Особенности влияния соли кадмия на относительную массу тимуса и селезенки белых крыс разного пола при разных режимах освещенности

Размещено на http://www.allbest.ru/

33

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО РЫБОЛОВСТВУ

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ

УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

АСТРАХАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ТЕХНИЧЕСКИЙ

УНИВЕРСИТЕТ

Институт Рыбного хозяйства, биологии и природопользования

Направление 020200.62 Биология

Кафедра Прикладная биология и микробиология

Курсовая работа

Особенности влияния соли кадмия на относительную массу тимуса и селезенки белых крыс разного пола при разных режимах освещенности

Работу выполнил

Студ. группы ДББ-41

Ахмеджанова А.С.

Руководитель работы

д-р биол. наук, профессор

Котельников А.В.

Содержание

Введение

Глава 1. Литературный обзор

1.1 Общая характеристика кадмия и его эффектов на организм

1.1.1 Характеристика кадмия как экополлютанта

1.1.2 Особенности распределения и метаболизма кадмия в организме

1.1.3 Физиологические эффекты кадмия в организме

1.2 Характеристика иммунокомпетентных органов млекопитающих

1.2.1 Виды иммунокомпетентных органов и их характеристика

1.2.2 Морфофункциональная характеристика тимуса

1.2.3 Морфофункциональная характеристика селезенки

Глава 2. Материалы и методы исследования

Глава 3. Результаты исследований и их обсуждение

3.1 Влияние постоянного освещения на относительную массу тимуса и селезенки

Список литературы

Введение

Широкое применение тяжелых металлов в технике, промышленности, сельском хозяйстве связано с физико-химическими и другими особенностями этих элементов. Одной из особенностей кадмия, как представителя этой группы металлов, является его рассеянное состояние в биосфере. Тем не менее, еще в 70-х годах XX века было обнаружено токсическое воздействие соединений кадмия на организм.

Известно, что представители различных видов живых организмов по-разному реагируют на действие химических веществ. Кроме того, особи одного и того же вида неодинаково чувствительны к токсикантам. Это связано, с особенностью биохимических и физиологических процессов, которые являются отражением возрастных и половых отличий организмов (Тельцов Л.П., Соловьев А.С.,2001). Так, например, важное отличие разнополых особей с позиций биохимии - гормональный фон, который играет немаловажную роль в регуляции многих процессов, и как следствие - реакций организма на поступление тех или иных токсикантов (Куценко С.А., 2003). Ряд исследователей склонны рассматривать в основном опосредованное влияние стероидных гормонов, при этом рассматриваются две возможности. Первая заключается в том, что эстрогены и прогестины значительно модифицируют окислительный метаболизм (что также имеет значение для метаболизма кадмия), вторая связана с особенностями биосинтеза стероидов в яичниках (Hodgson E., Levi P.E, 2007).

Физиологические и биохимические параметры организма подвержены и сезонным изменениям, что дает возможность говорить о различных реакциях организма в эти периоды на поступление в него кадмия. Более того: наблюдаются изменения в биохимических процессах, связанные с влиянием «суточных» факторов (Голиков А.П., Голиков П.П., 1973). К ним относится свет, температура. Установлена зависимость функционального состояния женской репродуктивной системы от длительности светового дня. Известен также угнетающий эффект гормонов эпифиза на становление репродуктивной функции организма (Кондратенко Е.И. с соавт., 2000).

Воздействие кадмия на организм способно приводить к изменениям со стороны защитных и адаптационных механизмов, которые широко варьируют в зависимости от вида организма, его физиологических и биохимических особенностей, которые изменяются посезонно и неодинаковы у организмов разного пола. Поэтому изучение состояния морфологических и функциональных черт иммунокомпетентных органов в условиях воздействия на организм токсических веществ является вполне обоснованным и актуальным.

Целью дипломной работы было изучение особенностей влияния соли кадмия на относительную массу тимуса и селезенки белых крыс разного пола при разных режимах освещенности.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучить изменения органного индекса селезенки и тимуса при постоянном освещении и в условиях световой депривации.

2. Выявить половые особенности реакции исследованных иммунных органов на воздействие солью кадмия.

3. Проанализировать роль светового фактора в реализации реакции организма на токсический стресс, вызванный солью кадмия.

Глава 1. Литературный обзор

1.1 Общая характеристика кадмия и его эффектов на организм

1.1.1 Характеристика кадмия как экополлютанта

Кадмий - один из самых токсичных тяжелых металлов и поэтому Российским СанПиНом он отнесен ко 2-му классу опасности - «высокоопасные вещества». Элемент принадлежит к числу редких рассеянных элементов и имеет 8 природных изотопов (http://ecoline.ru/news/ APR99/ 99042903. TXT, 2007).

Поступление кадмия в окружающую среду происходит как в результате эмиссии в процессах получения и удаления из производства продуктов, содержащих кадмий, так и вследствие прямого использования субстратов, содержащих кадмий, таких как минеральные удобрения или биологический ил, в которых этот элемент может находиться в виде соединений, способных к быстрому распространению (Корте Ф., 1997).

Кадмий, как правило, присутствует вместе с цинком в карбонатных и сульфидных рудах. Его получают также в виде побочного продукта при рафинировании других металлов. Поэтому, получая такие металлы как медь, свинец и цинк, человечество в течение нескольких столетий непроизвольно загрязняло окружающую среду кадмием (Мур Д.В., Рамамурти С., 1987).

Масштабы антропогенного загрязнения кадмием биосферы столь значительны, что поток их техногенного рассеивания намного превышает поток выветривания. Интенсивность антропогенного поступления кадмия в водную поверхность достигает 132 т в год для стран ЕЭС (1984). В атмосферу во всем мире ежегодно поступает 7300 т кадмия (http://ecoline.ru/news/APR99/ 99042903.TXT, 2007), в глобальном масштабе - от 25000 до 30000 т (Кадмий и его соединения, 2003). Производство кадмия в мире составляет около 20000 т в год. Соединения кадмия (хлорид, бромид, иодид, нитрат, карбонат, ацетат) применяются в гальванотехнике, керамике, в производстве полимеров, пигментов, а также серебряно-кадмиевых аккумуляторов, они входят в состав средств для чистки изделий из серебра (Корте Ф., 1997).

Содержание кадмия в незагрязненных внутренних водах, как правило, составляет 1 мкг/л. В поверхностных водах кадмий содержится преимущественно в веществах, адсорбированных на взвешенных в воде частицах, и лишь 25-30% его растворены в воде. При очистке воды около 5-40% кадмия (1-10 мкг/л) не улавливается на очистных сооружениях. Осаждение из воздуха (1-7 мкг/л), вымывание из сельскохозяйственных угодий (0,1-0,5 мкг/л) и вод, просачивающихся со свалок (менее 1 мкг/л), суммарно могут привести к появлению высоких локальных концентраций (Корте Ф., 1997).

