Экспериментальное моделирование процессов индукции дифференцировки и апоптоза опухолевых клеток in vitro

2. Биологическая активность структурно-различных химических реагентов на клетки сублиний К562/4-NQO и К562/2-DQO

Одной из главных причин неудачного использования цитостатиков в клинике является индукция у опухолевых клеток фенотипа МЛУ (Krishna, Mayer, 2000). В настоящее время представляется актуальным поиск соединений, способных усилить дифференцировку резистентных опухолевых клеток, что рассматривается в качестве одного из терапевтических подходов при лечении опухолей (Prados et al., 1998). Итогом такой дифференцировки могут стать замедление или полное прекращение пролиферации, индукция апоптоза, модуляция чувствительности опухолевых клеток к лизису ЕКК. Нами были получены сублинии клеток К562, резистентные к 2-DQO и 4-NQO, и охарактеризованы по способности подвергаться дифференцировке и апоптозу по сравнению с клетками родительской линии.

Клетки сублиний были протестированы на чувствительность к ДНК-интеркалирующему агенту БЭ, ингибитору сборки микротрубочек колхицину, 2-DQO и 4-NQO. Результаты представлены в таблице 10. Клетки К562/4-NQO оказались высокоустойчивыми к БЭ и 2-DQO, но были чувствительны к колхицину. Клетки К562/2-DQO показали одновременно высокую устойчивость ко всем реагентам, однако их устойчивость к БЭ была ниже по сравнению с клетками К562/4-NQO.

Таблица 10. Чувствительность клеток К562/4-NQO и К562/2-DQO к цитостатическим агентам

Далее нами показано, что в клетках К562/4-NQO, и особенно К562/2-DQO, процессы эритроидной дифференцировки протекали более интенсивно по сравнению с родительской линией. Причем обнаруженный эффект имел место только при обработке тимидином (рис. 6), но не бутиратом натрия или ДМСО. Резкое увеличение содержания гемоглобина в клетках сублиний обусловлено повышением синтеза белка (в частности, в-глобина, рис. 7), а не увеличением численности клеток в культурах.

В условиях индуцированной тимидином дифференцировки клеток К562/2-DQO наблюдалось резкое повышение экспрессии гена каспазы-3, но не каспазы-9 (рис. 8). Для клеток К562/4-NQO подобного эффекта не отмечено. Экспрессия генов каспаз в необработанных клетках К562/4-NQO и К562/2-DQO снижена. Снижение экспрессии также имело место при обработке тимидином+дексаметазон. При этом в отличие от родительских, в клетках сублиний апоптоз не индуцировался.

Рис. 6. Влияние обработки клеток К562, К562/4-NQO и К562/2-DQO тимидином на содержание гемоглобина за 2 (а) и 4 (б) суток

1 - необработанные клетки К562 (контроль); 2, 3, 4 - клетки К562, обработанные 1, 2 и 3 мМ тимидина, соответственно; 5 - необработанные клетки К562/4-NQO; 6, 7, 8 - клетки К562/4-NQO, обработанные 1, 2 и 3 мМ тимидина, соответственно; 9 - необработанные клетки К562/2-DQO; 10, 11, 12 - клетки К562/2-DQO, обработанные 1, 2 и 3 мМ тимидина, соответственно. Различия достоверны (p<0,05; p<0,01) в парах: 2-6, 2-10; 3-7, 3-11; 4-8, 4-12

Рис. 7. Электрофореграмма ПЦР-продуктов гена в-глобина клеток родительской линии К562 и сублиний К562/2-DQO, К562/4-NQO

1 - маркер длин фрагментов pUC19/Msp I (0,5 мкг/мкл, 501-67 bp); 2 - клетки К562, обработанные тимидином; 3 - необработанные клетки К562; 4 - необработанные клетки К562/4-NQO (сублиния, резистентная к 1,0Ч10^-6 М 4-NQO); 5 - необработанные клетки К562/4-NQO (сублиния, резистентная к 1,0Ч10^-7 М 4-NQO); 6 - необработанные клетки К562/2-DQO (сублиния, резистентная к 7,6Ч10^-5 М 2-DQO); 7 - клетки К562/2-DQO, обработанные тимидином. Концентрация тимидина - 2 мМ, время обработки - 2 суток

