Использование технологии дезоксирибонуклеиновой кислоты для оценки воспроизводительных качеств свиней

Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи

06.02.07 - Разведение, селекция и генетика

сельскохозяйственных животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени

кандидата биологических наук

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДНК - ТЕХНОЛОГИИ ДЛЯ ОЦЕНКИ ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНЫХ КАЧЕСТВ СВИНЕЙ

Нургалиев Фаннур Мударисович

Казань - 2013



Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»

Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент Ахметов Тахир Мунавирович

Официальные оппоненты: Мухаметгалиев Нурвахит Нургалиевич, доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», заведующий кафедрой кормления с.-х. животных

Фаизов Тагир Хадиевич, доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности, главный научный сотрудник научно - инновационного центра

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Ижевская государственная сельскохозяйственная академия»

Защита диссертации состоится « » декабря 2013 г. на заседании диссертационного совета Д.220.034.02 при ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» по адресу: 420029, г. Казань, Сибирский тракт, 35; тел. (8432) 73-96-17.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», автореферат размещен в сети интернет на сайтах http: //www.vak.ed.gov.ru/ и //www.ksavm.senet.ru/

Автореферат разослан « » ноября 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор Гильмутдинов Рустам Якубович



ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Свиноводство - динамично развивающаяся отрасль животноводства, однако, как показывает мировой опыт, дальнейшее повышение эффективности отрасли невозможно без внедрения в селекционную работу достижений в области молекулярной генетики, в частности, нахождения генетических маркеров, отвечающих за определённые показатели продуктивности (Каспирович Д.А. Влияние полиморфизма генов - рецепторов EPOR, MUC4, IGF-2 на основные селекционируемые признаки свиней белорусской крупной белой и белорусской мясной пород: автореф. дис. канд. с.-х. наук: 06.02.07. Гродно. 2010. 20 с).

Новые открытия в молекулярной генетике позволяют выделять и изучать специальные участки генома, которые влияют на важные продуктивные, в частности на воспроизводительные признаки.

В качестве маркеров плодовитости свиней рассматриваются следующие гены, которые признаны генами-кандидатами, влияющими на размер гнезда, это ген эстрогенового рецептора - ESR и ген пролактинового рецептора - PRLR (Лобан Н.А. и др. Молекулярная генная диагностика в свиноводстве Беларуси. Дубровицы. ВИЖ. 2005. С. 34-37; Шейко И.П. и др. Селекция на повышение многоплодия свиноматок крупной белой породы методом молекулярной генной диагностики // Весцi нацыянальнай акадэмii навук Бэларусi. 2006. № 3. С. 77-81).

Потребители и перерабатывающая промышленность нуждаются в улучшении качества мяса. Это требует от селекционеров использования новых методов генетической селекции, направленных на усовершенствование продуктивных признаков. Данные, полученные из литературных источников, показывают потенциальную значимость генов белка, связывающего жирные кислоты (H-FABP), рианодинового рецептора (RYR1) и меланокортиного рецептора 4 (MC4R) в качестве маркеров мясной и откормочной продуктивности (Лобан Н.А., Василюк О.Я. Карта генетического профиля свиней белорусской крупной белой породы // Вестник Белорусской Государственной Сельскохозяйственной Академии. 2010. № 2. С. 116-121; Гетманцева Л.В. Степень влияния гена МС4R на фенотип организма. Тезисы докладов XVIII Международ. науч. конф. студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов 2011». М:. 2011. С. 89).

Некоторые исследователи, такие как Рыжова Н.В. (Рыжова Н.В. Полиморфизм гена RYR1 в популяциях свиней мясных пород: дис. канд. биол. наук: 06.02.01 Лесные Поляны. 2001. 107 с), Гришина Н.Б. (Гришина Н.Б. Использование генетических маркеров в селекции свиней крупной белой породы в Сибири: дис. канд. биол. наук: 06.02.01. Новосибирск. 2008. 147 с), Плужникова О.В. (Плужникова О.В. Естественная резистентность, воспроизводительные и мясные качества свиней в связи с их аллельным состоянием по локусу RYR-1 гена: автореф. дис. канд. биол. наук: 06.02.01. Ставрополь. 2009. 19 с) отмечают, что разные аллели и генотипы по локусу генов RYR1 и H-FABP наряду с непосредственным влиянием на откормочную и мясную продуктивность, оказывают некоторое действие на репродуктивные качества свиней.

Степень разработанности темы. Изучением генетической структуры по ДНК -маркерам в стадах свиней разных пород занимались многие, в том числе Банникова А.Д., Бублик Е.М., Лаломова Е.В., Kmiec M. et al., Vincent A.L. et al. - по гену PRLR; Банникова А.Д., Бублик Е.М., Зиновьева Н.А. и др., Костенко С.А. и др., Полозюк О.Н., Korach K.S. - по гену ESR; Кузнецов А.И. и др., Fujii J. et al., Mac Lennan D.H. et al., Смирнов Н.Н. по гену RYR1; Зиновьева Н.А. и др., Лобан Н.А. и др., Максимов Г.В. и др., Gerbens F. et al. по гену H-FABP; Бублик Е.М., Гетманцева Л.В., Костюнина О.В., Зиновьева Н.А., Сизарева Е.И. и др., Шейко и др., Gantz I. et al. по гену МС4R. Однако в научных трудах этих учёных не имеется данных по генотипированию свиней методами ДНК-технологии в условиях Республики Татарстан. Не изучен аллельный полиморфизм генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP и МС4R у свиней разных пород, разводимых в Республике Татарстан.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы- исследование полиморфизма генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP и МС4R c помощью ДНК-диагностики у свиноматок крупной белой породы, а также определение влияния разных генотипов и их комбинаций на воспроизводительные качества животных.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

- апробировать технику выделения ДНК из крови свиней для генно-молекулярных исследований;

- совершенствовать технику проведения ПЦР, ПЦР-ПДРФ для генотипирования свиней по локусам генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP и МС4R; генный свинья белый воспроизводительный

- изучить частоту встречаемости аллелей, генотипов по локусам генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, МС4R и их комбинаций PRLR / ESR, PRLR / ESR / RYR1 / H-FABP / МС4R у свиноматок крупной белой породы;

- оценить воспроизводительные качества свиноматок крупной белой породы с разными генотипами по локусам генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, МС4R и их комбинаций PRLR / ESR, PRLR / ESR / RYR1 / H-FABP / МС4R;

- определить экономическую эффективность использования свиней крупной белой породы с разными комбинациями генотипов PRLR / ESR / RYR1 / H-FABP / МС4R.

Научная новизна работы. Усовершенствованы протоколы постановки ПЦР и ПЦР-ПДРФ для генотипирования свиней по локусам генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, МС4R. Впервые в условиях Республики Татарстан изучен полиморфизм и определена частота встречаемости генотипов по локусам генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, МС4R и их комбинаций PRLR / ESR, PRLR / ESR / RYR1 / H-FABP / МС4R у свиноматок крупной белой породы. Изучены воспроизводительные качества свиноматок крупной белой породы с разными генотипами по локусам генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, МС4R и их комбинаций PRLR / ESR, PRLR / ESR / RYR1 / H-FABP / МС4R.

