Исследование действия синтетического аналога люлиберина на развитие яичников трехиглой колюшки

Размещено на http://www.allbest.ru/

ИССЛЕДОВАНИЕ ДЕЙСТВИЯ СИНТЕТИЧЕСКОГО АНАЛОГА ЛЮЛИБЕРИНА НА РАЗВИТИЕ ЯИЧНИКОВ ТРЕХИГЛОЙ КОЛЮШКИ

Гашкова Л.В., Подушка С.Б., Николаев С.В.

Введение

В последнее время все более широкий размах получают исследования возможностей применения синтетических аналогов люлиберина в рыбоводстве. При этом обычно преследуется цель - добиться получения зрелых половых продуктов от производителей, т.е. стимулировать овуляцию у самок и спермиацию у самцов [1, 5-9]. Однако во многих случаях не менее актуальной бывает и противоположная задача - подавить развитие половых желез рыб [3]. Одним из возможных путей решения этой задачи может стать использование для подавления гаметогенеза синтетических аналогов-антагонистов люлиберина.

В литературе сведений о действии аналогов-антагонистов люлиберина на рыб мы не нашли, за исключением одной работы, выполненной на миноге Petromyzon marinus. У этого вида рыбообразных аналог-антагонист, в отличие от аналога-агониста, практически не влиял на уровень эстрадиола в крови и не вызывал овуляцию [12]. .

В настоящей работе изучалось действие однократных инъекций синтетического аналога люлиберина (а-ЛГРГ), имеющего следующую последовательность аминокислот:

pGlu-D-Phe-Trp-Ser-Tyr-D-Phe (NO₂₎-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂ на развитие яичников трехиглой колюшки Gasterosteus aculeatus. Известно, что аналоги, содержащие D-Phe во втором положении и D-аминокислоты в шестом положении, проявляют антагонистические свойства [10], являясь конкурентными ингибиторами люлиберина. Использованный нами препарат синтезирован на кафедре химии природных соединений Ленинградского государственного университета. В тестах на крысах этот аналог проявлял антиовуляторную активность.

Материал и методика

люлиберин колюшки яичник гаметогенез

Трехиглую колюшку отловили в восточной части Финского залива у пос. Большая Ижора и в течение двух суток до начала опыта содержали при температуре 4°С. В эксперименте использовали одних самок, которых в зимний период можно отличить от самцов по цвету дна ротовой полости (у самцов - оранжевое, у самок - серое). Опыт начат 23 февраля 1987 г. Колюшки были разделены на четыре группы. Рыбы первой группы были вскрыты в начале опыта - они служили для характеристики исходного состояния яичников. Рыбам трех других групп в тот же день были сделаны внутрибрюшные инъекции по 0,1 мл следующих препаратов: дистиллированной воды, водного раствора а-ЛГРГ и водного раствора а-ЛГРГ с добавкой пимозида. Доза а-ЛГРГ составляла 20,8 мкг на самку. Источником пимозида служил препарат орап (химический завод Гидеон Рихтер А.О., Венгрия), выпускаемый в виде таблеток, содержащих по 1 мг пимозида. Перед инъецированием таблетки растирали в ступке и добавляли водный раствор а-ЛГРГ с таким расчетом, чтобы в 0,1 мл суспензии содержалось 50 мкг пимозида и 20,8 мкг а-ЛГРГ, что соответствовало дозе, вводимой одной самке. Разные группы рыб метили подрезанием спинных и брюшных колючек. В течение опыта, длившегося две недели, рыбы находились в общем аквариуме емкостью 60 л с постоянно аэрируемой водой. Аквариум непрерывно освещался лампой накаливания мощностью 100 Вт, расположенной на расстоянии 40 см от поверхности воды. Температура воды в течение первых двух суток опыта была поднята до 14° и в дальнейшем в течение всего срока составляла 14-15°С. Ежедневно рыбу кормили живым мотылем и удаляли грязь из аквариума. Гибели колюшек в течение опыта не наблюдалось.

Абсолютная длина использованных в опыте рыб колебалась от 51 до 73 мм (в среднем 65 мм), масса тела варьировала от 0,9 до 3,6 г (в среднем 2,3 г). Особей, зараженных Schistocephalus sp., выбраковывали, поскольку этот паразит угнетает развитие половых желез. О состоянии яичников судили по коэффициенту зрелости (процентному отношению массы половых желез к массе тела рыбы без внутренностей) и по максимальному диаметру ооцитов. Диаметр ооцитов измеряли с помощью окуляр-микрометра под бинокулярным микроскопом при увеличении 16Ч на материале, фиксированном в 4%-ном формалине.

Результаты

Сведения о максимальном диаметре ооцитов и коэффициенте зрелости рыб в различных опытных группах представлены в таблице. По сравнению с исходным состоянием во всех вариантах опыта произошло достоверное увеличение коэффициента зрелости, и максимального диаметра ооцитов. Статистически достоверные различия между опытными группами, получившими инъекции различных препаратов, отсутствуют.

Коэффициент зрелости и максимальный диаметр ооцитов у самок трехиглой колюшки в.различных опытных группах

Обсуждение

Цель настоящей работы - установить, вызывают ли инъекции а-ЛГРГ тормозящее воздействие на развитие яичников рыб. Самки трехиглой колюшки удобны как тест-объект по следующим соображениям. Во-первых, в условиях Ленинградской области это один из самых многочисленных и легко доступных видов рыб. Во-вторых, состояние яичников у колюшек в течение зимних месяцев относительно однородно. В-третьих, регулируя продолжительность светового дня и температуру воды, легко можно управлять темпом развития половых желез этих рыб. И, наконец, в-четвертых, трехиглая колюшка уже достаточно хорошо освоена нами как экспериментальный объект [2].

