Некоторые фитохимические исследования эндемичных видов

Некоторые фитохимические исследования эндемичных видов Cyclamen mIrabIle HIldebr и Cyclamen trochopteranthum O. Schwarz

Введение

Актуальность

Луковицы, корневища и клубнелуковицы геофитов являются источником биологических активных веществ. Среди родов геофитов цикламены занимают особое место благодаря большому содержанию в них биохимически активных веществ. Но эти растения, особенно эндемичные виды, изучены мало.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Задачей авторов этой статьи являлось изучение некоторых типов фитохимических веществ (мюсилажы, антросенозиты, флавоны, сапонины и танены) в строении корневища 2 эндемичных видов цикламена (C. mirabile Hildebr и C.trochopteranthum O. Schwarz).

АНАЛИЗ ПУБЛИКАЦИЙ

Турецкая флора богата эндемичными растениями [1]. Среди цветочных растительных групп особое место отводят геофитам - многолетним растениям, почки возобновления которых скрыты в почве и в течение 3-6 месяцев развиваются под землей без фотосинтеза [2,3]. Геофиты делятся на луковичные растения, корневищные и клубнелуковичные, клубненосные.

Эти растения составляют 6,5-7% мировой флоры. А на территории Турции распространены около 500 видов геофитов. Среди геофитов есть прекрасные цветковые растения. В книге “Флора Турции» эти растения делятся на 1 (многие роды - Monocotyledoneae), У1 (виды - Primulaceae) и У111 (роды - Anemone, Eranthus, Corydalis и др.) [4-7].

В ходе работы над видами Cyclamenа, такими, как С. pseud-iberikum Hildebr., C. neopolitanihum Tenn., и эндемическим видом C. clicicum Boiss. были исследованы распространение, морфологические и некоторые анатомические особенности этих видов; были изолированы их сапонозиты и путем гидролиза выделены сапогенолы и озы. В результате исследования пришли к заключению, что цикламиретинные изомеры сапонозитов состоят из глюкозы, арабиноза и ксилоза. В этом исследовании был определен и порядок связки озов [8].

В составе C. mirabile Hildebr, кроме основных сапонинов деглико-цикламен, впервые были выделены три естественных сапонозита, их названия: цикламенонин, циклакоумин и мирабилин.

В одном из исследований, проведенных в последные годы, говорится, что сапонины, полученные из клубней различных видов цикламена, состоят в основном из цикламина, дегликоцикламина I и дегликоцикламина II, а из C. graecum Link. был выделен новый сапонин изоцикламен [9].

Методология исследования

В этой работе изучены имеющиеся в фитохимическом строении эндемических видов геофитов C.mirabile Hildebr и C.trochopteranthum O. Schwarz некоторые органические вещества (мюсилажы, антросенозиты, флавоны, сапонины и танены). Все исследования выполнены в соответствии с практическими указаниями [10-12].

1 Мюсилажы

1.1 Методы гистохимического определения

а) С реактивом тушь

Используется реактив тушь. Мюсилажы отталкивают краску туши и на окраске препарата получаются светлые зоны;

б) С реактивом голубой метилен

Кислотные мюсилажы (содержащие глюкорунические и галактуронические кислоты) окрашиваются с красильным препаратом.

2 Антросенозиты

2.1 Реакции определения

Производные агликоны 1,8-дигидроксиантрасена определяются реакцией Борнтраегера. Красный цвет производных 1,8-дигидроксиантрасена в щелочной среде является результатом мезомера ионизированных производных фенола (рис.1).

3 Флавонозиты

3.1 Определение флавоноидов

Флавоноидные группы определены при помощи специфической реакционной окраски.

4 Сапонозиты

4.1 Реакции определения сапонинов

Определение сапонинов выполняется опытом вспенивания и методом Салковского. Метод Салковского основан на получении пены на 1-10 см высоты, которая не исчезает при добавлении соляной кислоты, это говорит о наличии сапонинов.

5 Танены

5.1 Реакции определения таненов

Принцип основан на отложении феноло-гидроксильной группы танена под действием ионов двухвалентных металлов. Изменяется цвет водного раствора.

