Клеточный состав кроветворных органов половозрелых самок представителей класса рыб, земноводных и пресмыкающихся

Мегакариоциты располагались рядом с капиллярами, они выделялись своим размером и многодольчатым ядром. От общего количества формирующихся клеток они составляли 0,9%.

Таким образом, у земноводных красный косный мозг является универсальным кроветворным органом.

Селезенка земноводных

Участки белой пульпы селезенки исследованных особей были локализованы вокруг артериол, занимая на срезе 18,0%. Белая пульпа селезенки переходила в красную пульпу без четких границ. Её участки имели неправильную форму различных размеров. Здесь среди ретикулярных клеток были отмечены клетки крови разной степени зрелости, которые располагались хаотично, без какой-либо упорядоченности. Созревающие клетки располагались как поодиночке, так и небольшими группами по 2-3 клетки.

Среди всех развивающихся клеток на клетки грануло- и агранулоцитопоэтического ряда приходилось - 84,75%, и всего 14,7% приходилось на клетки эритропоэтического ряда. При этом, из формирующихся лейкоцитов всего 3,0% приходилось на формирующиеся клетки гранулоцитопоэтического ряда, остальные 97,0% составляли клетки агранулоцитопоэтического ряда.

Среди агранулоцитов самой многочисленной группой клеток были зрелые лимфоциты, на них, в среднем, приходилось 59,1 %, на втором месте по количеству находились пролимфоциты, их удельный вес составлял 15,8%. Лимфобластов было 5,6%. Среди плазматических клеток, плазмобласты, в среднем, составляли, 5,1±0,14%, проплазмоциты - 3,7±0,11%, и на плазмоциты - 4,7±0,12% от числа всех лейкоцитов. Из клеток моноцитопоэтического ряда были отмечены созревающие промоноциты (1,6%) и зрелые моноциты (1,4%).

Из гранулоцитов в селезенке были выявлены созревающие и зрелые клетки. Было отмечено одинаковое количество базофильных, нейтрофильных и эозинофильных миелоцитов (0,5%), из зрелых гранулоцитов - только сегментоядерные нейтрофилы (0,5%)

Основная масса клеток эритропоэтического ряда белой пульпы была представлена зрелыми эритроцитами, их удельный вес, в среднем, составлял 87,0±0,59%. Из созревающих клеток были отмечены проэритробласты (2,0%), базофильные (2,0%), полихроматофильные (2,0%) и оксифильные эритробласты (6,0%). Эритробласты были самой малочисленной группой, составляя 1,0% от числа клеток эритропоэтического ряда.

Кроме этого, в белой пульпе находились одиночные мегакариоциты (0,55%), в цитоплазме которых насчитывалось несколько ядер.

Таким образом, селезенка земноводных, на примере озерной лягушки, остается универсальным органом кроветворения, но основной процент формирующихся клеток приходится в ней на клетки лимфоцитопоэтического ряда.

Тимус земноводных

У исследованных особей земноводных, в возрасте трех лет, тимус представлял собой округлое образование, снаружи покрытое тонкой соединительнотканной капсулой. От капсулы шли перегородки - трабекулы, разделяющие тимус лягушки на дольки. Число долек на срезе было равно пяти. В каждой дольке четко различалось темно окрашенное корковое вещество и более светлое мозговое вещество, в соотношении 1:1. В мозговом слое долек тимуса были отмечены эпителиальные слоистые тельца Гассаля.

В мозговом веществе количество лимфобластов составляло - 5,0%, пролимфоцитов 11,0%, зрелых лимфоцитов - 78,0 %. Здесь же находились плазматические клетки, которые располагались хаотично; их удельный вес составлял - 6,0%.

В корковом веществе лимфобластов было отмечено несколько больше, чем в мозговом веществе - 10,0% (Р<0,001), пролимфоцитов здесь было выявлено на 11% больше, чем в мозговом веществе (Р<0,001); зрелые лимфоциты составляли- 53,0%, что оказалось на 25% меньше, чем в мозговом слое (Р<0,001). Из плазматических клеток в корковом веществе были отмечены плазмобласты, проплазмоциты, которые составляли по - 2,0%, зрелые плазмоциты - 11,0%, количество которых здесь оказалось выше, чем в мозговом веществе (Р<0,001), причем, они, в основном, локализовались по краю коркового вещества.

Таким образом, в тимусе земноводных происходило развитие и дифференцировка лимфоцитов.

Кроветворение в пищеварительном тракте земноводных

У исследованных особей лягушек на протяжении всего пищеварительного канала были отмечены скопления лимфоидных элементов в виде диффузной лимфоидной ткани, или одиночных лимфоидных образований, количество, которых увеличивалось по мере приближения к прямой кишке. В основном, эти образования имели округлую форму и располагались в слизистой оболочке кишечника. Основу образования составляли ретикулярные клетки, среди которых находились созревающие лимфоциты, плазмоциты и гранулоциты.

В лимфоидной ткани собственной пластинки слизистой оболочки глотки были выявлены немногочисленные гемоцитобласты - 0,8%, они располагались как небольшими группами по 2-3 клетки, так и поодиночке. Лимфобласты и плазмобласты располагались хаотично. Лимфобласты составляли, в среднем 4,9%, пролимфоциты - 21,2%, зрелые лимфоциты, которые были рассредоточены - 66,4%. Плазматические клетки составляли небольшой процент от всех формирующихся клеток, в некоторых случаях группировались по 2-3 клетки. Среди них плазмобласты составляли - 2,5%, проплазмоциты - 1,7%, плазмоциты - 2,5%.

В соединительнотканной собственной пластинке слизистой оболочки тонкой кишки также были выявлены скопления кроветворной ткани. Гемоцитобласты были немногочисленны (0,7%), их удельный вес незначительно стал ниже, чем в глотке (различия не достоверны). Были отмечены лимфобласты (5,0%), удельный вес, которых также практически не изменился по сравнению с глоткой (различия не достоверны); количество пролимфоцитов (8,3%) понизилось на 12,9% (Р<0,001), лимфоцитов (81,0%) - повысилось на 14,6% (Р<0,001). В собственной пластинке слизистой оболочки находились плазматические клетки, удельный вес которых незначительно отличался от их содержания в глотке. Среди них на плазмобласты, в среднем приходилось - 1,7±0,18% (Р<0,01), проплазмоциты - 2,0% (различия не достоверны), плазмоциты - 1,3%(Р<0,001).