Вследствие загрязнения почв он проникает в растительный организм. В определенных условиях ионы кадмия, обладая большой подвижностью в почвах, легко переходят в растения, накапливаются в них и затем поступают в организм животных и человека. Высокая фитотоксичность кадмия объясняется его близостью по химическим свойствам к цинку. Поэтому кадмий может замещать цинк во многих биохимических процессах, нарушая работу большого количества ферментов. Основным источником кадмиевого загрязнения почв является внесение удобрений, в особенности суперфосфата, куда кадмий входит в качестве микродобавок (http://www.poluchi5.ru/013539-5.html, 2007).

Широкое распространение кадмия в топливе, удобрениях, рудных отвалах наряду с использованием этого элемента в промышленном производстве и определяет постепенно увеличивающуюся концентрацию данного элемента в окружающей среде. Поступая в пресные водоемы и в моря, растворенный кадмий осаждается и накапливается в донных осадках. Водные растения и животные извлекают и концентрируют его в тканях своего тела. Явление биоаккумуляции кадмия происходит в экосистемах как при наличии металла в естественных для окружающей среды количествах, так и при антропогенном ее загрязнении.

Вследствие высокой биоаккумуляции кадмий наиболее опасен, в связи с чем возникает реальная угроза неблагоприятного воздействия его даже при низких уровнях загрязнения окружающей среды.

1.1.2 Особенности распределения и метаболизма кадмия в организме

В токсическом действии металла большое значение имеют его транспорт, распределение, концентрация в месте действия, метаболизм, скорость и пути выделения. Вопросы метаболизма мало изучены в отношении металлов в принципе, и кадмия в том числе. Однако известны происходящие в организме восстановительные процессы, при которых металл из состояния высшей валентности переходит в состояние низшей валентности.

Концентрация кадмия в месте действия, как и вообще любых ядов или фармакологических средств, является результатом динамических процессов всасывания из места поступления, проникания в жидкие среды, транспорта, распределения в органах и тканях, химических превращений и процессов выведения из организма (http://www.poluchi5.ru/013539-5.html,2007).

Известно, что скорость и полнота резорбции зависят от соотношения между ионизированной и неионизированной частью молекулы. Хлорид кадмия (CdCl₂) как хорошо растворимое и диссоциирующее соединение, попадая в организм, распадается на ионы.

При поступлении кадмия через желудочно-кишечный тракт, процент его усвояемости составляет лишь 4-7% (0,2 - 5 мкг кадмия в сутки абсолютных цифрах). Всасывание элемента происходит в тонкой кишке, причем уровень резорбции этого металла в подвздошной кишке значительно выше, чем в тощей.

Необходимо также отметить, что через легкие (ингаляционное поступление) кадмий легче усваивается организмом - до 10-20%.

В целом, величина всасывания для кадмия существенно ниже, чем дли меди и цинка, с которыми он, по-видимому, имеет общий транспортный механизм. Так, например, только 95% кадмия, попавшего в желудочно-кишечный тракт, выделяется с калом в силу плохой всасываемости металла (Куценко С.А,2002).

У новорожденных уровень всасываний кадмия в кишечнике значительно выше, чем у взрослых особей. В почках верхним безопасным порогом кадмия считается 200 мг/кг. Колебания уровня кадмия в этих органах зависят от пола, возраста и условий обитания (Березина О.В., Гоев А.А., 1982).

Абсорбция кадмия в первую очередь зависит от пути поступления, а затем уже от строения соединения. Большинство солей кадмия плохо абсорбируются в желудочно-кишечном тракте (в том числе CdCl₂).

Абсорбция в дыхательной системе проходит достаточно полно. В зависимости от степени растворимости в воде ингалированных соединений всасывается до 90% вещества проникшего в глубокие отделы дыхательной системы.

Поступивший в кровь кадмий быстро связывается эритроцитами (полагают, что двухвалентные металлы (Cd) проникают через пограничные мембраны в виде фосфатных комплексов) и альбуминами плазмы. Связавшийся с плазмой металл быстро переходит в различные ткани и органы, преимущественно печень и почки (до 50% поступившего в организм кадмия) (Березина О.В., Гоев А.А., 1982; Bell J.U., 1980).

В основном кадмий находится в организме в связанном состоянии - в комплексе с белком-металлотионеином, являющимся, таким образом естественной защитой организма (по последним данным альфа-2 глобулин также связывает кадмий) и в таком виде он менее токсичен, хотя и далеко не безвреден (Котеров А.Н. с соавт., 1995).

Кадмий химически очень близок к цинку и способен замещать его в биохимических реакциях, например, выступать как псевдоактиватор или, наоборот, ингибитор содержащих цинк белков и ферментов (а их в организме человека более двухсот). Кадмий является также антагонистом кальция и железа и способен замещать эти элементы, например, кальций в костной ткани. Поэтому недостаток в организме цинка, железа и кальция может привести к 2-3 кратному повышению усвояемости кадмия из желудочно-кишечного тракта (до 15-20%).

Выведение осуществляется с различной скоростью и различными путями. Кадмий очень медленно выводится из организма. Это связывают с тем, что тяжелые металлы склонны к образованию очень трудно растворимых гидроокислов, фосфатов, альбуминатов или других весьма стойких комплексов (Геннис Р., 1997). Период полувыведения Cd из организма человека составляет по современным оценкам 25-30 лет. Первоначально кадмий в неизмененном состоянии выделяется через почки. Однако после развития нефропатии происходит значительное увеличение выведения элемента с мочой в комплексе с металлотионеином (Куценко С.А.,2003).

Благодаря способности к комплексообразованию Cd откладывается в тканях. Главным «хранилищем» кадмия в организме служат почки (30-60% всего количества) и печень (20-25%). Остальной кадмий находится в поджелудочной железе, селезенке, трубчатых костях, других органах и тканях.

1.1.3 Физиологические эффекты кадмия в организме

Кадмий и его соединения представляют реальную опасность, как при остром, так и хроническом воздействии.

Острая интоксикация может развиться как при ингаляционном, так и алиментарном поступлении кадмия в организм. Однако для этого нужны достаточно высокие дозы и концентрации. Так, для крыс ЛД₅₀ при внутрижелудочном введении CdO равна 72 мг/кг, CdSO₃ - 88 мг/кг, CdCl₂ - 94 мг/кг, CdSO₄ - 2425 мг/кг (Куценко С.А.,2002). При вдыхании в течение получаса крысами аэрозоля CdO, образующегося при сжигании кадмия на пламени электрической дуги, ЛК₅₀, составляет 45 мг/м³ (Waalkes M. P., 2000).

