Лабораторная диагностика стафилококка

Размещено на http://www.allbest.ru/

Министерство образования и науки РС(Я)

ГБПОУ РС(Я) «Якутский медицинский колледж»

Курсовая работа

По дисциплине: микробиология

На тему: лабораторная диагностика стафилококка

Выполнила: студент 2 курса,

ФЛ 20-2, 1 бригада

Корякина София

Якутск 2021

Содержание

Введение

1. Классификация стафилококка

2. Морфология

3. Культивирование

4. Персистентные характеристики

5. Биохимические свойства

6. Резистентность

7. Эпидемиология

8. Лабораторная диагностика

9. Дифференциация

Заключение

Введение

Несмотря на то, что стафилококки принадлежат к числу наиболее легко обнаруживаемых и распознаваемых микроорганизмов, не требующих сложных диагностических приемов для их выявления, в практической работе микробиологи до сих пор испытывают определенные трудности при установлении их причинной роли в ряде различных заболеваний. С одной стороны, присутствие патогенных стафилококков, обнаруживаемое в исследуемом материале, не всегда является убедительным доказательством их этиологического значения. С другой, учитывая большое разнообразие проявлений биологической активности этих микробов, зависящее от разных, не всегда поддающихся учету факторов, широкую их изменчивость под влиянием лекарственных веществ и самого макроорганизма, довольно сложно бывает определить их потенциальную патогенность. Наконец, третья причина связана с тем, что стафилококки являются представителями нормальной микрофлоры из группы условно патогенных микроорганизмов и, наряду с непатогенными, патогенные представители обитают в организме животных и людей, распространяясь при этом весьма неравномерно на разные участки тела. Если выделение патогенного стафилококка, из крови больных и различных полостей тела, которые принято считать стерильными, в подавляющем большинстве случаев может служить доказательством его роли как возбудителя болезни, то присутствие стафилококков на слизистых зева, носа и т. д. даже при явном болезненном состоянии их требует большой осторожности исследователя в выводах об этиологии данных заболеваний. Поэтому, естественно, не может быть общих рекомендаций, как при диагностике различных стафилококковых инфекций, так и при микробиологических исследованиях участков тела и разных объектов внешней среды.

Актуальность изучения стафилококковых инфекций трудно переоценить. В связи с повсеместным ростом стафилококковых инфекций исследования лабораторной диагностики и профилактики стафилококковых заболеваний приобретает большое значение.

Цель работы заключается в изучении возбудителя стафилококка и их выявления в микробиологической диагностике.

Задачи:

· Изучить морфологию стафилококков.

· Изучить культуральные свойства стафилококков.

· Изучить биохимические свойства стафилококков.

· Охарактеризовать классификацию.

· Рассказать о методах лабораторной диагностики.

1. Классификация стафилококка

Стафилококк впервые выделен из гноя фурункула человека Л. Пастером в 1880 году, описан как возбудитель многих нагноительных процессов А. Огстоном , обстоятельно изучен Ф. Розенбахом . Стафилококки имеют шаровидную форму, располагаются в виде неправильных скоплений, напоминающих гроздья винограда. Тысячи людей ежегодно погибают по вине этого микроорганизма. Во вторую мировую войну около 50% раненых погибали от заражения крови, вызванного стафилококковой инфекцией. После открытия антибиотиков бороться со стафилококком стало проще. Но примерно с 1980 годов стафилококк начал приобретать устойчивость, нанося все больший вред человеку и животным. Кокки окрашиваются по Граму положительно (стафилококки и стрептококки) и отрицательно (гонококки и менингококки). Заболевания, вызываемые кокками, протекают в виде воспалительного процесса с гноем - гноеродные (пиогенные кокки). Степень органоторопности у них различная (резко выражена у гонококков и менингококков).

