Enterobacteria как возбудители кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных

Содержание

Введение

1. Роды и виды семейства Enterobacteria

1.1 Род Eshcerichia

1.2 Salmonella

1.3 Citrobacter

1.4 Klebsiella

1.5 Enterobacter

1.6 Proteus

1.7 Morganella

1.8 Providencia

1.9 Yersinia

1.10 Edwardsiella

1.11 Serratia

1.12 Hafnia

1.13 Erwinia

2. Питательные среды для культивирования энтеробактерий

2.1 Консервирующие смеси

2.2 Среды обогащения

2.3 Селективные среды

2.4 Дифференциально-диагностические среды

2.5 Среды, содержащие органические кислоты

3. Возбудители колибактериоза

4. Возбудители сальмонеллезов

Литература



Введение

Семейство энтеробактерий -- Enterobacteriaceae -- относится к порядку Eubacteriales -- собственно бактерии. По современной классификации оно включает 12 родов Escherichia, Edwarsiella, Citrobacter, Salmonella, Shigella, Klebsielia, Enterobacter, Hafnia, Serratia, Proteus, lersinia и Erwinia. В патологии домашних животных наибольшее значение имеют роды Escherichia, Salmonella, Proteus, lersinia.



1. Роды и виды семейства Enterobacteria

Энтеробактерии широко распространены в природе. Эта многочисленная группа возбудителей включает в себя патогенные, условно-патогенные и сапрофитные виды. Патогенные виды и серовары вызывают болезни, различающиеся клиническим проявлением (кишечные инфекции, септицемии, пневмонии, аборты у животных, артриты, маститы и т. д.), поэтому название семейства больше соответствует месту их обитания. Отмечено, что ферментативная активность энтеробактерий больше выражена у сапрофитных и условно-патогенных видов, в меньшей степени -- у патогенных видов как проявление одной из форм эволюции паразитизма. Наряду с большой универсальностью поражать многие виды животных есть виды (серовары) бактерий, вызывающие болезни только у одного вида животных, иногда с выраженным тропизмом к определенным тканям и органам (сальмонеллы аборта овец и лошадей, брюшного тифа, дизентерии человека).

Грамотрицательные прямые палочки длиной 1-6 мкм, шириной 0,3 --1>0 мкм. Подвижны за счет перитрихиальных жгутиков, но встречаются и неподвижные штаммы. Не формируют эндоспор и микроцист. Некислотоустойчивы. Для одних как единственный источник углерода необходима D-глюкоза, для других - витамины и (или) аминокислоты. Хемоорганотрофы, обладают как дыхательным, так и ферментативным типами метаболизма, что является одним из ведущих, наряду с отсутствием оксидазы, дифференцирующих признаков от других грамотрицательных микроорганизмов. Не галофильны. В процессе ферментации D-глюкозы, других углеводов и многоатомных спиртов образуют кислоту и часто выделяют газ. Каталазоположительны (исключение Shigella dysenteriae О-группы 1 и Xenorhabdus nematophilus). Редуцируют нитраты (исключение -- некоторые штаммы Erwinia и Yer-sinia). Хорошо развиваются на пептоне, мясном экстракте, среде Мак-Конки.

Семейство энтеробактерий подразделяется на 19 родов, среди которых имеются патогенные для животных и людей.

Для идентификации энтеробактерий исследуемые культуры высевают на селективные и дифференциальные среды (Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит-агар, ЭМС и др.) с последующим пересевом изолированных колоний и изучением биологических и ферментативных свойств. Последние являются основой для дифференциации энтеробактерий в пределах семейства (табл. 1).

Таблица 1.