Проявления хронического воздействия кадмия наиболее отчетливо прослеживаются со стороны дыхательной системы и почек. Поражение легких возникает исключительно при ингаляционном способе воздействия, в то время как почки страдают при поступлении кадмия в организм всеми возможными способами.

Другими эффектами хронического действия металла являются поражения опорно-двигательного аппарата, нарушение функций сердечно-сосудистой системы (Куценко С.А.,2003). Сd также усиливает отмирание париетальных клеток по средствам усиления изменения нормы и уменьшения базовой продукции соляной кислоты (Asar M., Oner G., 2005).

Митохондрии являются мишенью для токсического действия солей тяжелых металлов, что подтверждается изменением их формы, структуры и размеров при морфобиоптических исследованиях почек и печени животных, подвергавшихся воздействию солей тяжелых металлов (Морозова Т.С. с соавт., 1991). Это может быть связано с преимущественным распределением тяжелых металлов в митохондриальной фракции клеток (Кругликова Г.О. с соавт., 1976), хотя на долю митохондриальной фракции приходится не более 10% кадмия, в то время как митохондрии составляют около 12% от клеточного объема. В основе ингибирующего действия металла на функцию митохондрий может лежать его способность менять мембранный потенциал.

Кадмий блокирует работу ряда важных для жизнедеятельности организма ферментов. Кроме того, он поражает печень, почки, поджелудочную железу, способен вызвать эмфизему или даже рак легких. Вредность кадмия усугубляется его исключительной кумулятивностью. В связи с этим даже при незначительном количестве поступающего элемента его содержание в почках или в печени может через некоторое время достигнуть опасной концентрации. Кадмий плохо выводится, и от 50 до 75% его от попавшего количества удерживается в организме (Морозова Т.С. с соавт., 1991).

Наиболее типичным проявлением отравления кадмием является нарушение процессов поглощения аминокислот, фосфора и кальция в почках.

Длительное введение металла экспериментальным животным (крысы) сопровождается некрозом нервных клеток чувствительных ганглиев и аксональной дегенерацией и демиелинизацией периферических нервных стволов.

Исследования, проведенные на животных различных уровней организации - от микроорганизмов до млекопитающих, - показали, что соли кадмия обладают мутагенными и канцерогенными свойствами и представляют потенциальную генетическую опасность. Иммуносупрессивное действие кадмия может быть причиной канцерогенеза, встречающегося у организмов, контактирующих с металлом (Даутов Ф.Ф., Яруллин И.А., 1993). Однако в ходе эпидемиологических исследований не удалось зарегистрировать абсолютную связь между действием кадмия и канцерогенезом, хотя в опытах на грызунах было установлено, что хроническое воздействие кадмия приводит к развитию аденокарциномы легких. Также было установлено, что профессиональное воздействие смеси токсикантов, среди которых был и кадмий, приводит к значительному росту числа опухолей почек. Тем не менее, до настоящего времени кадмий не рассматривался как абсолютный, безусловный канцероген для животных и человека (Stoev S.D. et al., 2003; Oyama T.M. et al., 2006).

В результате интоксикации крыс кадмием обнаруживаются следующие изменения: увеличение объема лимфатических узлов в три раза от исходного, отечность, набухание, резкое кровенаполнение, нарушение адренергической иннервации узлов, уменьшение числа нервных сплетений и терминалей вокруг фолликулов и трабекул, выход катехоламинов за пределы нервных волокон в окружающие ткани, нервные волокна, сопровождающие кровеносные сосуды, питающие ткани узла, имеют прерывистость и утолщения (Колесниченко Л.С., Кулинский В.И., 1989). После кадмиевой интоксикации крыс обнаруживаются сдвиги в ионном составе в крови: концентрация ионов калия в плазме крови снижается, тогда как уровень ионов натрия и хлоридов в плазме незначительно возрастает. Таким образом, после отравления крыс кадмием уменьшается содержание белка в плазме и лимфе и увеличивается плазменная часть крови (Булекбаева Л.Э., Демченко Г.А., Ахметбаева Н.А,2003). Одновременное снижение вязкости крови и лимфы свидетельствует об их разжижении. Эти факты позволяют утверждать об уменьшении процессов лимфообразования и, как следствие, снижение лимфотока (Колесниченко Л.С., Кулинский В.И., 1989).

Кадмий также оказывает негативное действие и на другие жизненно важные органы, однако интенсивность его влияния несколько различается. Так, например, было установлено, что катионы кадмия медленнее и в меньших относительных количествах накапливаются в ткани селезенки, особенно на начальных стадиях воспроизведения кадмиевой интоксикации, оказывают прямое токсическое влияние на ткань данного органа, что подтверждалось исследованием его морфологической структуры и функционального состояния лимфоцитов. При кадмиевой интоксикации только после 10-кратного введения крысам кадмия наблюдается достоверное увеличение массы селезенки, не отмечается достоверных различий в количестве лимфатических узелков в белой пульпе и узелков со светлыми центрами размножения (Диденко М.Н., Дмитруха Н.Н., 1998).

По данным некоторых авторов, в динамике моделируемой кадмиевой интоксикации у крыс не выявлены существенные морфофункциональные нарушения в селезенке, которые характеризовали бы развитие иммунного ответа организма на кадмий (Стежка В.А. с соавт., 2001). Лимфатические узелки были представлены разными размерами с хорошо различимыми Т- и В-зависимыми зонами. Клетки в них представлены лимфоцитами различной величины. Центральная артерия узелков полнокровна, ее стенка утолщена. В красной пульпе отмечается резко выраженное полнокровие синусов, между ними в большом количестве определись плазматические клетки, тканевые базофилы, лейкоциты. После 5-кратного введения соли кадмия обнаруживается снижение спонтанной пролиферативной активности лимфоцитов и функциональной активности Т-лимфоцитов-супрессоров, тогда как функциональная активность Т-лимфоцитов-супрессоров и В-лимфоцитов селезенки не изменяется. После 10 введений крысам соли кадмия функциональная активность спленоцитов фактически не отличается от контрольных значений. В конце эксперимента, после 25-кратного введения крысам соли кадмия спонтанная пролиферация лимфоцитов селезенки достоверно повышается. Эффект кадмия на лимфоциты селезенки обусловлен прямым токсическим влиянием катионов кадмия на лимфоциты, нарушением специализированной функции их цитоплазматической мембраны (Диденко М.Н., Дмитруха Н.Н., 1998).