Теоретическая и практическая значимость. Основные положения и выводы диссертации позволяют пополнить теоретические данные, касающиеся селекции свиней методами ДНК-технологии.

Апробированные методы экстракции ДНК из крови свиней и усовершенствованные протоколы постановки ПЦР и ПЦР-ПДРФ для генотипирования свиней по локусам генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, МС4R позволяют результативно их использовать в генно-молекулярных исследованиях и в частности в скрининге перечисленных генов. Полученные результаты исследований, касающихся генотипов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, МС4R и их комбинаций, возможно, использовать в свиноводстве для улучшения хозяйственно-полезных признаков, в том числе репродуктивных качеств свиней.

Методология и методы исследования. Основой диссертационного исследования выступает комплекс общенаучных и специальных методов. Для получения результатов исследования использовались общенаучные методы: аналогии, синтеза, индукции, дедукции (обеспечивающие, прежде всего теоретическую составляющую) и наблюдения, сравнения, моделирования (обеспечивающие, прежде всего практическую составляющую). Наряду с этим применялись специальные методы, в систему которых входили зоотехнические и методы генно-молекулярной диагностики. Для расчёта количественных показателей использовали математический и статистический методы. Применение перечисленных методов позволило получить объективные и достоверные результаты исследования.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность исследования подтверждается использованием комплекса методов и программ, что, в конечном счёте, выражается согласованностью полученных выводов и результатов исследования.

Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных отчётах кафедры технологии животноводства ФГБОУ ВПО КГАВМ им. Н.Э. Баумана (Казань, 2011-2013 гг.); научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ФГБОУ ВПО КГАВМ им. Н.Э. Баумана (Казань, 2012-2013 гг.); конкурсе пятьдесят лучших инновационных идей для Республики Татарстан (Казань, 2011-2012 гг.); всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы научного и кадрового обеспечения инновационного развития АПК» (Казань, 2012); республиканском конкурсе научных работ среди студентов и аспирантов на соискание премии имени Н.И. Лобачевского (Казань, 2012); всероссийской научно-практической конференции студентов, аспирантов и учащейся молодёжи (Казань, 2013); международной научно-практической конференции «Научное и кадровое обеспечение инновационного развития АПК», посвящённой 140-летию КГАВМ им. Н.Э. Баумана (Казань, 2013).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 8 научных статей в ведущих рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ.

Основные положения, выносимые на защиту.

- Апробированные нами способы выделения геномной высокомолекулярной ДНК из крови свиней и усовершенствованные протоколы постановки ПЦР, ПЦР-ПДРФ для генотипирования свиней по локусам генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, МС4R позволяет точно определять аллели и генотипы, связанные у животных с хозяйственно-полезными признаками.

- Определена частота встречаемости генотипов и комбинаций генотипов генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, МС4R у свиноматок крупной белой породы в условиях Республики Татарстан.

- Выявлены желательные генотипы в стадах свиней крупной белой породы повышающие их репродуктивные качества.

- Экономически обосновано исследовать свиней крупной белой породы по локусам генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, МС4R.

Объем и структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 136 страницах, содержит 24 таблицы, 31 рисунок. Состоит из: введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, заключения, выводов, предложения производству, списка использованной литературы (всего 152 источника, в том числе 72 иностранных) и 15 приложений.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

2.1 Материалы и методы исследования

Исследования по теме диссертационной работы проводились в период с 2011 по 2013 гг. на кафедре технологии животноводства ФГБОУ ВПО «Казанская государственный академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», в отделе вирусологии и генно-молекулярной диагностики ФГБУ «Татарская межрегиональная ветеринарная лаборатория», в подсобном хозяйстве «Новая Тура» Зеленодольского района и ООО «Алтын Саба» Сабинского района, которое было реорганизовано и вошло в состав новой фирмы ООО «ТАТМИТ Агро» Сабинского района Республики Татарстан. Научно-хозяйственные опыты поставлены согласно схеме исследования (рисунок 1).



Рисунок 1 - Схема исследования

Для определения полиморфизма генов пролактинового рецептора (PRLR), эстрогенового рецептора (ESR), белка, связывающего жирные кислоты (H-FABP), рианодинового рецептора (RYR1) и меланокортиного рецептора 4 (MC4R), оценки воспроизводительных качеств свиней с разными генотипами PRLR, ESR, RYR1, H-FABP и MC4R было отобрано в подсобном хозяйстве «Новая Тура», ООО «ТАТМИТ Агро» 100 и 87 основных свиноматок крупной белой породы. Определение аллельного полиморфизма генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP и MC4R осуществляли методами ДНК-технологии (метод ПЦР и ПЦР-ПДРФ).

По принципу аналогов (Овсянников А.И. Основы опытного дела в животноводстве. М.: Колос. 1976. 303 с) были сформированы группы из основных свиноматок крупной белой породы с разными генотипами PRLR, ESR, RYR1, H-FABP и MC4R, а также с разными комбинациями соответствующих генотипов.

При проведении научно-хозяйственных опытов использовали документацию зоотехнического и племенного учёта подсобного хозяйства «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро».

В подсобном хозяйстве «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» рационы кормления свиноматок были составлены с учётом норм и рационов кормления сельскохозяйственных животных (Калашников А.П. и др. Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных. Справочное пособие. 3-е изд. перераб. и допол. М.: 2003. 456 с).

Кровь отбирали из яремной вены свиней в вакуумные пробирки с ЭДТА. Выделение ДНК из крови свиней проводили аммиачным и комбинированным щелочным способом.

Анализ локуса гена PRLR. ПЦР проводили на программируемом термоциклере «Терцик» (Россия) в объеме 20 мкл, с использованием праймеров PRLR1: 5/-СGGCCGCAGAATCCTGCTTGC-3/ и PRLR2: 5/-ACCCCACCTTGTAACCCATCATCC-3/, подобранных Linville R.C. et al. (Linville R.C. et al. Candidate gene analysis for loci affecting litter size and ovulation rate in swine // J. Anim. Sci. 2001. V. 79. P. 60-67) для амплификации фрагмента гена PRLR длиной 161 п.н. Для определения аллельного полиморфизма гена PRLR по вариантам А и В 20 мкл ПЦР пробы обрабатывали 2 ед. эндонуклеазы рестрикции AluI в 1Чбуфере «Y» фирмы СибЭнзим (Россия) при 370C в течение ночи. Для визуализации фрагментов ДНК пробы вносили в лунки 3% агарозного геля с содержанием этидия бромида (0,5 мкг/мл) и проводили горизонтальный электрофорез при 15 В/см в течение 40 мин в 1ЧТВЕ буфере.

