Характеристика и распространение бактерий рода campylobacter в продуктах убоя птицы

Размещено на http://www.allbest.ru/

ХАРАКТЕРИСТИКА И РАСПРОСТРАНЕНИЕ БАКТЕРИЙ РОДА CAMPYLOBACTER В ПРОДУКТАХ УБОЯ ПТИЦЫ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Курако Ульяна Михайловна

Саратов 2008

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Щербаков Анатолий Анисимович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Васильев Дмитрий Аркадьевич, доктор медицинских наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ

Самойлова Любовь Владимировна Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Защита диссертации состоится «29» января 2009 года в 15 часов на заседании диссертационного совета Д 220.061.04 при ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» по адресу: г. Саратов, ул. Соколовая, 335, диссертационный зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова».

Автореферат диссертации разослан « » 2008 г. и размещен на сайте: www.sgau.ru.

Отзыв на автореферат направлять по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Театральная пл., 1, ученому секретарю диссертационного совета.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор Л.В. Карпунина

Общая характеристика работы

Актуальность темы

Острые кишечные инфекции (ОКИ) широко распространены во многих странах мира и представляют серьезную опасность для современного общества (Светоч и др., 2007).

Важное место среди ОКИ занимает кампилобактериоз ввиду его широкой распространенности, множественности резервуаров, постоянной тенденции к росту заболеваемости и наносимого им значительного социально-экономического ущерба. Микроорганизмы рода Campylobacter в качестве этиологического фактора ОКИ встречаются чаще, чем сальмонеллы, шигеллы и ротавирусы. По данным ВОЗ, в зависимости от географического положения региона и сезонности, кампилобактеры вызывают от 3 до 73 % ОКИ (Сафонова и др., 1988; Сичинский, 1991; Иванов, Бойцов, Порин, 1995; Кирик, 1995; Черкасский, Подунова, Акулова, 1995; Friedman et al., 2001).

Значимость проблемы распространения кампилобактериоза подтверждает тот факт, что ВОЗ включила эту инфекцию в национальную программу по борьбе с инфекционными заболеваниями в 108 странах мира, в том числе и в России (Клево, 2006).

Кампилобактериоз подлежит обязательной регистрации в США, Великобритании, Франции, Германии и во многих других европейских странах. В России диагностика кампилобактериоза проводится редко, что приводит к отсутствию четкой информации о распространенности этого заболевания в РФ (Кветная, Железова, Партина, 2008).

Основным естественным резервуаром бактерий рода Campylobacter является промышленная птица, в первую очередь, бройлерная, и животные. В США бройлерная птица в возрасте 30 - 45 дней обсеменена кампилобактерами, при этом концентрация микроорганизмов у птицы в среднем составляет 10⁶ - 10⁷ КОЕ/г фекалий (Светоч и др., 2007).

Контаминация бактериями рода Campylobacter бройлерной птицы может достигать 100 %, а послеубойная обработка ее не всегда предотвращает попадание указанных бактерий на тушки птицы (Жакипбаева, 1992; Болохович и др., 1995;Wallace, Stanley, 1998).

Кроме этого кампилобактериоз наносит существенный экономический ущерб птицеводству за счет снижения яйценоскости, живой массы, падежа птицы и затрат на ликвидационные мероприятия (Кирьянов, 1992).

Актуальность проблемы связана с тем, что при употреблении в пищу недостаточно термически обработанного мяса птицы, появляется риск возникновения кампилобактериоза у людей.

Бессимптомное течение инфекции и опасность реализации населению контаминированных продуктов убоя кур, резко увеличивает их роль в распространении кампилобактериоза среди потребителей. (Свирина, 1992; Новикова, 2001).

Эпидемиологическая опасность мяса возрастает в связи с тем, что бактерии рода Campylobacter высококонтагиозны, что позволяет рассматривать их как возможный этиологический фактор профессионального заболевания у работников птицеводства (Blaser et al., 1986; Tee et al., 1987; Кирьянов, 1992).

В нашей работе, мы исследовали материал из птицефабрик и птицеводческих хозяйств Саратовской области, на наличие C. jejuni и C.coli, так как в большинстве случаев именно эти виды вызывают ОКИ животных и птиц.