Полнокровие красной и белой пульпы в большей мере свидетельствует о токсическом действии соли кадмия. Это подтверждалось и результатами исследования функциональной активности лимфоцитов селезенки, которые указывали на наличие прямого токсического влияния на них катионов кадмия. Последнее позволяет отнести селезенку не только к органам-мишеням, но и к критическим органам по развитию иммунотоксического действия катионов кадмия (Стежка В.А. с соавт., 2001). Кроме того, результаты исследований индийских ученых (Pathak N, Khandelwal S, 2005) выявили апоптозные процессы, происходящие на стадии G клетки лимфацита селезенки через 6 часов после воздействия металла. Происходила фрагментация ДНК, уменьшение потенциала митохондриальных мембран, усиливался синтез ROS. Было предположено, что ROS - критический медиатор Сd-обусловленного апоптоза и что кадмий усиливая апоптоз, ставит под угрозу иммунную функцию селезенки.

Кроме того, было установлено, что кадмий также увеличивает количество свободных радикалов кислорода и уровень ПОЛ (Atesi I., Suzen H.S, 2004).

1.2 Характеристика иммунокомпетентных органов млекопитающих

1.2.1 Виды иммунокомпетентных органов и их характеристика

Костный мозг, тимус, селезенка, лимфоузлы, пейеровы бляшки кишечника, миндалины и червеобразный отросток являются образованиями, в которых непрерывно образуются и созревают клетки, способные осуществлять «иммунный надзор» в организме млекопитающего. Эти иммунные органы и ткани непрерывно обмениваются между собой метками и молекулами, создавая достаточный уровень антител в каждой ткани. Активность органов иммунной системы регулируется автономной нервной системой и гуморальными веществами. Постоянное воздействие антигенов поддерживает активность органов иммунной системы - костного мозга, тимуса, пейеровых бляшек кишечника, миндалин, селезенки, лимфоузлов.

Иммунологическую компетентность клетки крови приобретают либо в костном мозге (эритроциты), либо в других иммунных органах (в лимфатической ткани миндалин глотки и пейеровых бляшек кишечника «созревают» В-лимфоциты с большим, в 100-200 раз превосходящим таковое у Т-лимфоцитов, количеством микроворсин на поверхности, в тимусе - Т-лимфоциты) (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В.,1998).

Важным органом иммунитета является желудочно-кишечный тракт (Выхристенко Л.Р. с соавт., 2005). В лимфоидной ткани ЖКТ можно условно выделить индуктивную и эффекторную зоны. Первая состоит из пейеровых бляшек, аппендикса и регионарных лимфоузлов. Вторая из собственной пластинки (lamina propria) и эпителиальных клеток слизистой оболочки кишечника. В индуктивной зоне происходит распознавание, представление антигена и формирование популяции антигенспецифических Т- и В-лимфоцитов; в эффекторной зоне - синтез иммуноглобулинов В-лимфоцитами, цитокинов - моноцитами/ макрофагами, Т- и NK-лимфоцитами. Антигены поступают в лимфоидную ткань кишечника преимущественно через плоский эпителий, который покрывает пейеровы бляшки. Последние состоят из Т и В-клеточных зон, состав которых существенно не отличается от такового любого периферического лимфатического узла (Абелев,1996). Характерная морфологическая структура пейеровой бляшки - фолликулярно-ассоциированный эпителий, главной чертой которого является М-клетка. Эпителиальные М-клетки, обладающие выраженными пиноцитарными свойствами, перерабатывают антигенный материал и передают его Т- и В-лимфоцитам. Далее развиваются процессы пролифирации и дифференцировки Т- и В-лимфоцитов, последние покидают пейерову бляшку и по афферентному лимфатическому протоку попадают в брыжеечный лимфоузел (Выхристенко Л.Р. с соавт., 2005).

Пейеровы бляшки - это довольно крупные скопления лимфоидной ткани в тонком кишечнике. Пейеровы бляшки отвечают за выработку иммунного ответа внутри слизистой. В пейеровых бляшках антигены стимулируют предшественники В-лимфоцитов и клетки памяти. Клетки переходят в мезентериальные лимфатические узлы, где и включаются в иммунный ответ (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В.,1998). Через грудной проток активированные лимфоциты переходят в кровеносное русло. Эти клетки затем поселяются в кишечнике и выполняют свои финальные эффекторные функции. В пейеровых бляшках нет высоких эпителиальных венул и механизм, по которому клетки заселяют слизистые оболочки, неизвестен. Важную роль могут влиять поверхностные молекулы клеток, известные как аддрезины. кадмий иммунокомпетентный орган тимус селезенка

В настоящее время можно считать установленным, что пейеровы бляшки являются важным источником плазмацитов, синтезирующих IgA практически для всех слизистых оболочек и железистых органов (Выхристенко Л.Р. с соавт., 2005).

При усилении процессов брожения и гниения в кишечнике снижается выработка этого иммуноглобулина, что может привести к формированию аллергических и воспалительных заболеваний.

В настоящее время не до конца ясен вопрос о наличии и сути функции червеобразного отростка в физиологии млекопитающего (Сапин М.Р.,1997). Однако к числу функций, которые предполагаются у червеобразного отростка, относятся: пищеварительная (резервуар для бактерий, участвующих в переваривании определённых типов пищи), эндокринная и иммунная.

Пейеровы бляшки находятся и в стенках придатка слепой кишки у животного, который представляет собой слепо заканчивающееся трубчатое образование, просвет которого соединяется с просветом слепой кишки.

Лимфоидные органы ЖКТ тесным образом функционально связаны с другими компонентами системы иммуннитета, поэтому воздействие на иммунокомпетентные клетки ЖКТ приводит к изменению как местного, так и общего иммунного ответа (Выхристенко Л .Р. с соавт.,2005).

Кроме лимфоидной ткани, сконцентрированной внутри лимфатических узлов, ее можно обнаружить и в других участках организма. В большей степени в желудочнокишечном, дыхательном и урогенитальном тракте.

Лимфоидная ткань, ассоциированная с кишечником, включает в себя, как это было отмечено выше, миндалины, аденоиды (лимфоидное кольцо), пейеровы бляшки, лимфатические агрегаты в аппедиксе, в толстом кишечнике, малые лимфоидные агрегаты в пищеводе, диффузно распределенные лимфоидные клетки, плазматические клетки в стенках кишечника.

Лимфоиные агрегаты кишечника содержат разнообразные В-лимфоци-тарные фолликулы и Т-лимфоцитарные зоны. Присутствуют также акцессорные клетки.