Кокки включают в себя 4 семейства: Micrococcoceae, Peaptococcoceae, Streptacoccocea , Neisorocea . Патогенные кокки относятся к классу Schysamicetes (бактерий), отряду Eubacteiiaies, семействам Micrococcaceae и Streptococcaceae, родам Staphylococcus и Streptococcus.

Они широко распространены в природе, обитают на кожном покрове и слизистых оболочках дыхательных путей, пищеварительных и половых органов животных. При снижении устойчивости организма являются причиной многих заболеваний. В патологии животных этиологическая роль стафилококков за последнее время значительно возросла. Эти микробы часто вызывают послеродовой эндометрит у коров, пневмонию, септицемию, энтерит у молодняка, абсцессы, флегмоны, артриты, гнойное воспаление ран. У кур данный микроб является возбудителем септического заболевания - стафилококкоза, сопровождающегося массовой гибелью птицы. У лошадей, свиней и реже у крупного рогатого скота стафилококки обусловливают развитие ботриомикоза, характеризующегося формированием в семенном канатике после кастрации гнойных очагов, окруженных плотной капсулой. По степени и патогенности Х. Гросс разделил стафилококков следующим образом: ) Безусловно-патогенные стафилококки, обладающие большой степенью летальности (гибели) для клеток крови; ) Условно-патогенные стафилококки, способные вызвать незначительный воспалительный процесс в виде гиперемии (покраснения) и инфильтрации (уплотнения); ) сапрофиты (обитатели поверхности кожи и внешней среды), практически не вызывающие поражений. Данная классификация является относительный, ибо патогенные проявления стафилококков зависят не только от их биологических свойств, но и от состояния организма животного, его устойчивости и реактивности. Также стафилококки можно разделить по пигментообразованию: ) золотистый стафилококк; ) белый стафилококк; ) лимонно-желтый стафилококк. В настоящее время различают Staph. aureus, Staph. epidermidis и Staph. saprophyticus. Из трех видов патогенным является Staphilococcus aureus. Выделено 40 фаготипов и 10 сероваров. Обычно эти серовары условно патогенны.

2. Морфология

Форма стафилококков шарообразная. В гнойном экссудате располагаются изолированно по одному, по два, цепочками или небольшими скоплениями. Диаметр кокков 0,5-1,5 мкм, жгутиков микробы не образуют. Неподвижны. В мазках из свежих бульонных культур имеют вид одиночных кокков или диплококков, в мазках из агаровых культур стафилококки расположены в виде отдельных скоплений, напоминающих гроздь винограда. В бульонных культурах могут встречаться инволюционные формы - крупные, неправильной формы или очень мелкие кокки. Спор стафилококки не образуют, но отдельные виды могут образовывать капсулу. Долгое время стафилококки характеризовались как микроорганизмы, лишённые способности образовывать капсулу. Однако с 80-х годов в литературе стали появляться сообщения о выделении штаммов Staphyloccocus aureus, формирующих капсулу или капсулоподобную (слизистую) субстанцию при культивировании in vitro. К настоящему времени известно, что потенцией к образованию капсулы обладают практически все штаммы золотистого стафилококка. Фенотипическое выражение этого признака для большинства культур зависит с одной стороны, от условий и места обитания в организме хозяина, а с другой - от условий культивирования in vitro. В этой связи разделение культур S. aureus на образующие истинную капсулу и псевдокапсулу не оправдано. Окрашиваются преимущественно по Граму положительно, исключая некоторые старые формы. При микроскопии наблюдается не прозрачная грубозернистая структура. Стафилококки образуют S-формы, реже R- и L- формы