Основные дифференциальные признаки некоторых родов и видов семейства Enterobacteriaceae

Признаки	Salmonellal	Escherichia coli	Proteus	Citio bacter	Klebsiella pneumoniae sb. pneumonia e	Enterobacter	Hafnia
Образование индола	_	+	P	P	_	P	_
Образование сероводорода	+	-	P	P	-	-	-
Цитрат Симонса	+	-	P	P	+	+ 1	_
Реакция	-	_	P		+	+ 1	X
Фогеса-Проскауэра
Ферментация лактозы	-	+	-	P	+	P	-
- \\ - маннита	+	+	--	+	+	+	+
Образование лизиндекарбоксилазы	+	(+)	_	_	+	P	+
Рост в присутствии KCN	--	--	+	P	+	P	+
Продукция:
орнитиндекарбоксилазы	+	X	P	P	--	+ 1	+
0-галактозидазы (ONPG)	--	+	_	+	(+)	P	+
Утилизация малоната натрия	-	-	-	P	+	P	X
Образование фенила- паниндезаминазы	-	-	+	-	-	i	J

Для родов Proteus и Morganella важное дифференцирующее значение имеет тест на наличие фенилаланиндезаминазы: для Escherichia и Shigella - етатный и цитратный тесты; для Salmonella - тесты на индолообразование, утилизацию цитрата и малоната натрия, дезами-нирование фенилаланина и декарбоксилирование лизина. Для опре-деления родовой принадлежности применяют соответствующие поли-валентные сыворотки.

1.1 Род Escherichia

Типовой род сем. Enterobacteriaceae включает два вида -- Е. соli и Е. blattae, а также малоизученный с неустановленным систематическим положением вид Е. adecarboxylata.

Сведения о выделении Е. blattae и Е. adecarboxylata от теплокровных отсутствуют.

Е. coli. Основными, имеющими таксономическое значение являются: неспособность утилизировать цитрат и малонат натрия, отсутствие уреазы и фенилаланиндезаминазы, отсутствие сероводорода на средах с хло-ридом железа, способность утилизировать ацетат натрия.

В мазках располагаются поодиночке, парами или короткими цепоч-ками. В МПБ растут диффузно, образуя интенсивную равномерную муть и легко разбивающийся осадок; иногда образуют поверхностную пленку и кольцо на стенке пробирки. На агаре Эндо ферментирующие лактозу штаммы формируют темно-красные с металлическим блеском, колонии; слабо или медленно ферментирующие лактозу штаммы образуют розовые или бесцветные колонии с интенсивно окрашенным центром; штаммы, не ферментирующие лактозу, формируют бесцветные колонии.

На МПА образуют гладкие, выпуклые, блестящие с ровными краями колонии (S-форма), хорошо суспендируемые в растворе хлорида натрия, и более плоские сухие с неровными краями, плохо суспендируемые в растворе хлорида натрия колонии (R-форма). Возможно образование переходных от S- к R-форме колоний, которые можно легко различить в косопроходящем пучке света,

Эшерихии имеют О, К, Н и пили-антигены и по этим антигенам проводят их серологическую идентификацию.

0-Антиген (соматический) представляет собой полисахаридно-протеино-липидный комплекс, в котором полисахарид определяет серологическую специфичность, липид -- токсичность, а протеин -- антигенность. Термостойкий, не разрушается при температуре более 100 С. По соматическому О-антигену описано около 180 серологических групп (Фрикк, 1978).

У различных 0-серогрупп обнаружено 104 разновидности поверхностных К-антигенов (представляющие собой полисахарид) и 56 жгутиковых Н-антигенов (Орсков, 1977; Фрикк.1978),

Пили-антигены состоят из белка, обеспечивают бактериям способность прилипать к эпителию кишечника, вследствие чего их называют адгезивными антигенами. Известно несколько типов пили-антигенов: К88, К99,987Р, F41,Att25.

Выделяют из кишечного содержимого, а при септической форме - из паренхиматозных органов млекопитающих, птиц, рыб, пресмыкающихся и насекомых. Эшерихии являются возбудителями колибак-териоза молодняка сельскохозяйственных животных.