Сведений о распространенности кампилобактериоза среди птиц в районах Саратовской области в литературе отсутствовали, до настоящего времени, поскольку бактериологические исследования на кампилобактериоз не проводились. Такое положение и определяет актуальность исследования материалов из птицефабрик и птицеводческих хозяйств, а также продуктов убоя кур на наличие возбудителя кампилобактериоза.

Цель работы - изучение распространения и идентификации бактерий рода Campylobacter на птицефабриках и птицеводческих хозяйствах Саратовской области, а также выявление кампилобактеров в продуктах убоя птицы.

Задачи исследования:

1. Провести сравнительный анализ по содержанию кампилобактеров в содержимом желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) и в смывах с тушек здоровой птицы и больной, направленной на санитарный убой на птицефабриках и в птицеводческих хозяйствах Саратовской области.

2. Определить видовой состав выделенных кампилобактеров и изучить их биологические свойства.

3. Оценить влияние условий обработки тушек птицы на степень их бактериальной контаминации перед упаковкой.

4. Провести выявление С. jejuni в мясе и субпродуктах кур, реализуемых в торговой сети города Саратова, с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР); сравнить эффективность бактериологического метода диагностики кампилобактеров и метода ПЦР.

5. Разработать рациональную схему бактериологического исследования продуктов убоя птиц для выявления и идентификации бактерий рода Campylobacter.

Научная новизна

· Впервые установлен факт обнаружения бактерий рода Сampylobacter в продуктах убоя кур на птицефабриках и птицеводческих хозяйствах Саратовской области; подтверждена роль мяса и продуктов убоя птицы, как источника передачи кишечного кампилобактериоза при несоблюдении санитарно-гигиенических требований.

· Впервые показано, что С. jejuni и С. coli сохраняются в продуктах убоя птицы, в том числе, в желудках и печени кур, поступающих в сети розничной торговли, а также присутствуют в смывах с тушек, как больной, так и здоровой птицы.

· Основными видами, выделенными при кампилобактериозе у птиц, явились С.jejuni и С. coli; были изучены их биологические свойства.

· Установлено, что ПЦР является эффективным методом индикации С.jejuni в продуктах убоя птицы и по чувствительности, и времени постановки анализа существенно превосходит общепринятый бактериологический метод.

Практическая значимость работы

Полученные данные расширяют представление о распространении бактерий рода Campylobacter в продуктах убоя птицы птицефабрик и племрепродукторов Саратовской области, открывая новые возможности для научно-обоснованного подхода к применению современных методов диагностики.

Для выявления и идентификации бактерий рода Campylobacter была разработана рациональная схему бактериологического исследования продуктов убоя птиц. бактерия кампилобактер птица тушка

По результатам исследований опубликованы «Методические рекомендации по выделению кампилобактеров из продуктов убоя птицы и их дифференциация», предназначенные для проведения практических занятий студентов старших курсов, а также для работы аспирантов и научных работников, специализирующихся в области ветеринарной микробиологии, рекомендованные Учебно-методической комиссией и одобренные Ученым советом ветеринарного факультета Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова (протокол № 4 от 26 октября 2007 г.)

Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии, факультета ветеринарной медицины и на кафедре технологии мяса и мясопродуктов факультета технологии продуктов питания ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова».

Основные положения, выносимые на защиту

1. На птицефабриках и птицеводческих хозяйствах Саратовской области впервые выделены бактерии рода Campylobacter, в материале от птиц и продуктах ее убоя, которые сохраняются в процессе переработки.

2. Для индикации С. jejuni в материале от птиц и продуктах ее убоя использовали метод ПЦР.

3. Разработан доступный для практических исследований метод бактериологического анализа и идентификации С. jejuni и С. coli в материале от птиц и продуктах ее убоя.

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ имени Н.И. Вавилова», в рамках ассоциации «Аграрное образование и наука» за 2007 - 2008 гг.