3. Культивирование

Стафилококки хорошо растут на простых питательных средах при температуре 35 - 37°С с рН. 7,2 - 7,4, в аэробных и анаэробных условиях. Температурный диапазон от +10°С до +45°С. На агаре образуют круглые, с ровными краями несколько выпуклые колонии в диаметре от 2 до 5 мм, окрашенные в золотисто-желтый, лимонно-желтый или белый цвет. Пигментообразование особенно отчетливо наблюдается в культурах, выращиваемых на агаре, содержащем 10% молочного обрата, а также на картофеле в аэробных условиях при рассеянном свете. Для повышения интенсивности пигментации колоний картофельные культуры рекомендуют выращивать при температуре 25° С. В бульоне эти микробы растут довольно интенсивно, вызывая равномерное помутнение среды с рыхлым осадком. Кровяной агар - лучшая среда для выращивания стафилококков из патологического материала, на этой среде их колонии окружены широкой зоной гемолиза. В столбике желатина через 24- 26 ч дает обильный рост по уколу и разжижение среды и к 4-5-му дню, по ходу укола образуется воронка, заполненная жидкостью.

4. Персистентные характеристики

Регистрируемое в настоящее время изменение характера течения стафилококковых инфекций в сторону увеличения доли их затяжных и хронических форм определило повышенный интерес к изучению новой группы биологических характеристик стафилококков - факторов персистенции, контролирующих процесс длительного переживания бактерий в организме хозяина. В настоящее время выявлены и изучены следующие факторы персистенции: способность бактерий инактивировать лизоцим, определенная как антилизоцимная активность (АЛА), способность к инактивации бактерицидного компонента интерферона - "антиинтерфероновая" активность (АИА), описана специфическая инактивация бактериальными клетками системы комплемента - антикомплементарная активность (АКА). Установлена возможность использования факторов персистенции стафилококков для дифференциации резидентной и транзиторной микрофлоры при бактерионосительстве, при проведении микробиологического мониторинга с целью биоиндикации загрязнения воздушной среды, а также прогнозирования особенностей течения гнойно-воспалительных заболеваний. Однако обнаружение у микроорганизмов данных факторов является достаточно трудоемким и длительным, что ограничивает возможность их широкого использования, особенно при массовых исследованиях. В результате проведённых опытов была установлена возможность использования фузидина в качестве селективного компонента для выделения стафилококков с комплексом персистентных характеристик (АЛА, АИА, АКА). Концентрацию антибиотика для создания селективной питательной среды подбирали в серии опытов с добавлением различных концентраций препарата в среду Чистовича. Применение новой питательной среды с фузидином сокращает сроки проведения микробиологических исследований, позволяя выделять из исследуемого материала стафилококки с комплексом персистентных характеристик (АЛА, АИА, АКА), что обосновывает возможность ее использования при определении возбудителя (стафилококка) в смешанной микрофлоре при инфекционной патологии, в системе скрининговых исследований для выявления резидентного стафилококкового бактерионосительства при проведении биоиндикации загрязнения воздушной среды, а также прогнозирования течения и рациональной терапии гнойно-воспалительных заболеваний человека и животных в медико-ветеринарной практике. стафилококковый инфекция биохимический селективный

5. Биохимические свойства

Стафилококки разлагают с образованием кислоты без газа глюкозу, фруктозу, сахарозу, мальтозу, ксилозу, глицерин, манит, не разлагают салицин, дульцит, раффинозу. Ферментация маннита рассматривается как свойство патогенных видов стафилококков. Эти микроорганизмы продуцируют уреазу, каталазу, сероводород, восстанавливают нитраты в нитриты, не разлагают крахмал, инсулин, гиппуровокислый натрий, не образуют индол. Наличие у патогенных стафилококков протеолитического фермента обусловливает их свойство разжижать желатину и свернутую кровяную сыворотку, а также свертывать и пептонизировать обычное и лакмусовое молоко. При определении биохимических свойств стафилококков учитывают их ДНК-азиую активность, которой также обладают патогенные стафилококки. С этой целью применяют следующие компоненты: щелочной МПА (рН 8,4-8,6), раствор натриевой соли ДНК (в стерильной дистиллированной воде - 20 мг/1 мл воды) с добавлением нескольких капель 2% NaOH, хлористый кальций, 1 н. раствор соляной кислоты. Методика определения ДНК-азной активности следующая: к расплавленному охлажденному агару добавляют раствор натриевой соли ДНК (1-1,5 мг/мл), стерилизуют в водяной бане кипячением 30-40 мин. После охлаждения среды до 60°С к ней асептично добавляют хлористый кальций (0,8 мг/мл), разливают в чашки Петри по 10-15 мл. Когда агар застынет (уплотнится), его подсушивают в термостате, затем засевают на поверхность МПА легким прикосновением петли испытуемую культуру стафилококка, помещают в термостат на 18-20 ч (37°С). Получив рост колоний, в чашку вносят 4-5 мл соляной кислоты, которую сливают через 2-3 мин. Чашки просматривают, учитывают результат: просветленная зона вокруг колонии на мутном слое среды свидетельствует о продуцировании ДНК - азы . Сущность реакции в том, что ДНК под действием НСl выпадает в осадок. Продуцируемый патогенными стафилококками фермент ДНК-аза деполимеризирует ДНК, и образование осадка не происходит.

