Частная микробиология

Размещено на http://www.allbest.ru/

Частная микробиология



1. Методы лабораторной диагностики инфекционных заболеваний

Существует 5 основных методов диагностики:

1) микроскопический -- позволяет обнаружить возбудителя непосредственно в материале, взятом от больного. Для этого мазок окрашивают различными способами. Этот метод играет решающую роль при диагностике многих инфекционных заболеваний: туберкулеза, малярии, гонореи и др.;

2) бактериологический -- заключается в посеве исследуемого материала на питательные среды. Этот метод позволяет выделить возбудителя в чистом виде и изучить его морфологические признаки, ферментативную активность и идентифицировать его;

3) биологический метод -- осуществляют путем выделения возбудителя при заражении лабораторных животных, которые восприимчивы к данному заболеванию. Этот метод дорогостоящий, поэтому применяется ограниченно;

4) серологические методы исследования -- основаны на выявлении специфических иммунных антител в сыворотке крови больного. Для этого используют различные иммунологические реакции: реакция Видаля (используется для выявления брюшного тифа);

5) аллергический метод -- ставятся кожно-аллергические пробы, введение аллергена накожно или внутрикожно; используются для диагностики туберкулеза, туляремии, лепры и т. д.

2. Стафилококки

Таксономия.

Стрептококки относятся к отделу Firmicutes, роду Streptococcus.

Вид-Staphyloccocus aureus

Морфология.

*Неподвижные грам «+» бактерии

*правильная шаровидная форма диаметром 0,5-1,5 мкм.

*делятся в виде гроздьев винограда

*пептидогликан и рибиттейхоевая или глицеринтейхоевая кислота-основные компоненты клеточной стенки

Культуральные свойства.

*факультативные анаэробы

*обильно растут при наличии кислорода

*содержат цитохромы, но оксидоотрицательны, и каталазоположительные.

*при выращивании в аэробных условиях нуждаются в аминокислотах, в анаэробных условиях-урацил и источники углерода

*не требовательны к питательным средам

*температурный оптимум 35-40 градусов, рН-7,0-9,4

*при росте на желточно-солевом агаре(ЖСА)-мутные круглые ровные колонии кремового, желтого или оранжевого цвета(липохромный пигмент). Колонии окружены радужным венчиком.

*на кровяном агаре-колонии с зоной гемолиза

*на жидких средах-равномерное помутнение, а затем рыхлый осадок.

Ферментативная активность

*продуцируют каталазу

*образуют ацетоин на среде с глюкозой(+реакция Фогеса-Проскауэра)

*выделяют аммиак при росте в аргениновом бульоне

*гидролизуют белки, гиппурат, жиры и твины

*расщепляют многие углеводы в аэробных условиях до уксусной кислоты и газа

*не образуют индол

*ферментируют глюкозу

Антигенная структура.

Антигенными свойствами обладает пептидогликаньи тейхоевые кислоты, типоспецифические АГ, хлопьеобразующий фактор и капсула.

Факторы патогенности.

Стафилококки-условно-патогенные микробы.

*микрокапсула

*компоненты клеточной стенки

*ферменты агрессии

*токсины

ТОКСИНЫ.

*эксфолиатины А и В

*токсин синдрома токсического шока

*?-токсин

*энтеротоксины А-F

ФЕРМЕНТЫ АГРЕССИИ.

*каталаза-защищает бактерии от действия О₂-зависимых микробицидных механизмов фагоцитов.

*в-лактамаза-разрушает молекулы бетта-лактамовых антибиотиков

*липаза-облегчает адгезию и проникновение в ткани.

*коагулаза-вызывает свертывание сыворотки.

*б-гемолизин(альфа-токсин)-лизирует эритроциты барана

*в-гемолизин(сфингомиелиназа)-умеренное действие на эритроциты человека

*?-гемолизин

*?-гемолизин

Эпидемиология.

Источник инфекции-больные со стертыми формами стафилококковой инфекции или носители.

Пути передачи:

-контактный

-алиментарный

-аэрогенно

-парентерально

Патогенез.

Гнойно-воспалительные процессы, воспаления, вследствие того, что стафилококки могут покидать свою нормальную нишу, преодолевать барьеры, и попадать во внутреннюю среду организма.

Иммунитет.

Постинфекционный-клеточно-гуморальный, нестойкий и не напряженный.

Лабораторная диагностика.

I. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД

Микроскопический метод имеет самостоятельное значение лишь при асептической работе с материалами, которые у здорового человека стерильны (например, кровь, спинномозговая жидкость). Обнаружение стафилококков при этом имеет самостоятельное диагностическое значение. В остальных случаях микроскопический метод применяется как предварительный, ориентировочный. При его использовании необходимо обращать внимание на количество микроорганизмов в каждом поле зрения (при стафилококковых заболеваниях патогенный возбудитель может вытеснить остальную микрофлору и обнаруживаться в мазках в громадных количествах), размеры гроздей (при высокой патогенности стафилококк усиленно делится, особи не успевают разойтись и дают большие грозди-скопления), величину отдельных особей (патогенные стафилококки в большинстве своем очень мелкие).

II. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Бактериологический метод - выделение чистой культуры возбудителей и их идентификация.

Стафилококки относятся к числу весьма распространенных микроорганизмов. Они обнаруживаются и у здорового человека. Поэтому для диагностики заболевания, установления его стафилококковой природы очень важно доказать патогенность выделенных бактерий. Решение диагностической задачи при этом тесно связано с выяснением вопросов эпидемиологии, лечения и профилактики данной инфекции. На этом основании бактериологический метод складывается из нескольких этапов и направлений.

Диагностика заболевания - выделение чистой культуры стафилококка и установление его вирулентности.

Выявление источников инфекции и возможных путей ее распространения - фаготипирование стафилококков, выделенных из разных, но связанных между собою источников.

Выбор наиболее эффективного способа лечения - определение чувствительности культур к антибиотикам и лечебному бактериофагу, в частности поливалентному пиофагу, моновалентному стафилофагу.

Стафилококки

Выделение чистой культуры возбудителя должно осуществляется с учетом его культуральных особенностей галофильности (хорошее развитие в присутствии избыточного содержания поваренной соли при одновременном угнетении прочей микрофлоры), высокой потребности в белках и углеводах. Это достигается путем применения элективных питательных сред, выполняющих одновременно и функции дифференциально-диагностических.