Апробация работы

· Материалы диссертации доложены на:

· Научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов СГАУ, посвященной 119 годовщине со дня рождения академика Н.И. Вавилова (2006 г.);

· Всероссийской научно - практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и животноводства» (2007 г.);

· Международной научно - практической конференции «Технология и продукты здорового питания» (2007 г.);

· Международной научно - практической конференции «Актуальные проблемы производства продукции животноводства» (2007 г.);

· Научной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов СГАУ по итогам научно - исследовательской работы за 2007 - 2008 гг. (2008 г.);

· Четвертой международной конференции, посвященной 85-летию Санкт-Петербургского НИИЭМ имени Пастера и 120-летию Парижского института Пастера (2008 г.);

· Всероссийской научно - практической конференции, посвященной памяти профессора кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГОУ ВПО Саратовского ГАУ им. Н.И. Вавилова, профессора, доктора медицинских наук Зыкина Леонида Федоровича «Актуальные проблемы ветеринарной патологии сельскохозяйственных животных и птиц» (Саратов, 2008);

· II Международной научно - практической конференции «Технология и продукты здорового питания» (Саратов, 2008).

Публикации

По материалам диссертации опубликованы 12 работ, из них одна статья в журнале, входящем в перечень ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, списка использованных литературных источников и приложения. Материалы диссертации изложены на 109 страницах машинописного текста, иллюстрированы 11 таблицами и 9 рисунками. Список использованных литературных источников включает 145 наименований, в том числе 82 зарубежных.

Собственные исследования

Материалы и методы

Материалами, для исследования бактериологическим методом, из птицефабрик, племенных птицеводческих заводов и частных хозяйств Саратовской области послужили:

· содержимое ЖКТ клинически здоровой птицы;

· содержимое ЖКТ птицы, которую при внешнем осмотре и по клиническим признакам направляли на санитарный убой;

· смывы из брюшной полости тушек после потрошения (до промывки);

· смывы из брюшной полости тушек готовых к упаковке.

Содержимое ЖКТ здоровых кур отбирали в момент отделения от тушек при механическом или ручном потрошении на конвейере. Забор ЖКТ кур направленных на санитарный убой осуществляли после ручного потрошения тушек.

Отобранный материал упаковывали в полиэтилен и доставляли в лабораторию, не позднее трех часов после выделения. Делали надрезы в тонком или толстом отделах кишечника, на желудке, откуда материал забирался бактериологической петлей и пересевался на селективную среду - основа агара для бруцелл (Brucella Agar Base (без добавок) М074 - 500G, производства HiMedia Laboratories Pvt. Ltd. Mumbai - 400086, India) с антибиотиками (фузидин, рифампицин, амфотерицин В) и с добавлением дефибринированной крови барана.

Чашки Петри с посевами помещали в эксикатор. Для создания микроаэрофильных условий пользовались газовыми пакетами (Anaerogas CampyloPack 3,5 L (LE002D), производства HiMedia Laboratories Pvt. Ltd. Mumbai - 400086, India; BBL 43-71045 CampyPakPlus and GasPak are trademarks of Beston Dickinson and Company, USA) или методом «горящей свечи». Кроме этого, для увеличения количества углекислого газа, в эксикатор со свечей помещали колбу с 10 мл водопроводной воды и 2 - 3 г кристаллизованной лимонной кислоты. Герметично закрытый эксикатор помещали в термостат при 42 ?С на 48 часов. Подозрительные колонии отбирали при помощи лупы и проводили их биохимическую идентификацию. Биохимические тесты проводили в следующей последовательности: определение каталазной и оксидазной (ОКСИтест (MIKRO-LA-TEST OXItest), производства PLIVA - Lachema Diagnostika s.r.о., Brno, CZ) активности и способности гидролизовать гиппурат натрия (ГИППУРАТтест (MIKRO-LA-TEST HIPPURATEtest), производства PLIVA - Lachema Diagnostika s.r.о., Brno, CZ или диски с гиппуратом натрия (Hippurate Hp DD035), производства HiMedia Laboratories Pvt. Ltd. Mumbai - 400086, India).

Следующим этапом нашей работы стало выделение кампилобактерий из смывов с брюшной полости тушек здоровых кур. Смывы с тушек брали после потрошения до промывки и непосредственно перед упаковкой.