В толстом кишечнике узелки с формирующимися клетками крови содержали лимфобласты (3,7%) и пролимфоциты (6,5%), количество которых здесь несколько снизилось, в сравнении с тонким кишечником (Р<0,001), а количество зрелых лимфоцитов (85,1%) увеличилось на 14,6% (Р<0,001). Из плазматических клеток средний удельный вес плазмобластов составлял 1,9%, что незначительно отличалось от тонкого кишечника (различия не достоверны), проплазмоцитов - 0,9% (Р<0,001), зрелых плазматических клеток - 1,9% (Р<0,05).

В соединительнотканной пластике слизистой оболочки клоаки были рассредоточены многочисленные узелки с формирующимися клетками крови. Гемоцитобласты, в среднем, составляли 0,9%. Средний удельный вес лимфобластов почти в два раза увеличился в сравнении с толстым кишечником, составляя - 1,8±0,19% (Р<0,001), пролимфоцитов - 17,7% (Р<0,001), количество зрелых лимфоцитов,наоборот снизилось - 74,4% (Р<0,001). Были выявлены плазматические клетки, среди них плазмобласты составляли - 1,8% (различия не достоверны), проплазмоциты - 1,8% (Р<0,01) и плазмоциты - 1,6% (различия не достоверны).

Таким образом, в лимфоидных образованиях стенок пищеварительного тракта земноводных происходит процесс пролиферации и дифференцировки клеток лимфоцитопоэтического ряда. Следовательно, у земноводных, кроме тимуса, гемопоэтические образования кишечного тракта являлись лимфоидными.

Зачаточные «лимфатические узлы» земноводных

Лимфатическая система лягушек включает лимфатические подкожные мешки и лимфатические сердца, связанные с кровеносной системой (Ноздрачев А.Д., Поляков Е.Л., 1994).

В тонкой прослойке подкожной клетчатки подкрыльцовой области были выявлены небольшие скопления неправильной формы из ретикулярных клеток и развивающихся клеток крови. Размер этих образований составлял 368,919,54 мкм на 325,518,36 мкм. Эти скопления располагались, примыкая к кровеносным сосудам, окруженные рыхлой волокнистой неоформленной соединительной тканью.Клеточный состав этих скоплений был представлен клетками лимфоцитопоэтического ряда.

В строме «узелка» клетки располагались хаотично, без какой-либо упорядоченности, т.е. типичного строения лимфоузлов, характерных для млекопитающих, с наличием коркового и мозгового вещества, окруженных капсулой из плотной волокнистой соединительной ткани, не наблюдалось. Среди развивающихся клеток выявлялись на общем фоне гемоцитобласты, которых было небольшое количество (0,75%). Самыми многочисленными были зрелые лимфоциты, средний удельный вес их составлял - 52,63±0,55% от всех клеток этого ряда. На втором месте по количеству находились пролимфоциты - 18,8%, среднее количество лимфобластов составило - 7,52%. Кроме того, в «лимфоидных» образованиях были выявлены плазматические клетки. Среди них на долю плазмобластов приходилось - 3,09%, проплазмоцитов - 6,02%, на зрелые плазмоциты - 7,52%. Из всех этих клеток была отмечена некоторая тенденция к группировке только у лимфобластов и плазмобластов - по 2-3 клетки.

Следует обратить внимание на то, что у так называемых лимфатических узлов отсутствовала соединительнотканная капсула, не было разделения стромы узла на корковое и мозговое вещество.

Кроме того, было проведено исследование ткани почки и сердца лягушек в возрасте трех лет, но гемопоэтической ткани в этих органах не было обнаружено.

При сопоставлении результатов по количеству образующихся клеток крови разных рядов в органах кроветворения представителей земноводных, была выявлена взаимосвязь между процентным соотношениям клеток эритропоэтического и лейкопоэтического рядов (рис.2).

Рис.2. Зависимость между относительным количеством развивающихся клеток разных рядов у лягушки (y = 0.51x + 0.48, r = 0.85)

У исследованных лягушек коэффициент корреляции был значителен (r = 0.85).

Периферическая кровь земноводных

Следует отметить, что среди клеток эритропоэтического ряда молодых эритроцитов было отмечено относительно немного (2,8%). Среди них выявлены эритробласты, проэритробласты, полихроматофильные эритробласты, на которые приходилось по 0,4%, оксифильных эритробластов, было несколько больше - 1,6%. Зрелые эритроциты, имеющие ядра, составляли - 81,4%.

Среди клеток белой крови на гранулоциты приходилось 19,6%, 80,4% - на агранулоциты. У исследованных особей лягушек были отмечены лейкоциты разных стадий зрелости. Так, среди гранулоцитов были выявлены миелобласты (1,5%), промиелоциты (1,6%) и миелоциты (4,7%). Из палочкоядерных гранулоцитов на эозинофильные приходилось 3,1%, на нейтрофильные - 1,6% и на базофильные - 1,2%. Зрелые гранулоциты составляли 4,4%: сегментоядерные эозинофилы составляли - 0,8%, сегментоядерные нейтрофилы - 2,4% и сегментоядерные базофилы - 1,2%.

Из клеток лимфоцитопоэтического ряда лимфоциты были самыми многочисленными - 68,5%, на втором месте по количеству находились пролимфоциты - 5,5%, лимфобласты составляли 2,4%. Из клеток моноцитопоэтического ряда были отмечены монобласты (2,4%) и моноциты (1,6%).

У всех исследованных особей отмечены различные патологические изменения эритроцитов. Так, олигохромазия составляла - 6,1%, пойкилоцитоз - 6,5%, при этом клетки имели, в основном, бобовидную и треугольную формы. Анизоцитоз составлял 3,2%, на макроциты приходилось - 2,0%, а на микроциты - 1,2%. Процент агглютинации составлял, в среднем, 13,0%.

Кроме этого, практически у всех особей, подвергнутых анализу, как цитоплазма, так и ядра эритроцитов были вакуолизированы. Отмечены случаи инвагинации цитоплазмы, кариорексиса ядра. В единичных случаях, как и у эритроцитов, в цитоплазме лейкоцитов была отмечена вакуолизация.