1.2 Род Salmonella

Возбудитель сальмонеллеза (паратифа). Прямые, с закругленными концами грамотрицательные палочки длиной 2--5 мкм, шириной 0,7-- 1,5 мкм. Обычно подвижны (исключение - S. gallinarum и S. pullorum). Факультативные анаэробы. Редуцируют нитраты. При росте на средах с глюкозой обычно выделяют газ. Индол не образуют. На трехсахарном агаре с железом выделяют газ (исключение - некоторые штаммы S. choleraesuis). Уреазоотрицательны, обычно не ферментируют сахарозу, инозит, салицин. Большинство штаммов утилизируют цитрат натрия. Продуцируют лизиндекарбоксилазу (исключение - S. paratyphi А) и орнитиндекарбоксилазу (исключение -- S. typhi). Культуры в R- и S-форме могут иметь различия биохимических и серологических свойств.

На МПА образуют прозрачные с голубоватым оттенком колонии диаметром 2-4 мм. На агаре Эндо колонии бледно-розовые прозрачные, на агаре Плоскирева -- бесцветные, непрозрачные, на среде Левина -- прозрачные с фиолетовым оттенком. Наиболее характерный рост отмечается на селективной для сальмонелл среде -- висмут-сульфит-агаре. Образуют черные колонии с металлическим блеском.

В ряде случаев, особенно при выделении от животных с подозрением на хроническое течение сальмонеллеза, первичные посевы проводят на одну из сред накопления (Кауфмана, Мюллера, Киллиана, селенитовая, магниевая).

По ферментативной активности сальмонеллы условно подразделяются на подроды (I, II, III, IV, V), которые в определенной степени соответствуют видам и подвидам других микроорганизмов (табл. 2),

Подавляющее большинство выделяемых от животных сальмонелл входят в подрод I (S. choleraesuis, S. typhimurium, S. gallinarum, S. pullorum, S. enteritidis, S. dublin, S. abortusovis, S. abortusbovis, S. typhisuis и др.).

В подрод III включена группа микроорганизмов, ранее составляющих отдельный род Arizone, отличительной особенностью которых является способность ферментировать лактозу и наличие 0-галактозидазы, Штаммы этого подрода могут быть выделены от различных видов сельскохозяйственных животных (табл. 52 и 53).

Для полной идентификации сальмонелл необходима серологическая типизация по О- и Н-антигенам в реакции агглютинации с поливалентными групповыми О-сыворотками и с монорецепторными О-и Н-сыворотками.



Таблица 2.

Дифференциальные признаки подродов рода Salmonella

Тесты или субстрат	Подрод
	I	II	III	IV	V
/3-Галактозидаза (ONPG)	_	- или ср	+	-	+
Образование кислоты на среде с:
лактозой	-	-	+ или ср	-	-
дульцитом	+	+	-	-	+
му катом	+	+	X	-	+
галактиронатом	-	+	X	+	+
Утилизация малоната	-	+	+	-	-
d-тартрата	+	- или ср	-или ср	-или ср	-
Гидролиз желатина	-	+	+	+	-
Рост в присутствии KCN	-	--	-	+	+
Большинство штаммов
обитают на:
теплокровных	+	-	-	-	-
хладнокровных и в	-	+	+	+	+
окружающей среде

Таблица 3.

Дифференцирующие признаки подродов и отдельных сероваров рода Salmonella

Тест или субстрат	Salmonella I	Salmonella II	Salmonella III Ari-zona	Salmonella IV	S. cholera suis	S.gallina rum	S, pul-orum
i Цитрат Симон са	+	+	+	+	(-)		_
Сероводород	+	+	+	+	X	+	+
Аргининдегидролаза	X	+	(+)	X	X	-	X
Орнитиндекарбоксилаза	+	+	+	+	+	-	+
Подвижность '	+	+	+	+	+	--	_
Рост в присутствии KCN	-	-	-	+	-	-	-
Малонат натрия	-	+	+	-	-	-	-
Газ на D- глюкозе	+	+	+	+	+	-	(+)
Лактоза	-	-	X	--	--	-	_
Дульцит	+	+	-	-	-	+	--
Салицин	-	-	-	X	--	-	_
D-Сорбит	+	+	+	+	(+)	-	(-)
L-Арабиноза	+	+	+	+	-	(+)	+
L-Рамноза	+	+	+	+	+	_	+
Мальтоза	+	+	+	+	+	+	_
Трегалоза	+	+	+	+	-	X	(+)
Мелибиоза	+	+	+	+	X	-	_
My кат	+	+	X	-	--	X	_
Э-Галактозидаза (ONPQ)	-	X	+	-	-	-	-

Таблица 4.