Сухим стерильным ватным тампоном забирали материал из брюшной полости тушки и помещали его в пробирку с тиогликолевым бульоном, который используют в качестве транспортной среды (питательная среда для контроля стерильности сухая) производства ОАО «Биомед» им. И.И. Мечникова).

Из транспортной среды производили высевы на селективную среду.

По разработанной методике составили схему лабораторной диагностики кампилобактериоза (рис. 1).

Исследования методом ПЦР проводили в научно-исследовательской лаборатории «Геном» при кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии, факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ имени Н.И. Вавилова».

Отбор и подготовка исследуемого материала проводили согласно временному наставлению по применению тест-системы «КАМ-БАК» для выявления и идентификации возбудителя кампилобактериоза Campylobacter jejuni методом ПЦР (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзор, АмплиСенс, Москва).

Методом ПЦР - анализа было исследовано 40 индивидуальных проб мяса и субпродуктов кур, направленных на реализацию, с трех птицефабрик Саратовской области. Параллельно проводили бактериологическое исследование.

Статистическую обработку полученных данных проводили по общепринятой методике (Плохинский, 1970).

Отбор проб патматериала и посев в транспортную среду

Посев на селективную среду

Выращивание культур

Идентификация кампилобактеров

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рисунок 1 Схема лабораторной диагностики кампилобактериоза

Результаты исследований

Исследование желудочно-кишечного тракта кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области на наличие С. jejuni и С. coli

При исследовании птицы с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области, обследовали ЖКТ как здоровой птицы так и больной, направленной на санитарный убой. Результаты выделения бактерий вида С. jejuni и С. coli из ЖКТ клинически здоровых кур и кур, направленных на санитарный убой, представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

Результаты обследования желудочно-кишечного тракта клинически здоровых кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области

№ п/п	Наименование предприятия	Количество исследуемых проб	Кол-во выделенных штаммов C.jejuni	Кол-во выделенных штаммов C.coli
1	Птицефабрика “Михайловская” - Татищевский район	11	1	-
2	Племенной птицезавод “Царевщенский-2” - Балтайский район	10	1	1
3	Племрепродуктор I порядка “Маркс” - Марксовский район	10	-	1
4	“Птицефабрика имени Карла Маркса” - Энгельский район	12	1	-
5	Птицефабрика “Лысогорская”- Лысогорский район	25	-	-
6	Племрепродуктор I порядка “Зоринский” - Саратовский район	18	1	-
7	Птицефабрика «Петровская» - Петровского района	5	-	-
8	“Татищевская птицефабрика” - Татищевский район	15	-	-
Итого: шт. (%)	106 (100 %)	4 (3,8 %)	2 (2 %)

Таблица 2

Результаты обследования желудочно-кишечного тракта кур направленных на санитарный убой, с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области

№ п/п	Наименование предприятия	Количество исследуемых проб	Кол-во выделенных штаммов C.jejuni	Кол-во выделенных штаммов C.coli
1	Птицефабрика “Михайловская” - Татищевский район	10	-	1
2	Племенной птицезавод “Царевщенский-2” - Балтайский район	10	3	1
3	Племрепродуктор I порядка “Маркс” - Марксовский район	10	1	1
4	“Птицефабрика имени Карла Маркса” - Энгельский район	13	1	-
5	Птицефабрика “Лысогорская”- Лысогорский район	25	3	-
6	Племрепродуктор I порядка “Зоринский” - Саратовский район	18	1	2
7	“Татищевская птицефабрика” - Татищевский район	15	1	1
Итого: шт. (%)	101 (100 %)	10 (10 %)	6 (6 %)

Соотношение количества выделенных штаммов С. jejuni и С. coli из ЖКТ кур клинически здоровых и направленных на санитарный убой, с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области представлено на рисунках 2 и 3.

Все выделенные штаммы по культурально - морфологическим свойствам были типичны для кампилобактеров: на плотных питательных средах наблюдались негемолитические, сероватые, плоские, влажные, блестящие, колонии, иногда более плотные, выпуклые; при 42 ?С рост обильный, иногда в виде влажной прозрачной пленки на поверхности питательной среды. В мазках бактерии представляли собой мелкие грамотрицательные палочки в виде запятой или соединенные в виде «крыльев чайки».