Анализ локуса гена ESR. ПЦР проводили на программируемом термоциклере «Терцик» (Россия) в объеме 20 мкл, с использованием праймеров ESR-F: 5/-CCCTCTATGACCTGCTGCTG-3/ и ESR-R: 5/-TCAGATTGTGGTGGGGAAGTTC-3/, подобранных Kamiсski S.et al. (Kamiсski S. Simultaneous identification of ryanodine receptor 1 (RYR1) and estrogene receptor (ESR) genotypes with the multiplex PCR-RFLP method in Polish Large White and Polish Landrace pigs // J. Appl. Genet. 2002. V. 43 (3). P. 331-335) для амплификации фрагмента гена ESR длиной 185 п.о. Для определения аллельного полиморфизма гена ESR по вариантам M и W 20 мкл ПЦР пробы обрабатывали 10 ед. эндонуклеазы рестрикции Ama87I в 1Чбуфере «W» фирмы СибЭнзим (Россия) при 370C в течение ночи. Для визуализации фрагментов ДНК пробы вносили в лунки 3% агарозного геля с содержанием этидия бромида (0,5 мкг/мл) и проводили горизонтальный электрофорез при 15 В/см в течение 40 мин в 1ЧТВЕ буфере.

Анализ локуса гена RYR1. ПЦР проводили на программируемом термоциклере «Терцик» (Россия) в объеме 20 мкл, с использованием праймеров:

1) Ryr1-p-f: 5/-TCCAGTTTGCCACAGGTCCTACCA-3/ и Ryr1-p-r: 5/-TTCACCGGA GTGGAGTCTCTGAGT-3/, подобранных Riojas-Valdes V.M. et al. (Riojas-Valdes V.M. et al. Allele frequency of porcine stress syndrome in Nuevo Leon by PCR-RFLP analysis // Vet. Mexico. 2005. V. 36. № 003. P. 261-267) для амплификации фрагмента гена RYR1 длиной 659 п.о. Для определения аллельного полиморфизма гена RYR1 по вариантам N и n 20 мкл ПЦР пробы обрабатывали 2 ед. эндонуклеазы рестрикции Bbv12I в 1Чбуфере «О» фирмы СибЭнзим (Россия) при 370C в течение ночи.

2) RYR1-F: 5/-CCACACCCTCCCCGCAAGTGC-3/ и RYR1-R: 5/-GCCAGGGA GCAAGTTCTCAGTAAT-3/, подобранных Luerce T.D. et al. (Luerce T.D. et al. An improved method for characterization of the mutation associated to porcine stress syndrome by PCR amplification followed by restriction analysis // Ciкncia Rural, Santa Maria. 2009. V. 39. N. 5. Р. 1577-1580) для амплификации фрагмента гена RYR1 длиной 144 п.о. Для определения аллельного полиморфизма гена RYR1 по вариантам N и n 20 мкл ПЦР пробы обрабатывали 5 ед. эндонуклеазы рестрикции HspAI в 1Чбуфере «Y» фирмы СибЭнзим (Россия) при 370C в течение ночи. Для визуализации фрагментов ДНК пробы вносили в лунки 2,5-4% агарозного геля с содержанием этидия бромида (0,5 мкг/мл) и проводили горизонтальный электрофорез при 15 В/см в течение 50 мин в 1ЧТВЕ буфере.

Анализ локуса гена H-FABP. ПЦР проводили на программируемом термоциклере «Терцик» (Россия) в объеме 20 мкл, с использованием праймеров H-FABP-F: 5/-ATTGCTTCGGTGTGTTTGAG-3/ и H-FABP-R: 5/-TCAGGAATGGGAGTTATTGG-3/, подобранных Li C.L. et al. (Li C.L. et al. Polymorphism of the H-FABP, MC4R and ADD1 genes in the Meishan and four other pig population in China // South African J. of Animal Sci. 2006. V. 36. N. 1.P. 1-6) для амплификации фрагмента гена H-FABP длиной 800 п.о. Для определения аллельного полиморфизма гена H-FABP по вариантам А и В 20 мкл ПЦР пробы обрабатывали 10 ед. эндонуклеазы рестрикции HaeIII в 1Чбуфере «G» фирмы СибЭнзим (Россия) при 370C в течение ночи. Для визуализации фрагментов ДНК пробы вносили в лунки 2% агарозного геля с содержанием этидия бромида (0,5 мкг/мл) и проводили горизонтальный электрофорез при 15 В/см в течение 40 мин в 1ЧТВЕ буфере.

Анализ локуса гена MC4R. ПЦР проводили на программируемом термоциклере «Терцик» (Россия) в объеме 20 мкл, с использованием праймеров MC4R-F: 5/-TACCCTG ACCATCTTGATTG-3/ и MC4R-R: 5/-ATAGCAACAGATGATCTCTTTG-3/, подобранных Li C.L. et al. (Там же, С. 2) для амплификации фрагмента гена MC4R длиной 226 п.о. Для определения аллельного полиморфизма гена MC4R по вариантам А и В 20 мкл ПЦР пробы обрабатывали 20 ед. эндонуклеазы рестрикции TagI в 1Чбуфере «W» фирмы СибЭнзим (Россия) при 65 0C в течение ночи. Для визуализации фрагментов ДНК пробы вносили в лунки 2% агарозного геля с содержанием этидия бромида (0,5 мкг/мл) и проводили горизонтальный электрофорез при 15 В/см в течение 40 мин в 1ЧТВЕ буфере.

Частоту встречаемости генотипов RYR1, PRLR, ESR, H-FABP, MC4R определяли по формуле: р = n : N, где р - частота определения генотипа, n - количество особей, имеющих определенный генотип, N - число особей. Частоту отдельных аллелей определяли по формулам: pA = (2nAA+nAB) : 2N и qB = (2nBB+nAB) : 2N, где pA - частота аллеля A, qB - частота аллеля B, N - общее число аллелей.

Ожидаемые и наблюдаемые частоты генотипов в исследуемых популяциях свиноматок крупной белой породы подсобного хозяйства «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» рассчитывали по закону Харди-Вайнберга (Петухов В.Л. и др. Ветеринария генетика с основами вариационной статистики. М.: Агропромиздат. 1996. 243 с).

Воспроизводительные качества основных свиноматок крупной белой породы с разными генотипами и комбинациями генотипов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, MC4R оценивали по таким показателям: общее количество родившихся поросят в среднем на 1 свиноматку, количество живых родившихся поросят в среднем на 1 свиноматку и процент мертворождённых поросят.

Полученные результаты исследований обрабатывались биометрическим методом с применением вариационно-статистического анализа (Меркурьева Е.К. Биометрия в селекции и генетике с.-х. животных. М.: Колос. 1970. 424 с). Достоверность полученных данных определяли по критерию Стьюдента.

2.2 Результаты собственных исследований

2.2.1 Апробация аммиачного и комбинированного щелочного способов выделения ДНК из крови свиней

ДНК из крови свиней выделяли аммиачным и комбинированным щелочным способами, предложенные Вафиным Р.Р. в 2006 году и усовершенствованные способы экстракции ДНК из крови крупного рогатого скота группой исследователей Вафиным Р.Р., Ахметовым Т.М., Валиулллиной Э.Ф., Зариповым О.Г., Тюлькиным С.В.