Антигенная структура групп сальмонелл, в которые входят патогенные для животных сероварианты.

Группа	Название серовариантов	О- Антиген	Н-Антиген
			1 -я фаза	2-я фаза
А (02)	S paratyphi A	1,2,12	a	(1,5)
В (04)	S. paratyphi В	1,4, (5), 12	b	1,2
	S. typhimurium	1,4, (5), 12	i	1,2
	S. abortusequi	4,12	-	e, n,x
	S. abortusbovis	1,4,12,27	b	e, n, x
	S. abortusovis	4,12	с	1,6
	S. branderburg	1,4,12	l,v	e.n.zis
	S. Stanleyville	1,4, (5), 12,27	Z4,Z23	(1,2)
	S. heidelberg	1,4, (5), 12	r	1,2
	S. derby	1,4, (5), 12	f,g	(1,2)
	S. reading	1,4, (5), 12	e,h	1,5
	S. abony	1,4, (5), 12,27	b	e, n,x
	S. Stanley	1,4, (5), 12,27	d	1,2
	S. saintpaul	1,4, (5), 12	e,h	1,2
	S. altendorf	4,12,27	с	1,7
Ci (06,7)	S. choleraesuis	6,7	(с)	(1,5)
	S. paratyphi С	6,7,(Vi)	с	1,5
	S. typhisuis	6,7	с	1,5
	S. oranienburg	6,7	m,t	-
	S. Thompson	6,7	k	1,5
	S. potsdam	6,7	l,v	e, n,zj5
	S. virchow	6,7	r	1,2
	S. bareilly	6,7	У	1,5
	S. tennessee	6,7	Z29	(1,2,7)
С2 (06, 8)	S. muenchen	6,8	d	1,2
	S. newport	6,8	e,h	1,2
	S. bovis morbificans	6,8	r	1,5
С3 (08, 20)	S. kentucky	8,20	i	Z6
di (09,12)	S. typhi	9, 12, (Vi)	d	-
	S. enteritidis	1,9,12	g, m	(1,7)
	S. dublin	l,9,12,(Vi)	g,P	-
	S. rostock	1,9,12	g, P,u	-
	S. moskow	9,12	g,q	-
	S. gallinarum-pullorum	1,9,12	-	-
	S. easbourne	1,9,12	e,h	1,5
	S. panama	1,9,12	l,v	1,5
,	S. sendai	1,9,12	a	1,5
E, (03, 10)	S. anatum	3,10	e, h	1,6
	S. meleagridis	3,10	e, h	l,w
	S. london	3,10	1, v	1,6
	S. veltevreden	3,10	г	Z6
	S. give	3,10	1, v	1,7
	S. amager	3,10	У	1,2
	S. muenster	3, 10	e, h	1,5
	S. newington	3,15	e,h	1,6

0-Антиген (соматический) представляет собой термостабильный липополисахаридно-белковый комплекс. Жгутиковые Н-антигены термолабильны, состоят из белка и делятся на 2 вида: 1-й фазы, обладающие специфическими свойствами, и 2-й фазы - неспецифическими, характерными для различных типов сальмонелл. Некоторые сальмонеллы содержат Vi-антиген и поверхностные К-антигены.

На основании общности соматических антигенов, обозначаемых арабскими цифрами 1, 2, 3, 4 и т. д., сальмонеллы объединены в серологические группы, обозначаемые буквами латинского алфавита (А, В, С и т. д.). Дифференциация вариантов внутри группы осуществляется по Н-антигенам, причем 1-я фаза обозначается строчными буквами латинского алфавита (а, Ь, с, d и т. д.), а 2-я фаза - арабскими цифрами и строчными буквами латинского алфавита (схема Кауфмана -- Уайта).