Таким образом, дифференцировка клеточных элементов крови у земноводных происходила, в основном, экстраваскулярно, и очень небольшой процент клеток развивается интраваскулярно.

2.4 Органы кроветворения в личиночный период развития

озёрной лягушки

Дифференцировка и созревание гемопоэтических элементов у головастиков осуществлялась в почке, печени, селезенке, тимусе, в пищеварительном тракте, красном костном мозге - на поздних стадиях .

В межканальцевой ткани почек, основная масса дифференцирующихся клеток - гранулоциты - 58,1%, на втором месте - агранулоциты - 29,0%, на третьем - эритроциты -12,9%.

В печени основная масса формирующихся клеток была представлена клетками эритропоэтического ряда -70,89%, далее по количеству находились клетки гранулоцитопоэтического ряда - 22,8%, меньше всего было агранулоцитов - 6,33%. Т.е. почка и печень у исследованных лягушек функционирует только в личиночный период жизни, когда они обитают в водной среде.

В селезенке головастиков площадь, занимаемая на срезе, белой пульпой составляла 22,0%. Здесь также как у взрослых особей лягушек формировались клетки всех рядов, основной процент формирующихся клеток приходился на агранулоциты - 64,0%, 15,2% - на гранулоциты, 18,4% - составляли эритроциты, и меньше всего было выявлено клеток тромбоцитопоэтического ряда - 2,4%.

Сравнение полученных данных по клеточному составу дифференцирующихся и созревающих клеток крови в селезенке головастиков и половозрелых самок лягушек показало, что в онтогенезе качественный состав образующихся здесь клеток не меняется, но меняется их количественное соотношение. У представителей обеих возрастных групп в этом органе формировались форменные элементы всех рядов. У половозрелых особей возросло количество клеток агранулоцитопоэтического ряда (Р<0,001), а количество гранулоцитов снизилось (Р<0,001). У головастиков незначительно превалировали развивающиеся эритроциты (различия не достоверны), также у них было отмечено большее количество формирующихся клеток тромбоцитопоэтического ряда (Р<0,001). Отмечено резкое снижение бластных клеток внутри рядов у половозрелых лягушек (Р<0,001).

На более поздних стадиях личиночного периода развития, когда происходит закладка конечностей, появляется красный костный мозг. Из формирующихся клеток здесь были выявлены клетки гранулоцитопоэтического - 25,0%, агранулоцитопоэтического - 26,1%, эритропоэтического ряда - 45,6%, тромбоцитопоэтического - 3,3% рядов. Т.е. красный костный мозг с самого начала своего функционирования - универсальный орган кроветворения. Сравнение клеточного состава гемопоэтической ткани красного костного мозга у головастиков и половозрелых особей показало, что среди клеток белой крови, доля клеток лимфоцитопоэтического ряда у головастиков выше (Р<0,001), у половозрелых особей больше гранулоцитов (Р<0,001). Количество клеток эритропоэтического ряда было выше у половозрелых особей (Р<0,05). Среди формирующихся эритроцитов и лейкоцитов у головастиков высока доля бластных клеток в отличие от половозрелых особей (Р<0,001).

Исследование тимуса и гемопоэтической ткани ассоциированной со слизистой оболочкой пищеварительного тракта показало, что эти органы у личинок лягушек функционируют как чисто лимфоидные органы. При сравнении клеточного состава тимуса личинок и коркового вещества этого органа у половозрелых особей лягушек отмечено, что число лимфобластов и лимфоцитов у головастиков выше (Р<0,001). Количество созревающих лимфоцитов выше было у половозрелых лягушек (Р<0,001). При сравнении клеточного состава гемопоэтических образований пищеварительного тракта выявлено, что удельный вес гемоцитобластов и лимфобластов у головастиков был выше (Р<0,001), чем у половозрелых особей.

2.5 Клеточный состав кроветворных органов пресмыкающихся

(на примере прыткой ящерицы)

Красный костный мозг пресмыкающихся

У исследованных особей кроветворная ткань находилась в ячейках губчатого вещества плоских костей черепа, эпифизах и диафизах трубчатых костей конечностей.

Жировые клетки в кроветворной ткани бедренной кости составляли около 60% среза. Среди клеток ретикулярной соединительной ткани, образующих микроокружение для развивающихся кроветворных элементов, гемопоэтические клетки располагались группами. Наиболее выраженные островки образовывали клетки эритроцитопоэтического и гранулоцитопоэтического рядов, причем, первые, в основном, располагались в центре, а вторые - по периферии кроветворной ткани. Кроме того, выявлялись и смешанные островки. В островках часто выделялись митотически делящиеся клетки. В эритробластическом островке среднее количество развивающихся клеток колебалось от 20 до 26 (23,0±3,11) шт. Исследование организации эритробластических островков показало, что молодые эритробласты находились в центральной области островка, а более дифференцированные - располагались по его периферии. В миелобластическом островке среднее количество клеток колебалось от 18 до 23 (20,0±2,5) шт.

В красном костном мозге исследованных особей были выявлены клетки всех рядов: эритропоэтического (63,4%), гранулоцитопоэтического (32,8%), агранулоцитопоэтического (3,2%) и тромбоцитопоэтического (0,6%).

В кроветворной ткани красного костного мозга ящериц были выявлены немногочисленные гемоцитобласты (0,8%). Как правило, они располагались в центральной части гемопоэтических островков.

Формирующиеся клетки эритропоэтического ряда были самыми многочисленными. Среди них превалировали эритробласты (30,5%), которые в островках располагались по 3-5 шт. Самыми малочисленными созревающими клетками были оксифильные эритробласты, которые, в среднем, составляли 5,1%.

Среди формирующихся лейкоцитов на агранулоциты приходилось 13,6%, 86,4% - на гранулоциты. Немногочисленная группа агранулоцитов была представлена клетками лимфоцитопоэтического и моноцитопоэтического рядов. Эти клетки не образовывали выраженных группировок, располагаясь по 1-3 шт. Среди них наибольшее количество приходилось на клетки лифоцитопоэтического ряда, их средний удельный вес составлял - 13,0±2,1%. Лимфобластысоставляли - 2,4%, пролимфоциты - 4,1%, лимфоциты - 4,0%. Из плазматических клеток плазмобласты составляли 1,6%, проплазмоциты - 0,8%, плазмоциты - 0,1%. Самой малочисленной группой среди агранулоциов были клетки моноцитопоэтического ряда. Были выявлены только монобласты, на которые, в среднем, приходилось - 0,6%. Гранулоциты составляли основную массу формирующихся лейкоцитов. Были выявлены миелобласты, средний удельный вес которых составлял - 7,3±0,39%. Среди созревающих и зрелых гранулоцитов наибольший процент формирующихся клеток приходился на эозинофилы - 61,1%, нейтрофилов было - 12,3%.