Выделенные нами образцы ДНК из крови свиней как аммиачным, так и комбинированным щелочным способами показали их возможность использования в ПЦР и ПЦР-ПДРФ для генотипирования свиней по генам PRLR, ESR, RYR1, H-FABP и MC4R.

2.2.2 Совершенствование техники ПЦР и ПЦР-ПДРФ для генотипирования свиней по гену PRLR

Для оценки качества работы известного протокола по генотипированию свиней по гену PRLR нами была протестирована серия олигонуклеотидных праймеров: PRLR1 и PRLR2, подобранных Linville R.C.et al. (Linville R.C. et al. Candidate gene analysis for loci affecting litter size and ovulation rate in swine. P. 62) по усовершенствованной нами технике ПЦР-ПДРФ. Праймеры PRLR1+PRLR2 инициируют амплификацию фрагмента гена PRLR свиней длиной 161 bp, а ПДРФ-AluI профиль (AA=126/35 bp, BB=91/35 bp и AB=126/91/35 bp) идентифицирует его генотипы (рис. 1).

Рис. 1. Электрофореграмма результата ПЦР-ПДРФ гена PRLR с праймерами PRLR1+PRLR2 и эндонуклеазным расщеплением ферментом AluI

Обозначения: М) ДНК-маркеры 100 bp (СибЭнзим); 1-2) генотип АА (126/35 bp); 3-4) генотип ВВ (91/35 bp); 5-6) генотип АВ (126/91/35), 7) цельный ПЦР-продукт гена PRLR (161 bp).

Полученные результаты ПЦР гена PRLR свиней с праймерами PRLR1+PRLR2 и в дальнейшем проведение ПДРФ являются удовлетворительными в плане воспроизводимости и идентификации генотипов.

2.2.3 Совершенствование техники ПЦР и ПЦР-ПДРФ для генотипирования свиней по гену ESR

Для оценки качества работы известного протокола по генотипированию свиней по гену ESR нами была протестирована серия олигонуклеотидных праймеров: ESR-F: 5/-CCCTCTATGACCTGCTGCTG-3/ и ESR-R: 5/-TCAGATTGTGGTGGGGAAGTTC-3/, подобранных Kamiсski S. et al. (Kamiсski S. Simultaneous identification of ryanodine receptor 1 (RYR1) and estrogene receptor (ESR) genotypes with the multiplex PCR-RFLP method in Polish Large White and Polish Landrace. P. 332) по усовершенствованной нами технике ПЦР и ПЦР-ПДРФ. Праймеры ESR-F+ESR-R инициируют амплификацию фрагмента гена ESR свиней длиной 185 bp, а ПДРФ - Ama87I профиль (MM=76/62/47 bp, WW=109/76 bp и MW=109/76/62/47 bp) идентифицирует его генотипы (рис. 2).

Рис. 2. Электрофореграмма результата ПЦР-ПДРФ гена ESR с праймерами

ESR-F+ESR-R и эндонуклеазным расщеплением ферментом Ama87I

Обозначения: М) ДНК-маркеры 100 bp (СибЭнзим); 1-2) генотип MM (76/62/47 bp); 3-4) генотип MW (109/76/62/47); 5-6) генотип WW (109/76 bp); 7) цельный ПЦР-продукт гена ESR (185 bp).

Полученные результаты ПЦР гена ESR свиней с праймерами ESR-F+ESR-R и в дальнейшем проведение ПДРФ являются удовлетворительными в плане воспроизводимости и идентификации генотипов.

2.2.4 Совершенствование техники ПЦР и ПЦР-ПДРФ для генотипирования свиней по гену RYR1

Для оценки качества работы известных протоколов по генотипированию свиней по гену RYR1 нами была протестирована серия олигонуклеотидных праймеров: Ryr1-p-f и Ryr1-p-r, подобранных Riojas-Valdes V.M. et al. (Riojas-Valdes V.M. et al. Allele frequency of porcine stress syndrome in Nuevo Leon by PCR-RFLP analysis // Vet. Mexico. 2005. V. 36. № 003. P. 263-264); RYR1-F и RYR1-R, подобранных Luerce T.D. et al. (Luerce T.D. et al. An improved method for characterization of the mutation associated to porcine stress syndrome by PCR amplification followed by restriction analysis. Р. 1578) по усовершенствованной нами технике ПЦР и ПЦР-ПДРФ. Праймеры Ryr1-p-f+Ryr1-p-r инициируют амплификацию фрагмента гена RYR1 свиней длиной 659 bp, а RYR1-ПДРФ-Bbv12I профиль NN=524/135 bp (здоровые особи), Nn=524/358/166/135 bp (особи-носители мутации, рис. 3) nn=358/166/135 bp (больные особи) идентифицирует его генотипы.

Рис. 3. Электрофореграмма результата ПЦР-ПДРФ гена RYR1 с праймерами Ryr1-p-f+Ryr1-p-r и эндонуклеазным расщеплением ферментом Bbv12I

Обозначения: М) ДНК-маркеры 1000-100 bp (СибЭнзим); 1, 2) генотип NN (524/135 bp); 3, 4) генотип Nn (524/358/166/135 bp); 5) цельный ПЦР-фрагмент гена RYR 1 (659 bp).

Праймеры RYR1-F+RYR1-R инициируют амплификацию фрагмента гена RYR1 свиней длиной 144 bp, а RYR1-ПДРФ-HspAI-профиль здоровых животных = 102/42 bp (генотип NN) (рисунок 4), больных животных = 144 bp (генотип nn), а животных-носителей мутантного аллеля n гена RYR1 =144/102/42 bp.

Рис. 4. Электрофореграмма результата ПЦР-ПДРФ гена RYR1 с праймерами RYR1-F+RYR1-R и эндонуклеазным расщеплением HspAI

Обозначения: М) ДНК-маркеры 1500-100 bp (СибЭнзим); 1-17) генотип NN (102/42 bp); 18) цельный ПЦР-фрагмент гена RYR1 (144 bp).

Полученные результаты ПЦР гена RYR1 свиней с праймерами Ryr1-p-f+Ryr1-p-r, RYR1-F+RYR1-R и в дальнейшем проведение ПДРФ также являются удовлетворительными в плане воспроизводимости и идентификации генотипов.

2.2.5 Совершенствование техники ПЦР и ПЦР-ПДРФ для генотипирования свиней по гену H-FABP

Для оценки качества работы известного протокола по генотипированию свиней по гену H-FABP нами была протестирована серия олигонуклеотидных праймеров H-FABP-F и H-FABP-R, подобранных Li C.L. et al. (C.L. Li, Y.C. Pan, H. Meng Polymorphism of the H-FABP, MC4R and ADD1 genes in the Meishan and four other pig population in China. P. 2) по усовершенствованной нами технике ПЦР и ПЦР-ПДРФ. Праймеры H-FABP-F+H-FABP-R инициируют амплификацию фрагмента гена H-FABP свиней длиной 800 bp, а ПДРФ-HaeIII профиль (АА=683/117 bp, ВВ=405/278/117 bp и АВ=683/405/278/117 bp) идентифицирует его генотипы (рис. 5).