Род Salmonella объединяетболее 2200 серовариантов, которые разделены по антигенному родству на 52 серогруппы, В пределах каждого серовара сальмонеллы подразделяются на биовары, фаговары, кроме того, они различаются по характеру продуцируемого бактериоцина и по устойчивости к действию определенных антибиотиков, что имеет значение при внутрисеровариантной дифференциации,

В процессе идентификации сальмонеллы следует дифференцировать главным образом от Citrobacter freundii, Proteus mirabilis, Hafnia alvei, а также от Alteromonas putrefaciens (вида, часто выделяемого из пищевых продуктов низкого качества).

Большинство выделяемых сероваров патогенны для различных видов животных, птиц и человека

1.3 Род Citrobacter

Прямые подвижные грамотрицательные палочки диаметром 0,8-- 1 0 мкм, длиной 2 -- 6 мкм. Располагаются поодиночке или парами. Основными дифференцирующими признаками являются: способность утилизировать цитрат, отсутствие лизиндекарбоксилазы и отрицательная реакция Фогес-Проскауэра.

Хорошо растут на обычных питательных средах, образуя гладкие, слегка выпуклые, влажные, сероватые колонии с блестящей поверхностью. Могут встречаться слизистые и шероховатые формы,

В отличие от эшерихий их рост не ингибируется на селективных средах, содержащих бриллиантовый зеленый и соли желчных кислот. На агаре Эндо лактозоположительные штаммы образуют красные или розовые колонии, но без металлического блеска, свойственного эшерихиям; лактозоотрицательные штаммы формируют бесцветные или розоватые колонии. На среде Плоскирева лактозоположительные штаммы образуют светло-красные или розовые колонии, лактозоотрицательные штаммы -- светло-розовые колонии. На висмут-сульфит-агаре образуют зеленые, коричневые и черные колонии. Черные колонии, образуемые штаммами, продуцирующими сероводород, в отличие от черных колоний, образуемых сальмонеллами, не окрашивают в черный цвет среды под колонией.

Род Citrobacter включает 3 вида: С. freundii, С. do versus и С. amalonaticus, различающиеся по ферментативным свойствам (табл. 54). Для полной идентификации цитробактеров необходимо определение их серовариантной принадлежности по О- и Н-антигенам. Имеют общие антигены с сальмонеллами и эшерихиями. Повсеместно распространены в природе и могут быть выделены из кишечного содержимого домашних животных, воды, почвы, продуктов питания.

Тест или субстрат	С. freun-dii	С. diver-sus	С. amalonaticus
Индол	--	+	+
Сероводород			-t-
Салицин
Аргининдегидролаза	X	+
Орнитиндекарбоксилаза	X
Рост в присутствии KCN	+	--
Малонат натрия	-		--
Кислота из D-адонита Г + Ц в ДНК, моль%	50-51	51-52	51-52

1.4 Род Klebsiella

В литературе встречается под названием "палочки Фридлендера". Представляют собой грамотрицательные, неподвижные, образующие капсулу палочки диаметром 0,3 -- 1,0 мкм, длиной 0,6 -- 6,0 мкм. Располагаются поодиночке, парами или короткими цепочками. Основными дифференциальными признаками являются: наличие капсулы, неподвижность, отсутствие оксидазы, способность утилизировать цитрат и глюкозу, положительная реакция Фогес--Проскауэра, ферментация инозита, гидролиз мочевины, отсутствие орнитиндекарбоксилазы, неспособность к образованию сероводорода. В отличие от эшерихий клебсиеллы (исключение -- К, oxytoca) не выделяют индол.

Хорошо растут на обычных питательных средах. Наличие капсулы обусловливает образование крупных, выпуклых, влажных, часто сливающихся колоний слизистой консистенции. На средах, обогащенных углеводами или азотом, отмечается лучшее образование капсулы, которая может быть выявлена в мазках, окрашенных тушью.