Все исследуемые культуры, которые проявляли положительные результаты с тестами на продукцию каталазы, цитохромоксидазы и гидролиз гиппурата натрия, были отнесены к С. jejuni, как обладающие типичными свойствами (табл. 3).

Таблица 3

Биохимические свойства кампилобактеров

Вид кампилобактеров	Тесты
	цитохром-оксидаза	каталаза	гиппурат натрия
С. jejuni	+	+	+
C. coli	+	+	-

Примечание: (+) - положительный тест; (-) - отрицательный тест.



Культуры, у которых тест на гидролиз гиппурата натрия был отрицательным, отнесены нами к C. coli, как обладающие соответствующими свойствами.

На основании биохимических тестов 14 выделенных штаммов были отнесены к С.jejuni и 8 штаммов к C. coli.

В результате бактериологического исследования 207 индивидуальных проб содержимого ЖКТ кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовского, Энгельского, Татищевского, Марксовского, Петровского, Лысогорского и Балтайского районов Саратовской области, выделено 14 штаммов С.jejuni и 8 штаммов С. coli. (табл. 4). То есть соотношение количества выделенных штаммов С. jejuni из ЖКТ клинически здоровых кур и кур, направленных на санитарный убой составило 29 % к 71 %, а C. coli 25 % к 75 %, соответственно.

Процент инфицированности кур бактериями вида С. jejuni, по результатам применения бактериологического метода, составлял 6,8 %, а вида С. coli около 3,9 %.

Таким образом, общий процент инфицирования кур бактериями рода Campylobacter на исследованных птицефабриках и племенных птицеводческих заводах, по результатам применения бактериологического метода составил 10,6 %.

Таблица 4

Данные по выделению С. jejuni и С. coli из желудочно-кишечного тракта кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области

№ п/п	Наименование предприятия	Кол-во выделенных штаммов C. jejuni	Кол-во выделенных штаммов C.coli
1	Птицефабрика “Михайловская” - Татищевский район	1	1
2	Племенной птицезавод “Царевщенский-2” - Балтайский район	4	2
3	Племрепродуктор I порядка “Маркс” - Марксовский район	1	2
4	“Птицефабрика имени Карла Маркса” - Энгельский район	2	-
5	Птицефабрика “Лысогорская”- Лысогорский район	3	-
6	Племрепродуктор I порядка “Зоринский” - Саратовский район	2	2
7	“Татищевская птицефабрика” - Татищевский район	1	1
Итого: шт. (%)	14 (6,8 %)	8 (3,9 %)

Определение контаминации С. jejuni и С. coli тушек птицы в процессе переработки

Для определения контаминации бактериями видов С. jejuni и С. coli тушек птицы в процессе переработки нами были исследованы:

· смывы из брюшной полости тушек после потрошения (до промывки);

· смывы из брюшной полости тушек, готовых к упаковке.

Всего было исследовано 109 проб смывов из брюшной полости кур после потрошения (до промывки) с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовского, Энгельского, Марксовского и Лысогорского районов Саратовской области, выделено 6 штаммов С. jejuni и 6 штаммов С. coli.

Результаты выделения бактерий рода Campylobacter из смывов брюшной полости кур после потрошения представлены в таблице 5.

Таблица 5

Результаты исследования смывов с брюшной полости кур после потрошения с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области

№ п/п	Наименование предприятия	Количество исследуемых смывов	Кол-во выделенных штаммов C.jejuni	Кол-во выделенных штаммов C.coli
1	Племрепродуктор I порядка “Маркс” - Марксовский район	30	2	1
2	Племрепродуктор I порядка “Зоринский” - Саратовский район	19	1	3
3	Птицефабрика “Лысогорская”- Лысогорский район	20	1	1
4	“Птицефабрика имени Карла Маркса” - Энгельский район	40	2	1
Итого: шт. (%)	109	6 (5,5 %)	6 (5,5 %)

Было исследовано 75 проб смывов брюшной полости кур, после промывки направленных на упаковку и дальнейшую реализацию с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовского, Энгельского, Марксовского и Лысогорского районов Саратовской области, выделено 2 штамма С. jejuni и 2 штамма С. coli.