Рис. 5. Электрофореграмма результата ПЦР-ПДРФ гена H-FABP с праймерами H-FABP-F+H-FABP-R и эндонуклеазным расщеплением ферментом HaeIII

Обозначения: М) ДНК-маркеры 100 bp (СибЭнзим); 1) генотип ВВ (405/278/117 bp); 2-3, 6-9, 11) генотип АВ (683/405/278/117 bp); 4-5, 10, 12) генотип АА (683/117), 13) цельный ПЦР-продукт гена H-FABP (800 bp).

Полученные результаты ПЦР гена H-FABP свиней с праймерами H-FABP-F+H-FABP-R и в дальнейшем проведение ПДРФ являются удовлетворительными в плане воспроизводимости и идентификации генотипов.

2.2.6 Совершенствование техники ПЦР и ПЦР-ПДРФ для генотипирования свиней по гену MC4R

Для оценки качества работы известного протокола по генотипированию свиней по гену MC4R нами была протестирована серия олигонуклеотидных праймеров: MC4R-F и MC4R-R, подобранных Li C.L. et al. (C.L. Li, Y.C. Pan, H. Meng Polymorphism of the H-FABP, MC4R and ADD1 genes in the Meishan and four other pig population in China. P. 2) по усовершенствованной нами технике ПЦР и ПЦР-ПДРФ. Праймеры MC4R-F+MC4R-R инициируют амплификацию фрагмента гена MC4R свиней длиной 226 bp, а ПДРФ-TaqI профиль (АА=226 bp, ВВ=156/70 bp и АВ=226/156/70 bp) идентифицирует его генотипы (рис. 6).



Рис. 6. Электрофореграмма результата ПЦР-ПДРФ гена MC4R с праймерами

MC4R-F+MC4R-R и эндонуклеазным расщеплением ферментом TaqI

Обозначения: М) ДНК-маркеры 100 bp (СибЭнзим); 1-2, 5, 7-8, 11) генотип ВВ (156/70 bp); 3-4) генотип АА (226 bp); 6, 9-10, 12-13) генотип АВ (226/156/70); 14) цельный ПЦР-продукт гена MC4R (226 bp).

Полученные результаты ПЦР гена MC4R свиней с праймерами MC4R-F+MC4R-R и в дальнейшем проведение ПДРФ являются удовлетворительными в плане воспроизводимости и идентификации генотипов.

2.2.7 Аллельный полиморфизм гена PRLR у свиноматок

После проведении ПЦР-анализа в подсобном хозяйстве «Новая Тура» 100 основных свиноматок крупной белой породы распределение свиноматок по генотипам локуса гена PRLR было следующим: 61 (61,0%) свиноматка имела генотип АА, 32 (32,0%) - генотип АВ и всего 7 (7,0%) свиноматок - генотип ВВ. Частота аллеля А достигла 0,77, аллеля В - 0,32 (табл. 1). Несколько другая встречаемость генотипов и аллелей гена PRLR была среди 87 основных свиноматок крупной белой породы в ООО «ТАТМИТ Агро». Наибольшее количество животных было с генотипом АВ - 39 (44,8%) свиноматок, а наименьшее количество с генотипом АА - 23 (26,5%). Промежуточное местоположение занимали свиноматки с генотипом ВВ, количество которых составило 25 (28,7%) животных. При этом частота аллеля А была на уровне 0,49, аллеля В - 0,51.



Таблица 1 - Частота встречаемости генотипов и аллелей гена PRLR у свиней

Хозяйство	n	Частота генотипов	Частота аллелей	ч2
		АА	АВ	ВВ
		n	%	n	%	n	%	А	В
Новая Тура	Н	100	61	61,0	32	32,0	7	7,0	0,77	0,23	0,32
	О		59	59,0	35	35,0	5	5,0
ТАТМИТ Агро	Н	87	23	26,5	39	44,8	25	28,7	0,49	0,51	0,56
	О		21	24,1	43	49,4	23	26,5

Н - наблюдаемая частота генотипов, О - ожидаемая частота генотипов

Анализ фактического и теоретического распределения генотипов по локусу гена PRLR в двух популяциях свиноматок крупной белой породы показал, что разница между генотипами (АА, АВ и ВВ) незначительная и составила 2,0-4,6%. При этом показатель вариабельности хи-квадрат (ч2) у свиней крупной белой породы в двух стадах был в пределах от 0,32 до 0,56, что ниже табличных значений. Поэтому полученные данные говорят о том, что генное равновесие по гену PRLR не нарушено.

2.2.8 Аллельный полиморфизм гена ESR у свиноматок

При исследование в подсобном хозяйстве «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» основных свиноматок крупной белой породы по локусу гена ESR методом ДНК-анализа получены следующие результаты, что из 100 и 87 свиноматок 22-30 (25,3-30,0%) свиноматок имели гомозиготный генотип WW, 34-47 (39,1-47,0%) - гетерозиготный генотип WM и 23-31 (23,0-35,6%) свиноматка - гомозиготный ММ. В подсобном хозяйстве «Новая Тура» частота аллеля W была 0,535, аллеля М - 0,465. Однако в ООО «ТАТМИТ Агро» частота аллеля W была 0,450, аллеля М - 0,550 (табл. 2).



Таблица 2 - Частота встречаемости генотипов и аллелей гена ESR у свиней

Хозяйство	n	Частота генотипов	Частота аллелей	ч2
		WW	WM	MM
		n	%	n	%	n	%	W	M
Новая Тура	Н	100	30	30,0	47	47,0	23	23,0	0,535	0,465	0,21
	О		29	29,0	50	50,0	21	21,0
ТАТМИТ Агро	Н	87	22	25,3	34	39,1	31	35,6	0,45	0,55	2,77
	О		18	20,7	43	49,4	29	29,9

Н - наблюдаемая частота генотипов, О - ожидаемая частота генотипов

Анализ фактического и теоретического распределения генотипов по локусу гена ESR в двух стадах свиноматок крупной белой породы показал, что разница между генотипами (WW, WM и MM) незначительная и составила 1,0-10,3%. Наибольшая разница была по генотипу WM в ООО «ТАТМИТ Агро» - 10,3%. При этом показатель вариабельности хи-квадрат (ч2) у свиней крупной белой бороды в двух стадах был в пределах от 0,21 до 2,77, что ниже табличных значений. Поэтому полученные данные говорят о том, что генное равновесие по гену ESR не изменено.

2.2.9 Аллельный полиморфизм гена RYR1 у свиноматок

Анализ результатов ДНК-тестирования в подсобном хозяйстве «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» 187 основных свиноматок крупной белой породы показал, что представленные животные имели гомозиготный генотип NN по гену RYR1, при этом у животных не выявлено наличие в их геноме мутантного аллеля n.

2.2.10 Полиморфизм гена H-FABP у свиноматок

В подсобном хозяйстве «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» 187 основных свиноматок крупной белой породы проведены исследования по локусу гена H-FABP. Методом ДНК-диагностики получены следующие результаты, что из 100 и 87 свиноматок 24-31 (27,6-31,0%) свиноматка имела гомозиготный генотип АА, 42-57 (48,3-57,0%) - гетерозиготный генотип АВ и 12-21 (12,0-24,1%) свиноматка - гомозиготный ВВ. Частота аллеля А достигла 0,520-0,595, аллеля В - 0,405-0,480 (табл. 3).

