Особенности процессов культивирования личинок и ранней стадии молоди дальневосточного трепанга в заводских условиях

26

Содержание

Введение

1. Обзор литературы

1.1 Биологическая характеристика объекта исследования

1.2 Физико-географическая характеристика б. Северная

2. Материал и методика

3. Результаты

4. Охрана труда и техника безопасности

Выводы

Список использованной литературы

Введение

Культивирование морских гидробионтов, или марикультура - перспективное направление хозяйственной деятельности в Приморье. Культивирование гидробионтов ставит перед собой цель получения дополнительной товарной продукции моллюсков и иглокожих, а также восстановление подорванных популяций ценных видов. Первостепенное значение при этом приобретают потенциальные свойства гидробионтов, обеспечивающие высокие приросты биомассы и скорость созревания. Перспективным в Приморье является культивирование трепанга, гребешка приморского и серого ежа [7].

В последние годы в Приморье развивается культивирование ценного в промысловом отношении вида - дальневосточного трепанга. Высокая рыночная стоимость и современное состояние популяции стали стимулом для начала таких работ. Низкая численность трепанга в заливе Петра Великого отмечается, начиная с 90-х гг. прошлого столетия. В последние годы крайне редки случаи обнаружения личинок трепанга в планктоне бухт, что не позволяет надеяться на быстрое восстановление его численности (а соответственно и промысла) и задействовать коллекторный способ культивирования.

Интенсивная (заводская) технология разведения может стать в настоящее время действенным способом пополнения скоплений и возможностью для получения товарной продукции. Одним из этапов биотехники является выращивание полученной в заводских условиях молоди до товарного размера. В настоящее время различные методы товарного выращивания молоди трепанга разработаны в Китае; работы в этом направлении ведутся в Японии и Корее.

За последние десятилетия произошли очень существенные изменения в численности и распределении запасов этого вида, пересмотрен таксономический статус, появились новые сведения по его биологии, достигнуты значительные успехи в разработке методик искусственного культивирования [6].

Целью данной работы является изучение особенностей процессов культивирования личинок и ранней стадии молоди дальневосточного трепанга в заводских условиях.

Для этого необходимо решить следующие задачи:

1. Определить продолжительность стадий и выживаемость культивируемых личинок;

2. Определить размеры личинок, полученных в искусственных условиях;

3. Определить размеры молоди, выращенных из личинок в заводских условиях;

4. Установить среднюю массу молоди;

5. Выявить количество более жизнестойких особей.

1. Обзор литературы

1.1 Биологическая характеристика объекта исследований

Дальневосточный трепанг Apostichopus japonicus (Selenka) относится:

тип Иглокожие - Echinodermata,

класс Голотурии - Holothurioidea,

отряд Щитовиднощупальцевые - Aspidochirotida,

семейство Стихоподида - Stichopodidae,

род Апостихопус - Apostichopus,

вид А. japonicus (Selenka ).

Крупная голотурия, длина тела до 43 см, ширина до 9 см. Тело вытянутое, в сечении почти трапециевидное, брюшная сторона уплощена в отчетливую ползательную подошву. Покровы довольно плотные, щупалец 20. Многочисленные амбулакральные ножки расположены тремя полосами вдоль брюшных радиусов. На спинной стороне 4 ряда крупных конусообразных выростов, несущих папиллы. Рот более или менее субвентральный. Анус терминальный.

Окраска спинной стороны желтоватая, темно - зеленая, коричневато - красная или черная; спинные выросты могут отличаться от основного фона. Брюшная сторона зеленая, красная или черная. Тело трепанга удлиненное, вольковатое, с хорошо развитой ползательной подошвой. На переднем конце тела располагается рот, сдвинутый на брюшную сторону, на заднем терминально размещается анальное отверстие. Ротовое отверстие окружено растяжимой околоротовой мембраной, по переферии которой располагаются щупальца [1].

Распространение:

Дальневосточный трепанг тихоокеанский приазиатский субтропическо-низкобореальный вид, обитает на глубинах, обычно не превышающих 150 м, ареал дальневосточного трепанга очень обширен. В прибрежной акватории Дальневосточных морей России этот вид распространен у берегов Приморья и островов Сахалин, Монерон, Кунашир. Распространен у берегов Приморья, доходя на север до залива Владимира, у островов Монерон, по западному и восточному побережьям Южного Сахалина, в залив Анива, у острова Кунашир. Также вдоль западного и восточного побережья Японии на юг до залива Кагосима, у берегов Кореи, в Желтом море по азиатскому берегу на юг приблизительно до 35° с. ш. По материковому побережью он встречается от границы с Кореей, по всему зал. Петра Великого, включая расположенные на его акватории острова и к северу - востоку за м. Поворотный.

У Сахалина дальневосточный трепанг встречается в южном прибрежье острова вдоль западного япономорского побережья, у островов Монерон, в зал. Анива, лагуна Буссе, зал. Терпения.

Среда обитания:

Минимальная глубина, на которой встречается вид 0,5 м; молодь обнаружена и на меньших глубинах вплоть до литорали. Нижняя граница массового поселения трепанга обычно глубины 30 - 40 м. ДВ - трепанг обитает преимущественно в верхней сублиторали.

Трепанг - эвритермный вид и способен переносить, как относительно высокие, так и низкие температуры.

Трепанг переносит повышение температуры до 25 - 28,5⁰С. Способность адаптироваться к высоким температурам и обусловлена высоким уровнем клеточной теплоустойчивости у этого вида.

Трепанг не обладает осмотической лабильностью и очень чувствителен к колебаниям солености, при чем негативное влияние опреснения тем сильнее, чем выше температура воды. Голотурия способна возвращаться к нормальной жизнедеятельности после непродолжительного понижения солености до 15 ‰. При солености 5 ‰ ее жизненные функции нарушаются необратимо. Еще более стеногалинны личинки трепанга. Летальной для них может быть соленость менее 25 ‰. Трепанг редко встречается в районах побережья, опресняемых впадающими реками и мелководных участков полузакрытых и закрытых бухт, соленость которых надолго понижается в период сильных дождей. Молодые особи более устойчивы к понижению солености.

Диапазон типов грунтов, на которых обитает вид, чрезвычайно широк. Наиболее часто он встречается на твердых скалистых грунтах, каменистых россыпях, зарослях зостеры с чередованием свободных песчаных и песчано-илистых площадок. Трепанговые поля обычно располагаются вдоль побережья цепочкой в зависимости от конфигурации берега.

Питание:

Дальневосточный трепанг по типу питания - собирающий детритофаг [7].