6. Резистентность

Устойчивость стафилококков к неблагоприятным факторам внешней среды высокая. Они превосходно переносят высыхание, оставаясь жизнеспособными в гнойном экссудате до 200 дней, в пыли до 100 - 120 дней, длительно сохраняются в навозе, замораживание их консервирует. Повторное замораживание и оттаивание не убивает стафилококк. Сохраняют свои свойства при длительном воздействии солнечных лучей. 50% фенол убивает микроорганизм за 30 минут. На питательных средах, в частности на полужидком агаре, сохраняются без пересевов более шести месяцев. При нагревании, например в молоке, погибают при температуре 70 °С через 1 ч, при 85°С - через 30 мин, кипячение убивает их мгновенно. Из дезинфицирующих веществ 1%-ный раствор формалина и 2%-ный раствор едкого натрия убивает этих микробов в течение 1 ч, а 1%-ный раствор хлорамина - в течение 2-5 мин. Наиболее чувствительны стафилококки к кристаллвиолету, пиоктанину, малахитовой зелени, которые в концентрации 1 : 300 000 обладают выраженным бактериостатическим действием, что позволяет с успехом использовать эти краски при стафилококковых поражениях кожи, фурункулезе, нагноении ран. Весьма устойчивы стафилококки к антибиотикам, особенно пенициллину, стрептомицину, а также сульфаниламидным препаратам. Учитывая высокую устойчивость стафилококков, их используют в качестве тест - объекта при испытании различных бактерицидных веществ - новых антибиотиков или дезинфицирующих веществ.