Анализ фактического и теоретического распределения генотипов по локусу гена H-FABP в двух стадах свиноматок крупной белой породы показал, что разница между генотипами (АА, АВ и ВВ) незначительная и составила 0-9,0%. Наибольшая разница была по генотипу АВ в подсобном хозяйстве «Новая Тура» - 9,0%. При этом показатель вариабельности хи-квадрат (ч2) у свиней крупной белой бороды в двух стадах был в пределах от 0,02 до 2,14, что ниже табличных значений. Поэтому полученные данные говорят о том, что генное равновесие по гену H-FABP не имеет сдвига.

Таблица 3 - Частота встречаемости генотипов и аллелей гена H-FABP у свиней

Хозяйство	n	Частота генотипов	Частота аллелей	ч2
		АА	АВ	ВВ
		n	%	n	%	n	%	А	В
Новая Тура»	Н	100	31	31,0	57	57,0	12	12,0	0,595	0,405	2,14
	О		35	35,0	48	48,0	16	16,0
ТАТМИТ Агро	Н	87	24	27,6	42	48,3	21	24,1	0,52	0,48	0,02
	О		24	27,6	43	49,4	20	23,0

Н - наблюдаемая частота генотипов, О - ожидаемая частота генотипов

2.2.11 Полиморфизм гена MC4R у свиноматок

После проведении ДНК-анализа в подсобном хозяйстве «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» 100 и 87 основных свиноматок крупной белой породы распределение свиноматок по генотипам локуса гена MC4R было следующим: 63-65 (63,0-74,7%) свиноматок имели генотип АА, 22-34 (25,3-34,0%) - генотип АВ и всего 3 (3,0%) свиноматок - генотип ВВ. При этом, необходимо отметить, что в ООО «ТАТМИТ Агро» животных с генотипом ВВ вообще не встречалось. Частота аллеля А достигла 0,80-0,87, аллеля В - 0,13-0,20 (табл. 4).



Таблица 4 - Частота встречаемости генотипов и аллелей гена MC4R у свиней

Хозяйство	n	Частота генотипов	Частота аллелей	ч2
		АА	АВ	ВВ
		n	%	n	%	n	%	А	В
Новая Тура	Н	100	63	63,0	34	34,0	3	3,0	0,80	0,20	0,14
	О		64	64,0	32	32,0	4	4,0
ТАТМИТ Агро	Н	87	65	74,7	22	25,3	0	0	0,87	0,13	0,49
	О		66	75,9	19	21,8	2	2,3

Н - наблюдаемая частота генотипов, О - ожидаемая частота генотипов

Анализ фактического и теоретического распределения генотипов по локусу гена MC4R в двух стадах свиноматок крупной белой породы методом Харди-Вайнберга показал, что разница между генотипами (АА, АВ и ВВ) незначительная и составила 1,0-3,5%. При этом показатель вариабельности хи-квадрат (ч2) у свиней крупной белой бороды в двух стадах был в пределах от 0,14 до 0,49, что ниже табличных значений. Поэтому полученные данные говорят о том, что генное равновесие по гену MC4R не нарушено.

2.2.12 Встречаемость комплексных генотипов генов, напрямую связанных с воспроизводительными качествами свиноматок

В исследуемых стадах подсобного хозяйства «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро», состоящего из 100 и 87 основных свиноматок крупной белой породы выявлено 9 комбинации генотипов по генам PRLR / ESR.

Из 100 свиноматок подсобного хозяйства «Новая Тура» имели комбинацию генотипов: PRLR AA / ESR WW, PRLR AA / ESR MW по 24 (24,0%) свиноматок, PRLR AB / ESR MW - 21 (21,0%), PRLR AA / ESR MM - 13 (13,0%), PRLR AB / ESR MM - 6 (6,0%), PRLR AB / ESR WW - 5 (5,0%), PRLR BB / ESR MM - 4 (4,0%), PRLR BB / ESR MW - 2 (2,0%), PRLR BB / ESR WW - 1 (1,0%) свиноматок соответственно.

Несколько другая частота встречаемости комбинаций PRLR / ESR наблюдалась в ООО «ТАТМИТ Агро». Так, из 87 свиноматок данного свиноводческого хозяйства имели комбинацию генотипов: PRLR AB / ESR WM - 15 (17,2%), PRLR AB / ESR MM - 14 (16,1%), PRLR AB / ESR WW, PRLR BB / ESR WM по 10 (11,5%), PRLR AA / ESR WM, PRLR BB / ESR MM по 9 (10,4%), PRLR AA / ESR MM - 8 (9,2%) и PRLR AA / ESR WW, PRLR BB / ESR MM по 6 (6,9%) свиноматок соответственно.

Таким образом, исследования показали, что в двух популяциях основных свиноматок крупной белой породы наибольшей частой встречаемости характеризовались три (подсобное хозяйство «Новая Тура») и четыре (ООО «ТАТМИТ Агро») комбинации генотипов генов PRLR / ESR, напрямую связанных с воспроизводительными качествами. Эти комбинации генотипов следующие PRLR AA / ESR WW, PRLR AA / ESR WM по 24 (24,0%), PRLR AB / ESR WM - 21 (21,0%) и PRLR AB / ESR WM - 15 (17,2%), PRLR AB / ESR MM - 14 (16,1%), PRLR AB / ESR WW, PRLR BB / ESR WM по 10 (11,5%) свиноматок соответственно.

2.2.13 Встречаемость комплексных генотипов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, MC4R у свиноматок

В анализируемых популяциях, состоящих из 100 и 87 основных свиноматок крупной белой породы подсобного хозяйства «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» выявлено 23 и 30 комбинаций генотипов по генам PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, MC4R соответственно.

Из 100 свиноматок подсобного хозяйства «Новая Тура» имели комбинацию генотипов: PRLR AA / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA, PRLR AA / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA по 14 (14,0%) свиноматок, PRLR AA / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AB, PRLR AA / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AB по 10 (10,0%), PRLR AB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA, PRLR AB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AB по 6 (6,0%), PRLR AA / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA, PRLR AA / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AA, PRLR AB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA по 5 (5,0%), PRLR AB / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA - 4 (4,0%), PRLR AB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA - 3 (3,0%), PRLR AA / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA, PRLR AB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AB, PRLR AB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AB, PRLR BB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA, PRLR BB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA, PRLR BB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AB по 2 (2,0%), PRLR AA / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AB, PRLR AB / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R BB, PRLR AB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AA, PRLR AB / ESR WM / H-FABP AB / RYR1 NN / MC4R BB, PRLR AB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AB, PRLR BB / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R BB по 1 (1,0%) свиноматок соответственно.