СОСТАВ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ СТАФИЛОКОККОВ

7,5% солевой МПА с pH 7,2-7,4: мясная вода - 100 мл, пептон-10 г, хлористый натрий-75 г, агар-агар - 20.0. Среда стерилизуется при +100 °C -30 минут.

МОЛОЧНО-СОЛЕВОЙ МПА готовят из 7,5% солевого МПА, но с добавлением в расплавленную и остуженную до 45 °Cреду 10-20% стерильного снятого молока. После этого производят дробную стерилизацию 3 дня подряд по 30 минут.

КРОВЯНОЙ МПА готовится из обычного МПА при добавлении к нему 5% дефибринированпой кроличьей или бараньей крови. Использование человеческой крови нецелесообразно.

При выполнении анализа необходимо учитывать следующие возможности отклонения от типичной характеристики стафилококков.

Обычная грампозитивность стафилококков может теряться в процессе их изменчивости: при возникновении лекарственной устойчивости, при воздействии ультрафиолетовых лучей, лизоцима. Это надо иметь в виду при изготовлении мазков из крови, культуры с кровяного МПА.

Пигментообразование в последние годы перестало быть устойчивым признаком стафилококков в связи с широким применением антибиотиков и их изменчивостью. Пигмент может меняться при пересевах. Золотистый пигмент не всегда совпадает с патогенностью возбудителя, а наличие белого и других пигментов не исключает участия данного стафилококка в этиологии заболевания.

Лечение и профилактика.

Профилактика стафилококковой инфекции проводится практически так же, как и дополнительное лечение фурункула. В первую очередь, нужно как можно лучше укреплять свой иммунитет. Также, не менее важным является соблюдение элементарных правил личной гигиены. Стафилококк - устойчивая бактерия, при необходимости она может ждать подходящего для заражения момента очень долго, и при первой возможности проникнуть в организм и начать размножаться. Кроме того, необходимо соблюдать следующие правила: Вести здоровый образ жизни, исключить вредные привычки; Поддерживать в норме витаминный баланс; Контролировать качество и чистоту употребляемой пищи; Придерживаться санитарно-гигиенических норм; Если в помещении проживает ребенок, то поддерживать максимальную чистоту нужно обязательно. Лечение стафилококковой инфекции Как правило, стафилококк практически неуязвим к большинству антибиотиков, которые назначают врачи. Для поиска подходящего препарата специалисты проводят множество тестов и анализов, и лишь после этого назначают конкретное лечение. Еще одним способом устранения данной болезни является употребление бактериофаговых лекарств. Но, к сожалению, большинство штаммов стафилококка имеют устойчивость и к этим медикаментам, поэтому врачи в первую очередь проводят исследования на фагочувствительность. Если по результатам анализов бактерия оказывается уязвимой к таковым препаратам, назначается специальный курс лечения ними. К сожалению, стафилококковой инфекцией можно заболеть не один раз в своей жизни. Организм способен вырабатывать антитела только к одному виду стафилококка, а их насчитывается более 30.

3. Стрептококки. Характеристика

Таксономия. Стрептококки относятся к отделу Firmicutes, роду Streptococcus. Род состоит из более чем 20 видов, среди которых есть представители нормальной мик­рофлоры человеческого тела и возбудители тяжелых инфекци­онных эпидемических болезней человека.

Морфологические и культуральные свойства. Стрептококки -- это мелкие шаровидные клетки, располагающиеся цепочками, грамположительные, спор не образуют, неподвижные. Большинство штаммов образует капсулу, состоящую из гиалуроновой кисло­ты. Клеточная стенка содержит белки (М-, Т- и R-антигены), углеводы (группоспецифические) и пептидогликаны. Легко переходят в L-формы. Возбудители растут на средах, обогащен­ных углеводами, кровью, сывороткой, асцитической жидкостью. На плотных средах обычно образуют мелкие серые колонии. Капсульные штаммы стрептококков группы А образуют слизи­стые колонии. На жидких средах стрептококки обычно дают придонный рост. Стрептококки -- факультативные анаэробы. По характеру роста на кровяном агаре они делятся на культуральные варианты: а-гемолитические (зеленящие), в-гемолитические (полный гемолиз) и негемолитические

Патогенность. На основе полисахаридного антигена делятся на серогруппы (А, В, С...О). Стрептококки группы А вырабатывают более 20 веществ, обладающих антигенностью и агрессивностью. На поверхности клетки имеется белковый антиген М, который тесно связан с вирулентностью (препятствует фагоцитозу). Этот белок определяет типовую принадлежность стрептококков. К фак­торам патогенности относят стрептокиназу (фибринолизин), ДНКазу, гиалуронидазу, эритрогенин. Наиболее патогенны для человека гемолитические стрепто­кокки группы А, называемые S. pyogenes. Этот вид вызывает у человека многие болезни: скарлатину, рожу, ангину, острый эндокардит, послеродовой сепсис, хронический тонзиллит, ревматизм.

Иммунитет: постинфекционный нестойкий, ненапряженный.

Микробиологическая диагностика.

Материал для исследования - гной, моча, кровь, мокрота.

Бактериоскопический метод: окраска по Граму мазков из патологического ма­териала. При положительном результате обнаруживают цепочки грам«+» кокков.

Бактериологический метод: Исследуемый материал за­севают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 °С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из коло­ний, готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для получения чистой культуры 1--3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcuspyogenes образует мелкие мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев, оставляя среду прозрачной. По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) а-гемолитические 3) ?-гемолитические, образующие вокруг колонии пол­ностью прозрачную зону гемолиза. Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам. По данному признаку все стрептококки делят на серологические группы (А, В, С, D и т. д.). Серогруппу определяют в реакции преципитации с полисахаридным преципитиногеном С. Серовар определяют в реакции агглютинации. Выявленную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом дисков.

Серодиагностика: устанавливают наличие специфических антигенов в крови больного с помощью РСК или реакции преципитации. Антитела к О-стрептолизину определяют для подтверждения диагноза ревматизма.

4. Возбудитель скарлатины. Хар-ка

Семейство-Sreptococacea включает 6 родов опасных для человека: Streptococcus, Aerococcus, Leuconostoc, Pediococcus, Lactococcus.

Стрептококки.

Морфология.