Результаты выделения бактерий рода Campylobacter из смывов брюшной полости тушек готовых к упаковке представлены в таблице 6.

На основании биохимических тестов 8 выделенных штаммов были отнесены к С.jejuni и 8 штаммов к C. coli.

Таблица 6

Результаты исследования смывов с брюшной полости кур, направленных на упаковку и дальнейшую реализацию, с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области

№ п/п	Наименование предприятия	Количество исследуемых смывов	Кол-во выделенных штаммов C.jejuni	Кол-во выделенных штаммов C.coli
1	Племрепродуктор I порядка “Маркс” - Марксовский район	10	1	1
2	Племрепродуктор I порядка “Зоринский” - Саратовский район	17	-	1
3	Птицефабрика “Лысогорская”- Лысогорский район	20	1	-
4	“Птицефабрика имени Карла Маркса” - Энгельский район	28	-	-
Итого: шт. (%)	75	2 (2,7 %)	2 (2,7 %)

Таким образом, общий процент инфицирования тушек кур бактериями рода Campylobacter на исследованных птицефабриках и племенных птицеводческих заводах по результатам применения бактериологического метода составил:

· после потрошения - 11 %.

· направленных на упаковку и дальнейшую реализацию - 5,3 %.

В результате данного эксперимента было установлено, что:

· контаминация тушек бактериями рода Campylobacter происходит, в основном, в результате попадания содержимого ЖКТ во время потрошения на конвейере, что соответствует данным многих исследователей: M.J. Blaser et al. (1982); R.C. Baker, M.D. Paredes, R.A. Qureshi (1987).

· промывка тушек кур после потрошения водопроводной водой не является достаточно эффективной, и в ряде случаев может способствовать большей обсемененности, что отмечали в своих работах некоторые исследователи: M.E. Berrang, R.J. Buhr, J.A. Cason (2001); N.J. Stern et al. (2001); F. Jorgensen et al. (2002).

На основании проведенных исследований можно предположить, что для снижения контаминации тушек кур в хозяйствах должны проводиться следующие мероприятия:

· автоматические потрошильные машины и автоматы для обработки мышечных желудков должны быть налажены так, чтобы не допускать разрыва кишечника и перекрестного обсеменения тушек;

· после промывки тушек кур их следует подсушивать, что значительно снижает возможность обсеменения продукции Campylobacter spp., поскольку данные микроорганизмы очень чувствительны к воздействию кислорода и температуры.

· внесение в воду для промывки определенных концентраций органических кислот, электрохимически активированного раствора натрия хлорида существенно уменьшает контаминацию, что отмечали в своих работах некоторые исследователи: Т.В. Алабугина, Н.В. Нефедов, М.Ю. Штукарева (1994), Е.И. Клево (2006).

Использование ПЦР для обнаружения С. jejuni в мясе и субпродуктах птицы

Методом ПЦР нами были исследованы мясо и субпродукты кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области, приобретенных в сетях розничной торговли города Саратова.

Отбор и подготовка исследуемого материала проводилась согласно временному наставлению № 13-7-2/1878 от 16 февраля 2000 года, по применению тест-системы «КАМ-БАК» для выявления и идентификации возбудителя кампилобактериоза Campylobacter jejuni методом ПЦР (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзор, АмплиСенс, Москва).

Результаты исследования продуктов убоя кур представлены в таблице 7.

Методом ПЦР исследовали материал из племрепродуктора 2 порядка «Возрождение - 1» и птицефабрики “Михайловская” Татищевского района и Аткарской птицефабрики, Аткарского района, всего 40 проб и параллельно их же исследовали бактериологическим методом.

Также, методом ПЦР нами было исследовано мясо уток, приобретенное в частном хозяйстве из Пугачевского района. Пробы мяса от 3 тушек уток отбирались из области клоаки.

При исследовании проб мяса уток в ПЦР, одна из проб была положительной на наличие С. jejuni.

Бактериологические исследования на наличие возбудителей в материалах из племрепродуктора 2 порядка «Возрождение - 1» и птицефабрики “Михайловская” Татищевского района, Аткарской птицефабрики, Аткарского района и образцов мяса уток не выявили С. jejuni.