Также в кроветворной ткани красного костного мозга исследованных особей ящериц выявлялись одиночные клетки - мегакариоциты. Эти клетки располагались вблизи кровеносных сосудов. От общего числа формирующихся клеток они составляли - 0,6%.

Таким образом, красный костный мозг - универсальный кроветворный орган.

Селезенка пресмыкающихся

Паренхима органа состояла из белой и красной пульпы без четких границ между ними. Строма всего органа состояла из ретикулярной ткани, окружающей форменные элементы крови, и сосуды различного диаметра. Участки белой пульпы отличались более плотным расположением клеток, которые концентрировались вокруг артериол, занимаемая на срезе 15,0%. Среди этих клеток были выявлены лейкоциты гранулоцитопоэтического и агранулоцитопоэтического рядов. Основную массу формирующихся клеток белой пульпы составляли лимфоциты - 76,4%, плазматические клетки составляли 11,3%, 12,3% - приходилось на гранулоциты, т.е. селезенка у пресмыкающихся является местом формирования и развития лейкоцитов, главными из которых были лимфоциты.

Формирующиеся клетки располагались хаотично, без какой-либо упорядоченности. Среди лимфоцитов были выявлены лимфобласты - 13,9%, пролимфоциты - 15,7%, зрелые лимфоциты - 46,8%. Причем, было отмечено, что лимфобласты располагались небольшими группами по 3-5 клеток, а наибольшая концентрация зрелых лимфоцитов была отмечена в зоне перехода белой пульпы в красную. Из плазматических клеток в участках белой пульпы были отмечены плазмобласты (2,6%), проплазмоциты (5,2%) и плазмоциты (3,5%). Также среди развивающихся клеток здесь выявлялись гранулоциты. Из созревающих клеток были отмечены промиелоциты (0,9%), миелоциты базофильные (0,9%) и нейтрофильные (0,9%) и метамиелоциты нейтрофильные (1,7%). Из зрелых гранулоцитов были отмечены сегментоядерные нейтрофилы, эозинофилы и базофилы, на которые приходилось по 0,9%. По периферии белой пульпы и в красной пульпе находились многочисленные макрофаги. За пределами участков белой пульпы располагались развивающиеся клетки тромбоцитопоэтического ряда - мегакариоциты, составляя 1,0% от общего количества развивающихся клеток.

Таким образом, у пресмыкающихся в селезенке основную массу формирующихся клеток составляли - лимфоциты.

Тимус пресмыкающихся

У взрослых половозрелых особей прыткой ящерицы тимус располагался в вентральной части шеи, был представлен правой и левой долями, которые, в свою очередь, подразделялись на более мелкие дольки. Тимус ящериц состоял как из отдельных изолированных долек, так и долек, соединенных своими основаниями. В нем четко выявлялось корковое и мозговое вещество органа. По строению и функциям он сходен с вилочковой железой млекопитающих.

Корковое вещество было густо заполнено клетками, и на общем фоне выглядело более темным. Пролиферирующие клетки располагались между ретикулоэпителиальными клетками, которые отличались светлой оксифильной окраской. Между ними располагались развивающиеся клетки лимфоцитопоэтического ряда. При этом зрелые лимфоциты были самой многочисленной группой клеток и составляли 77,0%, на втором месте по количеству стояли пролимфоциты - 11,0%, и лимфобласты составляли - 10,5%. Кроме того, в корковом веществе тимуса были выявлены немногочисленные плазматические клетки. Плазмоцитов, проплазмоцитов и плазмобластов наблюдалось по 0,5%. В корковом веществе ящериц была отмечена тенденция нахождения немногочисленных бластных клеток у соединительнотканной капсулы, зрелые лимфоциты наибольшей концентрации достигали в зоне перехода в мозговое вещество. Здесь же были отмечены митотически делящиеся клетки.

Мозговое вещество тимуса имело более светлую окраску, так как в нем содержалось меньшее количество лимфоцитов, чем в корковом. Лимфобластов в мозговом веществе было меньше, они составляли всего 3,0% (Р<0,001), удельный вес пролимфоцитов (6,0%) также был ниже, чем в корковом веществе (Р<0,001), удельный вес зрелых лимфоцитов был выше на 14% (Р<0,001). Слоистые эпителиальные тельца (Гассаля) были рассредоточены по всему мозговому веществу.

Кроветворение в пищеварительной системе пресмыкающихся

Исследование пищеварительного тракта ящериц, показало, что, практически на всем его протяжении встречались лимфоидные кроветворные образования, расположенные в собственной пластике слизистой оболочки глотки, тонкого кишечника, слепой кишки, толстого кишечника и клоаке.

В собственной пластинке слизистой оболочки глотки были выявлены скопления лимфоидной ткани различной величины. Основу узелка составляли ретикулярные клетки, среди которых располагались дифференцирующиеся лимфоциты. Был отмечен небольшой процент гемоцитобластов - 2,0%, которые, в основном располагались группами. Лимфобласты и плазмобласты концентрировались в этой же области, образуя светлый центр, но не четко выраженный. Лимфобласты составляли, в среднем, 7,8±0,34%. Пролимфоциты, располагались как небольшими группами по 2-4 клетки так и хаотично, их количество, в среднем, составляло 15,5±0,47%. Зрелые лимфоциты были рассредоточены по всему кроветворному образованию их удельный вес, в среднем составлял - 72,4±0,51%.

Плазмобласты и плазмоциты объединялись в небольшие группы по 2-3 шт., в основном, ассоциировались по периферии образования.