7. Эпидемиология

Развитие стафилококковых инфекций в большинстве случаев связывается с предшествующим носительством стафилококков в различных экологических нишах. S. aureus обитает главным образом на слизистой носа, полости рта, реже - в желудочно-кишечном тракте, во влагалище, в подмышечных впадинах и на коже промежности. Факторами риска развития манифестных форм стафилококковой инфекции у носителей являются: иммунодефицитные состояния, нарушение целостности кожи и слизистых, инвазивные вмешательства и угнетение нормальной микрофлоры кожи и слизистых. Наиболее восприимчивы к стафилококковым инфекциям новорожденные и дети первых месяцев жизни. Основным источником инфицирования детей S. aureus в родильных домах и детских стационарах являются медицинские работники - носители патогена на слизистой верхних дыхательных путей и коже. Реже источником инфекции являются матери (5-14%) или больные различными формами стафилококковой инфекции. Передача инфекции в основном происходит воздушно-капельным путем и через загрязненные руки. В первые дни жизни S. aureus изолируется со слизистой носа у 10-18% новорожденных, к 6 неделе частота выделения данного микроба достигает 40%. Дети, выписанные из родильных домов, в течение нескольких месяцев могут оставаться носителями тех же фаготипов стафилококков, которыми они были инфицированы в первые дни жизни. У детей старше года частота носительства S. aureus на слизистой носа достигает 52,3%. На слизистой зева S. aureus обнаруживается у 39,4% здоровых людей. В составе кишечной микрофлоры S. aureus обнаруживается у 40-46% здоровых детей первого года и у 9-14,3% детей 2-3 года жизни. Носительство стафилококков имеет клиническое и эпидемиологическое значение. Установлено, что у новорожденных детей - носителей стафилококков, чаще развиваются манифестные формы стафилококковой инфекции. Вероятность развития сепсиса у новорожденных детей в 3 раза выше у носителей S. aureus в носовых ходах и в 10 раз выше при сочетанном носительстве этих микроорганизмов в носовых ходах и пупочной ранке по сравнению с неносителями. Носительство S. aureus на слизистой носа и зева у детей раннего и дошкольного возраста ассоциируется с рецидивирующими инфекциями верхних дыхательных путей. Клиника. Клинические варианты инфекции, вызываемые S. aureus, разнообразны и включают более 100 нозологических форм от стафилодермий до септических эндокардитов и синдрома токсического шока. Различают локализованные и генерализованные формы стафилококковой инфекции. В большинстве случаев стафилококковая инфекция протекает в локализованных формах (омфалит, везикулопустулез, псевдофурункулез, ларинготрахеобронхит, энтероколит и др.) Омфалит - воспаление дна пупочной ранки, кожи, подкожно-жирового слоя вокруг пупка и пупочных сосудов. Характерно длительное мокнутие пупочной ранки, гнойное отделяемое, выпячивание пупка, гиперемия и отечность кожи вокруг него. При прогрессировании воспалительного процесса возможно развитие пупочного сепсиса. Везикулопустулез - своеобразное поражение кожи новорожденных, проявляющееся у ребенка на 5-6 день жизни в виде пузырьков, наполненных мутным содержимым, располагающихся на волосистой части головы, туловище и складках кожи. Состояние больного зависит от обилия высыпаний. Псевдофурункулез (множественные абсцессы кожи) развиваются у детей раннего детского возраста с измененной иммунологической реактивностью. На коже появляются инфильтраты диаметром 0,5-1 см, которые в дальнейшем нагнаиваются. Заболевание протекает длительно, сопровождается лихорадкой, симптомами интоксикации, падением массы тела. Пемфигус (пузырчатка новорожденных) - наиболее частая и контагиозная форма стафилодермии. Заболевание протекает с умеренно выраженными симптомами интоксикации и характеризуется появлением на коже живота, шеи, крупных складок пузырей различной величины, наполненных серозно-гнойным содержимым. После вскрытия элементов образуется эрозивная поверхность. У детей старшего возраста стафилококковое поражение кожи обычно проявляется фолликулитом, фурункулезом, реже - карбункулом, гидраденитом. Заболевания дыхательных путей. Возможна любая форма поражения (назофарингит, синуситы, ангина, ларинготрахеиты, пневмония). Для стафилококковой пневмонии характерен выраженный токсикоз, дыхательная недостаточность, склонность к абсцедированию и высокая частота плевральных осложнений (пневмоторакс, пиопневмоторакс, эмпиема плевры). Заболевания желудочно-кишечного тракта. Наиболее часто стафилококковые поражения ЖКТ развиваются у детей первых месяцев жизни, которые составляют 64,9% от общего числа заболевших. Стафилококковые энтероколиты в этом возрасте характеризуются затяжным течением и длительным бактериовыделением S. aureus. У новорожденных на фоне септицемии, обусловленной S. aureus, возможно развитие язвенно-некротических энтероколитов с перфорацией кишечника. Сепсис. S. aureus занимает лидирующее место в этиологической структуре сепсиса у детей разных возрастных групп. Чаще развивается у новорожденных