Размножение:

Дальневосточный трепанг - раздельнополое животное. Внешне половой диморфизм не выражен. Соотношение полов в популяциях оказывалось 1:1. количество яиц, продуцируемое одной голотурией очень велико, в 1 г зрелой гонады может находиться 183-253 тыс. яиц. К 3 - 4 годам особь может приступать к нересту.

После выхода из яйцевой оболочки зародыш превращается в пелагическую личинку. Её строение в течение планктонного периода значительно изменяется, она проходит через несколько личиночных стадий: диплеврулу, аурикулярию, долиолярию, пентактулу.

Таблица 1. Время наступления стадий развития дальневосточного трепанга

Стадия развития	Время после оплодотворения	Размеры, мкм
Выход 1-го полярного тельца	30-35 мин	100
Выход 2-го полярного тельца	40-50 мин	100
1-е деление (2 бластомера)	1 ч - 1 ч 10 мин	100-150
2-е деление (4 бластомера)	2 ч	150
3-деление (8 бластомеров)	2 ч 25 мин - 2 ч 45 мин	150
4-е деление (16 бластомеров)	2 ч 45 мин -3 ч 15 мин	150
5-е деление (32 бластомера)	3-4 ч	150
Бластула	8-12 ч	160
Гаструла ранняя	16-18 ч	250
Гаструла поздняя	24-30 ч	300
Диплеврула	2-3 сут.	450-500
Аурикулярия ранняя	4-7 сут.	550-700
Аурикулярия поздняя	8-10 сут.	750-850
Долиолярия	11-18 сут.	400-500
Пентактула	19-29 сут.	550-600
Малек	30-35 сут.	800-1200
Молодой трепанг	75-80 сут.	2000-3000 (2-3 см)

Стадия диплеврула - (размер - 300 мкм) - продолжительность развития 2-4 суток, с развитым ресничным шнуром, явно выраженная двусторонняя симметрия, прозрачная.

Стадия ранней аурикулярии - (размеры 500-600 мкм) - продолжительность развития 3-8 суток, внутри желудка и задней кишки хорошо видны биение ресничек. Конфигурация ресничного шнура усложняется. С левой стороны личинки, вдоль желудка и примыкаясь к нему, тянется тонкая полоска целома, от которого отходит поровой канал, открывающийся гидропором.

Стадия средняя аурикулярии - (размеры 620-900 мкм), продолжительность развития 7-9 дней, в углах анальной лопасти формируются неправильной формы глыбки кальцита, причем в левом углу эта глыбка значительно крупнее. Сложная конфигурация ресничного шнура, образующего пять пар симметричных выростов.

Стадия поздней аурикулярии - (размеры 400-730 мкм) - 10-15 суток, под ресничным шнуром на концах лопастей лежат пять пар круглых лопастей - эластичных шаров, ротовая и анальная лопасти редуцируются, ресничный шнур на них исчезает, боковые лопасти сглажены.

Стадия долиолярии - (размеры 310-400 мкм), продолжительность развития 14-16 дней, менее прозрачная, бочкообразная форма, сохраняются круглые полости, внизу видны глыбки кальцита, у полностью развитой долиолярии 5 ресничных шнуров.

Стадия пентактула- (размеры 500-600 мкм) - продолжительность развития личинки 16-20 дней, первичные щупальца не втягиваются, способны передвигаться, можно различить под покровами скелетные иглы.

Морфология и биология молоди:

Мальки дальневосточного трепанга имеют вытянутое тело, спинная поверхность несет несколько выростов, на брюшной располагаются тремя рядами очень немногочисленные амбулакральные ножки. По мере роста животных количество ножек увеличивается, их тело приобретает свойственную взрослым животным форму.

Молодь питается бентосными диатомовыми водорослями и детритом.

Молодые и взрослые особи ДВ трепанга встречаются, как правило, в различных биотопах. Молодь встречена в небольших количествах на каменистых россыпях в мелководных участках закрытых бухт, в основаниях кустов зостеры, на водорослях, на анфельции. Определяющим фактором для выживания мальков трепанга степень его защищенности и наличие кормовой базы [1].

1.2 Физико - географическая характеристика б. Северная

Бухта Северная расположена в юго-западной части Амурского залива. Она довольно значительно вдается в материк и ограничена от Амурского залива мысом Мальцева и юго-западной оконечностью полуострова Янковского. Координаты: 131° 24'в.д; 42° 54'с.ш.

Южный берег б. Северная от м. Мальцева резко понижается и образует узкую песчаную косу, ограничивающую с севера внутреннюю часть бухточки Наездник. Западный берег низкий, отмелый и окаймлен песчано-гравийным пляжем.

Берег вершины бухты низкий и окаймлен пляжем и осушкой, а на пляже лежит толстый слой водорослей, выброшенных волнами. От берега вершины бухты впадает мелководная река Брусья и два ручья. От берега вершины бухты отходит отмель с глубинами не менее 5 м. На отмели в ее северо-восточной части находятся подводные камни и валуны.

Юго-западный брег образует своеобразную подковообразную бухточку Западную, вытянутую с юго-востока на северо-запад и ограниченную, мысами Сергеева и Щелкунов. Расстояние между мысами составляет около 2000 м. В материк этот наиболее продуктивный участок бухты вдается на севере на 180-200 м, и в центральной - до 400 м, и на юге - более чем на 600 м.

Бухточка не глубокая, глубина на траверсе мысов не превышают 12 м. и затем плавно уменьшаются в сторону берега.

Северная вершинная часть бухты наиболее мелководная и заиленная. Это, по- видимому, связанно с выносом ила из реки Брусья и из ручьев.

Глубины во входе в бухту колеблются от 11 до 20 м., северо-восточная часть бухты наиболее глубокая. Глубины здесь резко увеличиваются до 20 м.

В северо-восточный берег бухты Северная вдается бухта Миноносок. Это бухта фиордового типа, которая вытянута на восток. В ее вершину впадает большое количество мелких ручьев, и вода часто в ней распреснена.

Вся северная часть бухты Северная изрезана пологими фиордовыми бухтами.

Грунты в бухте Северная преимущественно песчаные, илисто-песчаные в западной части, а в северной и центральной переходят в илы. В кутовой части бухты расположены подводные валы, сложенные из песчано-галечных наносов. На содержание донных осадков оказывают существенное влияние выносы из устьев ручьев и реки Брусья.

На траверсе мыса Щелкунова и вблизи от него на расстоянии 120-150 м. грунты представлены гравием, щебнем, битой ракушей, камнями и валунами различной величины.