*сферические или овоидные клетки размером 0,5-2,0 мкм

*в мазках располагаются парами или короткими цепочками

*не подвижны, спор не образуют, некоторые виды имеют капсулу

*грам «+»

*клеточная стенка состоит из 3 слоев: наружный слой(содержит типоспецифические белковые антигены); средний(групповой полисахарид); внутренний(пептидогликан).

Культуральные свойства.

*Факультативные анаэробы; капнофилы, предпочитают анаэробные условия.

*растут при 25-45 градусах, оптимум 37 градусов.

*стрептококки более требовательны к средам культивирования, чем стафилококки.

*растут на сложных питательных средах с добавление крови, сыворотки, асцитической жидкости, углеводов.

* при росте на агаре образуют колонии с зоной б-(частичный гемолиз и позеленение среды), в-(полный гемолиз) и ?-гемолиза(визуально невидимый гемолиз).

Ферментативная активность.

*ниже чем у стафилококков

*хемоорганотрофы

*метаболизм бродильный

*клинически значимые типы ферментируют глюкозу с образованием молочной кислоты.

*каталазоотрицательны.

Антигенная структура.

Выделяют 20 серогрупп, обозначаемых заглавными латинскими буквами(от А до V). В патологии человека основная роль принадлежит стрептококкам группы А. По специфичности белковых АГ-М, Р, и Т стрептококки внутри групп разделяют на серовары. Белок М-типоспецифический АГ; антитела к нему обеспечивают невосприимчивость к повторным заражениям. Белок М проявляет свойства суперантигена, вызывая поликлональную активацию лимфоцитов и образование АТ с низким аффинитетом.

Факторы патогенности.

*микрокапсула

*компоненты клеточной стенки

*ферменты агрессии

*токсины(эритрогенные, кардиогепатический)

*фимбриальный белок(белок М).

Иммунитет.

Постинфекционный иммунитет нестойкий и ненапряженный, как и при всех оппортунистических инфекциях.

Лабораторная диагностика.

1. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Для выделения чистой культуры стрептококков важное значение имеет создание оптимальной питательной среды, так как стрептококки предъявляют к ней особые требования. Им необходимо значительное количество углеводов и нативного белка. Поэтому наряду с общепринятыми сахарным МПБ, кровяным МПА, молочно-солевым МПА и МПБ (см. рецепты выше) при стрептококковых инфекциях применяются асцитические и сывороточные среды.

АСЦИТИЧЕСКИЙ МПБ И МПА готовятся с добавлением отчетной жидкости, получаемой стерильно из брюшной полости больных терапевтического и хирургического профиля. Жидкость прогревают 3 дня при +56-58 °C по 1 часу, стерилизуют фильтрованием через фильтр Зейтца или добавляют 40% глицерина и хранят на холоду. Для приготовления асцит-бульона и асцит-агара 1 часть жидкости смешивают с 2-3 частями МПБ (или Хоттингеровского бульона) или растопленного и остуженного МПА.

СЫВОРОТОЧНЫЙ МПБ готовят из простого свежего мясопептонного бульона с pH 7,6, к 1 части которого добавляют 2 части свежей сыворотки человека или лошади. Сыворотку перед прибавлением к среде инактивируют при + 56 °C в течение 30 минут.

При осложнении капельных стрептококковых инфекций сепсисом необходим и посев крови. Для бактериологического исследования крови Э. Г. Кассирская рекомендует комплексное использование трех видов питательных субстратов, засеваемых из расчета 1 часть патологического материала на 10-15 частей среды. В качестве последней используются 0,2% полужидкий агар с 10% асцитической жидкости, бульон Левинталя с кровью и печеночная среда Китт-Тароцци.

ДЛЯ БУЛЬОНА ЛЕВИНТАЛЯ отдельно готовят следующие компоненты: № 1 - к 100 мл мясного фарша добавляют 300 мл дистиллированной воды и 10 мл нормального раствора соды; № 2 - 0,5 г панкреатина растворяют в 20-30 мл воды с 2 мл 1 N раствора соды и 10 мл хлороформа; № 3 - буферный раствор фосфорно-кислого натрия в дистиллированной воде (разведение 8:1000). С помощью раствора НСl устанавливают pH, равное 5,6-6.

В первый день смесь № 1 инкубируют в термостате при + 37 °C 1-2 часа, добавляют к ней раствор № 2, перемешивают и при тех же условиях выдерживают еще 24 часа. Сосуд со средой периодически встряхивают. После этого берут равные количества мясной кашицы и буферного раствора № 3. Кипятят, фильтруют. Устанавливают рН-7,2-7,4. Вновь кипятят. Разливают по пробиркам и стерилизуют 2 дня подряд по 30 минут текучим паром.

СРЕДУ КИТТ-ТАРОЦЦИ готовят из говяжьей печени или мяса. Последние нарезают кусочками, взвешивают, заливают тройным количеством МПБ (рН-7,4-7,6) кипятят 30 минут. Затем бульон фильтруют, кусочки печени отмывают водопроводной водой. Далее пробирки с 3-4 кусочками печени, залитыми 7-8 мл фильтрата и слоем вазелинового масла, стерилизуют под давлением 1 атм. в течение 30 минут.

Высеваемость стрептококков возрастет при использовании ПОЛУЖИДКОГО АГАРА ГАРОЦЦИ: в бульон Мартена (рН-7,6-7,8) добавляют 0,3-0,5% глюкозы и 0,1-0,15% агар-агара. В стерильные пробирки помещают кусочки печени или вареного мяса, добавляют по 9 мл среды и стерилизуют при температуре +120 °C в течение 30 минут.

Зеленящий стрептококк, выделяемый при септическом эндоркардите, развивается очень медленно. В связи с этим посевы крови выдерживают 2-3 суток в термостате.

В некоторых случаях выделить культуру стрептококка при широкой аэрации не удается. Более успешным оказывается применение анаэробиоза. Для создания последнего можно использовать три простейших способа.

I. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ ЗАСЕВАЮТ В ПРОБИРКУ с 0.25% глюкозным бульоном и быстро всасывают его в стерильные пастеровские пипетки, концы которых тотчас же запаивают над пламенем горелки. Пипетки устанавливают вертикально в термостате. Через 24 часа нижние концы пипеток отламывают (стрептококки растут только внизу), первые капли используют для микроскопии и дальнейшего выделения чистой культуры возбудителя.

2. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ПОСЕВОВ В АТМОСФЕРЕ, НАСЫЩЕННОЙ УГЛЕКИСЛЫМ ГАЗОМ. Необходимую концентрацию СО₂ получают при добавлении в загруженный пробирками эксикатор вначале 1г двууглекислой соды на 1 литр объема, а затем из того же расчета 8-9 мл 10% Н₂SO₄ или HCl.

3. ДОВОЛЬНО ПРОСТ и менее эффективен следующий прием: на дно неплотно закрытого эксикатора ставят зажженную свечку. Она горит 1-3 минуты и гаснет. По окончании первой или второй процедуры эксикаторы покрывают крышками, края которых смазаны вазелином и помещают в термостат.

Выделение чистой культуры 

Биохимическая активность стрептококков непостоянна и ее выяснение не имеет диагностического значения. Изучение стрептококков в этом плане используется лишь для дифференциации с энтерококками (табл. 1.).

Таблица 1. Дифференциация стрептококков от энтерококков

Критерии Шермена для различия стрептококков группы А (истинные) oт группы Д (энтрококки)
Тесты	Группы
	Группа А (стрептококки)	Группа Д (энтерококки)
Длина цепочек	длинные (5-12 звена)	короткие (1-2 звеньев)
Рост на солевом МПА с 6,5%	+	-
Рост на желчно-кровяном МПА Д. Э. Беленького к П. Н. Поповой	-	+
Рост на молоке с метиленовой синькой	-	+ (редукция)
Рост на МПБ с pH - 9,6 (в присутствии 0,05 М р-ра Na2CO3)	-	+
Чувствительность к пенициллину	+	-
Термоустойчивость при +60 °C в течение 30 минут.	-	+

Состав дифференциально-диагностических сред, применяемых для этой цели следующий.

· ЖЕЛЧНЫЙ И ЖЕЛЧНО-КРОВЯНОЙ МПА Д. 3. Беленького и Н. Н. Поповой готовятся из расплавленного и отфильтрованного 3% МПА с любой бульонной основой. К 60 мл этого МПА добавляют 40 мл нативной профильтрованной желчи, разливают по флаконам и стерилизуют при давлении в 1 атм. 30 минут. Для приготовления агара с кровью к этому желчному МПА добавляют 5% дефибринированной крови.

· МОЛОКО С МЕТИЛЕНОВЫМ СИНИМ приготовляется из обезжиренного стерильного молока, к 100 мл которого добавляют 2 мл 10% водного раствора метиленового синего.

5. Пневмококки. Хар-ка

Морфология и биологические свойства.

Пневмококки представляют собой парно расположенные кокки овальной, слегка вытянутой ланцетовидной формы, напоминающие пламя свечи. Они могут располагаться также короткими цепочками, напоминая стрептококки. В организме человека и животных образуют капсулу; при выращивании на искусственных средах она отсутствует. Неподвижны, спор не образуют, грамположительны.

По типу дыхания -- факультативные аэробы. На простых питательных средах не растут или дают скудный рост. Выращивают их на средах с добавлением белка: кровяных, сывороточных, с асцитической жидкостью. На кровяном агаре колонии пневмококков мелкие, напоминающие росинки, прозрачные в проходящем свете, с вдавленным центром, окружены зоной неполного гемолиза, зеленоватого оттенка, сходные с колониями зеленящего стрептококка. На жидких средах дают нежное помутнение, иногда образуя осадок. Биохимически довольно активны: разлагают глюкозу, лактозу, мальтозу, инулин и другие углеводы с образованием кислоты, не разжижают желатина, не образуют индола. Расщепление инулина является дифференциально-диагностическим признаком, помогающим отличить пневмококки от стрептококков, которые инулин не разлагают. Важным отличительным признаком служит способность пневмококков растворяться в желчи, в то время как стрептококки хорошо в ней сохраняются.

Токсинбобразование. Пневмококки содержат эндотоксин, а также гемотоксин, фибринолизин, лейкоцидин, гиалуронидазу. Вирулентность пневмококка связана с веществом капсулы. В ней находится антифагин, препятствующий фагоцитированию лейкоцитами пневмококков.

Устойчивость. Пневмококки малоустойчивы во внешней среде. Они быстро теряют жизнеспособность под действием различных дезинфицирующих веществ. При температуре 60°С погибают в течение 10 мин. На искусственных питательных средах сохраняются не более 6-- 7 дней. Вместе с тем пневмококки довольно устойчивы к высушиванию: в высушенной мокроте остаются жизнеспособными до 2 мес. Под действием оптохина в концентрации 1 : 1 ООО ООО быстро погибают.

Антигенная структура. У всех пневмококков имеется один общий видовой протеиновый антиген, находящийся в цитоплазме. В капсуле пневмококков имеются различные полисахариды, специфичные для каждого типа. В настоящее время пневмококки делят по капсульному антигену на 80 типов. Считают, что наибольшее значение в патологии человека имеют I, II и III типы, но с каждым годом выявляется патогенность новых типов.

Патогенность. Пневмококки могут вызывать заболевания у телят, поросят, ягнят, собак. В лабораторных условиях наиболее восприимчивы белые мыши и кролики. При парентеральном введении белым мышам небольшого количества патологического материала или чистой культуры пневмококка у них развивается картина септического заболевания, приводящая через 18--24 ч к смерти животного. В крови и органах при микроскопии видны пневмококки в капсулах.

Патогенез и клиника. Пневмококки являются возбудителями крупозной пневмонии у человека. Они могут также вызывать ползучую язву роговицы, катары верхних дыхательных путей, менингит, эндокардит, поражения суставов и другие заболевания. Вместе с тем пневмококки являются обитателями слизистой оболочки верхних дыхательных путей здорового человека. Установлено, что у здоровых носителей встречаются маловирулентные штаммы, не относящиеся к I, II и III типам, поэтому инфекция в большинстве случаев носит экзогенный характер и передается воздушно-капельным путем. Понижение сопротивляемости организма в результате переохлаждения, переутомления, перенесенного гриппа и другие неблагоприятные факторы способствуют возникновению заболевания. Входные ворота инфекции -- слизистая оболочка верхних дыхательных путей. При крупозной пневмонии поражаются доли легкого или все легкое. Болезнь сопровождается высокой температурой, ознобом, сухим болезненным кашлем и другими симптомами. Микробные токсины поражают сосудистую и центральную нервную системы. В связи с успешным применением антибиотиков роль пневмококка в этиологии пневмоний резко снизилась.