В жидких средах рост сопровождается равномерным помутнением, образованием осадка и поверхностной пленки. Наряду со штаммами, хорошо ферментирующими лактозу, имеются и слабоферментирующие штаммы. На агаре Эндо образуют красные и розовые колонии с металлическим блеском. На агаре Плоскирейа, в зависимости от степени ферментации лактозы, образуют красные, розовые или бесцветные колонии. Выделение клебсиелл из исследуемого материала для лучшей дифференциации от эшерихий следует проводить на 48-часовой агаровой культуре. Образуются характерные крупные, выпуклые, слизистые колонии.

Род Klebsiella представлен 4 видами: К. pheumoniae, К. oxytoca, К. terrigena, К. planticola (табл. 5). Последние два вида в большинстве случаев выделяют из объектов окружающей среды, К. oxytoca - от ивотных из желудочно-кишечного тракта. К. pheumoniae подразделяются на 3 подвида: pneumoniae, ozaenae.rhinoscleromatis.

К pneumoniae подвид pneumonia (табл. 6), как и эшерихий, относится к постоянной микрофлоре кишечника, но может играть роль этиологического фактора при септических процессах, пневмониях, метритах, маститах.

Таблица 5.

Дифференцирующие признаки видов рода Klebsiella

Тест или субстрат	К. pneumoniae	К. oxytoса	К. terrigena	К. planticola
Индол	_	+	--	X
Газ из лактозы при 44,5 ° С	+	-	-	-
Газ из лактозы при 37 ° С	-	+	-	-
Рост при 10°С	-	4-	+	+
Ферментация:
инулина	-	+	X	X
D-мелизитозы	-	X	+	_
L-сорбозы	X	+	+	+
Утилизация :
гентизата	-	+	+	-
т-гидроксибензоата
гидрокси-Ь-пролина	X	X	X	-ь

Таблица 6.

Дифференцирующие признаки подвидов Klebsiella pneumoniae

Тест или субстрат	Pneumoniae	Ozaenae	Rhinoscleromatis
Газ из глюкозы	+	X	+
Кислота из
лактозы	+	ср	-
дулыдита	X	-	-
Реакция с метиловым красным	-	+	+
Реакция Фогес -Проскауэра	+	-	-
Цитрат Симонса	+	X	-
Малонат натрия	+	-	+
Уреаза	+	X	-
Утилизация органических кислот
(Кауфман - Петерсон) :
цитрата	X	X	~
тартрата	X	X	~
муката	+	X
Лизиндекарбоксилаза	4-	X	--
_Аргининдегидролаза		X

1.5 Род Enterobacter

Прямые подвижные грамотрицательные палочки диаметром 0,6-- 1,0 мкм, длиной 1,2-3,0 мкм. Большинство штаммов положительны в реакции Фогес -- Проскауэра и дают отрицательную реакцию с метиловым красным.

Хорошо растут на средах для энтеробактерий. На лактозном агаре Дригальского образуют выпуклые, радужные колонии диаметром 2--3 мм, но могут и плоские с неровными краями; на эозинметиленовом агаре -- бледно-розовые выпуклые колонии слизистой консистенции диаметром 3-4 мм.

Внутривидовая дифференциация, а также дифференциация на биогруппы основывается на различиях в ферментации углеводов и наличии аминокислотных декарбоксилаз. В отдельных случаях проводят серотипизацию по О- и Н-антигенам. Дифференцирующим признаком от рода Klebsiella является их подвижность, от медленно гидролизующих желатин штаммов Е. aerogenes -- штаммы К. pneumoniae подвида pneumonia всегда уреазоположительны, от рода Serratica -- неспособность продуцировать диоксирибонуклеазу, твин-80, эстеразу и липазу.

Широко распространены в природе, выделяют из кишечного содержимого животных и человека. Е. cloacae и Е. aerogenes (табл. 7) часто выделяют из фекалий, респираторных органов и гениталий.