ИЗЛОЖЕНИЕ ОСНОВНОГО МАТЕРИАЛА

1 Мюсилажы

С реактивом тушь

Принцип: Кусок мюсилажа в реактиве тушь, впитав воду, разбухает и заполняет пустоту среди лам и ламеллы. Мюсилажы отталкивают краску туши. Наконец на окраске препарата получаются светлые зоны.

Ход опыта: С помощью острого ножика вырезается из корневища C.mirabile Hildebr и C.trochopteranthum O. Schwarz тонкий слой. Этот слой опускается в раствор реактива тушь. Под микроскопом на этом слое видны открытые светлые зоны на темном препарате, вокруг этих светлых зон помещаются мюсилажы (фото 1,2).

С реактивом голубой метилен

Принцип: Кислотные мюсилажы (содержащие глюкорунические и галактуронические кислоты) окрашиваются красильным препаратом. Вместе с голубым метиленом можно использовать тионин (с раствором 0,2% пропанола с водой 1:1).

Ход опыта: Острым ножиком вырезается из корневища C.mirabile Hildebr и C.trochopteranthum O. Schwarz тонкий слой. Этот слой опускается в раствор голубого метилена (0,15%). Под микроскопом видны зоны мюсилажа с голубым оттенком (фото 3,4).

2 Антросенозиты

Для определения антросенозитов использованы две реакции Борнтраегера.

Принцип: Красный цвет производных 1,8-дигидроксиантрасена в щелочной среде является результатом мезомера ионизированных производных фенола.

Ход опыта: 50 мг порошка дрога с раствором 25 мл 7,5% HCI 15 минут подогревается на водяной бане. После охлаждения эта масса вливается в воронку с краном, смешивается с 20 мл эфира и взбалтывается. На эфирный слой добавляется 10 мл 10% аммиачного растворителя и тоже взбалтывается. Водный слой приобретет розово-красный оттенок.

Принцип: Производные 1,8-гидроксиантрасена после гидролиза определяются реакцией Борнтраегера.

Ход опыта: 50 мг порошка дрога с раствором 25 мл 2% HCI в течение 15 минут подогревается водяной бане. После охлаждения растворившаяся масса вливается в воронку с краном и смешивается с 20 мл эфира и взбалтывается. На эфирный слой добавляется 10 мл 10 % аммиачного растворителя и взбалтывается. В результате этой реакции получается водный слой.

После взбалтывания водный слой окрашивается светло-красным оттенком. Результаты обоих реакций показывают, что в корневище C.mirabile Hildebr и C.trochopteranthum O. Schwarz имеется малое количество антросенозитов.

3 Флавонозиты

Принцип: Определение флавоноидных групп с реакцией крашения. Изучена хроматография этих веществ с помощью сольванта, который приготовлен из н.-бутанола, концентрированной этановой кислоты и воды (4+1+5). Приготовленная бумага была высушена в воздухе. А потом сделана реакция цвета. Приготовленный раствор дрога в 2-3 мг метанола был капнут на бумагу и получена реакция цвета.

Ход опыта: Приготовлен порошок из корневища и смешан с крошками магнезиума. Потом наливают на смесь 10% раствор этаноловой HCI. После некоторого времени появляется окраска.

Принцип: Определение флавоноидных групп с реакцией крашения.

Ход опыта: Порошок корневища смешивают с концентрированной серной кислотой и появляется окраска.

С помощью этой реакции определено, что в корневище C.mirabile Hildebr имеются типы флавона калгона (с красным цветом) в большом количестве, а в C.trochopteranthum O. Schwarz - катехина (с желтым цветом).

4 Сапонозиты

Опыт вспенивания: 0,5 г порошка корневища вместе с 10 мл теплой воды вливается в пробирку. После охлаждения раствор 10 секунд сильно взбалтывается. Если имеются сапонины, тогда получится пена 1-10 см высоты, которая не исчезает после добавления 1-2 мл 2 н. HCI.

Опыт Салковского: 0,5 г порошка корневища гидролизируется с
3 мл H₂SO₄. Полученный раствор фильтруется, добавляется равное количество хлороформа и взбалтывается. Получается хлороформный слой. С добавлением 1-2 мл H₂SO₄ в 1 мл хлороформного слоя получается желтый круг. В результате взбалтывания или ожидания хлороформный слой получает кроваво-красный оттенок, что показывает наличие стероидных сапогенолов. Особенно в материале C.trochopteranthum O. Schwarz цвет получается красный. Это показывают, что в корневище C.trochopteranthum O. Schwarz количество стероидольных сапогенолов больше, чем в C.mirabile Hildebr.