Иммунитет. У людей довольно выражена естественная невосприимчивость к пневмококковой инфекции.

Об этом свидетельствует частое обнаружение пневмококков на слизистой оболочке верхних дыхательных путей здоровых лиц. После перенесенного заболевания иммунитет малонапряженный, кратковременный, типоспецифический. Перенесенная пневмококковая инфекция предрасполагает к повторным заболеваниям, так как пневмококки обладают сенсибилизирующими свойствами.

Микробиологическая диагностика.

Материалом для исследования являются мокрота, кровь, мазок из зева, спинномозговая жидкость. Ввиду того что пневмококк быстро погибает, патологический материал необходимо как можно скорее доставить в лабораторию для исследования. Из этого материала готовят мазки, окрашивают их по Граму и по методу Гинса, а затем микроскопируют. Обнаружение ланцетовидных диплококков, окруженных бесцветной капсулой, дает основание предположить наличие пневмококков. Затем производят микробиологическое исследование патологического материала. С этой целью делают посев на кровяной агар и сывороточный бульон. Одновременно используют биологический метод, вводя внутрибрюшинно исследуемый материал двум белым мышам. Уже через 4-6 часов у них появляются первые признаки заболевания. Мышей под наркозом вскрывают или отсасывают пунктат из брюшной полости. Кусочки внутренних органов, кровь или пунктат засевают в сывороточный бульон и на кровяной агар. На следующий день просматривают посевы, отмечают характер роста, микроскопируют, выделяют чистую культуру. Для дифференциации от стрептококка делают посев исследуемой культуры в пробирку с 10% желчным бульоном и в среду с инулином. Если через 24 ч инкубации в термостате в пробирке с желчным бульоном произошло полное просветление среды (вследствие лизиса микробов), а в пробирке инулином-- покраснение ее, указывающее на разложение инулина, выделенную культуру относят к пневмококкам. Для определения типа пневмококка ставят реакцию агглютинации с противопневмококковыми сыворотками, Профилактика и лечение. Меры профилактики сводятся к закаливанию организма; следует избегать рез- ч кого охлаждения. Специфическую профилактику не проводят.

Для лечения с успехом используют сульфаниламидные препараты и антибиотики (пенициллин, тетрациклин).

6. Менингококки

Морфология и биологические свойств.

Менингококк относится к роду нейссерий (Neisseria), который включает, помимо менингококка, ряд непатогенных представителей, встречающихся в полости рта, носоглотке и верхних дыхательных путях. Это диплококки, круглые или слегка овальные, бобовидной формы, соединенные между собой по длинной оси вогнутыми сторонами, размером 0,6--0,8 мкм. В мазках из чистых культур могут находиться беспорядочно; в патологическом материале характерно парное расположение клеток различной величины и разной интенсивности окраски. Все нейссерии, в том числе и менингококки, грамотрицательны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. В организме человека могут образовывать нежную капсулу, которую утрачивают при культивировании на искусственных средах.

Менингококк -- аэроб, на простых питательных средах не растет. Для культивирования используют питательные среды, содержащие нативный белок (сыворотка, кровь, асцитическая жидкость, яичный белок). Оптимальный рН среды 7,0--7,4, температура роста 37°С, при 25°С рост прекращается. На сывороточном агаре колонии менингококка мелкие, диаметром 0,5--1 мм, нежные, слегка выпуклые, полупрозрачные, голубоватые в проходящем свете, с ровным краем и гладкой поверхностью. Свежевыделенные штаммы образуют гладкие S-формы колоний, а для старых культур характерно образование шероховатых R-форм колоний. В сывороточном бульоне при росте наблюдается помутнение с осадком и пленкой. Биохимически микроб малоактивен: разлагает только глюкозу и мальтозу с образованием кислоты. Не дает гемолиза на кровяном агаре, не разжижает желатина, не образует индола и сероводорода.

Токсинообразование.

Менингококки не выделяют экзотоксина. Образуемый ими эндотоксин липополисахаридной природы, термоустойчив, при внутрибрюшинном или внутривенном введении морской свинке убивает ее в течение 24--48 ч. В естественных условиях животные к менингококку невосприимчивы.

Устойчивость.

Во внешней среде менингококк очень нестоек: быстро погибает при отклонении температуры от 37°С, при высыхании. Температура 55°С убивает его в течение 3--5 мин. Плохо переносит охлаждение, поэтому при транспортировке в лабораторию материал должен быть тщательно предохранен от охлаждения и высыхания, а посев следует производить сразу же после его доставки.

Менингококк быстро гибнет под действием различных дезинфицирующих веществ: 1% раствора карболовой кислоты и 0,1% раствора сулемы -- в течение 1 мин.

Антигенная структура.

У менингококков выделены три антигенные фракции:

1) углеводная С-субстанция, общая для всех менингококков, гонококков и пневмококков III типа;

2) протеиновая Р-субстанция, видовая, одна для всех типов менингококков;

3) поверхностные типоспецифические антигены, состоящие из полисахаридов или полисахаридополипептидов, различные по своему химическому составу.

В соответствии с этим вид Neisseria meningitidis разделяют на 10 групп, обозначаемых большими буквами латинского алфавита, из которых наибольшая роль принадлежит группам А, В и С. Штаммы группы А считают «эпидемическими», так как преимущественно с ними связано возникновение эпидемических вспышек менингита. Штаммы групп В и С чаще являются причиной спорадических случаев заболеваний.

Патогенез и клиника.

Источником инфекции являются больные или здоровые носители менингококка, а также лица, перенесшие стертые формы в виде кратковременной лихорадки, с явлениями катара верхних дыхательных путей. Менингококки встречаются на слизистых оболочках носоглотки и верхних дыхательных путей у 5--10% здоровых людей. Клинические проявления заболевания весьма разнообразны. Выделяют следующие основные клинические формы: назофарингит, менингит, менингококковый сепсис. Попадая на слизистую оболочку носоглотки, менингококк распространяется по лимфатическим и кровеносным сосудам, проникает в оболочки спинного и головного мозга и вызывает в них гнойное воспаление. Эпидемический церебральный менингит начинается остро, после 2--4 дней инкубации. Отмечаются высокая температура, сильная головная боль, рвота, судороги, ригидность мышц и другие признаки поражения центральной нервной системы. Заболевание длится несколько недель. До применения антибиотиков и сульфаниламидных препаратов летальность составляла 30--60%. В настоящее время прогноз благоприятный.