и недоношенных детей. Летальность достигает 20-25%. У недоношенных и новорожденных детей симптомы сепсиса выражены нерезко и могут быть неспецифичными: гипотермия, субфебрилитет, отказ от груди, плоская весовая кривая, бледно-серый цвет и мраморность кожных покровов, похолодание конечностей, беспокойство или патологическая сонливость, гепатоспленомегалия. Могут развиться дыхательные расстройства, желтуха, геморрагическая или гнойничковая сыпь. Характерно длительное волнообразное течение заболевания. У детей старшего возраста клиническая картина сепсиса более типична: септическая лихорадка с ознобами, гнойные очаги инфекции (пневмония, кардит, энтероколит, пиелонефрит и др.), тахикардия, склонность к гипотензии и коллапсу, гепатоспленомегалия. При тяжелом сепсисе развивается полиорганная недостаточность, септический шок. Характерна выраженная воспалительная реакция крови. Заболевания ЦНС. Среди всех случаев гнойных менингитов на стафилококковые менингиты приходится 2-3%. Стафилококковый менингит чаще развивается у детей первых месяцев жизни и обычно имеет вторичное происхождение на фоне стафилококкового сепсиса. Характерна склонность к затяжному волнообразному течению. Возможно поражение 3, 5, 7 и 11 пары черепно-мозговых нервов и развитие абсцессов мозга. Заболевания костей и суставов. S. aureus чаще всего служит этиологическим фактором при остеомиелите и гнойном артрите у детей. Остеомиелит следует подозревать у каждого лихорадящего ребенка с болями в руках или ногах и лейкоцитозом. S. aureus также вызывает 70-80% случаев септических артритов у подростков. Среди патологии, обусловленной золотистым стафилококком, особое место занимают поражения, вызванные действием токсинов, - синдромы токсического шока, «ошпаренной кожи» и пищевые отравления. Синдром токсического шока (СТШ). Пусковым моментом для развития заболевания является образование S. aureus специфических токсинов (TSST-1, реже - энтеротоксинов В и С). Чаще заболевание возникает на фоне менструации у девочек, молодых женщин, которые пользуются тампонами. СТШ может развиться на фоне гнойных ран, фарингитов, абсцессов и других очагов стафилококковой инфекции. Клинически проявляется высокой лихорадкой, рвотой, диареей, скарлатиноподобной экзантемой с последующей десквамацией на ладонях и подошвах через 1-2 недели, а также снижением артериального давления с развитием шока и полиорганной недостаточности (почечная или печеночная недостаточность, тромбоцитопения, нарушение ментального статуса). Синдром «ошпаренных младенцев» (эксфолиативный дерматит Риттера) наблюдается у новорожденных, инфицированных штаммами S. aureus, продуцирующими эксфолиатины. Заболевание начинается бурно. Характерно формирование очагов эритемы на коже с последующим образованием (через 2-3 суток) больших пузырей (как при термических ожогах) и обнажением мокнущих эрозированных участков. Стафилококковый синдром «ошпаренной кожи» представляет собой тяжелую инфекцию, вызванную S. aureus, которая характеризуется образованием на коже крупных пузырей и распространенным шелушением. Инфекция развивается у старших детей и значительно реже у взрослых. В большинстве случаев заболевание начинается с подъема температуры и появления скарлатиноподобной кожной сыпи. Затем образуются крупные пузыри и появляется распространенное шелушение кожи. Известный также под названием «токсический эпидермолиз кожи», этот синдром (синдром Лайела) может вызываться другими возбудителями или быть связан с применением лекарственных препаратов. Возможно тяжелое геморрагическое поражение слизистых оболочек органов дыхания и верхних отделов пищеварительного тракта. Пищевые отравления развиваются в результате употребления инфицированной S. aureus пищи, содержащей энтеротоксин, и характеризуется коротким инкубационным периодом (2-6 часов) и непродолжительным течением. Клинически проявляется рвотой, абдоминальными болями и водянистой диареей. Возможно развитие дегидратации. В настоящее время определена этиологическая роль коагулазоотрицательных стафилококков в развитии гнойно-воспалительных процессов у детей. Подавляющее число заболеваний, вызываемых КОС, имеют нозокомиальный характер и развиваются у новорожденных и пациентов со сниженной резистентностью. КОС в настоящее время признаны основными возбудителями внутрибольничных инфекций в палатах интенсивной терапии новорожденных клиник США и Европы. Факторами риска развития КОС-инфекций являются: использование внутрисосудистых катетеров, недоношенность, длительная госпитализация. Установлена этиологическая роль S. epidermidis как в развитии локализованных ГВЗ (пиодермии, конъюнктивиты, инфекции мочевыводящих путей), так и тяжелых генерализованных процессов у новорожденных детей в 24,8-44,7% случаев. Частота выделения S. epidermidis при септицемиях у детей первого года жизни достигает 27-38,1%, у недоношенных детей - 62%. Массивная контаминация кишечника эпидермальным стафилококком может стать причиной развития у недоношенных детей некротических энтероколитов.