В соединительнотканной слизистой основе тонкой кишки были выявлены скопления кроветворной ткани. Количество гемоцитобластов (2,8%) в этих образованиях тонкой кишки незначительно увеличилось, по сравнению с глоткой (Р<0,01). Из клеток лимфоцитопоэтического ряда были отмечены лимфобласты (6,4%) (Р<0,01), пролимфоциты (5,5%)(Р<0,001), количество которых здесь тоже уменьшилось. Самой многочисленной группой клеток кроветворных образований тонкой кишки являлись - лимфоциты (80,7%), количество которых было выше на 8,3%, чем в глотке (Р<0,001). В собственной пластинке слизистой оболочки кишки встречались плазматические клетки; среди них на плазмобласты, в среднем, приходилось - 1,9%±0,22 (различия не достоверны), проплазмоциты - 0,9±0,19% и плазмоциты - 1,8±0,21% (Р<0,001). Гемоцитобласты и лимфобласты группировались по несколько клеток в узелке близко друг от друга.

Слепая кишка представляла собой выпячивание кишечника, длиной 3 мм. Соединительнотканная собственная пластинка слизистой оболочки содержала кроветворную ткань. Наблюдалось чередование участков с плотно расположенными формирующимися клетками и участков, где клетки располагались реже. В узелках были выявлены формирующиеся лимфоциты, плазмоциты. Гемоцитобласты, удельный вес которых заметно снизился в сравнении с тонкой кишкой, составляли 1,9% (Р<0,001). Лимфобластов в собственной пластинке слизистой оболочки было отмечено довольно значительное количество, по сравнению с другими отделами пищеварительного тракта: их средний удельный вес составлял - 13,6±0,36% (Р<0,001). Клетки следующей стадии развития лимфоцитов - пролимфоциты, количество которых практически не изменилось, по сравнению с тонкой кишкой, составляли, в среднем - 5,6±0,3% (различия не достоверны). Лимфоциты были самой многочисленной группой клеток и, в среднем, составляли - 76,1±0,59% (Р<0,001).

В собственной пластинке слизистой оболочки толстого кишечника также были обнаружены гемопоэтические узелки с формирующимися клетками крови. При исследовании узелков отмечена тенденция группировки бластных клеток по несколько штук. В этих узелках формировались клетки агранулоцитопоэтического ряда. Клетки располагались небольшими группами по 3-5 клеток. Были отмечены гемоцитобласты (2,9%), их удельный вес стал выше на 1%, в сравнении со слепой кишкой (Р<0,001). В собственной пластинке слизистой оболочки формировались лимфоциты, в том числе плазмоциты: на лимфобласты приходилось 3,8% (Р<0,001), на пролимфоциты - 7,6% (Р<0,001), на лимфоциты - 80,9% (Р<0,001). Из плазматических клеток средний удельный вес плазмобластов был равен 2,9% (Р<0,01).

В собственной пластинке слизистой оболочки клоаки узелки с формирующимися клетками были многочисленны. В них формировались те же клетки. Количество гемоцитобластов здесь было чуть выше, чем в образованиях толстой кишки, в среднем, эти клетки составляли - 3,5±0,31% (различия не достоверны). Из формирующихся агранулоцитов удельный вес лимфобластов повысился на 5,0%, в сравнении с толстым кишечником, составляя - 8,8% (Р<0,001), пролимфоцитов было 3,4% (Р<0,001), лимфоцитов - 79,0% (Р<0,01). Плазматические клетки были представлены плазмобластами -3,6% (различия не достоверны) и плазмоцитами - 1,7% (различия не достоверны).

В основном, на периферии образований всех отделов пищеварительного тракта исследованных ящериц выявлялись единичные макрофаги, нейтрофилы и эозинофилы.

«Лимфатические узлы» пресмыкающихся

Лимфатическая система пресмыкающихся представлена так называемыми лимфатическими сердцами - мышечными уплотнениями, проталкивающими лимфу в вены (Константинов В.М. и др., 2007). У исследованных особей ящериц в подкрыльцовой области между скелетными мышцами в слое рыхлой волокнистой соединительной ткани были выявлены «лимфоидные образования». Основания этих образований, которые имели округлую форму, оплетали кровеносные сосуды. Две трети образования сверху были покрыты тонкой соединительнотканной капсулой, основание «узелка», в месте слияния с сосудами - ворота узелка - без четких границ сливалось с близлежащими тканями. Все образование было пронизано многочисленными кровеносными сосудами. Нечетко прослеживалось разделение «узла» на более светлую - мозговую часть, где клетки располагались реже и более темную - корковую, клетки, которой располагались более плотно.

Строму «узла» образовывали ретикулярные клетки, между которыми располагались формирующиеся клетки лимфоцитопоэтического ряда. В строме образования редко выявлялись гемоцитобласты, они, в среднем, составляли 2,14±0,23% от всех развивающихся клеток. От числа всех развивающихся клеток лимфобласты составляли - 12,9%, самой многочисленной группой клеток были зрелые лимфоциты, которые, в среднем, составляли 49,39±0,51%. Плазматические клетки также были представлены всеми стадиями зрелости, их соотношение распределилось следующим образом: на плазмобласты приходилось - 5,38%, проплазмоциты - 7,53%, на зрелые плазматические клети - 12,9%. Причем, было отмечено, что бластные клетки располагались по 2-3 шт.

Анализ тазовой почки и сердца прыткой ящерицы на наличие гемопоэтической ткани показал, что в этих органах у половозрелых особей, подвергнутых анализу, ее нет.

Периферическая кровь пресмыкающихся

Зрелые эритроциты с крупными ядрами - составляли 81,2% от числа всех эритроцитов. Установлено, что наряду со зрелыми - дифинитивными эритроцитами в периферической крови были отмечены молодые клетки эритропоэтического ряда, но их было немного - 4,0%. Из них на эритробласты приходилось - 1,5%, на проэритробласты - 1,25%, на базофильные эритробласты - 0,75%. Меньше всего было отмечено полихроматофильных и оксифильных эритробластов, на которые приходилось по 0,25%.

Среди лейкоцитов крови на агранулоциты приходилось 82,3%, на гранулоциты - 17,7%. Были отмечены лейкоциты разных стадий зрелости. Из гранулоцитов были выявлены промиелоциты (2,7%), миелоциты (3%). Палочкоядерных эозинофилов было 3,0%, палочкоядерные нейтрофилы - 2,75%, меньше всего было палочкоядерных базофилов - 0,25%. Сегментоядерные гранулоциты составляли 1,7%, 1%, 1,5% - соответственно. Среди клеток лимфоцитопоэтического ряда лимфоциты были самыми многочисленными - 56,7%, пролимфоциты составляли - 9,25%, и лимфобласты - 6,6%. Среди клеток моноцитопоэтического ряда были отмечены монобласты (3,0%), промоноциты (1,5%) и моноциты (5,25%).