Рис. 8. Относительная экспрессия генов каспазы-9 (а) и каспазы-3 (б) в клетках родительской линии К562 и сублиний К562/2-DQO, К562/4-NQO

1 - необработанные клетки К562; 2 - клетки К562, обработанные тимидином; 3 - необработанные клетки К562/2-DQO; 4 - клетки К562/2-DQO, обработанные тимидином; 5 - необработанные клетки К562/4-NQO; 6 - клетки К562/4-NQO, обработанные тимидином. Концентрация тимидина - 2 мМ, время обработки - 2 суток. Относительная экспрессия гена (ДС_t) в опыте определялась исходя из экспрессии гена в контроле, которая принималась за единицу: ДС_t=2^{Сt(контроля)- Сt(опыта)}

Различия достоверны (p<0,05) в парах: 1-3, 1-5, 2-4 (на рис. а и б); 1-2, 3-4, 5-6 (на рис. б)

Таким образом, в клетках К562, резистентных к 2-DQO и 4-NQO, наблюдается более выраженная индукция дифференцировки и сниженная чувствительность к индукции апоптоза по сравнению с родительской линией. Подобные изменения в сублиниях связаны с развитием устойчивости к 4-NQO, 2-DQO и другим соединениям (агентам группы МЛУ).

3. Биологическая активность структурно-различных химических реагентов на клетки К562/ts-p53

Клетки К562 дефектны по гену р53, который является важнейшим элементом ответа на стрессорные воздействия, в том числе на воздействие химиотерапевтических препаратов. Изменения в гене приводят к нарушению способности клеток вступать в апоптоз, останавливаться в контрольных точках клеточного цикла в ответ на повреждение и к развитию МЛУ (Ставровская, 2000). Чаще всего в гене обнаруживаются миссенс-мутации, приводящие к замене одного из аминокислотных остатков в ДНК-связывающем домене белка, что отражается на особенностях влияния мутантных форм р53 на фенотип опухолевых клеток. Нами было изучено влияние мышиного р53 белка, мутантного по Val 135, на дифференцировку и апоптоз клеток К562/ts-p53 после их обработки N-оксидированными производными хинолина в комбинации с эритроидными индукторами. При 37^оС этот белок имеет типичные характеристики мутантного белка, а при 32^оС приобретает конформацию и свойства белка дикого типа. В качестве контроля были использованы клетки с введенным пустым ретровирусным вектором pPS/neo (К562/neo).

Из результатов следует (табл. 12), что в клетках К562/ts-р53 процессы эритроидной дифференцировки и апоптоза протекали более интенсивно по сравнению с клетками К562/neo и клетками родительской линии. Тимидин, бутират натрия и ДМСО повышали синтез гемоглобина в клетках K562/ts-p53. Полученные данные подтверждают ранее обнаруженную способность опухолевого супрессора усиливать эритроидную дифференцировку клеток (Chylicki et al., 2000a; Chylicki et al., 2000b; Yao et al., 2004). Ингибирование синтеза гемоглобина и индукция апоптоза наблюдались при обработке QO. Установлено, что в индукции эритроидной дифференцировки клеток участвует каспаза-3, поскольку добавление ингибитора фермента приводило к снижению синтеза гемоглобина. QO не активировал каспазу-3. Обработка клеток тимидином или бутиратом приводила к повышению активности каспазы-9 и индукции апоптоза. При добавлении в культуры QO наблюдалось резкое возрастание активности фермента и выраженный апоптоз. Эффект отсутствовал при обработке ДМСО или ДМСО+QO. Вероятно, ДМСО способствует инактивации р53, что отражается на развитии апоптоза, индуцированного QO. Особенности клеток K562/ts-p53 объясняются способностью мутантного р53 белка в определенных условиях сохранять некоторые активности белка дикого типа: связываться с р53-респонсивными элементами и увеличивать транскрипцию репортерных генов, участвующих в процессах дифференцировки или апоптоза.