Из 87 свиноматок ООО «ТАТМИТ Агро» имели комбинацию генотипов: PRLR AB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA - 8 (9,2%) свиноматок, PRLR AA / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA, PRLR AB / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA, PRLR AB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AB, PRLR BB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA по 5 (5,7%), PRLR BB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AB, PRLR BB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA по 4 (4,6%), PRLR AA / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA, PRLR AA / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA, PRLR AA / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AB, PRLR AB / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA, PRLR AB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA, PRLR AB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA, PRLR AB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AB, PRLR AB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA, PRLR BB / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA, PRLR BB / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AA, PRLR BB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AB по 3 (3,5%), PRLR AA / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AВ, PRLR AA / ESR WM/ RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AA, PRLR AA / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA, PRLR AB / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AA, PRLR AB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AA, PRLR BB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA по 2 (2,3%), PRLR AA / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AA, PRLR AA / ESR WM/ RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA, PRLR AA / ESR WM/ RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AB, PRLR AB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AA, PRLR AB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AB, PRLR BB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AA, PRLR BB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AA только по 1 (1,1%) свиноматки соответственно.

Таким образом, исследования показали, что в двух стадах основных свиноматок крупной белой породы наибольшей частой встречаемости отличались четыре (подсобное хозяйство «Новая Тура») и пять (ООО «ТАТМИТ Агро») комбинаций генотипов PRLR / ESR / RYR1 / H-FABP / MC4R, а именно комбинации PRLR AA / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA, PRLR AA / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA по 14 (14,0%), PRLR AA / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AB, PRLR AA / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AB по 10 (10,0%) и PRLR AB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA - 8 (9,2%), PRLR AA / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA, PRLR AB / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA, PRLR AB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AB, PRLR BB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA по 5 (5,7%) свиноматок соответственно.

2.2.14 Воспроизводительные качества свиней с разными генотипами по локусу гена PRLR

Проанализировав воспроизводительные свойства свиноматок крупной белой породы с разными генотипами по локусу гена PRLR по первому опоросу в подсобном хозяйстве «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» выявлено, что свиноматки с генотипом ВВ гена PRLR превосходили свиноматок с другими генотипами как по общему количеству рождённых поросят (на 0,57-1,32 поросят), так и по количеству рождённых живых поросят (на 0,24-1,76 поросят) в среднем на одну свиноматку. Наименьшие показатели воспроизводительных качеств в разных хозяйствах отмечены у животных с генотипом АВ и АА соответственно. Процент мертворождённых поросят от свиноматок с разными генотипами по гену PRLR уменьшался в ряду АВ > АА > ВВ (подсобное хозяйство «Новая Тура») и ВВ > АА > АВ (ООО «ТАТМИТ Агро»).

Таким образом, исследования показали, что в подсобном хозяйстве «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» наилучшие показатели по многоплодию имели свиноматки крупной белой породы с генотипом ВВ гена PRLR. У свиноматок с генотипом АВ и ВВ разных свиноводческих хозяйств наблюдались наихудшие показатели - по проценту мертворождённых поросят - 6,4 и 8,0, что в 1,1-2,9 выше, чем у сверстниц.

2.2.15 Воспроизводительные качества свиней с разными генотипами по локусу гена ESR

Анализ свиноматок крупной белой породы с разными генотипами ESR в подсобном хозяйстве «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» показал, что животные с генотипом MM гена ESR превосходили свиноматок с другими генотипами по общему количеству рождённых поросят (на 0,10-1,26 поросят) и по количеству рождённых живых поросят (на 0,62-1,23 поросят) в среднем на одну свиноматку. При этом наибольшая разница по этим показателям была в ООО «ТАТМИТ Агро» - 1,07-1,26 (Р<0,05) и 1,12-1,23 (Р<0,05-0,01) поросят соответственно. Наименьшие показатели воспроизводительных качеств отмечены у животных с гетерозиготным генотипом WM (подсобном хозяйстве «Новая Тура») и гомозиготным генотипом WW (ООО «ТАТМИТ Агро»). Процент мертворождённых поросят от свиноматок с разными генотипами по гену ESR уменьшался в ряду WM > MM > WW (подсобном хозяйстве «Новая Тура») и WM > WW > MM (ООО «ТАТМИТ Агро»).

Таким образом, можно сделать вывод, что в подсобном хозяйстве «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» наилучшие показатели по многоплодию имели свиноматки крупной белой породы с генотипом МM гена ESR. У гетерозигот (WM) наблюдались наихудшие показатели по проценту мертворождённых поросят - 5,4 и 7,3%, что в 1,1-1,7 раза выше, чем у гомозигот (WW и MM).

2.2.16 Воспроизводительные качества свиней с разными генотипами по локусу гена RYR1

Популяции свиноматок подсобного хозяйства «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» было представлено особями, имеющими только один генотип по гену RYR1 - NN. Животные с генотипом NN гена RYR1 имели общее количество рождённых поросят в среднем на одну свиноматку - 11,44 и 12,07. При этом количество рождённых живых поросят составило 10,93 и 11,25 поросят в среднем на одну свиноматку. Процент мертворождённых поросят от свиноматок, несущих в своём геноме N аллель гена RYR1 был на уровне 4,5-6,8%.

Таким образом, исследования показали, что воспроизводительные качества у основных свиноматок крупной белой породы с генотипом NN по гену RYR1 были на среднем уровне.

2.2.17 Воспроизводительные качества свиней с разными генотипами по локусу гена H-FABP

Проведённые исследования показали, что свиноматки с генотипом ВВ по гену H-FABP превосходили свиноматок с другими генотипами по общему количеству рождённых поросят (на 0,66-2,03 поросёнка) и по количеству рождённых живых поросят (на 0,58-1,62 поросёнка) в среднем на одну свиноматку. При этом наибольшая разница по этим показателям была в ООО «ТАТМИТ Агро» между животные с генотипом АВ, ВВ и АА - 1,37-2,03 (Р<0,01 и Р<0,001) и 1,62 (Р<0,05 и Р<0,001) поросёнка. Наименьшие показатели воспроизводительных качеств отмечены у животных с генотипом АA. Процент мертворождённых поросят от свиноматок с разными генотипами H-FABP уменьшался в ряду ВВ > АА > АВ (подсобное хозяйство «Новая Тура») и АВ > ВВ > АА (ООО «ТАТМИТ Агро»).

Таким образом, в подсобном хозяйстве «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» наилучшие показатели по многоплодию имели свиноматки крупной белой породы с генотипом ВВ гена H-FABP. У животных с данным гомозиготным генотипом (ВВ) в основном наблюдался более высокий процент мертворождённых поросят - 7,3-10,4%, что в 1,5-2,5 раза выше, чем аналогов.

2.2.18 Воспроизводительные качества свиней с разными генотипами по локусу гена MC4R

Исследования свиноматок также показали, что свиноматки, несущие в своём геноме В аллель гена MC4R превосходили свиноматок с гомозиготным генотипом АА по общему количеству рождённых поросят (на 0,33-0,60 поросёнка) и по количеству рождённых живых поросят (на 0,36-0,54 поросёнка) в среднем на одну свиноматку. Процент мертворождённых поросят от свиноматок с разными генотипами по гену MC4R уменьшался в ряду АВ > АА > ВВ (подсобное хозяйство «Новая Тура») и АА > АВ (ООО «ТАТМИТ Агро»).