5 Танены

Принцип: Этот принцип основывается на отложении феноло-гидроксильной группы танена под действием ионов двухвалентных металлов.

Ход опыта: 0,1 г порошка корневища смешиваются с 10 мл теплой воды и по истечении 1 часа фильтруется. В полученный раствор добавляется 2 мл 10% аммиачного раствора FeSO₄. Этот раствор мутный и темно-серого цвета. После оседания верхняя часть раствора получает серо-желтый цвет.

Принцип: Принцип основывается на изменении цвета при реакции феноло-гидроксильной группы танена в кислотной среде с Fe (II). Цвет этанольного раствора более стабилен, чем водные растворы.

Ход опыта: На 0,5 г порошка дрога добавляется 5 мл этанола. Раствор периодически взбалтывается в течение 2 часов и фильтруется. В 1 мл кофейно-красного фильтрата добавляется 100 мл спирта, несколько капель 10% раствора FeCI₃ с этанолом и взбалтываются. Раствор получает зеленый цвет.

Обе реакции показывают наличие таненов в корневище C.mirabile Hildebr. и C.trochopteranthum O. Schwarz.

Заключение

Из эндемических видов, над которыми мы работали, сапонозиты C.mirabile Hildebr были изолированы, а C.trochopteranthum не был подвергнут исследованию.

В результате лабораторных исследований над видами C.mirabile Hildebr и C.trochopteranthum определено, что фитохимический состав этих видов состоит из мюсилажов, антросенозитов, флавонозитов, сапонозитов и таненов (таблица 1). В составе этих двух видов алкалоиды не были определены.

Как можно увидеть из таблицы, в составе C.mirabile Hildebr и C.trochopteranthum O. Schwarz. нормально выделяются мюсилажы, флавониты, антросенозиты и танены. Антрасенозиты видны частично. Распространение видов C.mirabile Hildebr и C.trochopteranthum O. Schwarz в районе Мугла, их естественный потенциал, многовидность органических элементов в их клубнях определяют их ценность и богатство с точки зрения исследуемости. В результате фитохимических исследований в клубнях этих растений можно выделить еще разные органические вещества.

Таблица 1- Результаты определительных фитохимических реакций

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Davis P. H. Flora of Turkey and The East Aegeon Islands, 1, Edinburgh Univ. Press, Edinburgh, 1974. - 614 p.

2. Davis P. H. Flora of Turkey and The East Aegeon Islands, 6, Edinburgh Univ. Press, Edinburgh, 1978. - 824 p.

3. Davis P. H. Flora of Turkey and The East Aegeon Islands, 8., Edinburgh Univ. Press, Edinburgh, 1984. - 743 p.

4. Ekim T., Koyuncu M., Guner A., Erik S., Yildiz B., Vural M. Taxsonomic and ecological studies on some economically important geophytes of Turkey, 1991. - 234 p.

5. Ekim T., Koyuncu M., Vural M., Duman H., Aytac Z., Adiguzel N. Red Data Book of Turkish Plans, Ankara, 2000. - 246 p.

6. Эbadli O. V. The Geophy tes of the Caucasus (Taksonomy, Spreading, Morfology, Anatomy, Эntroduktion, Use and Protection), Baku, 2002. - 271 p.

7. Муравьева Д. А. Фармакогнозия (с основами биохимии лекарственных растений). - Москва: Медицина, 1978. - 216 с.

8. Reznicek G., Jurenitch J., Robien W., W. Kubelka. saponins in Cyclamen Species, Phytochemistry, 1989. - № 28. - Р. 825-828.

9. Сикура И. И. Интрадицированные лекарственные растения. - Киев: Наукова Думка, 1983. - С. 52-68

10. Tanker M., Sakar M. Phytochemical analicic, Ankara, 1991. - 224 p.

11. Tanker, M., Tanker, N., Pharmokognosie, Ankapa, 1998.- t. 1. - Р. 96-283.

12. Harbome J.B. Phytochemical Methods, London and New York Charman and Hall, 1984. - 216 p.