Таблица 12. Биологическое действие индукторов эритроидной дифференцировки и их комбинаций с QO на клетки K562/ts-p53

Примечание - В таблице приведены показатели клеток, обработанных реагентами в течение 2-х суток при 32⁰С; сравнение результатов действия реагентов проводили в парах К562/neo -- K562/ts-p53; достоверных различий между клетками К562/neo и родительскими К562 не обнаружено; пролиферация клеток в представленных вариантах была блокирована; “+” изменение исследуемого показателя достоверно (р<0,05); “++” изменение исследуемого показателя достоверно (р<0,01); “-” изменение исследуемого показателя отсутствует

Таким образом, в настоящей работе нами показано, что клетки эритромиелолейкозной линии человека К562 в зависимости от условий способны подвергаться химически индуцированным дифференцировке и апоптозу, продемонстрированы основные различия в индукции этих процессов в клетках родительской линии К562, резистентных сублиний (К562/4-NQO, К562/2-DQO) и клетках-трансфектантах (K562/ts-p53). Несмотря на структурное различие используемых реагентов, итоговый биохимический эффект их действия на клетки может быть совершенно одинаков. В частности, нуклеозиды, натриевые соли жирных кислот с укороченной углеводородной цепью, ДМСО, некоторые N-оксиды (2-NSQO, 4-NSQO и DPyO), циклофосфан, третбутиламиновое производное тиазофосфола стимулируют эритроидную дифференцировку и/или апоптоз в опухолевых клетках. Напротив, системные кортикостероиды, ФМА, QO, 4-NQO подавляют индуцированную эритроидную дифференцировку и стимулируют созревание клеток моноцито-макрофагального или мегакариоцитарного ряда. При этом ФМА и ДМСО способны блокировать апоптоз клеток. В связи с этим, в реализации конкретной клеточной функции принимают участие различные сигнальные пути, воздействуя на которые можно определенным образом регулировать протекание клеточного процесса в том или ином направлении. Одни и те же участники сигнальных путей клетки могут выполнять роль ключевых звеньев модуляции различных клеточных функций, например, дифференцировки и апоптоза. Нами показано, что одними из таких ключевых участников процессов являются клеточные каспазы. Функциональная активность каспаз и других протеиназ во многом определяет чувствительность опухолевых клеток к лизису ЕКК и цитотоксических Т-лимфоцитов организма.

Выводы

Исследованные химические соединения обладают различным цитотоксическим и антипролиферативным действием на клетки эритромиелолейкозной линии человека К562, что объясняется их структурными особенностями и механизмом внутриклеточного действия. Жизнеспособность клеток в зависимости от условий обработки варьирует от 25% до 95%, пролиферативная активность частично или полностью подавляется.

Эритроидная дифференцировка опухолевых клеток К562 индуцируется нуклеозидами, солями жирных кислот с укороченной углеводородной цепью, ДМСО, 2-NSQO, 4-NSQO, DPyO, циклофосфаном и 2-третбутиламино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ином. В клетках увеличивается активность д-аминолевулинатсинтазы, каспазы-3, повышается синтез гемоглобина. Сочетанное действие двух различных индукторов эритроидной дифференцировки вызывает либо синергический, либо антагонистический эффекты.

Миелоцитарная дифференцировка опухолевых клеток сопровождается экспрессией на их поверхности моноцито-макрофагальных - CD11b, CD14, и мегакариоцитарного - CD41, маркеров, а также активацией гемоксигеназы и индуцируется преднизолоном, дексаметазоном, ФМА, QO, 2-MeQO, 4-NQO, 2-Me-4-NQO, 2-DQO, 4-DQO, 2-анилино-4-тиоксо-4-хлорметил-1,3,4-тиазофосфол-2-ином.

