Влияние острого эмоционально-болевого стресса на активность карбоксипептидазы н в тканях самок крыс на разных стадиях эстрального цикла

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Влияние острого эмоционально-болевого стресса на активность карбоксипептидазы н в тканях самок крыс на разных стадиях эстрального цикла

Бардинова Ж.С., Сметанин В.А., Генгин М.Т.

Различия в стресс-реакции и устойчивости к стрессу у особей женского пола на разных стадиях эстрального цикла определяются разным содержанием гонадотропных гормонов, половых стероидов и глюкокортикоидов [1], опиоидных пептидов, вещества Р [2]. Важную роль в адаптации организма к стрессорному воздействию играют компоненты стресс-лимитирующих систем: энкефалины, вещество Р, пептид, вызывающий дельта сон [3]. Известно, что уровень активных нейропептидов зависит от протеолитических ферментов, участвующих как в их процессинге, так и в инактивации [1]. Одним из ключевых ферментов процессинга ряда нейропептидов является карбоксипептидаза Н (КФ 3.4.17.10) (КПН), которая на последней стадии катализирует реакцию отщепления от пропептидов С-концевых основных аминокислот. Участие КПН в образовании активных форм пептидов определяет интерес к этому ферменту.

Опыты проводили на самках белых беспородных крыс массой 180-250 г. Животных разделили на три группы: проэструс, эструс и диэструс. Стадию эстрального цикла определяли по влагалищным мазкам [1]. В каждой группе выделили две подгруппы: стрессированную и контрольную. Контролем служили интактные животные. Для моделирования острого эмоционально-болевого стресса крысам в течение 0,5 ч в беспорядочном режиме подавали один из трех сигналов: вспышка света, звук, электрокожное раздражение. После воздействия стресса самок декапитировали непосредственно после воздействия (0 ч), через 0,5, 4 и 18 часов после стресса. Активность КПН определяли флюорометрическим методом по Fricker L.D., Snyder S.H. [4] при рН 5,6 по отщеплению дансил-Phe-Ala от дансил-Phe-Ala-Arg как разность в накоплении продукта реакции в пробах, не содержащих и содержащих гуанидиноэтилмеркаптоянтарную кислоту, и выражали в нмоль дансил-Phe-Ala образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка. Содержание белка в пробах определяли методом Lowry [5]. Отличия между средними значениями признаков определяли с помощью t-критерия Стьюдента, достоверными считали различия при p<0,05 [6].

Согласно результатам исследования (см. табл.) на стадии проэструс при остром эмоционально-болевом стрессе продолжительностью 30 мин отмечено наиболее выраженное снижение активности КПН в гипофизе через все интервалы времени после воздействия. В эструсе активность исследуемого фермента снижалась в гипофизе, гипоталамусе и повышалась в надпочечниках. В диэструсе кратковременный стресс приводил к повышению активности фермента во всех исследуемых отделах через длительные интервалы времени после действия стресса.

Таблица. Влияние острого эмоционально-болевого стресса на активность КПН в тканях самок крыс на разных стадиях эстрального цикла (нмоль продукта, образовавшегося за 1 мин инкубации на 1 мг белка; M ± m; n = 5?6; * - р < 0,05, ** - р < 0,01, *** - р < 0,001 относительно нормы).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что у самок опытных крыс активность КПН при действии острого эмоционально-болевого стресса в большей степени изменялась в отделах, в которых синтезируются стресс-пептиды [7]. Эти данные подтверждают предположение о вовлечении КПН в процессинг предшественников биологически активных пептидов, участвующих в ответе на стресс, и, соответственно, в развитие стрессорных реакций и адаптации.

У самок крыс острый стресс на стадиях проэструса и эструса вызывал преимущественно снижение активности КПН в гипофизе и гипоталамусе, а в диэструсе в этих отделах активность фермента повышалась. В надпочечниках во время эструса воздействие стресса приводило к увеличению ферментативной активности. Вероятно, что разнонаправленное изменение активности КПН на разных стадиях цикла при стрессе (снижение активности во время проэструса, эструса и повышение - в диэструсе) связано с различной устойчивостью животных к воздействию стрессовых факторов в течение эстрального цикла.

стресс реакция крыса карбоксипептидаза

Литература

1. Бабичев В.Н. Нейрогормональная регуляция овариального цикла. - М.: Медицина, 1984. - 240 с.

2. Potargowicz E., Traczyk W.Z. Role of substance P in central control of ovulation in female rats // Endocrine Regulations. - 1999. - N 33. - P. 161-167.

3. Бондаренко Т.И., Милютина Н.П., Михалева Н.И., Носкова Н.В. Мембраностабилизирующий эффект дельта-сон индуцирующего пептида при стрессе // Бюл. экспер. биол. и мед. - 1990. - № 9. - С. 325-327.

4. Supattapone S., Fricker L.D., Snyder S.H. Purification and characterization of membrane-bound enkephalin-forming carboxypeptidase, "enkephalin convertase" // J. Neurochem. - 1984. - V. 42, N 4. - P. 1017-1023.

5. Lowry O.H., Rosebrought N.J., Farr A.G., Randall R.J. Protein measurement with Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. - 1951. - V. 193, N 1. - P. 265-275.

6. Лакин Г.Ф. Биометрия. - М.: Высш. шк., 1990. - 352 с.

7. Drolet G., Dumont E.C., Gosselin I., Kinkead R., Laforest S., Trottier J.F. Role of Endogenous Opioid System in the Regulation of the Stress-Response // Prog. Neuro-Psych. Biol. Psych. - 2001. - V. 25, N 4. - P. 729-741.

Размещено на Allbest.ru