Иммунитет.

Врожденный иммунитет отсутствует. В связи с широко распространенным бактерионосительством менингококка (соотношение больных и здоровых бактерионосителей от 1 на 1000--2000 до 1 на 20 000) возникает приобретенный естественный иммунитет. Чувствительность к менингококковой инфекции зависит от уровня приобретенного иммунитета, вирулентности штамма и других причин. После перенесенного заболевания возникает стойкий иммунитет. Повторные случаи заболевания редки. В процессе болезни вырабатываются различные антитела: агглютинины, преципитины, опсонины и комплементсвязывающие антитела.

Микробиологическая диагностика.

При менингите исследуют спинномозговую жидкость (ликвор), кровь, у бактерионосителей -- слизь из носоглотки. Спинномозговую жидкость в количестве 2--5 мл центрифугируют. Из осадка готовят мазки, окрашивают их водным раствором фуксина или метиленового синего. При наличии бобовидных, расположенных внутриклеточно диплококков выдают ориентировочный ответ. Помимо микроскопического, проводят микробиологическое исследование. Посев 2--3 капель осадка спинномозговой жидкости делают на сывороточный агар. К оставшейся в пробирке надосадочной части добавляют 2--5 мл полужидкого агара. Посевы инкубируют при 37°С в течение 24 ч. На следующий день изучают колонии, отсевают на скошенный сывороточный агар для выделения чистой культуры. Идентификацию микроба производят на основании морфологических, тинкториальных и культуральных свойств. В случае необходимости (при обследовании в эпидемических очагах) определяют серогруппы менингококка с помощью реакции агглютинации, используя групповые противоменингококковые сыворотки. Носоглоточную слизь, содержащую постороннюю микрофлору, засевают, помимо сывороточного агара, на плотную среду, содержащую ристомицин. Он подавляет рост грамположительных кокков и не действует на нейссерий. Для дифференциации менингококка от непатогенных нейссерий, которые часто встречаются в носоглотке, выделенную культуру засевают на мясопептонный агар и инкубируют сутки при 37°С -- вырастают только непатогенные нейссерии. Параллельно делают посев выделенной культуры на сывороточный aгap и выращивают сутки при 22°С. Нейатогенные нейссерии дают хороший рост при этой температуре, а менингококки не растут. Для окончательной идентификации культуры делают посев на среды, содержащие углеводы: глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу.

Спинномозговую жидкость можно использовать для постановки реакции преципитации. Для этого на нее наслаивают специфическую преципитирующую противоменингококковую сыворотку. При положительной реакции на границе двух жидкостей появляется белое кольцо.

Профилактика и лечение.

Профилактика сводится к проведению карантинных мероприятий в очаге инфекции, выявлению и санации здоровых носителей, соблюдению санитарно-гигиенического режима в общественных и жилых помещениях, на предприятиях. В настоящее время ведется работа по созданию химической вакцины для профилактики менингита.

Для лечения и профилактики с успехом применяются антибиотики (пенициллин, тетрациклины и др.) и сульфаниламидные препараты.

7. Возбудители газовой анаэробной инфекции

Газовая анаэробная инфекция -- полимикробная, возникающая при загрязнении ран почвой, с которой попадают возбудители инфекции. Сопровождается интоксикацией, поражением мышечной ткани, развитием отека и гангрены в месте ранения.

Таксономия.

Возбудителями газовой гангрены являются Cl. perfringens, Gl. novyi, Cl. septicum, Cl. histolyticum, Cl. sordclli, относящиеся к семейству Bacillaceae.

Морфологические и культуральные свойства.

Cl. perfringens -- крупные полиморфные палочки, неподвижные, образуют овальные споры, которые расположены субтермииально, в организме человека и животных образуют капсулу. Микробы обладают слабыми про-теолитическими свойствами, имеют большой набор сахаролитических ферментов, сбраживают сахара с образованием кислоты и газа, способны быстро свертывать молоко (в течение 2--5 ч).

Cl. perfringens делится на шесть сероваров: А, В, С, D, E, F, выделяющих различные по антигенной структуре экзотоксины с летальными и некротическими свойствами. Клостридий А считаются основным возбудителем газовой гангрены: вызывают заболевание в 70--80% случаев. Споры клостридий А и F способны выдерживать температуру 100 °С от 1 до 6 ч.Cl. novyi -- толстые крупные грамположительные палочки, подвижные, образуют овальные споры, которые расположены субтерминально, без капсул. Обладают слабыми протеолитическими свойствами. Сахаролитичес-кие свойства менее выражены, медленно свертывают молоко. Известны четыре серовара: А, В, С, D, способных вырабатывать различные по антигенным свойствам токсины, которые обладают летальными, некротическими и гемолитическими свойствами. Споры устойчивы к различным факторам внешней среды, выдерживают кипячение в течение 1--2 ч, в почве сохраняются 7-- 8 лет.

Cl. septicum -- полиморфные палочки, грамположительные, подвижные, образуют овальные споры, расположенные субтермииально; капсул не имеют. Протеолитические и сахаролитические свойства выражены слабо, молоко свертывают через несколько дней, а глюкозу, мальтозу, лактозу ферментируют до кислоты. Возбудитель делится на шесть серологических типов, выделяет летальный, некротический и гемолитический токсины.

Cl. histolyticum -- небольшие палочки, грамположи-тельные, подвижные, образуют споры, которые располагаются субтерминально; без капсул. Обладают сильными протеолитическими свойствами, разлагают желатин и свернутую сыворотку. Молоко пептоиизируют до полного растворения казеина, углеводы не ферментируют. Вырабатывают экзотоксин, обладающий летальными и некротическими свойствами. Некроз мышечной ткани обусловлен действием выделяемых фермен-тов: коллагеназы, гиалуронидазы и лецитиназы.

Патогенез и клиника.