Таблица 7.

Дифференцирующие признаки Е. cloacae и E.aerogenes

Тест или субстрат	Е. cloacae	Е. aerogenes	Klebsiella pneumoniae sb. pneumoniae	Hafnia	Serratia
Гидролиз желатина	С»-)	-	-	--	(+)
Лизиндекарбоксилаза	-	+	+	+	P
Аргининдегидролаза	+	-	-	-	-
Мукат	X	+	(+)	--	~
Подвижность	+	+	-	+	+
Орнитиндекарбоксилаза	+	+	-	+	+
Диоксирибонуклеаза	-	--	--	--	+
Цитрат Симонса	+	+	+	--	+
Кислота из D-сорбита	+	+	+	-	+

1.6 Род Proteus

Род включает три вида (табл. 8 и 9): P. vulgaris, P. mirabillis -- часто выделяемые от животных, людей, объектов окружающей среды, и P. myxofaciens -- малоизученный вид, выделяемый только от личинок моли.

Морфологически представляет собой прямые грамотрицательные подвижные палочки длиной 1-3 мкм, шириной 0,4-0,8 мкм. Ветречаются нитевидные формы. Хорошо растут на простых питательных средах с образованием гнилостного запаха.

Образуют уреазу, сероводород, редуцируют нитраты, гидролизуют желатин, растут в присутствии цианида калия, ферментируют глюкозу с выделением кислоты и газа, дают положительную реакцию с метиловым красным, оксидазоотрицательны, не декарбоксилируют лизин и не дегидроксилируют аргинин. Способность к дезаминированию фенилаланина является одним из основных признаков протеев и фенотипически близких к ним морганелл и провиденсий, позволяющих дифференцировать их от остальных энтеробактерий.

При росте на плотных (особенно на влажных) питательных средах большинство штаммов обладает свойством "роения" (ползучего роста), проявляющимся образованием радиально расходящегося от места посева тонкого сплошного налета. Для подавления феномена "роения", вызывающего затруднения при выделении чистых культур других видов, используют среды, содержащие соли желчных кислот, желчь, 0,1 %-ный раствор хлоралгидрата, 4-7 % агара, а также хорошо просушенные среды.

Таблица 8.

Дифференцирующие признаки родов Proteus, Providencia и Morganella

Тест	Proteus	Providencia	Morganela
Ползучий рост	+	-	-
Сероводород	+	-	-
Желатин	+	-	-
Цитрат Симонса	Р	+	-
Орнитиндекарбоксилаза	Р	-	+
Кислота из:
маннозы	-	+	+
мальтозы	Р	-	-
инозита	-	+	--
адонита	-	+	-
арабитола	-	+	-

Таблица 9.

Дифференцирующие признаки видов рода Proteus

Тест	P. vulgaris	P. mirabilis	P. myxofaciens
Индол	+	-	-
Орнитиндекарбоксилаза	-
Кис лота из:
мальтозы
ксилозы	X
а- метилглюкозида	X	~
Образование вязкой пленки	--

На среде Плоскирева образуют крупные (2--7 мм) колонии с перламутровым оттенком. На кровяном агаре некоторые штаммы могут вызывать гемолиз. В МПБ вызывают равномерное помутнение и осадок. Для выделения из патологического материала используют среду П-1 (Калина, 1975), содержащую полимиксин и соли желчных кислот, которые ингибируют рост других видов бактерий. Для выделения чистой культуры посев производят в конденсационную жидкость скошенного агара.

Антигенная структура протеев включает около 49 соматических (О) и 19 жгутиковых (Н) антигенов, серологическая принадлежность к которым определяется имеющимися коммерческими иммунными сыворотками.

1.7 Род Morganella

Род представлен одним видом - Morganella morganii. Выделяют из кишечного содержимого млекопитающих и рептилий. Может вызывать диареи у молодняка животных.