К важнейшим лимфоидным тканям относят костный мозг и лимфоидные ткани на поверхностях тела.

1.2.2 Морфофункциональная характеристика тимуса

Тимус, вилочковая железа, или зобная железа (glandula thymus), - непарный лимфоидно-железистый орган, расположенный у млекопитающих загрудинно (Зуфаров К.А., Тухтаев К.Р.,1987), в верхнем отделе переднего средостения, значительно инволюирующий к моменту полового созревания и к 20 годам орган функционирует лишь на один процент (Галактионов В. Г.,1998).

На срезе тимус имеет дольчатое строение. Орган в целом и отдельные дольки заключены в соединительнотканную капсулу, внутренняя полость которой включает эпителиальную сеть, заполненную лимфоцитами (другое название лимфоцитов тимуса - тимоциты) (Сапин М.Р.,1997). В каждой дольке ясно выявляются два слоя: кора с плотной упаковкой малых тимоцитов (кортекс) и мозговое вещество (медулла), где количество тимоцитов снижено.

В основе мозгового вещества лежат эпителиальные клетки отростчатой формы, напоминающие ретикулярные клетки. Между ними располагаются разной степени зрелости лимфоциты. Тимоциты медуллярного слоя относятся, в основном, к бластным формам. Кора, имеющая темную окраску, состоит из плотно упакованных незрелых малых тимоцитов, локально окруженных разветвленными эпителиальными клетками эктодермального происхождения. Среди скоплений тимоцитов встречаются отдельные макрофаги. Тимоциты, и окружающие их эпителиальные клетки и макрофаги образуют фолликул Кларка (http://www.humbio.ru/humbio/immunology/imm-gal/0015cdac.htm, 2007).

Особенностью организации тимуса является наличие двух элементарных структурно-гистологических единиц: фолликулов Кларка и телец Гассаля (Агеева В.А., Стаценко Г.В., 1997). Фолликулы Кларка в корковом слое представляют собой как бы отдельные «кирпичики», из которых построен этот слой (Зуфаров К.А., Тухтаев К.Р.,1987). Плотно упакованные лимфоциты и расположенные среди них макрофаги окружены эпителиальными клетками, что вместе и создает элементарную структурно-гистологическую единицу (рис. 1).

На своем пути из коркового в мозговое вещество тимуса лимфоциты проходят через барьер, образованный макрофагами.

В медуллярной зоне наблюдаются свободные от лимфоцитов округлые скопления эпителиальных клеток, получивших название телец Гассаля.

Примечание: элементарная структурно-гистологическая единица органа, представляющая собой плотное скопление лимфоцитов, окруженных вытянутыми эпителиальными клетками (Э). Среди лимфоцитов фолликула имеются и макрофаги (Мф).

Функциональное назначение телец неясно. По мнению одних исследователей, они образуются в результате активной деструкции тимоцитов, что приводит к «обнажению» эпителиальных элементов. Другие авторы склонны видеть в тельцах Гассаля активные эпителиальные структуры, функция которых - продукция регуляторных факторов, поступающих в циркуляцию.

Специализированные крупные эпителиальные клетки в наружном корковом слое известны под названием «клеток-кормилиц», поскольку каждая из них ассоциирована со множеством лимфоцитов.

В корковой же зоне, преимущественно на переходе ее в мозговую, обнаружены интердигитатные дендритные клетки (ИДК).

В результате пионерских исследований Миллера (1962 год) по удалению тимуса у новорожденных мышей и одновременного изучения роли сумки Фабрициуса у птиц (лимфоидного органа в клоаке) и костного мозга у млекопитающих стало понятным значение этих органов в формировании иммунного ответа. Клетки, прошедшие определенные этапы развития в тимусе, ответственны в основном за обеспечение клеточного типа реагирования (отторжение трансплантата, разрушение трансформированных вирусом клеток, уничтожение опухолевых клеток) и регуляцию иммуногенеза.

В тимусе происходят события, связанные с дифференцировкой Т-лимфоцитов на различные субпопуляции. Удивительное свойство органа связано с его способностью к селекции клеток, экспрессирующих Т-клеточный антигенный рецептор, который распознает собственные антигены гистосовместимости. В связи с тем, что именно в тимусе определяется будущая судьба Т-лимфоцитов как функционально активной популяции, его вместе с костным мозгом определяют в качестве первичных (центральных) органов иммунитета (Абелев Г.И.1996).

Существенной особенностью клеток тимуса является их ярко выраженная пролиферативная активность и высокий процент гибели in situ. Сопоставление количества тимоцитов, покидающих тимус (8,6·10⁶ в сутки), с тем количеством, которое образуется вновь в то же самое время (30·10⁷-47·10⁷), показывает, что из тимуса выходит лишь 3% от всех вновь образованных клеток. Биологический смысл столь расточительного процесса связан с селекций клонов клеток, способных взаимодействовать с собственными антигенами гистосовместимости.

Еще одна примечательная особенность тимуса состоит в том, что в его паренхиме представлен только лимфопоэз и полностью отсутствуют миелоидные ростки дифференцировки, и эта особенность позволяет оценивать его как истинно лимфоидное образование (Абелев Г.И.1996). Данное обстоятельство особенно следует помнить при рассмотрении автономности иммунной системы в целом организме.

Наряду с тем, что тимус - продуцент Т-клеток лимфоидного ряда, ответственных за клеточный иммунитет и регуляцию серологического иммунитета, этот орган является также эндокринной железой. В нем образуются гормоны тимуса: тимозины и тимопоэтины - химические стимуляторы иммунных процессов (Сапин М.Р.,1997).

1.2.3 Морфофункциональная характеристика селезенки

Если костный мозг и тимус - центральные органы иммунитета, то селезенка, лимфатические узлы, лимфодные образования кишечника, миндалины, аппендикс относятся к периферическим структурам иммунитета (Галактионов В.Г. 1998).

Они не являются местом, направляющим дифференцировку стволовых элементов по пути формирования Т- и В -клеточных популяций. В то же время периферические органы и ткани являются основными морфологическими образованиями, где развивается иммунный ответ.

Формирование гуморального иммунного ответа в виде продукции специфических иммуноглобулинов связано, главным образом, с селезенкой (Иммунология,1987).

Основной чертой строения селезенки является наличие двух гистологически хорошо различающихся участков - красной и белой пульпы (рис.2). Впервые их выделил Мальпиги.