8. Лабораторная диагностика

Лабораторная диагностика стафилококковых инфекций включает выделение возбудителя из гноя, мокроты, слизи из зева и носа, спинномозговой жидкости, фекалий и других биологических материалов. Наибольшую значимость имеет выделение культур стафилококков из стерильных в норме биосубстратов (кровь, СМЖ, моча, плевральный экссудат). Даже однократное выделение из крови S. aureus редко бывает результатом случайного загрязнения пробы. Для экспресс-идентификации золотистого стафилококка (S. aureus) применяют тест латекс-агглютинации с использованием коммерческих наборов частиц латекса, нагруженных AT. Серологические исследования (РПГА, ИФА) в диагностике стафилококковых инфекций принципиального значения не имеют. Выделенные штаммы стафилококков тестируют на резистентность к антибиотикам. Первым этапом определения чувствительности стафилококков к антибиотикам должен быть тест на чувствительность к оксациллину, который проводится дискодиффузионным методом. Стафилококки, проявляющие устойчивость к оксациллину, следует считать устойчивыми к действию всех в-лактамных антибиотиков, включая цефалоспорины. Для определения этиологической роли стафилококков в различных патологических процессах при жизни животных исследуют раневой экссудат, гной абсцессов, ран, молоко при маститах, выделения из половых органов при эндометрите, кровь из яремной вены при, септицемии. Из патологического материала готовят мазки, окрашивают фуксином Пфейфера, по Граму и микроскопируют. Одновременно делают посевы на кровяной и молочно-солевой агар в чашки Петри. Из выросших колоний производят отсев на МПА в пробирках для выделения чистой культуры и ее идентификации, ставят реакцию плазмокоагуляции с чистой культурой, для чего кровь кролика смешивают с 5%-ным раствором лимоннокислого натра. Полученную плазму разводят 1:4 физраствором, разливают по 0,5 мл в стерильные пробирки, засевают исследуемой культурой и ставят в термостат (37°С) на 3 ч. Реакцию учитывают через 1-2-3-18 ч. Свойство свертывать цитратную плазму крови кролика является характерной особенностью патогенных стафилококков. Наличие гемолитического токсина стафилококков определяют по следующей методике: выделенную культуру выращивают на казеиновом бульоне в течение 5 суток в эксикаторе с содержанием в атмосфере выращивания 20 % СО2. Затем культуру центрифугируют, верхний слой отсасывают, разводят физраствором 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320, разливают в пробирки по 1 мл и добавляют по одной капле эритроцитов кролика, трижды отмытых физраствором и разведенных 1: 2. Пробирки выдерживают в термостате при 37°С 1 ч и такое же время при комнатной температуре и учитывают наличие гемолиза. Потенциальную гемолитическую способность стафилококков выявляют на кровяном агаре подобно КАМП - тесту. Дермонекротические свойства определяют на кроликах, для чего готовят взвесь стафилококков в физрастворе с содержанием в 1 мл 2 и 4 млрд. микробов и вводят внутрикожно кролику в выбритую кожу в дозе 0,1 мл. Наличие некроза в местах инъекции учитывают на четвертые сутки. Фаготипирование стафилококков проводят набором 22 типовых стафилококковых бактериофагов, которые по литическому родству составляют четыре группы. Размножают каждый тип фага на соответствующем штамме стафилококка. Для типирования выделенной культуры ее выращивают на глюкозном бульоне, затем высевают на глюкозный агар в чашку Петри, разделенную на четыре квадрата, в каждый из них наносят петлю бактериофага, принадлежащего к одной из указанных выше групп. С помощью фаготипирования можно идентифицировать стафилококки, выделенные из различных источников.