Таблица 7

Исследование с помощью ПЦР продуктов убоя птицы, приобретенных в сетях розничной торговли города Саратова, на наличие С. jejuni

№ п/п	Наименование предприятия	Исследуемый материал	Кол-во проб	Кол-во положительных результатов
1	Племрепродуктор 2 порядка «Возрождение - 1»Татищевского района	Желудки неочищенные	10	1
2	Аткарская птицефабрика, Аткарского района	Мясо от размороженных и промытых тушек кур	17	-
3	Птицефабрика “Михайловская” - Татищевский район	Желудки очищенные и печень	13	13
Итого: шт. (%)	40 (100%)	14 (35 %)

Результаты исследования с помощью ПЦР материала (желудки кур) с племрепродуктора 2 порядка «Возрождение - 1» Татищевского района, приобретенных в сети розничной торговли города Саратова представлены на рисунке 4.



П1 П2 О1 О2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Рисунок 4 Анализ материала (желудки кур) с племрепродуктора 2 порядка «Возрождение - 1» Татищевского района (приобретенных в сетях розничной торговли города Саратова) методом ПЦР

Примечание:

П1 - положительный контроль на этапе выделения ДНК;

П2 - положительный контроль на этапе амплификации участка ДНК;

О1 - отрицательный контроль на этапе выделения ДНК;

О2 - отрицательный контроль на этапе амплификации участка ДНК.

Как следует из данных таблицы 7, выявление бактерий вида С. jejuni с помощью ПЦР в мясе и субпродуктах кур, приобретенных в сетях розничной торговли города Саратова составляет 35 %. При этом посев на селективную среду не выявил роста кампилобактерий.

Таким образом, результаты исследований подтвердили важность применения метода ПЦР в индикации бактерий вида С. jejuni.

Отсутствие роста кампилобактеров на питательных средах вполне объяснимо низкой посевной концентрацией, то есть чувствительностью используемого метода (1*10³ - 1*10⁵ КОЕ/мл), что согласуется с данными, полученными в исследованиях О.Д.Склярова, И.Л. Обухова и М.Ю.Сорокина (1999).

Таким образом, метод ПЦР существенно превышает информативность бактериологического метода и позволяет провести анализ за 5 - 7 часов, тогда как по бактериологическое исследование выделения бактерий рода Campylobacter, на это требуется 6 - 7 суток.

Все выше сказанное делает возможным рекомендовать ПЦР в качестве эффективного дополнительного экспресс - метода лабораторной диагностики бактерий рода Campylobacter у птиц и индикации кампилобактеров в продуктах убоя кур.

Выводы

1. На птицефабриках и племенных птицеводческих заводах Саратовской области бактериологическим методом было обнаружено и выделено 22 штамма С.jejuni (5,1 %) и 16 штаммов С. coli (3,7 %).

2. Анализ выделенных штаммов показал, что в содержимом желудочно-кишечного тракта кур, с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области выявлено: от клинически здоровых кур 29 % - С. jejuni и 25 % - C. coli, а от кур, направленных на санитарный убой (с остро протекающей инфекцией и явными клиническими признаками) - 71 % и 75 % соответственно.

3. Впервые установлено, что контаминация тушек бактериями рода Campylobacter происходит в результате попадания на них содержимого ЖКТ во время потрошения на конвейере (5,5 % - С. jejuni и 5,5 % - C. coli), а промывка тушек кур после потрошения водопроводной водой не является эффективной и даже может способствовать большей обсемененности.

4. Методом ПЦР в продуктах убоя птицы идентифицировано 14 положительных проб С. jejuni Высокая чувствительность метода и короткое время анализа делает возможным рекомендовать ПЦР в практику ветеринарных лабораторий для индикации кампилобактеров в продуктах убоя птицеводческих хозяйств.