На свежих срезах селезенки лимфоидная ткань, образующая белую пульпу, представляет собой округлые или удлиненные серые участки среди заполненной эритроцитами красной пульпы, содержащей макрофаги и пронизанной венозными синусоидами. Как и в лимфатических узлах, T- клеточные области и B-клеточные области селезенки разделены (Абелев Г.И.,1996). Плазмобласты и зрелые плазматические клетки располагаются в краевой (маргинальной) зоне (пограничная зона между белой и красной пульпой).

Белая пульпа (мальпигиевы тельца) представляет собой скопление лимфоцитов вокруг эксцентрично расположенного артериального канала. В центрах размножения присутствуют также фолликулярные дендритные клетки и фагоцитирующие макрофаги.

Красная пульпа является местом локализации большого количества эритроцитов, а также макрофагов, гранулоцитов, многочисленных плазматических клеток и перемещающихся сюда из белой пульпы лимфоцитов. Однако лимфоциты и плазмоциты не образуют в этой зоне морфологически оформленных скоплений.

Лимфоцитами красной пульпы являются Т-клетки, покидающие селезенку через венозные синусы. Плазмоциты этой зоны представляют собой те завершившие дифференцировку В-клетки, которые вышли из зародышевых центров.

Четких границ между белой и красной пульпой нет, и между ними происходит частичный клеточный обмен (Зуфаров К.А., Тухтаев К.Р.,1987).

Для понимания иммунологических процессов наибольший интерес представляют белая пульпа и пограничная область между белой и красной пульпой. Именно здесь локализуются Т-лимфоциты и В-лимфоциты, мигрирующие из центральных органов иммунной системы. Они распределяются по двум зонам: тимусзависимой, где скапливаются Т-лимфоциты вокруг пронизывающих пульпу артериол, и тимуснезависимой - места накопления В-лимфоцитов. В этой зоне хорошо различимы фолликулы с центрами размножения, которые образуются в ответ на антигенный стимул.

Т-клетки, располагаясь вокруг артериол, образуют периартериальные муфты.

До настоящего времени физиология селезенки изучена не до конца. Однако существующие знания позволяют говорить о ее функции удаления отживших и поврежденных эритроцитов (красной пульпой), участия в выработке антител (белая пульпа), удаления ФЭК и бактерий (Галактионов В.Г.,1998). Удаляя из кровотока утратившие функциональную активность эритроциты и лейкоциты, селезенка осуществляет контроль над цитологическим составом крови (рис. 3).

Окружающая лимфатические фолликулы красная пульпа представлена заполненными кровью синусами, разделенными селезеночными тяжами.

Селезеночная артерия разветвляется на центральные артерии, а затем на так называемые кисточковые артериолы. Меньшая часть крови из них через шунтовые капилляры непосредственно поступает в вены, большая же часть попадает в синусы и в селезеночные тяжи красной пульпы.

Те эритроциты, которые вышли в селезеночные тяжи, вынуждены просачиваться через щели в их стенках.

При этом старые и поврежденные эритроциты, утратившие способность к деформации, не проходят через эти щели и задерживаются в селезеночных тяжах. Там они разрушаются, а их компоненты утилизируются.

Из проходящих сквозь щели жизнеспособных эритроцитов макрофаги удаляют паразитов, остатки ядер (тельца Говелла-Жолли) и денатурированный гемоглобин (тельца Гейнца). Все эти процессы происходят довольно быстро, так как скорость кровотока в селезенке лишь ненамного ниже, чем в других органах.

У некоторых животных селезенка в качестве депо крови участвует в адаптации к стрессу.

В пренатальный период селезенка функционирует как смешанный лимфоэпителиальный орган с хорошо выраженным эритропоэзом. В постнатальный период эритро- и миелопоэтические процессы в селезенке у грызунов, в отличие от других млекопитающих, сохраняются (Иммунология, 1987).

При угнетении костномозгового кроветворения, селезенка вырабатывает форменные элементы крови (миелоидная метаплазия селезенки, обусловленная восстановлением кроветворной функции, выполняемой селезенкой в эмбриогенезе).

Глава 2. Материалы и методы исследования

В эксперименте было задействовано 93 половозрелых белых беспородных крыс, самцов и самок. Средний вес животных к началу каждой серии эксперимента составлял 180 г. Крысы содержались при свободном доступе к воде и пище, самцы и самки отдельно. При проведении серии эксперимента животных каждого пола делили на 2 группы, контрольную и опытную соответственно.

Было проведено 2 серии эксперимента: 1 серия - животные, самцы и самки, контрольных и кадмиевых групп содержались при естественном освещении, и те же группы - при постоянном освещении в течение 15 дней, после этого у них еще в течение 15 дней моделировали токсический стресс. 2 серия - кроме естественного освещения животных помещали в условия световой депривации в течение того же периода, что и в 1 серии.

Токсический стресс у крыс опытной группы моделировали введением per os с помощью зонда хлорида кадмия (CdCl₂) в дозе 2 мг на 100 г массы тела животного ежедневно в течение 15 дней. Общая доза составила 30 мг / 100 г массы тела, что составляет ¹/₃ от LD₅₀. Показано, что при введении солей кадмия через желудочно-кишечный тракт высасывается около 5% от вводимой дозы (Абдурахманов Г.М., Зайцев И.В. Экологические особенности содержания микроэлементов в организме животных и человека. - М.: Наука, 2004. - С. 187). Подобный тип токсического стресса можно характеризовать как полухронический, ни одно животное не погибло до окончания эксперимента.

По окончании введения кадмия крыс декапитировали под хлоралгидратным наркозом, извлекали и взвешивали тимус и селезенку.

Индекс относительной массы органа рассчитывали, находя отношение массы органа в мг к массе животного на момент окончания эксперимента в граммах.

Полученные данные обработаны статистически с использованием критерия Стьюдента.

Глава 3. Результаты исследований и их обсуждение

3.1 Влияние постоянного освещения на относительную массу тимуса и селезенки

Помещение животных в условия постоянного освещения отражается на системе водителей сезонных и циркадианных ритмов супрахиазматическое ядро гипоталамуса - эпифиз, что снижает продукцию мелатонина, вырабатываемого эпифизом. Изменение гормонального фона отражается в том числе на органах иммунной системы.

И у крыс, содержащихся в условиях естественного освещения, и в условиях постоянного освещения, были выявлены четкие половые отличия в относительной массе тимуса контрольных животных. При этом относительная масса тимуса самок превышала относительную массу самцов: при естественном освещении в 2,2 раза, при постоянном освещении - в 2,3 раза (р < 0,001, табл. 1).

Таблица 1. Влияние постоянного освещения на относительную массу тимуса в норме и при токсическом стрессе.