В центре бухты Северная распространена аккумулятивная пелитовая равнина. Спокойный гидродинамический режим и слабое волновое воздействие способствует аккумулятивным процессам, где происходит накопление тонкого пелитового материала.

Горловина б. Миноносок и северное побережье бухты Северная сильно заилены, также как и мелководье у м. Сергеева.

По характеру водообмена с открытым морем, степени проникновения и воздействия морских волн на берега и подводный склон б. Северная может быть отнесена к вторичным полузакрытым отмелым бухтам (Мануйлов, 1990).

Гидрологический режим в бухте нестабильный и во многом зависит от ветрового и конвективного перемешивания вод. Основные поступления водных масс из Славянского залива проходят вдоль северо-восточного побережья бухты в вершинную часть, где образуется круговорот, а выход их осуществляется ближе к центральной части бухты.

В апреле-мае в бухте наблюдается проникновение более холодных вод из Славянского залива. Они распространяются вдоль восточного побережья в вершинную часть бухты. Мыс Щелкунова является барьером на пути холодного течения, он также защищает эту часть бухты Северной от преобладающих в это время северо-западных ветров, вследствие чего образуется зона с менее выраженной динамикой вод. К концу круговороты, четко выраженные в апреле-мае, приобретают размытые очертания. Большое влияние на формирование гидрологического режима оказывает поступающие с материка распресненные воды реки Брусья.

Температурный режим б. Северная, также как и солевой подвержен значительным изменениям, как в разные сезоны, так и в разные годы. В целом температура воды находится в прямой зависимости от типа гидрологического режима и динамических процессов вод Славянского залива.

Годовые амплитуды температуры составляют 23,5-24,5°С - на поверхности и 20,0-21,0°С - в придонных слоях. Наибольшая разница между поверхностными и придонными температурами отмечаются в июне-июле (то 5,0 до 5,5°С) - в центральной и (3,0-3,6°С) - в мелководной части бухты. В остальные месяца эта разница незначительна. Ранней весной и до апреля температура воды как на поверхности, так и у дна практически одинакова.

В сезонном ходе изменения солености воды в бухте прослеживается максимум в зимний и минимум в летний периоды года. При сгонном ветре соленость воды увеличивается на 0,2‰_. Перепады солености между поверхностными и придонными слоями может достигать 11,6‰. Весной самая высокая соленость до 33‰ наблюдается у устья реки, это в поверхностных слоях. Далее в мористую часть бухты соленость повышается, но очень незначительно. Летом, например в июне, самая низкая соленость на поверхности четко прослеживается в участках у устьев рек и в мористой части бухты значения ее также невысокие (до 20‰). Такое понижение солености воды летом происходит вследствие берегового стока и усиление осадков.

В придонном слое воды, как весной, так и летом соленость высокая в пределах 31 -33,3‰. В осеннее время в период ливневых дождей и тайфунов соленость воды очень низкая (до 5,0‰), которая может оставаться в таких пределах в течении недели.

В сезонном изменении содержания кислорода в б. Северная прослеживается два максимума. Первый весной - 8,3 - 8,5 мг/л и второй (такой же) зимой, что связанно с фотосинтезом. При сгонных ветрах содержание кислорода понижается на 2-5%.

Абсолютный максимум относительного содержания кислорода в весеннее - летний период может достигать больших величин (от 123 до 150%). В придонном слое насыщенность отмечается в апреле-мае и осенью. В остальное время года процентное содержание кислорода несколько ниже и составляет 85-97%.

Изменение рН водной среды связаны с процессами образования и распада органического вещества. Величина коррелируется с изменением температуры воды, солености и содержанием кислорода. рН на поверхности зимой уменьшается, а летом увеличивается. На рН в значительной степени сказывается влияние стока рек, впадающих в бухту.

Щелочность, как известно, позволяет проследить распространение речных стоков. Влияние речного стока уменьшает щелочность, а подток вод из открытого моря увеличивает ее.

Биогенные вещества происходят от жизнедеятельности морских организмов. Основная роль в повышении количества питательных солей принадлежит материковому стоку. В летнее время содержание их минимально, а зимой - максимально.

Эколого-токсикологическая ситуация в б. Северная приемлема для марикультуры. Загрязненность воды не велика. Концентрации тяжелых металлов (цинка, меди, свинца) в кутовой части ниже, чем в центре и на выходе, и по всей толще воды не превышает ПДК.

Донные беспозвоночные. Бухта Северная довольно богатая по содержанию промысловых беспозвоночных. В зарослях водорослей и морских трав обитают ракообразные, такие как чилимы, раки - отшельники, камчатский краб, краб стригун и прибрежные крабы. Из моллюсков часто встречаются хитоны, брюхоногие: умбониум, литорины, нептунеи, букциниды, мурициды (рапана, церостома, оценебра, нуцелла и бореотрофон). Двустворчатые моллюски представлены разнообразными видами - это тихоокеанская мидия, мидия Грея, модиолис, мускулисты, септиферы, приморский и японский гребешки, калитака, макома и др.

Наиболее часто встречающиеся в б. Северная морские организмы: Из головоногих моллюсков можно найти кальмара, осьминога и каракатицу. Из представителей иглокожих в бухте есть голотурия, трепанг, три вида ежей (черный, серый, сердцевидный). Повсеместно на акватории бухты присутствуют морские звезды: гребешковая, амурская, дистоластерия, евастория и офиуры. Так приморский гребешок обитает на глубинах от 2 до 20 м., преимущественно на илисто-песчаном или слегка заиленном грунте. Плотность гребешка составила от 0,5 до 2 экз/м². это выявлено по данным собранным в юго-восточной части бухты на 4-х разрезах в 1996 г.

Другой вид - калитака обнаружена, в центральной части бухты с максимальной плотностью до 8 экз/м². Глицимерис с максимальной плотностью до 20 экз/м² был обнаружен у мыса Щелкунова. Макома найдена в юго-западной части бухты с наибольшей плотностью 2 экз/м² вблизи м.Сергеева. Мидия Грея образует свои скопления с плотностью до 10 экз/м² в юго-восточной части бухты.

Из иглокожих черный и серый ежи обнаружены также в юго-восточной части бухты ближе к мысу Сергеева, с плотностью до 2 экз/м² (серый еж), а черный еж с плотностью 2 экз/м², найден у м. Щелкунова и с большей плотностью у м. Сергеева.

Рис. 1. Карта-схема участка марикультуры НЭЦМК Дальрыбвтуза в бухте Северной Славянского залива.



Рис. 2. Бухта Северная Амурский залив Японское море.