Входными воротами инфекции является раневая поверхность, через которую вместе с разнообразными инородными телами (земля, обрывки одежды, осколки снарядов и др.) возбудители проникают в виде спор. Попавшие в рану споры в анаэробных условиях, которые возникают в результате сдавливания тканей и сосудов травматическим отеком, прорастают в вегетативные формы, размножаются, выделяя сильный экзотоксин. Под действием различных ферментов и токсинов, которые накапливаются в ране, нарушается кровообращение, после чего появляются отек, газообразование и некроз ткани. Ассоциации возбудителей газовой гангрены и условно-патогенных микроорганизмов, попавших в рану, усиливают токсический эффект и значительно отягощают течение газовой гангрены. Инкубационный период длится 2--5 дней. Клиническая картина заболевания разнообразна. Различают четыре основные клинические формы:

1. Эмфизематозная -- характеризуется обильным газообразованием в ране. Возбудителем этой формы являются Cl. perfringens и Cl. septicum.

2. Смешанная -- отличается отеком и газообразованием. Из раны выделяется пенистая жидкость красного цвета. Возбудителями являются ассоциации анаэробных микробов.

3. Токсическая -- характеризуется быстрым развитием отека с резким побледнением кожи. Возбудителем этой формы является Cl. novyi.

4. Флегмонозная -- сопровождается отеком без тенденции к распространению; отделяемое гнойное. Эта форма возникает в случае присоединения вторичной инфекции, сопровождающейся нагноением.

Иммунитет.

После перенесенного заболевания непродолжительный и нестойкий.

Лабораторная диагностика.

Материалом для бактериологического исследования служат кусочки некротизи-рованной ткани, отечная жидкость, обрывки одежды, частицы земли, кровь. Готовят мазкиотпечатки для микроскопического исследования, окрашивают по Граму и по Гинсу для обнаружения капсул. Бактериологический метод заключается в посеве на среду Китта-Тароцци, молоко, кровяной агар, агар Вильсона-Блера и идентификации выделенных культур. При биологическом методе фильтрат патологического материала вводят внутримышечно морским свинкам или белым мышам. В случае гибели зараженных животных дополнительно ставят реакцию нейтрализации на мышах с антитоксическими сыворотками против токсинов возбудителей газовой гангрены для определения вида.

Эпидемиология. Естественной средой обитания возбудителей газовой гангрены является кишечник человека или животных. При выделении с испражнениями происходит загрязнение почвы. Клостридии попадают в раны при их загрязнении землей, обрывками одежды, осколками (во время войн). При этом не всегда наступает заболевание: его развитию способствуют ослабление защитных сил макроорганизма, наличие обширных ран с размозжением мягких тканей, образованием кровяных сгустков, нарушением кровообращения и при попадании в рапу достаточного количества микробов.

Специфическое лечение и профилактика. Необходимо своевременное введение раненым поливалентной про-тивогангренозной антитоксической сыворотки с последующим введением (после бактериологического исследования) видоспецифической сыворотки.

Для профилактики газовой гангрены применяется очищенный адсорбированный полианатоксин.

8. Клостридии столбняка

Морфология и биологические свойства.

Возбудитель столбняка представляет собой длинную, тонкую, подвижную палочку (4--8x3--0,8 мкм). Капсулы не имеет. Образует круглую спору на конце клетки, что придает микробу вид барабанной палочки. В организме споры не образуются. Грамположителен. Является облигатным анаэробом. Хорошо растет на простых питательных средах при оптимальном рН 6,8--7,4 и температуре 37°С. На жидких средах дает равномерное помутнение с газообразованием. В столбике сахарного агара колонии имеют вид комочков ваты; на кровяном агаре растет в виде тонкого налета из переплетающихся нитей, напоминающих паучков, с зоной гемолиза. Углеводы не ферментирует, молоко свертывает с образованием хлопьев с обесцвечиванием, медленно разжижает желатин. Содержит О-соматический антиген, общий для всех типов, и Н-антиген, типоспецифический, по которому бациллы столбняка делят на 10 серологических типов.

Токсинообразование.

Выделяет сильный экзотоксин, состоящий из тетаноспазмина (нейротоксин), оказывающего действие на нервную систему (сокращение поперечнополосатых мышц) и тетаногемолизина, вызывающего гемолиз эритроцитов. Токсин можно получить, выращивая микроб в течение 10--14 сут на жидкой питательной среде. Он легко разрушается под действием высокой температуры, света и кислорода. Парентеральное введение самых малых доз токсина (0,000001 мл) вызывает гибель животного с типичными симптомами столбняка.

К столбнячному токсину наиболее чувствительны белые мыши и морские свинки, у которых клиническая картина заболевания развивается по типу восходящего столбняка.

В естественных условиях столбняком болеют лошади, крупный и мелкий рогатый скот, реже кошки, свиньи, собаки.

Устойчивость.

Споры обладают высокой устойчивостью во внешней среде. В высушенном виде они сохраняются десятки лет, выдерживают кипячение до 1 ч. Под действием 5% раствора карболовой кислоты погибают через 8--10 ч, 1% раствора формалина -- через 6 ч.

Патогенез и клиника.

Попадая в рану, при наличии анаэробных условий, споры столбнячной палочки оседают, прорастают в вегетативные формы, размножаются и выделяют экзотоксин. Чем больше экзотоксина попадает в организм, тем короче инкубационный период. В сред¬нем он составляет 2 нед. Токсины из пораженной мышечной ткани проникают в центральную нервную систему по двигательным корешкам нервов и через кровь, вызывая состояние повышенной возбудимости поперечнополосатых мышц. Клиническая картина болезни развивается по типу нисходящего столбняка. Наиболее ранним симптомом является напряжение жевательных мышц, вызывающее затруднение при открывании рта (тризм), тоническое сокращение мимических мышц лица, вследствие чего оно приобретает выражение вынужденной улыбки. Затем поражаются мышцы затылка, туловища, конечностей. Часто разгибательная мускулатура спины сведена сильнее, чем сгибательная, поэтому тело больного изгибается дугой. Малейшее внешнее раздражение (шум, движение воздуха, свет) вызывает приступ судорог. Смерть наступает от паралича дыхательной мускулатуры или сердца.

Иммунитет.

Перенесенное заболевание не оставляет выраженного иммунитета. Искусственная иммунизация анатоксином создает продолжительный и достаточно напряженный иммунитет.

Микробиологическая диагностика.