Условия проведения опыта	Количество животных	Группа	Индекс тимуса, мг/г массы тела
	Самцы	Самки		Самцы	Самки
Естественное Освещение	6	8	К	1,13±0,072	2,46±0,247°°°
	6	7	Cd	0,64±0,136**	0,91±0,122***
Постоянное освещение	5	6	К	0,61±0,096^^	1,41±0,063°°°^^
	6	6	Cd	0,25±0,035**	0,31±0,048***

Постоянное освещение оказывало значительное влияние на относительную массу тимуса контрольных животных. Так. У самцов относительная масса тимуса при постоянном освещении оказалась на 47% ниже, чем при естественном освещении, а у самок - на 43% (р < 0,01 в обоих случаях).

Токсический стресс, вызываемый хлоридом кадмия, приводит к уменьшению относительной массы тимуса у животных обоего пола вне зависимости от условий эксперимента. Во влиянии кадмия отмечены половые особенности: у самок он приводит к более значительному сокращению тимуса, чем у самцов: (на 66% у самок (р < 0,01) против 43% у самцов при естественном освещении (р < 0,001) и на 78% у самок (р < 0,01) против 59% у самцов (р < 0,001) при постоянном освещении.

В то же время, содержание животных при постоянном освещении приводит к более выраженной реакции относительной массы тимуса подопытных животных на токсический стресс.

Таблица 2. Влияние постоянного освещения на относительную массу тимуса в норме и при токсическом стрессе.

Сезон	Количество животных	Группа	Индекс тимуса
	Самцы	Самки		Самцы	Самки
Лето	6	8	К	1,13±0,072	2,46±0,247°°°
	6	7	Cd	0,64±0,136**	0,91±0,122***
Лето+осв	5	6	К	0,61±0,096^^	1,41±0,063°°°^^
	6	6	Cd	0,25±0,035**	0,31±0,048***
Осень	5	6	К	0,59±0,084	0,83±0,051°
	5	6	Cd	0,31±0,031*	0,67±0,082
Осень+тем	5	5	К	0,63±0,129	1,05±0,185
	6	5	Cd	0,22±0,029*^	0,38±0,159*

Сезон	Количество животных	Группа	Индекс селезенки
	Самцы	Самки		Самцы	Самки
Лето	6	8	К	3,89±0,293	5,55±0,362
	6	7	Cd	3,58±0,462	3,17±0,218
Лето+осв	5	6	К	3,89±0,467	4,36±0,285^
	6	6	Cd	3,37±0,185	3,93±0,200
Осень	5	6	К	3,96±0,359	3,67±0,260
	5	6	Cd	3,47+0,166	4,40±0,131*
Осень+тем	5	5	К	4,40±0,249	4,50±0,083^
	6	5	Cd	3,26±0,171	3,57±0,384

Были обнаружены сезонные колебания относительной массы тимуса контрольных животных. Наибольшей величины индекс органа, как у самцов, так и у самок, достигает в «стабильные» сезоны года, причем у самок максимальные значения относительной массы тимуса были зафиксированы в летний период (2,46мг/ г массы тела), а у самцов - в зимний (1,32мг/ г массы тела). Несколько меньших величин массы тимуса достигали весной, а осенью у животных обоего пола индекс органа имел наименьшие значения (0,59 мг/г у самцов и 0,83 мг/г у самок). Тимусы самок были больше, чем таковые у самцов; наибольшие половые различия приурочены к летнему периоду (в 2,2 раза, р<0,001). Напротив, зимой относительные массы органа у животных обоего пола не отличались. Весной тимусы самок были больше таковых у самцов на 64% (р<0,001), осенью - на 41% (р<0,05).

Хлорид кадмия приводил к инволюции тимуса как у самцов, так и самок крыс практически во все изученные сезоны. Исключение составляли самки в осенний период: снижение массы тимуса не достигало достоверности безошибочного прогноза по отношению к контролю, однако в этот период индекс органа интактных животных и без того был самым низким за год (и - ну, не исчезнуть же ему!). Наибольшему угнетению тимус подвергался в зимний период (на 91% и на 73%, р<0,001), достигая как у самцов, так и самок наименьших значений. Напротив, максимальную массу тимуса кадмиевые животные имели в летний период, несмотря на значительное уменьшение по сравнению с контролем (на 43% у самцов, р<0,01 и на 63% у самок, р<0,001).

«Переходные» сезоны, с их перестройкой функциональных систем, задействуют и иммунную систему, что выражается в снижении относительной массы тимуса контрольных животных. Однако «напряжение», создаваемое в организме при токсическом стрессе, выявляет принципиальную разницу в резервах иммунной системы и двух внешне благополучных «стабильных» сезонов года. В зимний период эти резервы находятся в пессимуме, а в летний - в оптимуме.

Индекс относительной массы селезенки. Селезенку, как орган иммунной системы, относят не только к органам-мишеням, но и к критическим органам по развитию иммунотоксического действия катионов кадмия. Это подтверждается результатами исследования функциональной активности лимфоцитов селезенки, выявленным полнокровием красной и белой пульпы при действии соли кадмия (Стежка В.А., Лампека Е.Г., Дмитруха Н.Н. К механизму материальной кумуляции тяжелых металлов в организме белых крыс.// Гиг. труда. - 2001. - Вып. 32. - С. 219--230).

У самцов в относительной массе селезенки сезонных отличий не выявлено. У самок индекс органа возрастал в ряду осень - зима - весна - лето, достигая максимальных отличий между осенним и летним периодами (в 1,67 раз, р<0,01). Именно летом, когда относительная масса селезенки была у самок наибольшей, возникали половые отличия (у самок индекс селезенки на 41% больше, чем у самцов, р<0,05).

Используемая доза кадмия оказалась недостаточной, чтоб оказать значимое влияние на относительную массу селезенки самцов в весенний, летний и осенний периоды, в то время как зимой относительная масса органа уменьшалась на 39 % по отношению к контролю (р<0,001). У самок, напротив, только в зимний период не было выявлено токсическое действие кадмия на индекс селезенки. Весной и летом в ответ на введение кадмия относительная масса органа у самок уменьшалась на 20% (р<0,01) и 43 % (р<0,001) соответственно. В осенний период кадмий привел к не к уменьшению, а напротив, к возрастанию индекса селезенки самок крыс на 20 % по сравнению с контролем.

Список литературы

1. Абелев Г.И. Основы иммунитета.// Соросовский Образовательный Журнал. - 1996. - № 5.

2. Агеева В.А. К морфологической характеристике тимуса крыс от рождения до половой зрелости.// Морфология компенсаторных и приспособительных процессов при различных патологических состояниях: Труды Волгоградской медицинской академии. - Волгоград, 1998. - Т. 54, вып. 2. - С. 9-11.

