Размещено на http://www.allbest.ru/

Морфофункциональная характеристика тучных клеток печени потомства самок крыс с хроническим алкогольным поражением гепатобилиарной системы

Леонов Н.В.

Брюхин Г.В.

В экономически развитых странах около 10% населения страдает алкоголизмом, при этом значительную часть этой группы составляют женщины, в том числе и детородного возраста [1,8]. В связи с чем, в этой группе населения увеличивается процент лиц, с поражением гепатобилиарной системы, так как от 75% до 98% алкоголя метаболизируется в печени. Гепатотоксическое действие этанола и его метаболитов определяют изменения в структуре и функции органа [5].

Патология печени у беременных приводит к значительным нарушениям гомеостаза и морфофункционального состояния ряда жизненно важных органов. Развивающиеся функциональные системы плода в таких условиях испытывают воздействия, которые могут изменить скорость и характер их созревания и вызвать появление разнообразных морфофункциональных нарушений органов и систем [7].

У матерей с хроническим поражением гепатобилиарной системы различной этиологии рождается физиологически незрелое потомство, являющееся иммунологически компрометированным и имеющее сниженный «старт» защитных, адаптивных реакций и здоровья, что обусловливает нарушение резистентности организма [2].

Проблема действия хронического алкогольного поражения печени матери, сформированного до наступления беременности, на тучные клетки (ТК) различных компартментов у потомства, как центрального звена обеспечения и поддержания местного (тканевого) гомеостаза, не получила должного рассмотрения в научной литературе.

Исходя из выше изложенного, целью данного исследования явилось изучение морфофункционального состояния ТК печени у потомства самок крыс с хроническим алкогольным поражением печени в различные сроки постнатального онтогенеза.

Материалы и методы исследования. В эксперименте были использованы лабораторных крысы (самки) «Вистар» и их потомство (145 животных) в различные сроки постнатального онтогенеза (на 1-й, 15-й, 30-й, 45-й и 60-й дни). Моделирование хронического алкогольного поражения печени достигалось у половозрелых самок крыс путем ежедневного зондового введения в желудок 40%-го водного раствора этанола в дозе 4 г/кг массы на протяжении 4 недель [3]. Оценка состояния популяции ТК печени у потомства крыс-самок с хроническим алкогольным поражением печени, сформированным до наступления беременности, осуществлялась с помощью морфофункционального анализа по Д.П. Линднеру и соавт. (1980) [4] и иммуногистохимического метода исследования [6].

Изучение морфофункционального состояния тучноклеточной популяции печени подопытных животных осуществлялась на серийных гистологических срезах с последующим определением содержания ТК в 1 мм2 исследуемого органа. Производился дифференциальный анализ содержания ТК с различной степенью гранулярного насыщения цитоплазмы (очень темные, темные, светлые и очень светлые) с последующим определением индекса насыщения. Индекс насыщения вычислялся как отношение суммы всех темных клеток к сумме всех светлых клеток. Индекс дегрануляции рассчитывали по формуле:

ИД = (А 0 + Б 1 + В 2 + Г 3) / n,

где А - неактивные клетки; Б - слабо дегранулирующие клетки; В - клетки с умеренной дегрануляцией; Г - клетки с сильной дегрануляцией; n - общее количество тучных клеток. Кроме того, для выявления в печени экспрессии триптазы ТК нами использовался иммуногистохимический метод.

Оценка иммуногистохимического исследования осуществлялась по следующим критериям: отсутствие реактивности обозначалось как «-»; минимальную реактивность как «+»; среднюю (умеренную) как «++»; максимальную как «+++» [6]. Возможность судить об уровне содержания триптазы в секреторных гранулах ТК дает расчет среднего иммуногистохимического показателя (СИГХП) по следующей формуле:

СИГХП=(А1+В2+С3)/n,

где А - количество клеток со слабой степенью выраженности экспрессии антигена; В - количество клеток с умеренной степенью выраженности экспрессии антигена; С - количество клеток с сильной степенью выраженности экспрессии антигена; n - общее количество клеток.

Оценка статистически значимых различий между средними значениями проводилась непараметрическими методами с использованием критерия Манна-Уитни. При этом во внимание принимались результаты, где уровень статистической значимости (p) обнаруженных различий был < 0,05 (95%).

Результаты исследования. Проводимый в рамках исследования анализ содержания ТК в печени позволил выявить общую тенденцию изменения числа мастоцитов у экспериментальных животных интактной и опытной группы (Таблица 1): постепенное снижение количества ТК с 1-го по 30-ый дни, а затем увеличение, вплоть до 60-го дня.

