является то, что у 6 серовариантов, выявленных по этой схеме, не удалось обнаружить корреляцию с основными иммунотипами возбудителя, поэтому и эта схема не нашла широкого применения [5].

Существует также сывороточный бактерицидный тест, с помощью которого возможно проведение дифференциации серологических групп А и С.

2.3 Постановка биопробы

Применяют для определения патогенных свойств выделенной культуры NAD-зависимых бактерий. Культуру выращивают в желточном мешке 6-7-дневных развивающихся куриных эмбрионов или на оптимальной плотной питательной среде. Биопробу проводят на 2-3 клинически здоровых wpax восприимчивого возраста. Содержимое желточного мешка вводят курам интраназально в дозе 0,1-0,2 мл. Клинические признаки болезни Выявляются через 24-48 часов, но иногда инкубационный период составляет 6-7 суток [8].

Диагноз ставится комплексно, с учетом эпизоотических данных, симптомов болезни, патологоанатомических изменений с обязательным проведением бактериологического исследования, для чего в лабораторию направляют трупы павшей или убитой с диагностической целью птицы, (экссудат носовой полости, трахеи, легкие). Биопробу ставят на цыплятах 3 месячного возраста, они заболевают на 2-7 день с характерными симптомами. Диагноз считают установленным при выделении возбудителя из патматериала с последующей его идентификацией, а также при получении позитивных результатов биопробы с последующей реизоляцией возбудителя. В процессе проведения диагностики следует исключить инфекционный ларинготрахеит, респираторный микоплазмоз, оспу и авитаминоз А, где решающее значение отводится лабораторным исследованиям.

2.4 Серологическая диагностика

Диагноз на гемофилез ставится комплексно, с учетом эпизоотологических данных, симптомов болезни (опухание голов, ринит, дыхание с открытым клювом), патологоанатомических изменений (ринит, синусит, ларинготрахеит, атрофия носовых раковин, «совиная голова»), результатов гистологического исследования кожи, гортани и трахеи, серологического исследования (в т.ч. ретроспективной диагностики), бактериологического исследования, ПЦР, биопробы. Для проведения бактериологического исследования в лабораторию направляют клинически больных птиц с признаками синусита или мазки, приготовленные из содержимого носовой полости и синусов (в таком случае посев на питательные среды должен быть произведен не позднее 24 часов после отбора) [3].

Серология - это метод исследования, при котором в крови обнаруживается не сам возбудитель заболевания, а реакция иммунной системы на него. Если антитела есть, то можно говорить о том, что в крови присутствует антиген, который вызвал активизацию работы иммунитета.

Дифференцировать гемофилез следует от: метапневмовирусной инфекции (серозное воспаление передней гортани, лимфоидно-макрофагальные периваскулиты и пролифераты в коже, гортани и трахее), инфекционного бронхита (пробочки фибрина в бифуркации трахеи); инфекционного ларинготрахеита (катарально-геморрагический, дифтеритический ларингит и трахеит); оспы (инфекционная сыпь в коже головы, дифтеритический ларингит); респираторного микоплазмоза (фибринозный аэросаккулит); колисептицемии (полисерозит, септическая селезенка, не поражаются дыхательные пути); пастереллеза (крупозная плевропневмония, катарально-геморрагический дуоденит, не поражаются дыхательные пути); гиповитаминоза А (ороговение желез пищевода - просовидные узелки в слизистой оболочке).

Возбудитель болезни - Haemophilus paragallinarum-мелкие грамотрицательные аэробные коккоподобные палочки. Спор не образуют, неподвижны, вызывают гемолиз эритроцитов. В воде, на деревянных и бетонных покрытиях возбудитель сохраняет жизнеспособность 50-90 суток. По антигенным свойствам H. paragallinarum подразделяется на 3 серологические группы: A,B,C с соответствующими серовариантами: А1, А2, А3,А4, В1, С1-С4. Перекрестное серологическое родство между представителями серологическими группами не установлено [6].

Вид антигенно неоднороден, подразделяется в РА на ряд сероваров. Биопромышленность РФ соответствующие диагностические сыворотки не выпускает.