2. Материал и методика

Работы проводились в летний период 2007- 2008 годах в условиях мини-завода Научно-экспериментального центра марикультуры Дальрыбвтуза в б. Северная и включали в себя следующие этапы: отбор производителей, стимуляция нереста, выращивание планктонных личинок, выращивание кормовых планктонных микроводорослей, выращивание прикрепленных диатомовых микроводорослей, приготовление дополнительных кормов, определение плотности и размеров. В работе были использованы методики, разработанные Н. Д. Мокрецовой, И. В. Проскуренко, Г. М. Рубан, Г. С. Гавриловой, С. Ф. Авраменко, В. Г. Марковцев, Ю. Э. Брегман, В. Ф. Пржеменецкая [2,3,4]. Методики были адаптированы к условиям бухты Северная. [5]. Принципиальная схема культивирования трепанга в искусственных условиях показана на рисунке 3 [3].

Рис. 3. Схема культивирования трепанга в искусственных условиях.

Отбор и транспортировка. Отбор производителей трепанга производился небольшими партиями водолазным способом в б. Северная, Транспортировку животных осуществляли в 100-л емкостях. В лабораторных условиях производители были помещены в 300-литровые бассейны при температуре воды равной таковой в местах сбора (17°С). Плотность посадки производителей - 10 экз./л. Смена воды осуществлялась 3 раза в сутки на 1/3 объема при постоянной аэрации [2].

Стимуляция нереста. Для получения зрелых половых продуктов у производителей после периода адаптации осуществлялась стимуляция гаметогенеза и нереста. Применялись методы температурной стимуляции и подсушивание, т.е. трепанга оставляют на час без воды, а потом вновь набирают воду. Температуру воды повышали на 0,5-1°С каждые двое суток, постепенно доводя ее до 18-20°С [4].

Нерест и получение эмбрионов. Процессу нереста предшествует характерное поведение голотурий. В искусственных условиях перед началом икрометания животные активно передвигаются, как правило, располагаясь на вертикальных стеках сосудов, принимая характерную S-образную позу, и совершают раскачивающиеся движения передней частью тела, не прикрепленной в это время к стенкам бассейнам. Во время нереста самок от самцов можно отличить по цвету половых продуктов. У самцов они светлые от белого до бежевого, у самок более яркие - от розового до оранжевого. Трепанг обычно нереститься ночью, поэтому после проведения стимуляции нужно ночью проверять наличие нереста через каждые два часа. Наличие икры в емкости можно визуально определить по замутненной воде, если производители уже закончили нерест. После берут пробу воды наличие и количество эмбрионов, далее взрослых особей отсаживают, а эмбрионов помещают в емкость для выращивания личинок.

Выращивание планктонных личинок. Для выращивания планктонных личинок применялась фильтрованная морская вода с тонкостью очистки 5 мкм. Температура в бассейнах поддерживалась на уровне 21°С. Подмена воды осуществлялась один раз в сутки на Ѕ объёма. Для предотвращения вымывания личинок слив воды производился через сито с размером ячеи 100 мкм.

Аэрацию воды и кормление личинок осуществляли на вторые-третьи сутки с момента нереста. В качестве корма использовали планктонные микроводоросли, из расчёта 40 тыс.кл./мл. в сутки (Dunaliella salina - 20 тыс.кл./мл., Chaetoceros muelleri - 20 тыс.кл./мл.). Корм задавали три раза в сутки. В рацион личинок были включены дополнительные корма - дрожжи Rhodotorula sp (красные дрожжи) и хлебные дрожжи.

Оседание личинок происходило на гофрированные ПХВ-пластины, на поверхности которых предварительно выращивали прикрепленные диатомовые микроводоросли. Подготовленные таким образом субстраты помещали в бассейны с личинками, начиная с момента массового перехода личинок на стадию долиолярии.

Определение плотности и размеров личинок. Пробы брали ежедневно с помощью бюретки, троекратно из разных мест емкости по 50 мл, а затем пипеткой по 10 мл для просчета личинок в камере Богорова под бинокуляром. Также под бинокуляром с помощью микрометра определяли размеры.

Определение количества, размеров и средней массы молоди. Для установления численности молоди считали количество особей на пластинах, на сетках и также молодь, которая осела на дне и стенках. В емкости из корзин брали по три пластины и просчитывали количество трепанга, из установленной численности методом пропорции определяли общее количество ювенилов (жизнестойкая молодь). При выпуске молоди из емкости на анфельцию, смывали особей со стенок и дна с водой в ведро, брали стаканом воду вместе с ювенилами, просчитывали их количество на объем стакана и с помощью метода пропорции на объем воды в ведре. При просчете количества молоди на пластинах была определена доля пигментированных особей, затем рассчитали их процент.

Измеряли размеры молоди в произвольном порядке.

Определили среднюю массу одной особи молоди трепанга: ювенилов поместили на газовую сеточку - взвесили, методом разности нашли массу молоди в пробе, далее определили отношение массы всей молоди в пробе к количеству штук - получили среднюю массу одного экземпляра молоди.

3. Результаты

Материалы, положенные в основу работы:

Таблица 2. Условия проведения нерестов и результат

Дата нереста	Температура воды, °С	Способ стимуляции	Результат
26 июня 2007 г.	18	Без стимуляции, естественным образом	Получена партия молоди, с низким процентом выживаемости. Длительность развития до оседания 21 день
24 июля 2007 г.	20,5	Температурный метод, с применением метода сушки.	Получена партия молоди с высоким процентом выживаемости. Длительность развития до оседания 12 дней
1 июля 2008 г.	17	Температурный способ	Получена партия молоди с выживаемостью от бластулы 2,3%, продолжительность развития 16 суток.
11 июля	20,5	Температурный метод, с применением метода сушки	Личинки погибли на стадии поздней аурикулярии, не смогли перейти на следующую стадию, произвести метаморфоз.

Нерест и получение эмбрионов. Нерест произошел 26 июня ночью при температуре воды 18^оС, естественным способом без стимуляции. Утром в емкости с производителями были обнаружены эмбрионы на стадии бластулы, размером 100 мкм. Эмбрионы были пересажены в личиночные емкости с плотностью посадки 10 экз./мл.

Выращивание планктонных личинок трепанга. Через 2 суток после нереста эмбрионы достигли стадии гаструлы и начали переход на стадию диплеврулы. Численность личинок сократилась, в личиночных емкостях было обнаружено много уродливых форм, а также осевшие на дно мертвые экземпляры. Выживаемость составляла при этом 90% (табл. 4). Стадия диплеврулы продолжалась 1 сутки, средний размер личинок составлял 225х350 мкм., плотность посадки 7,2 экз./мл. (табл. 3), а выживаемость 80% (табл. 4).

