Модификация схемы выделения бактериофагов бактерий klebsiellapneumoniae

Размещено на http://www.allbest.ru/

Модификация схемы выделения бактериофагов бактерий klebsiellapneumoniae

Садртдинова Г.Р.

Актуальность исследования. Проблема клебсиеллезной инфекции, представителями которой являются бактерии рода Klebsiella, достаточно актуальна в настоящее время. Патогенные варианты этих микроорганизмов, способны вызывать у животных и людей самостоятельные заболевания, характеризующиеся поражением желудочно-кишечного тракта и респираторных органов [1,3].

Исследования по изучению бактериофагов, (уже с 1915 года) позволили широко использовать их для решения многих задач в микробиологии, вирусологии, генетике, биохимии, иммунологии, радиобиологии, биотехнологии и других областях биологических исследований. Фаги являются одним из наиболее подходящих объектов для глубокого изучения ряда вирусологических проблем и, в частности, взаимоотношения вируса с клеткой-хозяином. При их использовании, возможно, моделировать как явно выраженную продуктивную инфекцию, так и потенциальное вирусоносительство в форме лизогении.

Исследования с использованием фагов позволили раскрыть механизмы таких фундаментальных биологических процессов, как репликация ДНК, рекомбинация, транскрипция и генная регуляция. Благодаря изучению фагов открылись также возможности разработки многих важных методов и направлений генной инженерии [2].

Имеющаяся на сегодняшний день схема выделения бактериофагов бактерий рода Klebsiella, признанная как классическая, имеет ряд недостатков, основным из которых является ее трудоемкость (большой расход сред, времени). Поэтому цель данного исследования заключалась в модификации схемы выделения бактериофагов бактерий Klebsiellapneumoniae. фаг бактерия кlebsiella

Материалы и методы исследования. Основным этапом наших исследований стало выделение бактериофагов из объектов санитарного надзора. Материалом служили: сточные воды и образцы земли фермерского хозяйства (Тереньгульский р-он, Ульяновской области), кровь МРС (больные свиньи), фекалии (куриные).

Все образцы (4 образца) фильтровали через бумажный фильтр для освобождения от механических примесей. В колбу, содержащую стерильный мясопептонный бульон (МПБ) в количестве 50 миллилитров, вносили 20 мл фильтрата каждого образца и по 1 мл всех имеющихся у нас штаммов бактерий Klebsiellapneumoniae(13 музейных штаммов кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ Ульяновской ГСХА им.П.А.Столыпина).Таким образом, каждый образец испытывался на наличие фагов ко всем имеющимся культурам бактерий Klebsiellapneumoniae. Колбу помещали в термостат и инкубировали в течение 24 часов при 37 °С. После этого содержимое колбы разливали в стерильные пробирки, центрифугировали, одну из пробирок с супернатантом обрабатывали хлороформом (в разведении 1 : 10), а вторую прогревали в водяной бане при 58 - 60 °С в течение 30 минут. Такая обработка смеси позволяет выделить термоустойчивые или хлороформустойчивые фаги.

Результаты исследования.Полученные пробы исследовали методом «стекающей» капли. Для этого 13 чашек с мясопептонным агаром (МПА) были «разбиты» на 8 секторов (на 4 из которыхнаносили супернатант обработанный температурой, а на следующие 4 сектора обработанный хлороформом). Чашки ставили в термостат на 18 - 24 часа при 37 °С. Наличие негативных колоний или зон лизиса на газоне роста индикаторной культуры свидетельствовало о присутствии в исследуемом материале бактериофага (таб.1, рис.1).

Табица 1

Результаты исследования методом «стекающей» капли

В результате проведенных исследований было установлено, что бактериофаг обнаруживался в образце с землей. Причем, данный фаг характеризовался устойчивостью к обработке хлороформом и не термостабилен. Индикаторной культурой данного фага является штамм K. pneumonia №81/1.

Рис.1.Выделение бактериофагов бактерий Klebsiellapneumoniae(методом «стекающей» капли.

Разделение чашки с МПА на сектора, позволило нам одновременно происследовать 4 образца патологического материала всех 13 клебсиеллезных штаммов. Результаты были наглядно представлены в сравнении, что облегчило формулировку выводов.

Библиографический список

1. Бульканова, Е.А. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Klebsiella, конструирование на их основе биопрепарата:автореф. дис. … канд. биол. наук: 03.00.07,03.00.23 / Бульканова Елена Анатольевна. - Саратов, 2006. - 20 с.

2. Каттер, Э. Бактериофаги. Биология и практическое применение / Э. Каттер, А. Сулаквелидзе // М.: Научный мир, 2012.- 640 с.

3. Ляшенко, Е.А. Разработка и применение фагового биопрепарата для диагностики клебсиеллезной инфекции / Е.А. Ляшенко, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // I-я международная научно-практическая интернет-конференция «Современные направления в диагностике, профилактике и терапии заболеваний животных» «Вестник ветеринарии», Том - 59. - Ставрополь, 2011. - с. 90-92.

Размещено на Allbest.ru