Серологическая диагностика инфекционного ринита птиц -- не менее важный инструмент контроля данного заболевания. Как известно, одним из самых главных преимуществ этого вида исследований является возможность контроля поствакцинального иммунитета. Для выявления специфических антител против A. paragallinarum используют иммуноферментный анализ (ИФА) и реакцию торможения гемагглютинации (РТГА). В настоящее время сертифицированных коммерческих наборов ИФА для диагностики инфекционного ринита не существует. Некоторые компании предлагают наборы ИФА для научных целей без гарантии воспроизводимости полученных результатов. РТГА, широко применяющуюся для серологической диагностики многих гемагглютинирующих вирусов и бактерий, таких как вирусы ньюкаслской болезни, гриппа птиц или возбудителя респираторного микоплазмоза, также используют для выявления антител к A. paragallinarum. С помощью РТГА достоверно определяют специфические антитела к серотипам А и С с использованием как нативного антигена, так и антигена, обработанного тиоцианатом калия. Чувствительность реакции к выявлению постинфекционных антител к серотипу С низкая. Также существует третий тип РТГА для обнаружения антител к A. paragallinarum, где для постановки реакции используют антиген, обработанный гиалуронидазой, и эритроциты, обработанные формальдегидом. Этот вариант реакции позволяет с высокой достоверностью выявлять специфические антитела к серотипам А и С. При этом ни одна из предложенных модификаций РТГА не обладает достаточной чувствительностью для выявления специфических антител к серотипу В.

2.5 Аллергическая диагностика

Не проводится, т. к возбудитель не аллергенный

2.6 Дифференциация от исходного микроорганизма

От других видов пастерелл H.paragallinarum легко отличить по потребности в NAD. Этот признак исследуют посевом культуры на сывороточный или кровяной агар с последующим высевом «баккормилки» или нанесением на поверхность питательной среды бумажного диска, пропитанного NAD (10 мг/мл). Через 24 часа инкубирования сателлитный рост дают только культуры Н. paragallinarum и P. avium, остальные пастереллы и другие родные виды бактерий растут с одинаковой интенсивностью по всей поверхности питательной среды (NAD-зависимость отсутствует).



2.7 Применение ПЦР

При патологоанатомическом вскрытии павшая птица от гемофилеза истощена, подкожная клетчатка в области головы пропитана студневидным экссудатом, под-глазничные синусы заполнены серозным и серозно-фибринозным экссудатом, на поверхности слизистой оболочки носовой полости, гортани и трахеи наблюдается вязкая слизь, в носовых пазухах плотные выделения. Гемофилез диагностируют на основа-нии клинических, патологоанатомических изменений и подтверждением выделения возбудителя на питательных средах или методом ПЦР [4].

Материал от каждой птицы отбирается отдельными инструментами в отдельные стерильные ёмкости. Забор крови: в объеме 2 мл в стерильные пробирки с 3% K2EDTA или K3EDTA (с фиолетовой крышкой). Закрытую пробирку с кровью необходимо аккуратно перевернуть несколько раз. Забор сыворотки: Кровь забирается в вакуумную пробирку с красной или коричневой крышкой (с активатором свертывания) в объеме 2-4 мл. Цельную кровь необходимо подержать при комнатной температуре до момента, когда она свернется, затем убрать в холодильник. По возможности отделите сыворотку и переместите ее в пустую пробирку типа Эппендорф или шприц. Отбор помета: отбирается в стерильную посуду в количестве 1-10 г. Отбор соскобов, мазков со слизистых оболочек: материал отбирается стерильными зондами (урогенитальный зонд типа А) вращательными движениями, захватывая клетки эпителия. После забора конец зонда помещается в стерильную одноразовую микропробирку типа Эппендорф на 1,5 мл с 0,5 мл физ. раствора. Материал хранить при температуре от +4 до +8 °C.

Для лабораторных исследований отправляют живую птицу в начальной стадии острой формы болезни и свежие трупы. Клинически здоровую птицу используют для проверки возможности контактного заражения. Выделение возбудителя гемофилеза Avibacterium(Haemophilus) paragallinarum сложно. Для роста Avibacterium (Haemophilus) paragallinarum необходим V-фактор. Возбудитель растет при пониженной концентрации кислорода, факультативный анаэроб. При установлении диагноза на гемофилез применяют для лечения птицы сульфаниламиды и макролиды, проверенные в лабораторных условиях на активность против Н. paragallinarum [10].