5. Для выявления и идентификации бактерий рода Campylobacter предложена рациональная схема бактериологического исследования продуктов убоя птиц, предусматривающая следующие этапы: отбор проб; посев на селективные среды; идентификация.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Курако У.М. Первые случаи кампилобактериоза кур в Саратовской области / У.М. Курако, Л.Ф. Зыкин, А.Н. Шнякина // Вавиловские чтения - 2006: материалы конференции посвященной 119-й годовщине со дня рождения академика Н.И. Вавилова, 4-8 декабря 2006. Саратов, 2006. С. 58 - 62.

2. Зыкин Л.Ф. Кишечный кампилобактериоз - современная оценка проблемы / Л.Ф. Зыкин, У.М. Курако // Актуальные проблемы ветеринарной медицины и животноводства: материалы Всероссийской научно - практической конференции, 29 января - 2 февраля 2007 г. Саратов, 2007. С. 38 - 39.

3. Курако У.М. Выделение Campylobacter jejuni от кур в Саратовской области / У.М. Курако, Л.Ф. Зыкин, А.Н. Шнякина // Ветеринарная патология. 2007. №2. С. 44 - 46.

4. Курако У.М. Влияние кишечного кампилобактериоза на качественные показатели мяса птицы и птицепродуктов / У.М. Курако, Л.Ф. Зыкин // Технология и продукты здорового питания: материалы Международной научно - практической конференции. Саратов, 2007. С. 76 - 78.

5. Курако У.М. Обсемененность тушек птицы бактериями рода Campylobacter на птицефабриках и птицеплемзаводах Саратовской области / У.М. Курако // Актуальные проблемы производства продукции животноводства: материалы Международной научно - практической конференции, сентябрь 2007 г. Саратов, 2007. С. 47 - 49.

6. Курако У.М. Птица и птицепродукты, как источник кишечного кампилобактериоза / У.М. Курако // Современные технологии переработки сельскохозяйственной продукции: материалы Всероссийской научно - практической конференции, 4-8 февраля 2008 г. Саратов, 2008. С. 147 - 149.

7. Зыкин Л.Ф. Кишечный кампилобактериоз - современная оценка проблемы / Зыкин Л.Ф., Курако У.М. // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. 2008. № 2. С. 30 - 33.

8. Хапцев З.Ю. К вопросу о распространении возбудителей некоторых эмерджентных пищевых зоонозов на Территории Саратовской области / З.Ю. Хапцев, У.М. Курако, А.Н. Шнякина // Памяти профессора кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГОУ ВПО Саратовского ГАУ им. Н.И. Вавилова, профессора, доктора медицинских наук Зыкина Леонида Федоровича: материалы Всероссийской научно - практической конференции, 24-25 апреля 2008 г. Саратов, 2008. С. 19 - 23.

9. Курако У.М. Выделение и идентификация некоторых видов Campilobacter - возбудителей пищевых токсикоинфекций из продуктов убоя кур в Саратовской области / У.М. Курако, А.А. Щербаков // Памяти профессора кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГОУ ВПО Саратовского ГАУ им. Н.И. Вавилова, профессора, доктора медицинских наук Зыкина Леонида Федоровича: материалы Всероссийской научно - практической конференции, 24-25 апреля 2008 г. Саратов, 2008. С. 69 - 72.

10. Курако У.М. Использование ПЦР для быстрого обнаружения C. jejuni в мясе и субпродуктах кур / У.М. Курако, Т.В. Спиряхина, А.А. Щербаков // Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: тезисы 4 международной конференции, посвященной 85-летию Санкт-Петербургского НИИЭМ имени Пастера и 120-летию Парижского института Пастера, 2-4 июня 2008. Санкт - Петербург, 2008. С. 80.

11. Курако У.М. Выделение и идентификация Campilobacter jejuni из продуктов убоя кур / У.М. Курако, А.А. Щербаков // Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: тезисы 4 международной конференции, посвященной 85-летию Санкт-Петербургского НИИЭМ имени Пастера и 120-летию Парижского института Пастера, 2-4 июня 2008. Санкт - Петербург, 2008. С. 127.

12. Курако У.М. Распространение кампилобактериоза на птицефабриках и племрепродукторах Саратовской области / У.М. Курако / Технология и продукты здорового питания: материалы II Международной научно - практической конференции, Саратов: Научная книга, 2008. С. 84 - 86.

Размещено на Allbest.ru