Переключение процессов клеточной дифференцировки с эритроидного на моноцито-макрофагальный или мегакариоцитарный влечет за собой переключение функциональной активности каспаз и модуляцию процессов апоптоза. Апоптоз, индуцированный в клетках эритроидными индукторами, реализуется с участием каспазы-9. ФМА подавляет эритроидную, индуцирует моноцито-макрофагальную дифференцировку, блокирует активность каспазы-9 и апоптоз клеток К562, при этом активируется каспаза-6. Каспаза-3 в зависимости от условий участвует как в процессах дифференцировки, так и апоптоза опухолевых клеток.

Апоптоз опухолевых клеток К562, индуцированный стирильными производными N-оксидов хинолина и пиридина, а также производными тиазофосфола, осуществляется при участии митохондриального цитохрома С, каспаз-3, -8 и -9. Реагенты оказывают влияние на процессы окисления-восстановления цитохрома С, модулируют набухание-сжатие митохондрий и способствуют выходу данного белка в цитоплазму. Преобладание в цитоплазме клеток окисленной или восстановленной форм цитохрома С отражается на реализации программы апоптоза.

6. Изменение чувствительности клеток К562 к лизису естественными клетками-киллерами лейкоцитов периферической крови человека зависит от типа химического соединения, концентрации, времени воздействия, исходного состояния клеток, способных подвергаться дифференцировке и/или апоптозу. Обработка клеток индукторами эритроидной дифференцировки повышает их чувствительность к лизису. Влияние индукторов миелоцитарной дифференцировки и/или апоптоза зависит от процесса, первично индуцируемого в опухолевых клетках. Чувствительность клеток к лизису снижается, если первично индуцируется дифференцировка и повышается, если индуцируются апоптоз и дифференцировка.

7. Эритроидная дифференцировка в клетках резистентных сублиний К562/4-NQO, и особенно К562/2-DQO, протекает более интенсивно по сравнению с родительскими К562, при этом регистрируется резкое повышение экспрессии генов в-глобина и каспазы-3. Экспрессия гена каспазы-9 не изменяется. Сублинии являются устойчивыми к апоптоз-индуциру-ющему действию исследуемых ксенобиотиков.

8. Процессы эритроидной дифференцировки и апоптоза в клетках К562/ts-р53, обработанных индукторами при 32⁰С, протекают более интенсивно по сравнению с родительской линией К562. В индукции эритроидной дифференцировки клеток участвует каспаза-3.

Стирильные производные N-оксидов хинолина, пиридина и производные тиазофосфола являются наиболее перспективными реагентами для создания на их основе препаратов нового типа, использование которых может повысить эффективность лечения онкологических заболеваний.

Работа выполнялась при финансовой поддержке грантов Фонда Президента Российской Федерации «Поддержка ведущих научных школ РФ» (НШ-894.2003.4, НШ-4310.2006.4), РФФИ (гранты 99-04-49442, 01-04-06530, 02-04-49999, 02-04-06427), С.-Петербургского КЦФЕ (МО1-2.6П-783, диплом АСП № 301106) и Целевой программы РАН «Поддержка молодых ученых».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Волкова Т.О., Немова Н.Н. Молекулярные механизмы апоптоза лейкозной клетки: Отв. ред. д.м.н., проф. А.И. Шевченко. - М.: Наука, 2006. - 208 с.

2. Анисимов А.Г., Болотников И.А., Волкова Т.О. Влияние тимидина и форбол-12-миристат-13-ацетата на эритроидную дифференцировку клеток К562 и чувствительность их к неспецифическому лизису спленоцитами крыс // Бюл. эксперим. биол. и медицины, 1999. - Т. 128. - № 11. - С. 521-524.