Таким образом, точно диагностировать гемофилез возможно только в лабораторных условиях, поскольку признаки заболевания характерны и для других инфекционных болезней домашней птицы. Диагноз должен быть основан на анализе выделений и установлении типа возбудителя и отделять гемофилез от схожих по симптоматике заболеваний: лейкоза, пуллороза, пастереллеза, болезни Марека.



3. Биопрепараты, используемые в ветеринарных лабораториях

Первый этап в лечении гемофилеза - облегчить страдания несчастной курицы и вернуть ей возможность полноценно дышать. Правда, он уместен только в условиях приусадебного хозяйства, где кур не много: марлевым тампоном, смоченным в простейшем растворе (тетрациклина, фурацилина или даже чайной заварки) очистить забитые корочками носовые ходы птицы и шприцем ввести лекарственный препарат (отлично действуют пенициллин или стрептомицин). Безусловно, это хлопотно и занимает немало времени даже на маленькой ферме, но такая процедура дает неплохой эффект и спасает кур от дальнейших осложнений в области дыхательных органов.

В крупных птицеводческих хозяйствах можно поступить несколько иным образом: добавить препараты, к которым гемофильная палочка очень чувствительна, в воду и пропаивать кур этим «зельем» 5-7 дней. В качестве основной составляющей для лечебного раствора очень подойдут сульфаниламидные препараты: дисульфан, фталазол, этазол, сульфадимезин. Все перечисленные процедуры дают положительный эффект на первом, не осложненном вторичными признаками, этапе заболевания.
Если же дело зашло слишком далеко и гемофилез у кур протекает очень тяжело, необходимо принять срочные карантинные меры, избавиться от зараженного поголовья и провести максимально полную дезинфекцию птичников [7].

Для лечения инфекционного насморка кур используют сульфаниламидные препараты и антибиотики. Лучше всего использовать антибиотики на основе действующих веществ тизолин и триметоприм.

В ваших аптеках вы можете встретить множество средств на основе сульфаниламидов, тизолина и триметоприма, например: «Септовет», «Бровасептол», «Би-септим» и пр.

Схема лечения указана в инструкции конкретного препарата. Например:

- «Бровасептол-концентрат» выпаивают 7-10 суток (1 г/3 л воды)

- «Тимил-250» выпаивают 3-5 суток (1 г/1 л воды)

- «Би-септим» - 3-5 суток (1,5 г/1 кг корма).

Обязательно следует провести дезинфекцию курятника (к примеру, препаратом «Бровадез-плюс»). Яйца от кур, переболевших гемофилезом, не следует брать на инкубацию, употребляя только в пищевых целях. Больную птицу обязательно отсаживают от здоровой, а здоровую выпаивают теми же препаратами, но в меньших дозах - для профилактики. Неплохо было бы и больной, и здоровой птице дать витаминных препаратов, особенно витамина А.

Также для лечения применяют препарат ВИРСИН 437. Вакцина Приготовлена из инактивированного вируса болезни Ньюкасла птиц штамм "VH" и инактивированной бактерии Авибактерум парагалинарум серотипы A-B-C. По внешнему виду препарат представляет собой однородную эмульсию белого цвета. При хранении допускается отслоение масла в верхней части флакона. При встряхивании однородность эмульсии восстанавливается [5].

Итак, профилактика инфекционного ринита кур включает в себя соблюдение правил содержания и кормления маточного стада и молодняка. Молодняк необходимо содержать изолировано от взрослого стада. При посадке птицы в птичник придерживаются принципа одноразовой комплектации: «все пусто - все занято».



Заключение

В начале работы для проведения исследования были поставлены следующие задачи:

- рассмотреть технику безопасности при работе в лаборатории;

- исследовать деятельность ветеринарных лабораторий;

- изучить оборудование и методы;

- проанализировать материал для исследования;

- рассмотреть бактериологическую диагностику;

- изучить постановку биопробы;

- проанализировать серологическую диагностику;

- изучить аллергическую диагностику;

- проанализировать дифференциацию от исходного микроорганизма;

- рассмотреть применение ПЦР;

- изучить препараты, используемые в ветеринарных лабораториях.

В ходе проведенного исследования были сделаны следующие выводы.