Таблица 1. Содержание тучных клеток в печени потомства экспериментальных животных в различные сроки постнатального онтогенеза в 1 мм2 M(s)

* - p<0,05

У подопытной группы животных установлено статистически значимое уменьшение содержания ТК в 1мм2 печени на 1-ый день и увеличение числа мастоцитов на 30-ый день постнатальной жизни по сравнению с аналогичным контролем.

Изучение динамики изменения значений индекса гранулярного насыщения цитоплазмы ТК печени экспериментальных животных (Таблица 2) позволило выявить статистически значимое снижение величин показателя у новорожденных и 45-ти дневных опытных крысят по сравнению с аналогичными контрольными животными.

На фоне слабо изменяемой дегранулярной активности ТК печени экспериментальных животных на всех сроках проводимого исследования (Таблица 3), нами не было обнаружено статистически значимого изменения значений индекса дегрануляции мастоцитов печени у потомства самок крыс с хроническим алкогольным поражением печени по сравнению с контрольными крысятами.

Таблица 2. Индекс гранулярного насыщения тучных клеток печени экспериментальных животных в различные сроки постнатального онтогенеза М(s)

* - p<0,05

У экспериментальных животных с 1-ых по 60-ые сутки отмечается постепенное снижение уровня содержания триптазы в секреторных цитоплазматических гранулах ТК печени, о чем свидетельствует динамика значений СИГХП (Таблица 4). Исключение лишь составляют 60-ти дневные подопытные крысят. В данной группе животных значение СИГХП вновь возрастает.

Таблица 3. Индекс дегрануляции тучных клеток печени экспериментальных животных в различные сроки постнатального онтогенеза М(s)

* - p<0,05

На 30-ый и 60-ый день значения СИГХП в опытной группе статистически значимо выше по сравнению с аналогичными контрольными крысятами. Однако, на 45-ые сутки значение показателя у подопытных крысят снижено.

Таблица 4. Средний иммуногистохимический показатель тучных клеток печени экспериментальных животных в различные сроки постнатального онтогенеза M(s)

* - p<0,05

Обсуждение. Хроническое алкогольное поражение гепатобилиарной системы матери приводит к снижению содержания ТК в печени у потомства на 1-ые сутки и увеличение числа мастоцитов на 30-ые сутки постнатального онтогенеза. При этом имеет место уменьшение содержания гепарина в секреторных цитоплазматических гранулах у новорожденных и 45-ти дневных крысят, о чем свидетельствует динамика индекса гранулярного насыщения ТК печени опытной группы животных. Наряду с этим увеличивается уровень содержания триптазы в секреторных гранулах на 30-ые и 60-ые сутки и уменьшается на 45-ые сутки проводимого исследования.

Обращает на себя внимание тот факт, что основные морфофункциональные изменения состояния ТК печени наблюдаются у потомства само крыс с хронического алкогольного поражения гепатобилиарной системы в период зрелости, что, скорее всего, обусловлено изменением гормонального гомеостаза.

Литература

тучноклеточный печень компартмент

1. Авдеева, Т.Г. Влияние алкоголизма матери на состояние здоровья новорожденного / Т.Г. Авдеева, И.Л. Алимова // Педиатрия. - 1994. - № 5. - С. 57-58.

2. Брюхин, Г.В. Влияние хронической патологии печени различного генеза матери на становление систем жизнеобеспечения потомства в условиях эксперимента / Г.В. Брюхин // Роль патологии печени матери в нарушении развития, реактивности и резистентности потомства в условиях эксперимента: сб. науч. тр. - Челябинск: Челябинская медицинская академия, 2004. - С 189-194.

3. Кругликов, Р.И. Особенности высшей нервной деятельности и бензодиазепиновой системы мозга крыс, подвергшихся воздействию этанола в пренатальном периоде / Р.И. Кругликов, В.В. Жулин // Журнал высшей нервной деятельности им. И.П. Павлова. - 1990. - Т.40, №3. - С. 481-489.

4. Линднер, Д.П. Морфометрический анализ популяции тучных клеток / Д.П. Линднер, И.А. Поберий, М.Я. Розкин и др. // Архив патологии. - 1980. - №6. - С. 60-64.

5. Подымова, С.Д. Механизмы алкогольного повреждения печени и их корреляция с эсенциальными фосфолипидами / С.Д. Подымова // Фармакинетика. - 2005.- № 14. - 5 с.

6. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека / под ред. С.В. Петрова, Н.Т. Райхлина. - 3-е изд., перераб. и доп. - Казань, 2004. - 592 с.

7. Скосырева, А.М. Влияние злоупотребления алкоголем на состояние здоровья женщин и их потомства / А.М. Скосырева, Ю.Д. Балика, С.К. Кочиева и др. // Акушерство и гинекология. - 1993. - №2. - С. 48-51.

Размещено на Allbest.ru