3. Анисимов А.Г., Болотников И.А., Волкова Т.О. Изменение чувствительности клеток К562 к неспецифическому лизису лейкоцитами человека и крысы под влиянием бутирата натрия, диметилсульфоксида и форбол-12-миристат-13-ацетата // Онтогенез, 2000. - Т. 31. - № 1. - С. 47-52.

4. Анисимов А.Г., Болотников И.А., Чекмасова А.А., Волкова Т.О. Взаимосвязь индуцированной in vitro дифференцировки клеток опухолевых линий и чувствительности их к неспецифическому лизису ЕКК. Возможные механизмы // Цитология, 2000. - Т. 42. - № 10. - С. 923-936.

5. Анисимов А.Г., Чекмасова А.А., Волкова Т.О., Немова Н.Н. Обработка клеток К562 тимидином на фоне дексаметазона повышает чувствительность опухолевых клеток к литическому действию лейкоцитами человека // Цитология, 2001. - T. 43. - № 1. - C. 76-81.

6. Волкова Т.О., Немова Н.Н. Биологические эффекты in vitro стирильных производных ряда хинолина и пиридина на примере клеток опухолевых линий: В книге «Химия и биологическая активность синтетических и природных соединений»/ Под ред. д.х.н. В.Г. Карцева и акад. Г.Н. Толстикова. - М.: ИРИДИУМ-ПРЕСС, 2001. - С. 254-257.

7. Анисимов А.Г., Волкова Т.О., Чекмасова А.А., Немова Н.Н. Форбол-12-миристат-13-ацетат отменяет ингибирующее действие А23187 на эритроидную дифференцировку клеток К562, индуцированную диметилсульфоксидом // Известия РАН. Серия биол., 2002. - № 2. - С. 142-148.

8. Анисимов А.Г., Волкова Т.О., Чекмасова А.А., Немова Н.Н. Химически-индуцированная дифференцировка клеток опухолевых линий // Онтогенез, 2002. - Т. 33. - № 5. - С. 325-341.

9. Волкова Т.О., Малышева И.Е. Модуляция процессов дифференцировки и апоптоза клеток промиелоцитарной линии человека К562 стирильными производными ряда хинолина и пиридина // Вестник молодых ученых. Серия «Науки о жизни», 2002. - вып. 4. - С. 58-63.

10. Волкова Т.О., Малышева И.Е., Немова Н.Н. Сравнительный анализ дифференцирующего и апоптогенного действий цитидина, тимидина и гуанозина на клетки эритромиелолейкозной линии человека К562 // Вопросы мед. химии, 2002. - Т. 48. - № 6. - С. 586-593.

11. Анисимов А.Г., Чекмасова А.А., Волкова Т.О., Немова Н.Н. Эритроидная дифференцировка сублиний клеток К562, резистентных к 2-(4'-диметил-аминостирил)хинолин-1-оксиду или 4-нитрохинолин-1-оксиду, значительно усиливается при обработке тимидином // Известия РАН. Серия биол., 2003. - № 1. - С. 37-46.

12. Волкова Т.О., Малышева И.Е., Зыкина Н.С. Модуляция активности каспаз в клетках К562 в условиях обработки бутиратом, изобутиратом и изовалератом натрия // Вестник молодых ученых. Серия «Науки о жизни»,2004- вып.1.-С. 72-76.

13. Волкова Т.О., Малышева И.Е., Немова Н.Н. Форбол-12-миристат-13-ацетат ингибирует апоптоз в эритролейкемических клетках К562, индуцированный рядом нуклеозидов // Онтогенез, 2005. - Т. 36, № 1. - С. 18-25.

14. Варга О.Ю., Игнатьев В.К., Рябков В.А., Волкова Т.О., Кручек М.М. Активность программированной клеточной гибели лимфоцитов при ревматоидном артрите // Терапевтический архив, 2006. - № 6. - С. 14-19.

15. Волкова Т.О., Зыкина Н.С., Малышева И.Е., Немова Н.Н. Клеточные механизмы индукции апоптоза в эритромиелолейкозной линии человека К562 при обработке производными хинолин-N-оксида // Биомедицинская химия, 2006. - Т. 52, № 2. - С. 180-187.

16. Volkova T.O., Zykina N.C., Malycheva I.E., Nemova N.N. Cell mechanisms for apoptosis induction in K562 human erythroleukemia cell line treated with quinoline-N-oxides derivatives // Biochemistry (Supplement Series B: Biomedical chemistry), 2007. - Vol. 1 (1). - P. 82-86 (англ. вар. 15).

17. Волкова Т.О., Немова Н.Н. Функциональное перераспределение активностей каспаз в клетках К562, индуцированных к дифференцировке и апоптозу производными тиазофосфола // Биомедицинская химия, 2008. - Т. 54., № 6. - С. 643-648.

18. Болотников И.А., Волкова Т.О., Анисимов А.Г. Модуляция эритроидной дифференцировки и чувствительности к неспецифическому лизису клеток человеческой эритромиелолейкозной линии К562 в условиях обработки рядом метаболических ингибиторов / Международная конф. «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». - Пущино, 1998. - С. 68-71.

19. Volkova T.O., Anisimov A.G. Change of number and viability of cells K562 in conditions of treatment by a number of chemical reagents / Proceeding of the International young research school. - Petrozavodsk, 1998. - Vol. 1. - P. 59-68.

20. Болотников И.А., Волкова Т.О., Анисимов А.Г. Влияние индукторов дифференцировки клеток К562 на чувствительность их к лизирующему действию ЕКК-содержащих лейкоцитов человека и крыс // Цитология, 1999. - Т. 41. - № 3/4. - С. 262.

21. Волкова Т.О., Чекмасова А.А., Анисимов А.Г. Биологическая активность некоторых производных хинолина на клетки К562 / II Съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров. - С.-Петербург, 2000. - Т. 2. - С. 151.

22. Анисимов А.Г., Волкова Т.О., Чекмасова А.А., Андреев В.П. Взаимосвязь между апоптогенной активностью ряда производных хинолина и пиридина и их способностью ингибировать эритроидную дифференцировку клеток линии К562 // Цитология, 2000. - Т. 42. - № 3. - С. 258.

23. Волкова Т.О., Чекмасова А.А., Анисимов А.Г. Форбол-12-миристат-13-ацетат восстанавливает дифференцирующее действие диметилсульфоксида на клетки К562, подавленное предобработкой клеток кальциевым ионофором А23187 // Цитология, 2001. - Т. 43. - № 4. - С. 328.

24. Volkova T.O., Nemova N.N. Styryl derivatives of quinolines and pyridine: biological action on the cells of tumor lines in vitro / International conference “The Chemistry and Biological Activity of Nitrogen-Containing Heterocycles and Alkaloids. - Moskow, 2001. - Vol. 1. - P. 553-556.

25. Волкова Т.О., Черномордая Ю.П., Малышева И.Е., Немова Н.Н. Модулирующее действие N-оксидированных производных хинолина на индуцированную эритроидную дифференцировку клеток К562 зависит от типа эритроидного индуктора и последовательности обработки опухолевых клеток реагентами // Цитология, 2001. - Т. 43. - № 9. - С. 846.

26. Волкова Т.О. Цитотоксическое и апоптогенное действие индукторов дифференцировки клеток миелоидных опухолевых линий / 6^ая Санкт-Петербургская Ассамблея молодых ученых и специалистов. - СПб.: Изд-во СПбГУ, 2001. - С. 41.

27. Волкова Т.О. Индукция программированной гибели в клетках миелоидных опухолевых линий человека. Особенности. Механизмы / XII Международная конф. молодых ученых «Человек. Природа. Общество. Актуальные проблемы». - С.-Петербург, 2001. - С. 619-623.

28. Малышева И.Е., Волкова Т.О., Немова Н.Н. Клетки крови эритроидного ряда человека: особенности дифференцировки в условиях холодового стресса / Международная конф. «Медико-биологические и экологические проблемы здоровья человека на Севере». - Сургут, 2002. - С. 60-62.

29. Волкова Т.О., Малышева И.Е., Немова Н.Н. Участие каспаз в проведении сигнала апоптоза в опухолевых клетках человека / V Международный симпозиум «Химия протеолитических ферментов». - Москва, 2002 - C. 35.

30. Волкова Т.О., Малышева И.Е. Модуляция биологической активности цитохрома С в условиях обработки рядом метаболических ингибиторов / 6^ая Пущинская школа-конф. молодых ученых «Биология - наука 21^го века». Секция «Молекулярная биология и биохимия» - Пущино, 2002. - Т. 1. - С. 229.

31. Волкова Т.О., Сак Н.С., Малышева И.Е., Немова Н.Н. Поиск новых модуляторов электронтранспортной функции белков системы цитохромов в эритролейкемических клетках человека К562 / III съезд Биохимического Общества. - С.-Петербург, 2002. - С. 65-66.

32. Волкова Т.О., Малышева И.Е., Немова Н.Н. Индукция апоптоза в клетках миелоидных опухолевых линий человека. Возможные участники и модуляция их биологической активности / Всероссийская конф. «Проблемы медицинской энзимологии», «Современные технологии лабораторной диагностики нового столетия». - Москва, 2002. - С. 55.

33. Волкова Т.О. Экспериментальное моделирование процессов индуцированной дифференцировки клеток миелоидных опухолевых линий in vitro и модуляции их чувствительности к неспецифическому лизису лейкоцитами человека и крыс / Научная конф. «Карелия и РФФИ». - Петрозаводск, 2002. - С. 20.

34. Волкова Т.О., Малышева И.Е. Эффекторное влияние индуцированной дифференцировки клеток миелоидных опухолевых линий на модуляцию активности внутриклеточных цистеиновых протеиназ и чувствительность клеток к неспецифическому лизису лейкоцитами человека / Научная конф. «Карелия и РФФИ». - Петрозаводск, 2002. - С. 21.

35. Волкова Т.О., Малышева И.Е., Немова Н.Н. Диметилсульфоксид ингибирует апоптоз в эритролейкемических клетках К562, индуцированный кальциевым ионофором А23187 // Цитология, 2002. - Т. 44. - № 9. - С. 866-867.

36. Волкова Т.О., Малышева И.Е. Модуляция чувствительности эритролейкемических клеток К562 к неспецифическому лизису лейкоцитами человека в условиях обработки антиопухолевыми агентами / 5^ый Конгресс РААКИ «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии». - Москва, 2002. - Т. 2. - С. 37.

37. Волкова Т.О., Сак Н.С., Малышева И.Е. Взаимосвязь цитохромов С и Р-450 в реакциях метаболизма N-содержащих гетероциклических соединений / 7^ая Пущинская школа-конф. молодых ученых «Биология - наука 21^го века». Секция «Молекулярная биология и биохимия» - Пущино, 2003. - С. 41.

38. Варга О.Ю., Игнатьев В.К., Везикова Н.Н., Марусенко И.М., Волкова Т.О. Программированная клеточная гибель лимфоцитов при раннем ревматоидном артрите // Научно-практическая ревматология (приложение к журналу), 2003. - № 2. - С. 21.

39. Волкова Т.О., Малышева И.Е., Немова Н.Н. Влияние форбол-12-миристат-13-ацетата на модуляцию апоптоза в эритролейкемических клетках человека К562 при обработке рядом химических реагентов // Цитология, 2003. - Т. 45. - № 9. - С. 858-859.

40. Волкова Т.О., Малышева И.Е., Немова Н.Н. Процессы индукции эритроидной дифференцировки и апоптоза клеток К562 в условиях обработки 2-(4'-нитростирил)хинолин-1-оксидом и 4-(4'-нитростирил)хинолин-1-оксидом // Цитология, 2003. - Т. 45. - № 9. - С. 859.