Область деятельности лаборатории - это управляемый документ, содержащий:

- виды конкретных испытаний, оценок и калибровок/поверок, которые лаборатория квалифицирована проводить;

- перечень оборудования, которое лаборатория использует для осуществления указанной выше деятельности;

- перечень используемых методов и эталонов.

Ветеринарная лаборатория осуществляет: Участие в мониторинге здоровья животных, обеспечение своевременного установления причин их заболеваемости и гибели; участие в мониторинге и контроле ветеринарно-санитарного качества животноводческой продукции, кормов и кормовых добавок; изучение эпизоотической обстановки по особо опасным заразным болезням животных;

методическое руководство и контроль работы лабораторий ветеринарно-санитарной экспертизы на рынках;

участие в разработке нормативно-технической документации в области ветеринарии и животноводства.

С целью диагностики болезней животных и обеспечения безопасности в ветеринарно-санитарном отношении продуктов животного происхождения и кормов проводит многочисленные исследования.

Для бактериологической диагностики инфекционного ринита кур в лабораторию поступала живая птица разного возраста с признаками поражения респираторного тракта. Клинические признаки заболевания обычно проявлялись в виде водянистого истечения из носовых отверстий. У некоторых птиц, вследствие закупорки носовых отверстий, наблюдали ротовое дыхание с хрипами. Иногда у птиц наблюдали опухшие под - глазничные синусы и конъюнктивальные мешки. Для выделения A. paragallinarum из патологического материала использовали кровяной агар Колумбия (Becton, Dickinson and Co.), содержащий 5% дефибринированной крови барана с дополнительным посевом культуры негемолитичного штамма Staphylococcus aureus. Чистые культуры возбудителя выращивали на шоколадном агаре или сывороточном агаре, содержащем 20 мкг/мл НАД (AppliChem) и 5% сыворотки крови лошади. Культивирование бактерий проводили в течение 24-72 ч при температуре 37°С в условиях обычной атмосферы и повышенного содержания угле - кислого газа (8-10%). Морфологию бактерий изучали методом микроскопии мазков, окрашенных по Граму. Наличие капсулы у бактерий определяли в мазках, окрашенных по Гинсу. Флуоресценцию колоний изучали в косопроходящем свете под стереоскопическим микроскопом. Биохимические свойства изолятов изучали при по - мощи коммерческого набора API NH (bioMerieux) и по - севом на среды Гисса с моноуглеводами. Определение каталазы проводили на предметном стекле с 3%-м раствором перекиси водорода.



Список литературы

1. Белоусов В.И. Ветеринарная лаборатория / Белоусов В.Hi, Никитин И.Н. // Ветеринария. 2018. - №10. - С. 3-6.

2. Бессарабов Б.В. Болезни сельскохозяйственных птиц.- М.: Колос, 1970.- 183 с.

3. Борзова Л.Д. Ветеринарная микробиология и иммунология. Практикум: Учебное пособие / Л.Д. Борзова, Н.Ю. Черникова, В.В. Якушев и др. - СПб.: Лань П, 2016. - 368 c.

4. Гусев В.Ф., Кононов Г.А. Справочник по болезням сельскохозяйственных птиц.- Л.: Колос, 1969.- 367 с.

5. Корма и кормление сельскохозяйственной птицы / Р.Ф. Бессарабова, Л.В. опорова, И.А. Егоров и др. - М.: Колос, 1992. - 271с.

6. Коровин Р.Н., Байдевлятов А.Б., Бессарабов Б.Ф. Советы птицеводам.- Киев: Урожай, 1997.- 395 с.

7. Коровин Р.Н., Зеленский В.П., Грошева Г.А. Лабораторная диагностика болезней птиц.- М.: Агропромиздат, 1989.- 255 с.

8. Костюнина, В. Ф. Зоогигиена с основами ветеринарии и санитарии / В.Ф. Костюнина, Е.И. Туманова, Л.Г. Демидчик. - М.: Агропромиздат, 1991. - 480 c.

9. Микробиология: учебник / Под ред. Зверева В.В.. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2015. - 384 c.

10. Моисеенко, Л.С. Болезни сельскохозяйственной птицы. Диагностика, лечение и профилактика / Л.С. Моисеенко. - М.: Феникс, 2016. - 791 с.

11. Моисеенко, Л. С. Ветеринарный справочник фермера / Л.С. Моисеенко. - М.: Феникс, 2015. - 256 c.

Размещено на Allbest.ru