Таким образом, можно сделать вывод, что в подсобном хозяйстве «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» наилучшие показатели по многоплодию имели свиноматки крупной белой породы с генотипами АВ и ВВ гена MC4R. При этом у аналогов с генотипом АА и АВ наблюдался самый высокий процент мертворождённых поросят - 3,8-7,1%, что в 1,2-2,0 раза выше, чем у сверстниц.

2.2.19 Воспроизводительные качества свиней с разными комбинациями генотипов генов PRLR и ESR, напрямую связанных с данными показателями

Нами были проанализированы воспроизводительные качества свиноматок крупной белой породы с разными комбинациями генотипов PRLR / ESR. В подсобном хозяйстве «Новая Тура» наибольшие показатели по количеству рождённых (12,25-14,00) и по количеству живых поросят при рождении (12,00-13,00) были у животных с комбинациями генотипов PRLR BB / ESR WW, PRLR BB / ESR WM и PRLR BB / ESR MM. Данные комбинации генотипов превосходили по этим показателям аналогов с другими комбинациями генотипов PRLR / ESR на 0,56-2,86 и 0,80-2,76 поросят соответственно. Причём комбинация генотипов PRLR BB / ESR WW с показателями 14,00 и 13,00 поросят имела достоверное превосходство над генотипами PRLR AA / ESR WW, PRLR AA / ESR WM, PRLR AA / ESR MM, PRLR AB / ESR WW, PRLR AB / ESR WM на 2,31-2,83 (Р<0,01 и 0,001) и 1,92-2,76 (Р<0,05 и 0,001) поросят соответственно. Процент мертворождённых поросят от свиноматок с разными комбинациями генотипов по гену PRLR / ESR уменьшался в ряду PRLR AB / ESR WM > PRLR BB / ESR WW > PRLR AA / ESR MM > PRLR AA / ESR WM > PRLR AB / ESR WW > PRLR AA / ESR WW и PRLR AB / ESR MM > PRLR BB / ESR MM > PRLR BB / ESR WM.

Тогда как в ООО «ТАТМИТ Агро» наибольшие показатели по количеству рождённых (11,90-13,78) и по количеству живых поросят при рождении (11,20-12,33) были у животных с комбинациями генотипов PRLR AA / ESR MM, PRLR AВ / ESR MM, PRLR BB / ESR WM и PRLR BB / ESR MM.

Представленные комбинации генотипов превосходили по этим показателям сверстниц с другими комбинациями генотипов PRLR / ESR на 0,17-2,38 и 0,20-1,89 поросят соответственно. Причём комбинация генотипов PRLR BB / ESR MM с показателями 13,78 и 12,33 поросят имела достоверную разницу с комбинациями генотипов PRLR AA / ESR WM, PRLR AA / ESR MM, PRLR AB / ESR WW, PRLR AB / ESR WM, PRLR AB / ESR MM и PRLR BB / ESR WM на 1,21-2,38 (Р<0,05-0,001) и 1,40-1,89 (Р<0,05-0,01) поросят соответственно. Процент мертворождённых поросят от свиноматок с разными комбинациями генотипов по гену PRLR / ESR уменьшался в ряду PRLR BB / ESR MM > PRLR AA / ESR WM > PRLR BB / ESR WW > PRLR AB / ESR WW > PRLR AB / ESR WM > PRLR AA / ESR MM > PRLR BB / ESR WM > PRLR AA / ESR WW > PRLR AB / ESR MM.

Таким образом, исследования показали, что только две комбинации генотипов PRLR BB / ESR WM и PRLR BB / ESR MM среди изучаемых основных свиноматок крупной белой породы характеризуются достаточно высоким многоплодием и встречались как в подсобном хозяйстве «Новая Тура», так и в ООО «ТАТМИТ Агро».

2.2.20 Воспроизводительные качества свиней с разными комбинациями генотипов генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, MC4R

Нами были изучены воспроизводительные качества свиноматок крупной белой породы с разными комбинациями генотипов PRLR / ESR / RYR1 / H-FABP / MC4R. Исследования показали, что в подсобном хозяйстве «Новая Тура» свиноматки с наиболее распространёнными комбинациями генотипов PRLR AA / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA, PRLR AA / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA, PRLR AA / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AB, PRLR AA / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AB обладали показателями по количеству рождённых (11,07-11,86) и по количеству живых (10,57-11,43) поросят при рождении, близкими к средним значениям по стаду - 11,44 и 10,93 поросят. У шести комбинаций генотипов PRLR AB / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R BB, PRLR AB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AB, PRLR AB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AB, PRLR BB / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R BB, PRLR BB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA и PRLR BB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AA / MC4R AA показатели по количеству рождённых (12,00-14,00) и по количеству живых (12,00-13,00) поросят были выше или равны количеству - 12 поросят.

При проведении исследовании в ООО «ТАТМИТ Агро» было выявлено, что свиноматки с наиболее встречающимися комбинациями генотипов: две комбинации генотипов имели более высокие показатели по количеству рождённых (13,25-14,4) и по количеству живых (12,75-13,00) поросят при рождении по сравнению со средними значениями по стаду - 12,07 и 11,25 поросят; однако три аналогичные комбинации генотипов имели данные ниже, чем в среднем по стаду - 11,00-11,60 и 10,20-10,40 поросят соответственно. У девяти комбинаций генотипов PRLR AA / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AВ, PRLR AA / ESR WW / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AA, PRLR AA / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AB, PRLR AB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AA, PRLR AB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AB, PRLR AB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA, PRLR AB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AA, PRLR BB / ESR WM / RYR1 NN / H-FABP BB / MC4R AB и PRLR BB / ESR MM / RYR1 NN / H-FABP AB / MC4R AA показатели по количеству рождённых (12,33-14,40) и по количеству живых (12,00-13,33) поросят были выше или равны количеству - 12 поросят.

Таким образом, исследования показали, что использование комбинаций генотипов из пяти генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, MC4R позволило увеличить в подсобном хозяйстве «Новая Тура» и ООО «ТАТМИТ Агро» показатели воспроизводительной способности у основных свиноматок крупной белой породы, в частности количество рождённых и количество живых поросят в сравнение со средними значениями по стаду на 0,06-2,33 и 0,07-2,08 поросят соответственно.

2.2.21 Экономическая эффективность использования свиней с разными комбинациями генотипов генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, MC4R

Экономическая эффективность использования свиноматок крупной белой породы с разными комбинациями генотипов генов PRLR, ESR, RYR1, H-FABP, MC4R определялась согласно методических рекомендаций Шмакова Ю.И. и др. (Шмаков Ю.И., Комаров Л.Л., Черекаев Н.В. Методические рекомендации по определению экономического эффекта от внедрения результатов научно-исследовательских работ в животноводство. Дубровицы. 1984. 30 с) с учётом методики расчёта стоимости новорождённых поросят (Никитин И.Н., Апалькин В.А. Организация и экономика ветеринарного дела. 5-е изд. прераб. и допол. М.: «КолосС». 2006. 368 с). Для этого использовали следующие формулы: