Особенности функционирования АТФаз эритроцитов цыплят-бройлеров

Выделение цитоплазматических мембран и ядер эритроцитов цыплят-бройлеров. Данные о влиянии ионов Na+ и К+ на активность общей АТФазы эритроцитов и АТФаз, локализованных в цитоплазматической и ядерной мембранах. Состав внутриклеточной и внеклеточной среды.

Рубрика Биология и естествознание
Вид статья
Язык русский
Дата добавления 26.04.2017
Размер файла 304,3 K

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

12

Размещено на http://www.allbest.ru/

Курский институт социального образования

Особенности функционирования АТФАЗ эритроцитов цыплят-бройлеров

PECULIARITIES OF ERYTHROCYTE ATPASE FUNCTIONING OF CHICKEN-BROILERS

Мосягин В.В. к. б. н., доцент

В статье рассматриваются особенности функционирования АТФаз эритроцитов цыплят-бройлеров. Предложен метод выделения цитоплазматических мембран и ядер эритроцитов цыплят-бройлеров. Представлены данные о влиянии ионов Na+ и К+ на активность общей АТФазы эритроцитов и АТФаз, локализованных в цитоплазматической и ядерной мембранах.

Peculiarities of functioning of ATPase of erythrocyte of chicken-broilers are considered in the article. Method of discharge of cytoplasmic membranes and nuclei of erythrocytes of chicken-broilers was proposed. Data on influence of ions Na+ and K+ on activity of general ATPase, localized in cytoplasmic and nuclear membranes were presented.

Ключевые слова: АТФазная активность, Na/K-АТФаза, эритроциты, цыплята-бройлеры, цитоплазматическая мембрана, ядра.

Key words: ATPASE ACTIVITY, NA/K-ATPASE, ERYTHROCYTES, CHICKENS-BROILERS,

CYTOPLASMIC MEMBRANE, NUCLEI.

Известно, что ионный состав внутриклеточной и внеклеточной среды имеет существенные различия, особенно в отношении одновалентных катионов натрия и калия. Ионная асимметрия используется для генерации возбуждения в нервных и мышечных клетках, а также является движущей силой для работы белков-переносчиков, осуществляющих транспорт аминокислот и сахаров в клетку [1].

Создание градиента концентраций ионов натрия и калия по обе стороны мембраны осуществляется активным транспортом этих ионов против их электрохимических градиентов специальным ферментом - Na/K-АТФазой, использующей энергию макроэргических связей АТФ. Наибольшая активность Na/K-АТФазы обнаружена в возбудимых и секреторных тканях: мозге, электрическом органе, почках, солевых железах [2]. На активность Na/K-АТФазы существенное влияние оказывают многие факторы: соотношение ионов натрия и калия, количество доступного АТФ и др. Специфическими ингибиторами Na/K-АТФазы служат уабаин (строфантин-G) и другие сердечные гликозиды, а также эндогенные дигиталисоподобные факторы [1, 3, 4, 5].

Наиболее удобными объектами для изучения функционирования Na/K-АТФазы являются препараты, получаемые из эритроцитов, почек и мозга, что связано с легкостью получения достаточно активных мембранных препаратов из этих объектов [4].

Однако изучение функционирования Na/K-АТФаз эритроцитов цыплят-бройлеров затруднено, так как применение специфического ингибитора этой аденозинтрифосфатазы - уабаина (строфантина-G) в концентрации 2,0-100,0 ммоль не вызывает существенного подавления активности АТФазы, выделенной из тканей цыплят [6, 7].

Такая нечувствительность к уабаину, по-видимому, объясняется существованием, по крайней мере, двух видов АТФаз, связанных с транспортом натрия. Одна из них - классическая Na/K-АТФаза - чувствительна к уабаину, а другая - Na-транспортирующая АТФаза - не нуждается для своей работы в ионах калия [8].

Особенности работы Na/K-АТФазы эритроцитов птиц связаны с их более сложным строением, заключающимся в наличии ядра, а в молодых эритроцитах - и митохондрий. Вследствие чего возрастные изменения морфологии и функции эритроцитов птиц изучены недостаточно [9].

Выделение субклеточных структур эритроцитов птицы сопряжено с определенными трудностями. Так, методы, предполагающие для разрушения цитоплазматических мембран эритроцитов использование детергентов (сапонин, тритон Х-100) [10, 11], оказались неприемлемы, так как, по нашим данным, применение детергентов приводило к полному разрушению цитоплазматических и ядерных мембран эритроцитов. Использование метода получения теней эритроцитов млекопитающих [12] путем гемолиза эритроцитов дистиллированной водой приводило в наших опытах к агглютинации мембранных структур.

Цель исследования - изучить влияние ионов Na+, К+ и Mg2+ на активность общей АТФазы эритроцитов и активность АТФаз ядер и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров.

Методика исследований. Исследования проводили на 20 цыплятах кросса «Бройлер-6» на базе птицефабрики «Курская» Курской области. Условия содержания и кормления соответствовали действующим нормативам.

Кровь для исследований у цыплят брали из вен шеи. Отделение эритроцитов от плазмы проводили путем центрифугирования в рефрижераторной центрифуге (t = 100C) в течение 30 мин при 3000 оборотах. Эритроциты после отделения от плазмы двукратно отмывали физиологическим раствором.

Активность АТФаз оценивали по приросту неорганического фосфата (Фн) после инкубации при 370С и выражали в нмоль Фн·мг белка-1·мин-1 [13]. Неорганический фосфат определяли спектрофотометрически [14]. Концентрацию белка устанавливали спектрофотометрическим методом Варбурга и Кристиана [15].

Результаты исследований. Результаты исследований по влиянию различных концентраций ионов Na+, К+ и Mg2+ на активность общей АТФазы эритроцитов цыплят-бройлеров, представленные на рисунке 1, показывают, что ионы натрия, калия и магния оказывают активирующее действие на активность АТФазы в разных диапазонах концентраций. Так, максимальная АТФазная активность проявлялась при концентрациях ионов: натрия - 115-145 ммоль·мл-1, калия - 17-22, магния - 3,0-4,0 ммоль·мл-1.

Результаты изучения комбинаций оптимальных концентраций этих ионов представлены в таблице 1. Максимальная АТФазная активность отмечена в инкубационной среде, содержащей: Na+ - 120 ммоль·мл, К+ - 20 ммоль·мл; Mg2+ - 3,0 ммоль·мл, и составляла 9,240,23 нмоль Фн ·мг белка-1·мин-1.

Рисунок 1 - АТФазная активность эритроцитов при различных концентрациях ионов

Результаты, полученные нами, указывают на то, что основную регуляторную роль в активности фермента играют ионы натрия в сочетании с ионами магния, ионы калия оказывают значительно меньшее влияние на активность АТФазы.

Таблица 1 - Влияние комбинаций ионного состава на активность АТФазы

№ среды

Ионы инкубационной среды

Активность АТФазы,

нмоль Фн ·мг белка-1·мин-1

1

Na+, К+, Mg2+

9,240,23

2

Na+ , Mg2+

8,560,21

3

К+, Mg2+

7,360,18

4

Mg2+

5,960,15

5

-

5,120,11

С целью изучения влияния ионов Na+ и К+ на активность АТФаз ядер и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров для выделения этих субклеточных структур был выбран метод замораживания - оттаивания в растворе сахарозы, содержащем 50 ммольл-1 трис-H2S04 буфер (pH 7,4), с последующим центрифугированием в течение 30 мин при 1000 обмин-1.

В результате проведения серии опытов было установлено, что оптимальным является 1,375 мольл-1 (=1,176) раствор сахарозы, а наиболее полное разрушение клеток и выход ядер происходят при 3-кратном замораживании - оттаивании. При этих условиях получили чистую от не разрушенных клеток фракцию ядер. На рисунках 2-5 представлена микрокартина суспензии эритроцитов на разных стадиях замораживания - оттаивания.

Рисунок 2 - Частичный гемолиз эритроцитов после первого замораживания - оттаивания. Видны не разрушенные эритроциты

Рисунок 3 - Микроскопическая картина суспензии эритроцитов после второго замораживания - оттаивания. Тени эритроцитов и ядра

Рисунок 4 - В осадке ядра эритроцитов (после третьего замораживания - оттаивания и центрифугирования)

эритроцит бройлер цыпленок

Рисунок 5 - В супернатанте тени эритроцитов (после третьего замораживания - оттаивания и центрифугирования)

На рисунке 6 представлены данные о влияние ионов Na+ и K+ на активность АТФаз ядер и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров. Дисперсионным и регрессионным анализом полученных данных было установлено, что замена в среде инкубации ионов Na+ на ионы K+ не оказывает достоверного влияния на активность АТФазы ядер (P>0,05). Это, по-видимому, связано с отсутствием в ядерных мембранах Na+,K+-чувствительной АТФазы. Аналогичная замена ионов в среде инкубации цитоплазматических мембран эритроцитов приводила к достоверному изменению их АТФазной активности на 24,2?4,49% (P<0,01). Коэффициент регрессии (rxy) составлял 0,657?0,285 (P<0,05), что характеризовало сильную зависимость АТФазной активности этих мембранных структур от концентрации ионов натрия и калия.

Рисунок 6 - Активности АТФаз ядерной и цитоплазматической мембран эритроцитов цыплят в средах различного ионного состава

Заключение. На активность АТФаз эритроцитов птиц существенное влияние оказывают ионы Na+, К+ и Mg2+. Основную регуляторную роль в активности фермента играют ионы натрия. Ионы калия оказывают значительно меньшее влияние на активность АТФазы.

АТФазы цитоплазматических и ядерных эритроцитов цыплят имеют существенные различия, проявляющиеся во влиянии на них ионов Na+ и K+. Так, цитоплазматические мембраны эритроцитов содержат Na+,K+- чувствительную АТФазную компоненту, составляющую 24,2+4,5 % от общей АТФазной активности, в то время как в ядерных оболочках наличие такой системы не установлено.

Список литературы

1. Болдырев А.А. Na/K-АТФаза - свойства и биологическая роль // Соросовский образовательный журнал. - 1998. - № 4. - С. 2-9.

2. Кометиани, З.П. Кинетика мембранных транспортных ферментов / З.П. Кометиани, М.Г. Векуа. - М.: Высш. шк., 1988. - 111с.

3. Болдырев А.А. Биологические мембраны и транспорт ионов. - М.: МГУ, 1985. -167 с.

4. Болдырев А.А. Современное состояние проблемы транспортных АТФаз и транспортные аденозинтрифосфатазы. - М.: МГУ, 1977. - 115с.

5. Тапильская, Н.И. Эндогенные дигиталисоподобные ингибиторы Na/K-АТФазы - новый класс гормонов с широким спектром функций / Н.И. Тапильская, И.А. Егорова, А.Я. Багров // Цитокины и воспаление. - 2006. - № 3. - С. 3-9.

6. Степанян, Р.А. АТФазная активность плазматических мембран печеночной ткани кур в онтогенезе / Р.А. Степанян, А.А. Симонян // Биологический журнал Армении. - 1983. - № 10. - С. 830-834.

7. Фурман Ю.В. Технологические аспекты производства и использования кормовых добавок и биологически активных препаратов в животноводстве: Дисс. на соиск. уч. степ. док. биол. наук. - М., 2001. - 329 с.

8. Скулачев В.П. Биоэнергетика. Мембранные преобразователи энергии. - М.: Высш. школа, 1989. - 283 с.

9. Болотников, И.А. Гематология птиц / И.А. Болотников, Ю.В. Соловьев. - Л.: Наука, 1980. -116 с.

10. Шкорбатов, Ю.Г. Биоэлектрические свойства клеточных ядер / Ю.Г. Шкорбатов, В.Г. Шахбазов // Успехи современной биологии. - 1992. - Вып. 4. - С. 499-503.

11. Шкорбатов, Ю.Г. О роли нуклеиновых кислот и других биополимеров в образовании электрического заряда клеточного ядра / Ю.Г. Шкорбатов, В.Г. Шахбазов // Молекулярная генетика и биофизика. - 1982. - № 7. - С. 35-38.

12. Keeton K.S., Kaneko I.I. Characterization of adenosinetriphosphatase in erythrocyte membrane of the cow // Proc.Soc.Ekp.Biol. and Med. 1972. N 1. P. 140-145.

13. Иващенко, А.Т. Выделение и свойства аниончувствительной аденозинтрифосфатазы из мембран эритроцитов / А.Т. Иващенко, И.А. Бушнева // Биохимия. - 1981. - № 3. - С. 486-488.

14. Кондрашова, М.Н. Метод определения неорганического фосфата по спектрам поглощения молибдатных комплексов в ультрафиолете / М.Н. Кондрашова, М.Н. Лесогорова, С.Э. Шноль // Биохимия. - 1965. - № 3. - С. 567-572.

15. Досон, Р. Справочник биохимика / Р. Досон, Д. Эллиот, У. Эллиот. - М.: Мир, 1991. - 544 с.

Размещено на Allbest.ru


Подобные документы

  • Изучение изолированного и сочетанного действия 1,1-диметилгидразина и ионов свинца и ртути на состояние мембран эритроцитов. Возможности повышения резистентности мембран с помощью биологически активных веществ (витаминов С, Е и препарата "Селевит").

    диссертация [2,8 M], добавлен 25.10.2013

  • Процессы энергетического метаболизма и основные энергетические параметры эритроцитов. Выяснение условий, при которых может происходить переход метаболизма эритроцитов из одной устойчивой точки в другую. Анализ строения и функций гемоглобина, эритроцитов.

    дипломная работа [3,5 M], добавлен 17.10.2012

  • Биохимические показатели эритроцитов в условиях хранения в присутствии раствора глюкозы. Строение и дифференцировка эритроцитов, биохимические процессы при их созревании и старении. Реакция оксигенации, углеводный обмен. Получение гемолизата эритроцитов.

    дипломная работа [150,5 K], добавлен 20.03.2011

  • Функции антигенов эритроцитов, их химическая природа и факторы, влияющие на динамику действия. Современная классификация и типы, биологическая природа и значение в организме. Система антигенов эритроцитов Резус. Описание других антигенных систем крови.

    реферат [477,9 K], добавлен 18.02.2015

  • Количество крови у животных. Кровяное депо. Состав крови. Плазма. Сыворотка. Строение, функции, количество. Количество эритроцитов в крови. Необходимое условие образования и созревания эритроцитов. Фолиевая кислота. Истинный и относительный эритроцитоз.

    реферат [22,6 K], добавлен 08.11.2008

  • Кровь — жидкая ткань организма, состоящая из плазмы и взвешенных в ней клеток: лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов. Свойства крови, транспортная, защитная, терморегуляторная функции. Антигенные характеристики эритроцитов, определяющих группы крови.

    презентация [532,1 K], добавлен 21.02.2016

  • Строение мембран. Мембраны эритроцитов. Миелиновые мембраны. Мембраны хлоропластов. Внутренняя (цитоплазматическая) мембрана бактерий. Мембрана вирусов. Функции мембран. Транспорт через мембраны. Пассивный транспорт. Активный транспорт. Ca2+ –насос.

    реферат [18,2 K], добавлен 22.03.2002

  • Ультраструктура биологических и молекулярное строение цитоплазматических мембран, их основные функции. Физическая природа сил взаимодействия белков и липидов в их структурах. Методы изучения и исследования искусственных моделей цитоплазматических мембран.

    презентация [68,6 K], добавлен 06.06.2013

  • Кровь и ее состав, основные функции в организме. Назначение, жизненный цикл и нормы содержания эритроцитов и лейкоцитов (соответственно красных и белых кровяных телец) в организме. Группы лимфоцитов, их размеры, структура и функциональные особенности.

    реферат [12,8 K], добавлен 02.12.2011

  • Сущность и основные элементы внутренней среды организма. Состав и функции крови, соотношение ее компонентов. Форма, строение и место образования эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Схема движения лимфы, ее назначение. Характеристика тканевой жидкости.

    презентация [1,6 M], добавлен 02.10.2012

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.