При изучении состояния крови исследованных особей ящериц, были выявлены различные патологические изменения эритроцитов. На общем фоне выявлялись эритроциты с бледно окрашенной цитоплазмой - олигохромазия - составляла 4,2%. Были отмечены микроциты - 2,2%, макроциты - 2,8%. Пойкилоцитоз составлял 3,6%, шистоцитоз -1%, такое же количество приходилось на эритроциты, которые имели пикнотические ядра.

Таким образом, дифференцировка форменных элементов крови происходила в основном, экстраваскулярно.

Заключение

Проведенный анализ организации гемопоэтической ткани у представителей разных классов позвоночных животных показал, что от низших (рыбы) и до высших позвоночных (рептилии) наблюдается усложнение ее организации. Проведенное исследование позволило в пределах каждой группы животных, подвергнутых анализу, выявить свои особенности в строении и организации органов гемопоэза. У животных разных классов, по мере продвижения по эволюционной лестнице комплекс этих органов постепенно совершенствуется (Галактионов В.Г., 2004).

Для выявления кроветворной функции и установления особенностей кроветворных органов, помимо исследования гистоструктуры, был проведен дифференцированный подсчет развивающихся клеток крови.

При сравнении полученных данных по кроветворению у хрящевых (на примере ската), костно-хрящевых рыб (на примере осетровых рыб), костистых (на примере воблы), земноводных (на примере озерной лягушки) и пресмыкающихся (на примере прыткой ящерицы), было выяснено, что у рыб способностью к кроветворению обладает большее количество структур организма. У всех представителей разных классов животных кроветворение осуществляется в селезенке, тимусе, кишечной стенке. В отличие от представителей земноводных и пресмыкающихся у рыб процесс кроветворения осуществляется также в почках, жабрах, в перикардиальной полости сердца, в полостях черепных костей - у представителей костистых рыб (на примере воблы), в краниальном органе - костно-хрящевых рыб. У представителей земноводных и пресмыкающихся, как более высокоорганизованных животных появился красный костный мозг как универсальный орган кроветворения и «лимфоидные узелки» - аналог лимфатических узлов млекопитающих.

Почка рыб - один из центральных органов кроветворения рыб, многие авторы сравнивают ее с красным косным мозгом высших позвоночных животных (Заварзин А.А.,1953; Иванова Н.Т., 1982). У рыб, она подразделяется на два отдела - пронефрос, или головная почка и мезонефрос, или туловищная почка. Головная почка выполняет функцию кроветворения и эндокринную, а туловищная, наряду с основной выделительной функцией, выполняет также кроветворную.

У костистых и костно-хрящевых рыб оба отдела почек являются универсальным органом кроветворения. У этих рыб здесь формировались эритроциты и лейкоциты, причем, процент содержания клеток грануло - и агранулоцитопоэтического ряда в обоих отделах превышал количество развивающихся эритроидных клеток, количество развивающихся клеток эритропоэтического ряда в туловищной почке было несколько ниже, чем в головной. Отмечены различия в процентном соотношении этих клеток внутри рядов. В туловищной почке также, как и в головной, у исследуемых рыб разных классов, семейств формировались клетки тех же рядов. У представителей хрящевых рыб, в отличие от костистых и костно-хрящевых, гемопоэтическая ткань в этом органе концентрировалась в виде редких, небольших по размеру, островков (рис.3,4).

В личиночный период жизни лягушек, когда средой обитания головастиков является вода, почка выступает и как орган гемопоэза, где в межканальцевой ткани дифференцировались гранулоциты, агранулоциты, эритроциты (рис.5).

Паренхима селезенки исследуемых видов рыб, земноводных и пресмыкающихся состояла из чередующихся участков белой и красной пульпы. Четких границ между белой и красной пульпой не было. У хрящевых, осетровых, костистых рыб, земноводных и пресмыкающихся в селезенке формировались все форменные элементы крови, у исследованных пресмыкающихся - лейкоциты и тромбоциты (рис. 7). В селезенке головастиков также как у взрослых особей лягушек формировались клетки всех рядов (рис. 5,6).

В селезенке пресмыкающихся формирующихся клеток эритропоэтического ряда выявлено не было, там развивались только лейкоциты, что подтверждает нахождение этих животных на более высокой ступени гениологического древа и приближает этих животных к более высокоорганизованным (млекопитающим).

Таблица 3. Клеточный состав органов гемопоэза у представителей разных классов животных

Тимус у исследованных животных является парным органом. Как у большинства позвоночных, за исключением костистых рыб, он отделяется от глоточного эпителия уже на очень ранних стадиях развития (Ройт А. и др., 2000). У костистых рыб он устроен более примитивно: представлял собой утолщение стенки жаберной полости. У земноводных и пресмыкающихся, в отличие от костистых рыб, он представлял собой самостоятельный орган, покрытый соединительнотканной капсулой. По сведениям О.В. Ложниченко (2007), тимус осетровых рыб подразделялся на дольки, где хорошо было различимо мозговое и корковое вещество, причем, корковое доминировало. Она отметила, что у осетровых в тимусе формировались лимфоциты и эозинофилы. Проведенное исследование тимуса костистых, земноводных и пресмыкающихся, показало, что паренхима органа у всех этих животных была разделена на мозговое и корковое вещество, но у представителей земноводных и пресмыкающихся это подразделение было более четким, чем у костистых рыб. В отличие от осетровых, тимус костистых рыб не подразделялся на дольки, выделялось корковое и мозговое вещество, в соотношении 1:2. У земноводных - от капсулы внутрь органа отходили трабекулы, разделяющие тимус на слабозаметные дольки, у пресмыкающихся было отмечено четкое разделение органа на отдельные дольки. У костистых рыб, земноводных и пресмыкающихся в тимусе формировались клетки лимфоцитопоэтического ряда (рис.3,5,6,7). Кроме того, у всех этих животных в мозговом слое тимуса выявлялись тельца Гассаля. Исследование тимуса головастиков лягушек, показало, что этот орган у них, как и у взрослых особей, был покрыт соединительнотканной капсулой, строма органа на дольки не делилась, не четко выявлялось мозговое и корковое вещество. Редко встречались тельца Гассаля. Были выявлены клетки только лимфоцитопоэтического ряда, как и у взрослых особей.

У земноводных и пресмыкающихся имеется красный костный мозг. Подобное образование обнаружено у костистых рыб - в полостях костей челюстей, хотя, согласно литературным данным, амфибии - первые наземные позвоночные, у которых с появлением конечностей, и особенно, с утолщением их скелета появляется костный мозг (Пестова И.М., Четвертных В.Н., 1990; Селезнев С.Б., 1999). У исследованных представителей костистых рыб в полостях костей черепа формировались все типы форменных элементов крови. У земноводных и пресмыкающихся красный костный мозг располагался внутри костномозговых полостей трубчатых костей конечностей, состоял из стромы, сосудистого и гемопоэтического компонентов. У этих животных здесь также были выявлены формирующиеся клетки крови всех линий. Клетки эритропоэтического ряда группировались, образуя островки, но у пресмыкающихся количество клеток в островке было большим, по сравнению с гемопоэтическими островками земноводных. Также в гемопоэтической ткани у этих животных были отмечены гранулоцитопоэтические островки, что для лягушек было менее характерно, т.к. гранулоцитопоэтические клетки располагались в красном костном мозге не только компактно, но и хаотично. У личинок земноводных с самого начала функционирования красного костного мозга здесь образуются ростки всех клеток, но развивающиеся клетки распределялись хаотично. Сравнивая процентный состав формирующихся клеток у особей озерной лягушки и прыткой ящерицы, выявлено, что количество клеток эритропоэтического ряда у вторых выше (53,5%; и 63,4% - соответственно), а количество клеток гранулоцитопоэтического, агранулоцитопоэтического и тромбоцитопоэтического рядов у пресмыкающихся ниже (рис.5,7).

У осетровых имеется кроветворная ткань в краниальном хряще рыб, где формируются все форменные элементы крови (Иванова Н. Т., 1970; Ложниченко О.В., 2007). О.В. Ложниченко (2007) отметила, что у осетровых рыб в краниальном органе доминировали развивающиеся эритроциты. Было выявлено, что у костистых рыб в челюстных костях висцерального отдела черепа находились гемопоэтические тяжи, содержащие развивающиеся клетки всех рядов, которые были рассредоточены хаотично. Здесь превалировали клетки лимфоцитопоэтического ряда.

В пищеварительном тракте у всех исследованных животных были выявлены кроветворные образования, ассоциированные со слизистой оболочкой. У осетровых гемопоэтические образования пилорической железы, среднего отдела кишечника и спирального клапана имели различные размеры: от мелких до крупных, были заключены в плотную соединительнотканную капсулу.

У хрящевых, костно-хрящевых и костистых рыб в гемопоэтической ткани формировались лимфоциты и гранулоциты, у всех групп рыб среди лейкоцитов во всех отделах пищеварительного тракта превалировали клетки лимфоцитопоэтического ряда (рис.3).

У земноводных и пресмыкающихся эти образования также были выявлены в глоточной области и в области клоаки, что напоминает миндалины млекопитающих и клоакальную сумку птиц (Горышина Е.Н, Чага О.Ю., 1990). У земноводных и пресмыкающихся кроветворные образования, связанные с кишечником, были оформлены более четко, чем у костистых рыб, здесь формировались только клетки лимфоцитопоэтического ряда.

Гемопоэтическая ткань, ассоциированная с собственной пластинкой слизистой оболочки пищеварительного тракта головастика, также как и у половозрелых особей, имела лимфоидный характер. Сравнение клеточного состава гемопоэтических образований пищеварительного тракта этих двух возрастных групп, показало, что удельный вес гемоцитобластов, лимфобластов у головастиков был выше.

Таким образом, у пресмыкающихся и земноводных в тимусе и лимфатических образованиях кишечника формировались и дифференцировались лимфоциты.

Согласно литературным источникам, у бесхвостых амфибий существуют так называемые лимфоидные органы -- инкапсулированные скопления лимфоидной ткани, аналогичные лимфоузлам млекопитающих, но фильтрующие не лимфу, а кровь.

Рис.3. Относительное содержание форменных элементов крови

в органах кроветворения воблы

Рис.4. Относительное содержание форменных элементов крови

в органах кроветворения ската

Л.И. Александрова (2007) указывает на то, что они не имеют четкой структуры, свойственной лимфатическим узлам млекопитающих и служат, в основном, фильтрующими кровь органами, хотя могут захватывать материал и из окружающей лимфы. Нами были выявлены в подкрыльцовой области у земноводных небольшие, нечетко оформленные кроветворные образования, которые не были отграничены от окружающей ткани, в них формировались и дифференцировались клетки лимфоцитопоэтического ряда. Эти образования были пронизаны многочисленными кровеносными сосудами, что свидетельствует о том, что здесь происходит фильтрация крови.

В отличие от костистых рыб, у исследованных земноводных и пресмыкающихся были выявлены образования в виде небольших узлов в подкрыльцовой области, что напоминает локализацию лимфатических узлов у млекопитающих (Купер Э., 1980; Селезнев С.Б., 1999). У земноводных эти образования не были чётко оформлены: они не были отграничены от окружающей ткани, у ящериц скопления кроветворной ткани были крупнее, отграничены тонкой соединительнотканной капсулой, в них нечетко прослеживалось разделение «узла» на более светлую центральную и более темную периферическую зоны. У пресмыкающихся и земноводных эти образования являлись лимфоидными органами, т.к. здесь формировались и дифференцировались клетки только лимфоцитопоэтического ряда (рис.5,7). В личиночный период жизни у исследованных земноводных лимфоидные образования подкрыльцовой области отсутствуют.

Рис. 5. Относительное содержание форменных элементов крови в органах кроветворения половозрелой лягушки

Рис. 6. Относительное содержание форменных элементов крови

в органах кроветворения головастика

Рис.7. Относительное содержание форменных элементов крови

в органах кроветворения ящерицы

У хрящевых, костистых, и осетровых рыб кроветворная ткань рассредоточена в организме более диффузно, о чем свидетельствует ее нахождение в перикарде и жабрах. Такое распределение очагов гемопоэза у рыб, по-видимому, связано с водным образом жизни, где организм находится постоянно, и существует большая вероятность проникновения болезнетворных микроорганизмов. В перикардиальной полости исследованных рыб формировались эритроциты и лейкоциты (рис.3,4).