3. Агеева В.А., Стаценко Г.В. Морфология тимуса в норме и при воздействии антропогенных факторов внешней среды.// Экология, здоровье, природопользование: Тезисы докладов российской научно-практической конференции. - Саратов, 1997. - С. 100-101.

4. Анищенко Т.Г. Половые аспекты проблемы стресса и адаптации.// Успехи совр. биол. - 1991. - Т. 111, вып. 3. - С. 460-475.

5. Березина О.В., Гоев А.А. Оценка токсичности некоторых тяжелых металлов методом поведенческой токсикологии.// Гигиена и санитария. -1982. -№1/ -C. 42 - 46.

6. Булекбаева Л.Э., Демченко Г.А., Ахметбаева Н.А. Адаптивные реакции лимфатических структур при кадмиевой интоксикации.// Материалы 21-го международного симпозиума «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 27-28 января 2003 г.) - М., 2003 - С. 86-87.

7. Выхристенко Л.Р., Новиков Д.К., Колосова Т.С. Особенности функции-онирования системы иммунитета желудочно-кишечного тракта.

8. Галактионов В.Г. Иммунология. - М.:Издательство МГУ, 1998

9. Гланц С. А. Медико-биологическая статистика.- М., Практика, 1998.- 459с.

10. Голиков А.П., Голиков П.П. Сезонные биоритмы в физиологии и патологии. - М.: Медицина, 1973. - 165 с.

11. Головко А.И., Куценко С.А., Ивницкий Ю.Ю. и др. Экотоксикология. - СПб.: НИИХВ СПбГУ, 1999. - 124 с.

12. Даутов Ф.Ф., Яруллин И.А. Изучение связи между загрязнением окружающей среды и уровнем заболеваемости детского населения города.// Гигиена и санитария. -1993. -№ 8/ -C. 4 - 6.

13. Деряпа Н.Р., Мошкин Н.П., Посный В.С. Проблемы медицинской биоритмологии. - М.: Медицина, 1985. - 208 с.

14. Диденко М.Н., Дмитруха Н.Н. Морфофункциональная характеристика органов иммунной системы, лимфоцитов селезенки и периферической крови у крыс при свинцовой интоксикации.// Проблемы медицины труда. --К., 1998. --С. 160--164

15. Загрязнение кадмием окружающей среды.// Реферат.: РЛС 72 Охрана природы (6.72.327)1998. - С. 22-38.

16. Зуфаров К.А., Тухтаев К.Р. Органы иммунной системы.//Структурные и функциональные аспекты. - Ташкент: ФАН, 1987. - 182 с.

17. Иванов В.Н., Никитина Л.П., Вощенко А.В.// Экологозависимые состояния: Тез. докл. Всерос. научно-практической конф. - Чита, 1998. - С. 45-46.

18. Иммунология.//Под ред. Н. Пола. М.: Мир, 1987.

19. Иммунология. [Электронный ресурс]. - 2007. - Режим доступа: http:// www.humbio.ru/humbio/immunology/imm-gal/0015cdac.htm.

20. Кадмий и его соединения. Балтика и вредные вещества// под ред. Коровина Л. К. Скубовой В.С.// инф. вып. №5. - СПб. - 2003. - 16с.

21. Колесниченко Л.С., Кулинский В.И.// Успехи соврем.биологии. - 1989. - Т. 107, № 2. _ С.179-194.

22. Кондратенко Е.И., Теплый Д.Л., Зайцева Н.А., Дегтярева С.С. Околосуточные колебания перекисного окисления липидов печени самцов крыс при холодовом стрессе и предварительном введении витамина Е.// Тезисы докладов 5-ой Всероссийской конференции «Нейроэндокринология - 2000», посвященной 75-летию А.Л. Поленова - СПб - 2000. - С. 68.

23. Корте Ф., Бадахир М., Кляйн В., и др. Экологическая химия: Пер. с нем./ Под ред. Ф.Корте - М.: Мир, 1997.- 396 с.

24. Котеров А.Н., Шагова М.В., Шилина Н.М., Конь И.Я. Снижение уровня перекисного окисления липидов и острой токсичности бромбензола при введении мышам полимерной формы цинк металлотионеина// Бюл. экспер. биол. - 1995. - №1. - С.43-45.

25. Кругликова Г.О., Штутман Ц.М.// Укр. бiохим. журн. _ 1976. - Т. 48, №2. - С.223-228.

26. Куценко C.А. Основы токсикологии. - СПб.: Санкт-Петербург, 2002. - 456 с.

27. Куценко С.А. Основы токсикологии. - Том 4, ст.№119. - СПб, 2003. - С.32-34.

28. Лакин Г.Ф. Биометрия. - 4-е изд. - М.: Высш. шк., 1990. - 352 с.

29. Левина Э.Н. Общая токсикология металлов. - Москва, 1972;

30. Лужников Е.А., Клиническая токсикология. - М.: Медицина, 1999.

31. Меерсон Ф.З. Физиология адаптационных процессов.// В кн: Руководство по физиологии. - М.: Наука, 1986. - С. 10.

32. Морозова Т.С., СуколинскийВ.Н., Стрельников А.В.// Вопр. мед. химии. - 1991. - Т. 37., № 6. - С. 59-61.

33. Мур Д.В., Рамамурти С. Тяжелые металлы в природных водах. - М.: Мир, 1987.

34. Плохинский Н.А. Биометрия. - М.: Изд-во Моск. ун-та, 1980. - С.368.

35. Ройт А. Основы иммунологии. М.: Мир, 1991

36. Сапин М.Р. Новый взгляд на лимфатическую систему и ее место в защитных функциях организма. Морфология 1997; 5: 84-87

37. Стежка В.А., Лампека Е.Г., Дмитруха Н.Н. К механизму материальной кумуляции тяжелых металлов в организме белых крыс.// Гиг. труда. --2001. --Вып. 32. --С. 219--230.

38. Тельцов Л. П., Соловьев. А. С.// Рос. морфол. ведомости.- 2001.- №1-2.- С. 153-155.

39. Труфакин В.А. Иммуноморфология -- вчера, сегодня, завтра / В.А. Труфакин, М.В. Робинсон // Вестник Российской академии медицинских наук. -- 1996.-- № 6. -- С. 38-43.

40. Учебно-методическое пособие по общей химии для студентов лечебных и медико-профилактических факультетов, ч.2, Москва, 1993;

41. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Особенности функционирования иммунной системы желудочно-кишечного тракта в норме и при патологии.// Аллергия, астма и клиническая иммунология. - М.: Медицина , 1998. - N4. - С. 1-7.