Лабораторное исследование при столбняке проводится редко ввиду типичной клинической картины инфекции. В сомнительных случаях исследуют раневое отделяемое, иссеченные кусочки мышечной ткани, материал, полученный на вскрытии. Ход исследования аналогичен таковому при газовой гангрене. Для обнаружения столбнячного токсина материал растирают в ступке, добавляют изотонический раствор хлорида натрия, выдерживают в течение часа, отфильтровывают. Фильтрат инъецируют внутримышечно двум белым мышам в бедро задней лапки; двум другим (контроль) вводят его вместе с антитоксической противостолбнячной сывороткой. В случае наличия токсина в исследуемом материале подопытные мыши погибают в течение 2--4 сут при типичной картине восходящего столбняка. Контрольные мыши остаются живыми, так как происходит реакция нейтрализации токсина антитоксином. Постоянным резервуаром столбнячной палочки является почва, куда микроб попадает вместе с испражнениями животных и человека.

Профилактика и лечение.

В Советском Союзе производят в обязательном порядке прививки против столбняка всем школьникам, военнослужащим и лицам, занятым на земляных работах. Используют адсорбированный столбнячный анатоксин, который вводят по 0,5 мл двукратно с интервалом 30--40 дней. Ревакцинация проводится через 10--12 мес, а в дальнейшем каждые 5-- 10 лет. В настоящее время анатоксин входит в состав комплексных вакцин (см. с. 270). С целью создания пассивного иммунитета при травмах, ранениях одновременно с анатоксином вводят противостолбнячную антитоксическую сыворотку в дозе 3000 АЕ или столбнячный гамма-глобулин.

Для лечения применяют противостолбнячную антитоксическую сыворотку (от 100 000 до 200 000 АЕ) или гамма-глобулин, антибиотики, противосудорожные препараты.

9. Клостридии ботулизма

Клостридии ботулизма (CI. botulinum) были выделены в 1895 г. ван Эрменгемом из остатков пищи и органов людей, умерших от ботулизма.

Морфология и биологические свойства.

Возбудитель ботулизма представляет собой полиморфную палочку размером 4--9X0,6--0,9 мкм, с закругленными концами, подвижную. Образует споры, располагающиеся субтерминально, что придает палочке вид теннисной ракетки. Клостридии ботулизма грамположительны, старые культуры грамотрицательны. Капсулы не имеют. Строгие анаэробы. Оптимальная температура роста и токсинообразования 30--50°С. На среде Китта -- Тароцци через сутки дают равномерное помутнение и газообразование. В столбике сахарного агара колонии имеют форму чечевиц или комочков ваты с уплотненным центром. На поверхности кровяного агара вырастают колонии-росинки с ровными или изрезанными краями и блестящей поверхностью, окруженные зоной гемолиза. Микроб сбраживает некоторые углеводы (глюкоза, мальтоза, левулеза) с образованием кислоты и газа. Обладает протеолитическими свойствами, разжижая желатин, свернутую сыворотку; растворяет куриный белок.

Возбудители ботулизма содержат общий О-соматический антиген и Н-антигены, по которым их делят на шесть типов: А, В, С, D, Е, F. Наибольшее значение в патологии человека имеют типы А, В, Е.

Токсинообразование.

Все типы возбудителей ботулизма вырабатывают токсин -- самый сильный из всех известных ядов биологического происхождения. Он является экзотоксином и обладает устойчивостью к ряду факторов: не разрушается пищеварительными ферментами желудочно-кишечного тракта, выдерживает кипячение до 10 мин, на него слабо действуют солнечный свет и высушивание. В консервах сохраняется 6--8 мес. Токсины накапливаются в мясных и растительных продуктах, в условиях анаэробиоза (в толще мяса, рыбы, консервах). Характерно гнездное распределение токсина в пище.

К ботулиническому токсину чувствительны лошади, рогатый скот, птицы, холоднокровные животные. Из лабораторных животных наиболее восприимчивы морские свинки, кролики, белые мыши. При введении им токсина отмечаются мышечная слабость, одышка, парезы конечностей. Смерть наступает через 1--3 дня.

Устойчивость.

Вегетативные формы микроба малоустойчивы во внешней среде. В пищевых продуктах, корме для животных, почве возбудитель ботулизма образует споры, которые очень устойчивы к воздействию различных физических и химических факторов. Споры хорошо переносят низкие и высокие температуры. Они не погибают даже при --190°С. Кипячение убивает их только через 1--6 ч; некоторые штаммы выдерживают автоклавирование при 120°С в течение 10 мин; 10% раствор хлористоводородной кислоты убивает их только через 1 ч, а 40% раствор формалина -- через 24 ч.

Патогенез и клиника.

Заболевание возникает при употреблении пищи, содержащей ботулинический токсин, и представляет собой типичный токсикоз микробной природы. Человек высокочувствителен к токсину, который всасывается в желудке и кровью разносится по всему организму, поражая центральную нервную систему. Первые симптомы отравления появляются обычно через 12--24 ч. В результате действия токсина на ядра черепных нервов у больного развиваются парезы мышц глазного яблока, паралич мышц языка и глотки, расстройства речи и слуха. Температура не повышается, пульс частый. Летальность колеблется от 15 до 70%. Смерть наступает от паралича дыхания или сердца.

Иммунитет.

Перенесенное заболевание не оставляет после себя иммунитета. Естественный иммунитет у человека также отсутствует.

Микробиологическая диагностика.

Исследуют материал, взятый у больного (рвотные массы, промывные воды желудка, кровь, испражнения), от трупа (содержимое желудка, кишечника, печень), пищевые продукты, воду, почву. Цель лабораторной диагностики -- выявить наличие ботулинического токсина или возбудителя.

Присутствие токсина в исследуемом материале определяют в биологической пробе (реакция нейтрализации). Для этого вначале материал растирают с двойным объемом изотонического раствора хлорида натрия, оставляют на 2 ч при комнатной температуре, затем центрифугируют и надосадочную жидкость вводят подкожно или внутрибрюшинно двум белым мышам или морским свинкам. Двум другим животным вводят смесь, состоящую из фильтрата и диагностических антитоксических сывороток типов А, В, С, Е, которую предварительно выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин. Если в материале содержится ботулинический токсин, то погибнут животные, не получившие антитоксическую сыворотку.