41. Волкова Т.О., Малышева И.Е., Зыкина Н.С., Кожевникова М.Н. Влияние N-оксидированных производных хинолина на активность микросомальных NADPH-оксидоредуктаз и концентрацию никотинамидных коферментов в клетках линии К562 / 8^ая Пущинская школа-конф. молодых ученых «Биология - наука 21^го века». Секция «Общая и функциональная биохимия» - Пущино, 2004. - С. 72.

42. Варга О.Ю., Игнатьев В.К., Хейфец Л.М., Волкова Т.О. Программированная клеточная гибель лимфоцитов при системной красной волчанке // Научно-практическая ревматология (приложение к журналу), 2004. - № 4. - С. 7.

43. Варга О.Ю., Игнатьев В.К., Хейфец Л.М., Волкова Т.О. Программированная клеточная гибель лимфоцитов как критерий активности и эффективности терапии при системной красной волчанке и хроническом гломерулонефрите / III Международная научно-практическая конф. “Болезнь Ходжкина” - Петрозаводск, 2004. - С. 132-134.

44. Варга О.Ю., Игнатьев В.К., Хейфец Л.М., Везикова Н.Н., Марусенко И.М., Волкова Т.О. Программированная клеточная гибель лимфоцитов при ревматоидном артрите, системной красной волчанке и хроническом гломерулонефрите / Материалы IV конференции по ревматологии Северо-Западного федерального округа. - Великий Новгород, 2004. - С. 36-38.

45. Волкова Т.О. Индукция апоптоза в эритролейкемических клетках человека К562 при обработке системными кортикостероидами // Вестник молодых ученых. Серия «Науки о жизни» (приложение к журналу), 2005. - С. 45.

46. Волкова Т.О., Немова Н.Н. Участие каспаз в индукции дифференцировки и апоптоза клеток миелоидных опухолевых линий человека / VI Международный симпозиум «Химия протеолитических ферментов». - Москва, 2007.

47. Волкова Т.О., Зыкина Н.С., Немова Н.Н. Участие опухолевого супрессора р53 в индукции эритроидной дифференцировки клеток линии К562 // Цитология, 2007. - Т. 49, № 9. - С. 727-728.

48. Волкова Т.О., Немова Н.Н. Влияние нитростирильных производных хинолин-1-оксида на чувствительность эритролейкемических клеток К562 к неспецифическому лизису лейкоцитами человека // Цитология,2007. - Т. 49, № 9. - С. 728.

49. Волкова Т.О. Опухолевый супрессор р53 индуцирует эритроидную дифференцировку клеток линии К562 / Всероссийская медико-биологическая научная конф. молодых учёных "Фундаментальная наука и клиническая медицина" (XI Всероссийская конф. «Человек и его здоровье»). - С.-Петербург, 2008. - С. 71-72.

50. Волкова Т.О., Немова Н.Н. Апоптоз-индуцирующее действие комбинаций системных кортикостероидов и солей жирных кислот с укороченной цепью на эритролейкемические клетки К562 / IV Съезд российских биохимиков и молекулярных биологов. - Новосибирск: Изд-во «Арта», 2008. - С. 223.

51. Волкова Т.О., Гуров Э.В. Новые ингибиторы электронтранспортной функции цитохрома С в опухолевых клетках / 12^ая Пущинская школа-конф. молодых ученых «Биология - наука 21^го века». Секция «Общая и функциональная биохимия» - Пущино, 2008. - С. 77.

52. Волкова Т.О. Эффекторное влияние индуцированной дифференцировки клеток миелоидных опухолевых линий на модуляцию активности внутриклеточных цистеиновых протеиназ и чувствительность клеток к неспецифическому лизису лейкоцитами человека: ВНТИЦентр; № ГР 01. 200.210712; Инв. № 0220.0 502160. - М., 2005. - 56 с.

Размещено на Allbest.ru