В основании филаментов жабр у представителей костно-хрящевых и костистых рыб формировались только лейкоциты, среди которых, у осетровых преобладали развивающиеся клетки лимфоцитопоэтического ряда, у костистых незначительно превалировали гранулоциты (рис.3).

Также как и у личинок рыб (Ложниченко О.В., 2007), у личинок земноводных в печени осуществляется гемопоэз клеток крови эритро-, грануло- и агранулоцитопоэтического рядов (рис.5).

В организме земноводных и пресмыкающихся количество мест расположения универсальной гемопоэтической ткани заметно уменьшилось.

Лейкоформула периферической крови всех исследованных животных носит лимфоидный характер, также для них характерно наличие, наряду со зрелыми, бластных и созревающих клеток, но процент их незначителен, т.е. в основном дифференцировка этих клеток происходила экстраваскулярно.

Сравнительный анализ гемопоэтических органов исследованных представителей разных классов животных показал, что по мере усложнения общей организации животных идет постепенное, целенаправленное усложнение их защитных систем. Образ жизни и степень организации повлияли на расположение и морфофункциональные особенности гемопоэтической ткани. В сравнительном ряду: рыбы - земноводные - пресмыкающиеся, у позвоночных возникли лимфоидные органы (у костистых рыб - тимус, у земноводных и пресмыкающихся - тимус, лимфоидные образования ассоциированные со слизистой оболочкой пищеварительного тракта, «лимфатические узлы»), появление которых свидетельствует о том, что усложнилась регуляция защитных реакций животных. Отмечено, что уровень организации органов кроветворения у позвоночных имеет нетождественное в каждом классе проявление ряда универсальных для всей системы закономерностей ее эволюционной динамики. Такое усложнение структурной организации этой системы необходимо для более совершенной реализации свойственных ей разносторонних функций. У менее организованных позвоночных большая часть органов совмещает функции кроветворения и иммунитета, у более высокоорганизованных животных появляются большее число органов с чисто иммунной функцией.

У всех исследованных животных органы кроветворения не равнозначны, т.е. происходит их специализация. Среда обитания рыб неустойчива, и в процессе эволюции эти животные к ней приспособились. В том числе, это отразилось на топографических и функциональных особенностях кроветворных органов. Количественные значения образующихся клеток эритропоэтического ряда в органах кроветворения представителя хрящевых рыб, в сравнении с костно-хрящевыми и костистыми рыбами заметно ниже. Различия, в основном, обусловлены уровнем естественной подвижности рыб (Солдатов А.А., 2005). Вобла является наиболее типичным пелагическим, активно мигрирующим видом. В про-, мезонефросе, селезенке у этих рыб доминировал процесс эритропоэза. У представителей костно-хрящевых рыб, которые являются проходными и пресноводными рыбами в про- и мезонефросе доля эритропоэза ниже в сравнении с лейкопоэзом. Представитель хрящевых рыб - скат - типичный обитатель дна, в отличие от воблы и осетровых ведет малоподвижный образ жизни, что отразилось на особенности гемопоэза: в мезонефросе и в селезенке у этих рыб доминирует лейкопоэз.

Применение кластерного анализа в оценке полученных результатов, подтвердило, что гемопоэтическая функция кроветворных органов у исследованных животных не равнозначна. Выделяются три крупных кластера, которые объединяют соответственно наземных позвоночных (ящерица и лягушка), сложно устроенный кластер, объединяющий примитивных рыб - скат и осетровые, в центре дерева кластеризации объединены головастик и костная рыба - вобла (рис. 8).

Рис. 8. Дерево кластеризации для случая Полная связь - Расстояние Чебышева

Впервые чисто лимфоидным органом тимус становится у костистых рыб, в то время как у костно-хрящевых он является органом лимфомиелопоэза. Освоение земноводными воздушной среды приводило к неизбежным контактам вышедших на сушу животных с новыми, не известными ранее микроорганизмами, что простимулировало дальнейшее развитие иммунной системы (Галактионов В.Р., 2004). У этих животных чисто лимфоидными органами становятся гемопоэтическая ткань, ассоциированная с пищеварительным трактом, в то время как у исследованных рыб, эта ткань пока еще являлась лимфомиелоидной. Кроме того в дополнение к этим органам у них обнаружены скопления лимфоидной ткани в подкрыльцовой области, хотя морфология этих скоплений пока примитивная. Появившийся красный костный мозг исследованных амфибий является универсальным органом кроветворения. Доминируют в нем формирующиеся клетки эритропоэтического ряда. Селезенка земноводных также как у рыб - универсальный орган гемопоэза, но в отличие от рыб, здесь значительно сокращается эритропоэз. В личиночный период жизненного цикла амфибий локализация и качественный состав гемопоэтических очагов во многом схож с организацией этих образований у рыб. В первую очередь это относится к почкам, т.к. у головастиков лягушек нами были выявлены в межканальцевой ткани скопления клеток крови тех же рядов что и у рыб. Также как и у личинок рыб (Ложниченко О.В., 2007), у личинок земноводных в печени осуществляется гемопоэз клеток крови эритро-, грануло- и агранулоцитопоэтического рядов. Локализация кроветворных органов у личинок и половозрелых особей земноводных различна, и меняется в процессе онтогенеза. У личинки наряду с развитием постоянных очагов кроветворения имеются временные личиночные очаги (мезонефрос, печень). Во время развития организма, в связи с потребностью в клетках крови, кроветворение начинается во временных очагах и перемещается в дефинитивные по мере формирования их микроокружения. Т.е. в классе амфибий локализация кроветворной ткани реорганизуется в рамках пути развития пройденного в филогенезе. При исследовании гемопоэтической функции органов кроветворения у пресмыкающихся, которые полностью перешли к наземной среде обитания, мы наблюдали дальнейшее ее усложнение. Заметно в сравнении с земноводными усложнилась организация тимуса, лимфатических узлов подкрыльцовой области. Селезёнка у исследованных представителей пресмыкающихся утратила функцию эритропоэза. У исследованных позвоночных животных, по мере усложнения их организации, отмечено уменьшение площади белой пульпы селезенки.