Предыдущее исследование показало, что при содержании самок трехиглой колюшки в феврале при температуре 14-17°С и непрерывном освещении первые рыбы полностью созревают (овуляция и выметывание икры) за 18-20 суток [2]. Поэтому выбранный нами двухнедельный срок опыта был вполне достаточен для того, чтобы в яичниках подопытных рыб начался вителлогенез. Предполагалось, что в случае эффективности а-ЛГРГ, он должен оказать угнетающее воздействие на оогенез, которое можно будет зафиксировать по различиям в коэффициентах зрелости и в диаметрах ооцитов опытной и контрольной групп рыб. Пимозид является антагонистом допамина, которому приписывается роль гонадотропин-релизинг ингибирующего фактора. Совместное введение пимозида и аналога-агониста люлиберина, как показано на некоторых видах рыб, часто оказывается значительно более эффективным, чем введение одного аналога [4, 8, 11]. Одновременное инъецирование пимозида и аналога-антагониста может дать труднопредсказуемый результат. С одной стороны, известно, что введение одного только пимозида приводит к увеличению концентрации гонадотропного гормона в сыворотке крови [4], т.е. должно оказывать стимулирующий эффект на оогенез. С другой стороны, пимозид должен усиливать действие вводимого совместно с ним аналога, а поскольку в нашем случае инъецировался аналог-антагонист, эффект на оогенез мог быть угнетающим.

Результаты настоящего исследования показали, что а-ЛГРГ при использованных нами дозировках и схеме введения не оказал угнетающего действия на оогенез трехиглой колюшки. Как у рыб контрольной группы, получивших инъекцию дистиллированной.воды, так и у рыб, которым был введен один а-ЛГРГ или а-ЛГРГ в сочетании с пимозидом, произошел существенный сдвиг в состоянии яичников по сравнению с началом опыта (таблица). Однако статистически достоверных различий между группами инъецированных рыб не установлено. Отсутствие ингибирующего эффекта а-ЛГРГ на оогенез трехиглой колюшки может быть обусловлено одной из следующих причин:

- использованный а-ЛГРГ не обладает активностью по отношению к рыбам данного вида;

- использованный а-ЛГРГ неэффективен при примененных дозировках;

- действие препарата кратковременно и к концу опыта нивелировалось.

В дальнейшем целесообразно испытать.действие многократного введения а-ЛГРГ на оогенез трехиглой колюшки.

Литература

1. Гончаров Б.Ф. Синтетический аналог люлиберина - новый перспективный стимулятор созревания половых продуктов осетровых рыб // Докл. АН СССР. 1984. Т.276. № 4.С.1002-1006.

2. Подушка С.Б. Некоторые особенности созревания в экспериментальных условиях самок трехиглой колюшки Gasterosteus aculeatus L. в период зимовки. Л. 1976. 11 c. Рукопись деп. в ВИНИТИ. № 3444-76. Деп. от 28.09.76.

3. Brown L.A., Roberta R.I. Production of neutered salmonids // Comp. Biochem. and Physiol. 1982. Vol.B.73. N 1. P.177-180.

4. De Leeuw R., Resink J.W. e. a. Pimozide modulates the luteinizing hormone-releasing hormone effect on gonadotropin release in the African catfish, Clarias lazera // Gen. and Comp. Endocrinol. 1985. Vol.58. N 1. P.120-127.

5. Horvath L., Peteri A., Seprodi J. Elцzetes kцzlemeny LH-RH keszi tmenyek felhassnalassarol halak ovulaciojanak indukalasara // Halaszat. 1983. R.29. N 5. S.134.

6. Kouril J., Barth T. e.a. Pokusy s pouzitim LH-RH a jeho analogu k dosazeni ovulace jikernacek lina, amura, karpa a sumce // Bul.VURH Vodnany. 1983. R.19. C.2. P.3-16.

7. Lam T.J. Application of endocrinology to fish culture // Can. J. Fish. and Aquat. sci. 1982. Vol.39. N 1. P.111-137.

8. Lin H.-R., Peng Ch. e.a. Induction of ovulation in the loach (Paramisgurnus dabrianus) using pimozide and (D-Ala⁶ -Pro⁹-N-ethylamid)-LHRH // Aquaculture. 1985. Vol.46. N 4. p.333-340.

9. Lin H.-R. Polyculcural system of freshwater fish in China // Can. J. Fish. and Aquat. sci. 1982. Vol.39. N 1. P.143-150.

10. Schally A.V., Amiura A., Coy D.H. Recent approaches to fertility control based on derivatives of LH-RH // Vitamins and Hormones. 1980. Vol. 38. P.258-323.

11. Sokolowska M., Peter R.E., Nahorniak C.S. The effects of different doses of pimozide and (D-Ala⁶ -Pro⁹-N-ethylamid)-LHRH on gonadotropin release and ovulation in female goldfish // Can. J. Zool. 1985. Vol.63. N 6. P.1252-1256.

12. Sower S.A., Dickhoff W.W. e.a. Ovulatory and steroidal responses in the lamprey following administration of salmon gonadotropin-releasing hormone // Can. J. Zool. 1985. Vol.61. N 12. P. 2653-2659.

Размещено на Allbest.ru