Стадия аурикулярии длилась 16 суток, включая раннюю, среднюю и позднюю, по мере развития средние размеры личинок увеличивались от 342х530 мкм. до 563х795 мкм., в ходе метаморфоза на стадии долиолярии (1 сутки) личинка сворачивается и приобретает форму бочонка, в результате этого размер ее уменьшается до 265х400 мкм., средний размер пентактулы (2 суток) - 237Х530 мкм. (табл. 3).

Таблица 3. Продолжительность стадий, средний размер и плотность посадки личинок

Стадия	Продолжительность развития стадии, сут.	Средняя плотность посадки личинок, экз./мл.	Средний размер, мкм.
Бластула	1	10	100
Гаструла	2	9	158х208
Диплеврула	1	7,2	225х350
Ранняя аурикулярии	4	4,03	342х530
Средняя аурикулярия	4	1,33	450х663
Поздняя аурикулярия	8	0,7	563х795
Долиолярия	1	0,43	265х400
Пентактула	2	0,29	237х530

В развитии аурикулярии отмечался самый низкий процент выживаемости, максимальный отход был при переходе со стадии ранней аурикулярии на стадию средней аурикулярии (33%) из-за затянутого развития. От поздней аурикулярии до долиолярии и от пентактулы до осевшей молоди процент выживания был довольно высокий 60,4% и 66,4% соответственно. Общий процент выживаемости от диплеврулы до осевшей молоди составляет 2,7% (табл. 4).

Численность личинок снижалась на протяжение всего развития, но наиболее резко падала с 30 июня по 3 июля, что соответствует стадиям ранней и средней аурикуляриям (рис. 2). На стадии аурикулярии выявлен наиболее высокий отход и наиболее замедленное развитие (табл. 3, 4; рис. 4). Далее изменение численности шло без резких скачков.

Таблица 4. Выживаемость личинок при переходе от стадии к стадии

Стадии	Выживаемость, %
От бластулы до гаструлы	90
От гаструлы до диплеврулы	80
От диплеврулы до ранней аурикулярии	56
От ранней аурикулярии до средней аурикулярии	33
От средней аурикулярии до поздней аурикулярии	54
От поздней аурикулярии до долиолярии	60,4
От долиолярии до пентактулы	67,2
От пентактулы до осевшей молоди.	66,4
От диплеврулы до осевшей молоди	2,7
От бластулы до осевшей молоди	1,916

Рис 4. Изменение численности личинок от нереста 26.06.2007 г.

Вероятной причиной низкой выживаемости личинок может быть недостаточная зрелость половых продуктов производителей. Об этом свидетельствует и замедленное развитие личинок на стадии аурикулярии (табл. 3).

С наступлением стадии долиолярии через 19 суток после нереста, в личиночные емкости были выставлены субстраты для оседания личинок с прикрепленными диатомовыми микроводорослями. На следующие сутки начался переход личинок на стадию пентактулы и оседание их на субстрат.

Нерест и получение эмбрионов от 24.07.2007 г. Нерест произошел при температуре воды 20,5°С. Стимулировали производителей температурным методом, с применением метода сушки. Определили размер бластул - 175мкм.

Выращивание планктонных личинок трепанга. Через 1 сутки после нереста эмбрионы достигли стадии гаструлы, с плотностью посадки 2,9 экз./мл. (табл. 5 ), и начали переход на стадию диплеврулы, выжило при этом 79,5% личинок (табл. 6). Стадия диплеврулы продолжалась 1 сутки, средний размер личинок составлял 225х300 мкм, плотность посадки 0,93 экз./мл, плотность стала меньше, так как личинок пересадили в емкость большим объемом. Стадия аурикулярии длилась 7 суток, включая раннюю, среднюю и позднюю, по мере развития средние размеры личинок увеличивались от 300х500 мкм. до 600х885 мкм. (табл. 5). Выживаемость на стадии аурикулярии была довольно высокой - более 80% (табл. 6).

Таблица 5. Продолжительность стадий, средний размер и плотность посадки личинок нереста от 24.07.07

Стадия	Продолжительность развития стадии, сут.	Средняя плотность посадки личинок, экз./мл.	Средний размер, мкм.
Бластула	1	4	175
Гаструла	1	2,9	175х175
Диплеврула	1	0,93	225х300
Ранняя аурикулярии	2	0,84	300х500
Средняя аурикулярия	2	0,71	471х779
Поздняя аурикулярия	3	0,63	600х885
Долиолярия	1	0,4	285х450
Пентактула	2	0,39	307х500

Наибольшая смертность отмечена при выращивании молоди (32%), так как подращивание занимало наибольший промежуток времени (54 дня). Так же высокая смертность отмечалась при переходе от стадии поздней аурикулярии к долиолярии, что объясняется метаморфозом (64%).

Выживаемость личинок от диплеврулы до молоди от нереста 26 июня была довольно низкой - 2,7%, в то время как у личинок, полученных в 24 июля, этот показатель составил 13,4%, выживаемость нереста от 26 июня от бластулы до молоди 1,916% также низкая, у нереста от 24.07.08 г. 10,4% (табл. 6).

Личинки, полученные до начала массового нереста трепанга в природе (26 июня) отличались медленным переходом от стадии к стадии и большим отходом (табл. 3, 4). По-видимому, это связано с низкой температурой, при которой происходило раннее личиночное развитие (18-19°С) и, возможно, недостаточной зрелостью производителей. Высокая скорость развития и выживаемость личинок (табл.5, табл.6, рис.5), полученных 24 июля, вероятно, связана с приуроченностью к естественному нересту в природе, и, как следствие, с более качественными половыми продуктами отнерестившихся особей, а также с более высокой температурой раннего личиночного развития (20,5-23°С).

Таблица 6. Выживаемость при переходе от стадии к стадии

Стадии	Выживаемость, %
От бластулы до гаструлы	97,5
От гаструлы до диплеврулы	79,5
От диплеврулы до ранней аурикулярии	89,8
От ранней аурикулярии до средней аурикулярии	85
От средней аурикулярии до поздней аурикулярии	88
От поздней аурикулярии до долиолярии	64
От долиолярии до пентактулы	97,5
От диплеврулы до осевшей молоди	13,4
От пентактулы до осевшей молоди.	32
От бластулы до осевшей молоди	10,4



Рис. 5. Изменение численности личинок, полученных в результате нереста 24.07.07 г.

Анализ данных о скорости развития, размерах и выживаемости личинок свидетельствует о возможности их получения и выращивания в условиях мини-завода с конца июня до середины августа, хотя наилучшие показатели были отмечены во второй половине июля - время массового нереста в бухте Северная.

Нерест и получение эмбрионов. Нерест произошел 1 июля 2008 г. при температуре воды 17^оС после стимуляции производителей температурным способом. Размер эмбрионов на стадии бластулы составлял 150 мкм. На стадии гаструлы эмбрионы были рассажены в 2 личиночные емкости, объемом 500 л. и 600 л. с плотностью посадки 2,8 экз./мл. и 2,79 экз./мл.

Выращивание планктонных личинок трепанга. 2 июля эмбрионы достигли стадии диплеврулы. При переходе от стадии гаструлы к стадии диплеврулы численность личинок сократилась, выживаемость составила 90,2% (табл. 8), личинки были помещены в 2 емкости объемом 1000 л. На следующий день личинки перешли на стадию ранней аурикулярии. На этой стадии личинки находились трое суток, при этом средний размер составил 336х519 мкм. (табл. 7). Стадия аурикулярии длилась 12 суток, включая раннюю, среднюю и позднюю. По мере развития средние размеры личинок увеличивались от 336х519 мкм. до 566х842 мкм., в ходе метаморфоза на стадии долиолярии (1 сутки) личинка сворачивается и приобретает форму бочонка, в результате этого размер ее уменьшается до 250х350 мкм., средний размер пентактулы (2 суток) составил 240х520 мкм. (табл. 7).

Таблица 7. Продолжительность стадий, средний размер и плотность посадки личинок.

Стадия	Продолжительность развития стадии, сут.	Средняя плотность посадки личинок в емкость № 1, экз./мл.	Средняя плотность посадки личинок в емкость № 2, экз./мл.	Средний размер, мкм.
Бластула	1	15	150
Гаструла	1	2,8	2,79	167х217
Диплеврула	1	2,6	2,45	189х313
Ранняя аурикулярии	3	0,845	1,197	336х519
Средняя аурикулярия	6	0,595	0,745	485х707
Поздняя аурикулярия	3	0,34	0,39	566х842
Долиолярия	1	0,23	0,27	250х350
Пентактула	2	0,18	0,25	240х520

Численность личинок снижалась постепенно на протяжении всего развития (рис. 6). Наименьшая выживаемость отмечена при метаморфозе от стадии поздней аурикулярии до стадии долиолярии и составила 58% (табл. 8) Большой отход наблюдался на стадии ранней молоди, выживаемость от стадии диплеврулы до осевшей молоди на день выпуска составила 3,7%, выживаемость от бластулы до осевшей молоди 2,3%.

Таблица 8. Выживаемость личинок при переходе от стадии к стадии

Стадии	Выживаемость, %
От бластулы до гаструлы	68,2
От гаструлы до диплеврулы	90,2
От диплеврулы до ранней аурикулярии	74
От ранней аурикулярии до средней аурикулярии	65,3
От средней аурикулярии до поздней аурикулярии	64
От поздней аурикулярии до долиолярии	58
От долиолярии до пентактулы
От диплеврулы до осевшей молоди	3,7
От пентактулы до осевшей молоди.	24
От бластулы до осевшей молоди	2,3

Рис. 6. Изменение численности личинок

С наступлением стадии долиолярии через 15 суток после нереста, в личиночные емкости были выставлены субстраты для оседания личинок с прикрепленными диатомовыми микроводорослями. На следующие сутки начался переход личинок на стадию пентактулы и оседание их на субстрат.

Нерест и получение эмбрионов от 11.07.2008 г. Нерест произошел при температуре воды 20,5°С. Стимулировали производителей температурным методом, с применением метода сушки.

Выращивание планктонных личинок трепанга. Личинки на стадии гаструлы находились в трех емкостях - объемами 600 л., 500 л. и 500 л. Через 1 сутки после нереста эмбрионы достигли стадии диплеврулы и были рассажены в 4 емкости объемами 1000 л., с плотностью посадки в емкости №1 - 2,682 экз./мл., в емкости №2 - 3 экз./мл., в емкости №3 - 1,8 экз./мл., в емкости №4 - 1,5 экз./мл. (табл. 9). При переходе на стадию ранней аурикулярии выживаемость личинок составила 73,8% (табл. 10). Стадия диплеврулы продолжалась 1 сутки. Средний размер личинок составлял 217х383 мкм., плотность уменьшилась, так как личинок рассадили в емкости большего объема. 21.07.08 г. в емкости №3 уменьшили объем воды до 700 литров. 22.07.08 г. взяв пробу со дна обнаружили много личинок на более ранних стадиях развития, а также много погибших личинок на дне, поэтому емкость слили. Стадия аурикулярии длилась 12 суток, личинок на стадии долиолярии не обнаружили, при этом наблюдалось много личинок на стадии ранней и средней аурикулярии, а также много уродливых форм, слабо двигающихся. Средние размеры ранней аурикулярии были равны 338х554 мкм., средней аурикулярии - 455х674 мкм. (табл. 9). Личинки поздней аурикулярии имели меньшие размеры по сравнению с личинками от нереста 1 июля - 463х669 мкм. (табл. 9). Так как, личинки затормозились в развитии, не правильно развивались, имели небольшие размеры и численность их сильно сократилась емкости слили.

Таблица 9. Продолжительность стадий, средний размер и плотность посадки личинок нереста от 11.07.08 г.

Стадия	Продолжительность развития стадии, сут.	Средняя плотность посадки личинок емк №1, экз./мл.	Средняя плотность посадки личинок емк №2, экз./мл.	Средняя плотность посадки личинок емк №3, экз./мл.	Средняя плотность посадки личинок емк №4, экз./мл.	Средний размер, мкм.
Бластула	1		140
Гаструла	1	5,22	8	4,6	-	142х192
Диплеврула	1	2,682	3	1,8	1,5	217х383
Ранняя аурикулярии	3	2,5	1,4	1,34	1,39	338х554
Средняя аурикулярия	4	2,13	0,67	0,91	1,25	455х674
Поздняя аурикулярия	5	1,132	0,35	0,446	0,58	463х669

Таблица 10. Выживаемость при переходе от стадии к стадии.

Стадии	Выживаемость, %
От бластулы до гаструлы	93,4
От гаструлы до диплеврулы	95,2
От диплеврулы до ранней аурикулярии	73,8
От ранней аурикулярии до средней аурикулярии	73,6
От средней аурикулярии до поздней аурикулярии	44,3

Рис. 7. Изменение численности личинок, полученных в результате нереста 11.07.08 г.

Вероятными причинами аномального развития и гибели большого количества личинок являются: низкая соленость воды, вследствие распреснения бухты из-за обильных осадков, а также высокая плотность посадки личинок на ранних этапах развития (табл. 10).

Таким образом, в ходе работы был проведен нерест дальневосточного трепанга, получена партия эмбрионов, из которых были выращены личинки до стадии осевшей молоди.

Для повышения эффективности выращивания необходим тщательный контроль за качеством воды, строительство отстойника большего объема для увеличения запаса воды на случай распреснения, а также контроль плотности посадки личинок.

Выращивание молоди. В 2007 г. впервые на базе центра марикультуры была собрана информация о размерах, средней массе и доле пигметированных особей. Пигментированные особи являются показателем жизнестойкости молоди, как правило они более крупных размеров. К сожалению ни литературных данных, ни данных с других заводов и центров разведения о размерной структуре молоди трепанга не имеется и требует дальнейших исследований.

Минимальная длина молоди трепанга составляет 0,8 мм, максимальная - 7 мм. (табл. 5). Модальный класс составили особи размером от 1,1 до 2,1 мм.

Рис 5. Частота распределения длины тела ювенильных особей трепанга.

Таблица 11. Статистика размеров молоди на момент отсадки в естественную среду.

Количество измеренной молоди, шт.	Стандартное отклонение	Квадратичное отклонение	Средняя	Min, мм.	Max, мм.	Ошибка среднего
176	1,505	396,26	2,95	0,8	7	- 1,23

Определили среднюю массу молоди трепанга (табл. 12).

Таблица 12. Определение средней массы молоди трепанга.

Количество молоди, шт.	Масса молоди с сеткой,г.	Масса сетки,г.	Навеска, г.	Средняя масса 1 экземпляра молоди, г.
136	2,18	1,91	0,27	0,002

При просчете количества молоди на пластинах было определено и количество пигментированных особей, затем подсчитали долю в % (табл. 13). Во время подращивания молоди для разрежения плотности посадки и поддержания чистоты воды некоторые пластины были перенесены из емкости №1 в емкость №1А и №13. В емкости №1 среднее количество экземпляров молоди на пластину составляло 296 экз., общее количество на пластинах (124) - 36750 экз., количество пигментированных - 0,7%. В емкости №1А среднее количество экземпляров на одну пластину - 241,5 экз., на всех пластинах (94) - 22704 экз., количество пигментированных - 0,095%., в емкости №13 на одну пластину в среднем приходилось 220 экз., на все (140) - 30826 экз., доля пигментированных - 1,75% (табл. 6). Возможно, что доля пигментированных особей в емкости №13 больше, так она находилась в более затемненном месте, дальше от окна.

Таблица 13. Количество пигментированных особей на пластинах.

№ емкости	Среднее количество на пластину,шт.	Общее количество на пластинах,шт	Количество пигментированных,%
№1	296	36750	0,703
№1А	241,5	22704	0,095
№13	220	30826	1,75

В 2008 г. на базе центра марикультуры была собрана информация о размерах, средней массе и количестве жизнестойкой молоди трепанга, показателем чего является пигментация.

Минимальная длина молоди трепанга равняется 1 мм., а максимальная 7 мм. Модальный класс составили особи размером от 1,1 до 2,1 мм. В 2008 г. более многочисленными были модальные классы от 0,1-1,1 и от 2,1-3,1 (рис. 5, рис. 7) по сравнению с 2007 г., классы 1,1-2,1 численно практически равны, а классы более крупных размеров в 2007 г. насчитывают большее количество особей, но в общем их численность в 2007 и 2008 годах небольшая.

Рис.7 Частота распределения длины тела ювенильных особей трепанга.

Таблица 14. Статистика размеров молоди трепанга на момент отсадки в естественные условия.

Количество измеренной молоди, шт.	Стандартное отклонение	Квадратичное отклонение	Средняя	Min, мм.	Max, мм.	Ошибка среднего
203	1,36	371,02	2,64	1	7	- 1,17

Определили пигментированных т.е., более жизнестойких особей трепанга. (табл. 15).

В емкости №1.2 среднее количество экземпляров молоди на пластину составляло 75,3 экз., общее количество на пластинах (101) - 7605 экз., количество пигментированных - 1,3%. В емкости №1.3 среднее количество экземпляров на одну пластину - 71 экз., на всех пластинах (120) - 8520 экз., количество пигментированных - 2,2%; в емкости №4.1 на одну пластину в среднем приходилось 67,3 экз., на все (85) - 5720 экз., доля пигментированных - 3,5 % (табл. 15). Доля пигментированных особей в емкости №4.1 больше, так как плотность посадки разрежена, поэтому корма и кислорода имеются в достаточном количестве, а степень загрязнения продуктами метаболизма меньше, поэтому молодь лучше растет, имеет большую массу и как показатель жизнестойкости - высокий процент пигментированных.

Таблица 15. Количество пигментированных особей на пластинах.

№ емкости	Среднее количество на пластину, экз.	Общее количество на пластинах, экз.	Количество пигментированных,%
1.2	75,3	7605	1,3
1.3	71	8520	2,2
4.1	67,3	5720	4,5

Определили среднюю массу одной особи молоди трепанга взяли осевшую молодь трепанга с пластины (100 экз.) и поместили в стакан с водой. Далее воду слили, а ювенилов поместили на газовую сеточку - взвесили (4,14 г.), методом разности нашли массу молоди в пробе (0,77 г.), далее определили отношение массы всей молоди в пробе к количеству штук - получили среднюю массу одного экземпляра молоди (0,0077 г.).

Таблица 16. Определение средней массы молоди трепанга.

Количество молоди, шт.	Масса молоди с сеткой, г.	Масса сетки, г.	Навеска, г.	Средняя масса 1 экземпляра молоди, г.
100	4,14	3,37	0,77	0,0077

4. Охрана труда и техника безопасности

Общие требования безопасности.

1. Лица, работающие в производственных цехах рыбоводных предприятий, должны хорошо знать устройство, правила его эксплуатации, обслуживания и в обязательном порядке пройти инструктаж по охране труда к работе не допускаются.

2. Работающий в производственных цехах рыбоводных предприятий обязан соблюдать правила внутреннего трудового распорядка, установленные на предприятии. Работник не должен приступать к выполнению разовых работ по специальности до получения целевого инструктажа.

3. Продолжительность рабочего времени работника не должна превышать 40 часов в неделю.

4. Работник должен знать, что вредными и опасными производственными факторами, которые могут действовать на него в процессе выполнения работ, являются: травмы, наносимые вращающимися частями оборудования, падения с высоты и падение в воду при раздаче кормов, поражение электротоком.

Чтобы избежать травм устройство производственных цехов должно выполняться по определенным правилам.

4.1. Работа в помещениях с размещенными в них рыбоводными бассейнами, лотками, инкубаторами и т. п. связана с использованием большого количества воды, поэтому полы этих помещений должны быть покрыты нескользящими пластинами, а также должны быть водостойкими, плотными, ровными, без щелей и выбоин и иметь уклон для стока в канализационные сети.

4.2. Трапы следует располагать по возможности в стороне от рабочих мест. Количество трапов и диаметр отводящих канализационных труб должны обеспечить быстрое удаление сточных вод на любом участке помещения. Уклон к трапам должен быть не более 0,02.

4.3. Эксплуатация транспортного, кормоприготовительного оборудования, станков, установок, приспособлений и т.д. должны осуществляться в соответствии с правилами их технической эксплуатации с обязательным соблюдением техники безопасности.

4.4. Все оборудование на предприятии должно иметь защитные ограждения выступающих частей, валов, шпонок, зубчатых колес, маховиков, шкивов и т.д. Для удобства очистки оборудования от пыли и грязи и для производства необходимого ремонта ограждения должны быть съемными.

4.5. Во избежание поражения электротоком всё электрооборудования должно иметь надежное соединение с землей.

4.6. Люки, ямы, смотровые колодцы и каналы в полях производственных помещений должны быть закрыты прочными крышками на уровне с полом, а при открывании их на время ремонтных работ необходимо устанавливать барьерные ограждения. 1.5. При работе в производственных цехах рыборазводных предприятий рабочим должна выдаваться положенная по нормам спецодежда и обувь. 1.6. Работник должен соблюдать правила пожарной безопасности, запрещается начинать работу без средств пожаротушения. Курить разрешается только в специально отведенных местах.

5. О замеченных нарушениях требований безопасности на своем рабочем месте, а также о неисправности оборудования, приспособлений, инструмента и средств индивидуальной защиты работник должен сообщить своему непосредственному руководителю и не приступать к работе до устранения нарушения и неисправностей. Заметив нарушения требований безопасности другим работником, следует предупредить его о необходимости их соблюдения.

6. Работник должен знать и оказывать доврачебную помощь пострадавшему в соответствии с типовой инструкцией по оказанию доврачебной помощи при несчастных случаях.

7. Работник должен соблюдать правила личной гигиены: перед посещением туалета, курением, приемом пищи мыть руки с мылом, не хранить и не употреблять на рабочем месте пищу и питьевую воду.

Требования безопасности при эксплуатации маломерных судов

1.1. К управлению маломерными самоходными судами допускаются лица. Которые прошли курс специального обучения. Сдали экзамены и имеют специальное удостоверение на право вождения маломерных судов.

1.2. Работающий с маломерными судами обязан соблюдать правила внутреннего трудового распорядка, установленные на предприятии.

Работник не должен приступать к выполнению разовых работ по специальности до получения целевого инструктажа.

Выводы

1. Высокая скорость развития и выживаемость личинок, полученных 24 июля по сравнению с нерестом 26 июня связана, с приуроченностью к естественному нересту в природе и более высоким температурам развития личинок на ранних этапах развития. Личинки от нереста 11.07.08 г. долго находились на стадии поздней аурикулярии, не смогли перейти на стадию долиолярии и погибли, из-за влияния опресненной воды и высокой плотности на ранних этапах развития. Смертность личинок нереста 1.07.08 г. была небольшой, так как воздействие опресненной воды пришлось на более поздние сроки их развития.

2. В основном средний размер личинок, полученных 24.07.07 г. немного больше личинок от нереста 26.06.07 г. Средние размеры диплеврул практически равны. Средние размеры гаструл от нереста 11.07.08 г. меньше (142х192), чем от нереста 1 июля (167х217). Средние размеры диплеврул, ранней и средней аурикулярий примерно одинаковые, а дальше происходит обмельчание нереста от 11.07.08 г. и средние размеры поздних аурикулярии меньше, чем от нереста 1 июля.

3. Особи поколения 2007 г. в моей выборке имеют в среднем больший размер - 2,95 мм.

4. Средняя масса одной особи молоди трепанга составляла 0,002 г. В 2008 г. средняя масса молоди больше 0,0077 г.

5. Доля пигментированных особей была максимальной - 1,75% в более затемненной емкости. Количество пигментированной молоди было больше - 4,5% в емкости №4.1 с меньшей плотностью посадки.

Список литературы

1. В. С. Левин. Дальневосточный трепанг. Биология, промысел, воспроизводство. Санкт - Петербург. «Голанд» 2000 г.

2. А.с. № 794791, МКЛ³АО1К 61/00. Способ культивирования трепанга/ Н.Д. Мокрецова, И.В. Проскуренко, Г.М Рубан. Заявл. 25.06.79. №2813974. Опубл. 8.09.80 г.

3. Временная инструкция по биотехнологии заводского способа получения и выращивания личинок трепанга до стадии оседания / Н.Д. Мокрецова, Г.С. Гаврилова, С.Ф. Авраменко. - Владивосток: ТИНРО, 1988.

4. Культивирование тихоокеанских беспозвоночных и водорослей /В.Г. Марковцев, Ю.Э. Брегман, В.Ф. Пржеменецкая и др.-М.: Агропроммиздат, 1987 г.

5. Патент №2198509 Способ выращивания личинок трепанга до жизнестойкой стадии. Авт. Гостюхина О.Б., Бровкина Е.П., Осьмачко В.А., Шатковская О.В.

6. Алексин М. Трепанг и его промышленное значение. - СПб., 1912. - (Рыбные промыслы Дальнего Востока; Вып. 6).

7. Баранова З.И. Тип иглокожие (Eсhinodermata). Животные и растения залива Петра Великого. - Л.: Наука. 1976 г.

8. Лоция северо-западного берега Японского моря от реки Туманной до м. Белкина. Министерство обороны СССР.

9. Гидробиологические исследования заливов и бухт Приморья; Владивосток: ДВНЦ АН СССР, 1984 г.

10. Лебедев А.М. Ресурсы дальневосточного трепанга Apostichopus japonicus в Приморском крае. Владивосток - Дальнаука - 2006. - С.140.

11. Морская аквакультура. П. А. Моисеев, А. Ф. Карпевич, О. Д. Романцева и др.. - М.: Агропромиздат, 1985 г.)

12. Аквакультура. В. И. Козлов, А. Л. Никифоров-Никишин, А. Л. Бородин. Москва, «КолосС», 2006 г.