9. Дифференциация

Свойства Вирулентные Авирулентные

Гемолитические + -

Плазмокоагуляция + -

Дермонекротические + -

А-белок на поверхности + -

б - токсин + -

Разжижение желатины + -

Ферментация маннита + -

Образование пигмента Образуют золотистый или белый Образуют лимонно - жёлтый или белый

В настоящее время для идентификации стафилококков разработаны диагностические тест-системы, выпускаемые у нас в стране и за рубежом: ПБДС - пластины биохимические, дифференцирующие стафилококки, «STAPHYtest» («Lachema», Чехия), «API STAPH BioMerieux» (Франция), «Automicrobic VITEK» (США) и др. Система «STAPHYtest» представляет собой полистироловую пластину с 96 лунками. В них внесены высушенные реактивы, позволяющие с помощью восьми тестов идентифицировать все стафилококки и некоторые микрококки. При этом изучают способность утилизировать глюкозу, сахарозу, трегалозу, манит, наличие уреазы, фосфатазы, нитратредуктазы, образования ацетилметилкарбинола. На одной пластине идентифицируют 12 штаммов стафилококков. В ячейки планшета вносят по 0,1 мл бактериальной суспензии в физиологическом растворе, приготовленной из одной изолированной суточной колонии с d = 2-3 мм с плотной питательной среды (МПА, АГВ, кровяного агара). После инокуляции планшеты накрывают предохранительной плёнкой и инкубируют в течении 18-24 часов при температуре 37 °С. Видовую принадлежность стафилококков определяют в соответствии с таблицей для идентификации прилагаемой к инструкции. С помощью международного набора диагностических стафилококковых бактериофагов проведено фаготипирование коагулазоположительных штаммов стафилококков. Таким образом, полученные результаты позволили установить, что выделенные от больных коагулазоположительные стафилококки относятся ко всем трём видам, имеющим значение в патологии. Наибольшую часть (80,9 %) составляют штаммы S. аureus. Среди коагулазоотрицательных стафилококков преобладает S. epidermidis, который встречается почти в половине случаев, и примерно с одинаковой частотой - S. hominis, S. caseoliticus и S. auricularis. Они выделяются почти равномерно из разных видов патологического материала. (см таблицу) Система «STAPHYtest» может быть использована в практической работе лаборатории клинической микробиологии, однако для точной дифференциации некоторых видов коагулазоотрицательных стафилококков необходимо использовать дополнительные тесты.

Заключение

Стафилококк был и остаётся коварной инфекцией. Стафилококковые инфекции являются одной из наиболее актуальных проблем современного животноводства. Вопросы профилактики и лечения данного заболевания, несмотря на несомненные успехи, достигнутые в других отраслях ветеринарной науки и практики, остаются открытыми. В связи с его постоянной изменчивостью, следует уделять больше внимания изучению свойств возбудителя. Необходимы новые среды для выделения штаммов, резистентных к антибиотикам. Следует уделять больше внимания: морфологии, биохимическим и культуральным свойствам возбудителя. Необходимо тщательнее изучать изменчивость возбудителя и искать новые методы борьбы с ним. Принципиальное значение имеет профилактика инфекций, вызванных стафилококами. Следует соблюдать общеклинические мероприятия, контроль за средой и персоналом.

Размещено на Allbest.ru