Грамотрицательные прямые подвижные палочки длиной 1-1,7 мкм, шириной 0,6-0,7 мкм. К основным дифференцирующим признакам' относятся: способность к дезаминированию фенилаланина, выделению индола и гидролизу мочевины, а также способность дезамйнировать орнитин и ферментировать с образованием кислоты маннозу. Спектр ферментативной активности по отношению к углеводам незначителен они ферментируют глюкозу и маннозу, встречаются штаммы, ферментирующие трегалозу и лактозу. Хорошо растут на обычных питательных средах, на кровяном агаре некоторые штаммы дают гемолиз. На среде, содержащей 5 % триптофана, штаммы морганелл продуцируют красно-коричневый пигмент.

Известно около 50 серовариантов, отличающихся структурой соматического антигена, и большое число серовариантов, имеющих разные типы жгутиковых Н-антигенов.

1.8 Род Providencia

Род включает три вида: P. alcaligenes, P. stuartii, P. rettgeri. Широко распространены в природе, выделяют от животных и человека при гнойно-воспалительных процессах и наиболее часто из содержимого кишечника.

Согласно ранее существующей классификации P. alcaligenes и P. stuartii составляли один вид - Proteus inconstans, a P. rettgeri - Proteus rettgeri.

Все три вида, дифференцирующие признаки которых представлены в таблице 10, имеют форму прямых палочек длиной 1,5--2,5 мкм, шириной 0,6-0,8 мкм. Подвижны. Характерными для рода признаками являются: неспособность к «роению», ферментирование инозита, маннита, маннозы и утилизирование цитрата Симонса. Наличие фенилаланин-деминазы является одним из наиболее важных диагностических признаков.

Таблица10.

Дифференцирующие признаки видов рода Providencia (Penner, 1984)

Тест	P. alcaligenes	P. stuartii	P. rettgeri
Мочевина	_	X	+
Кислота из:
инозита	-	+	+
маннита	-	\	+
арабитола	_	-	-t-
эритрола	-	-	X
трегалозы		+
адонита	+	--	+

1.9Род Yersinia

Род включает 7 видов (табл. 11, 12) и один вид Y. philomiragia неустановленным систематическим положением. Представляют собой палочковидные или овоидные грамотрицательные клетки длиной 1-3 мкм, шириной 0,5-0,8 мкм; могут располагаться поодиночке, парами, иногда короткими цепочками из 4-5 клеток. Хорошо растут на простых питательных средах, образуя на плотных средах, в отличие от других энтеробактерий, мелкие, диаметром до 1 мм, колонии. В мазках-отпечатках и из бульонных культур могут окрашиваться биполярно. В культурах, выращенных при 30°С, все виды, за исключением Y. pestis, подвижны, при 37° С это свойство утрачивается. Все иерсинии, за исключением Y. pestis, могут развиваться на синтетических минеральных средах (25°С), содержащих в качестве источника энергии один из углеводов.

Иерсиниям свойственна зависимость проявления фенотипических свойств от температуры культивирования (диапазон 14--42°С и рН 4-10). Оптимальной для развития всех видов является температура 28-29°С и рН 7,2-7,4. Ферментируют углеводы без образования газа; для Y. pestis и Y. pseudotuberculosis это свойство постоянно, в то время как другие виды при 28°С на 3-4-е сутки могут образовывать незначительное количество газа. Оксидазоотрицательны. За исключением некоторых биоваров, редуцируют нитраты. Каталазоположительны.

Патогенны для многих видов животных и человека. При последовательных пассажах через питательные среды Y. pestis, Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica утрачивают вирулентность.

Для выделения иерсинии используют среду Юшенко, Дунаева (1980), а также обычные и селективные для энтеробактерий среды. Обычно посевы инкубируют при 37°С в течение 24 ч (при 28-29°С - 48 ч), далее 48-72 ч при комнатной температуре.

Y. pestis. Возбудитель чумы, острого инфекционного заболевания животных и человека, относящегося к группе особо опасных инфекций (ООН).

Хорошо растет на обычных питательных средах. На плотных средах образуются шероховатые, с желтовато-коричневым выпуклым центром колонии вязкой консистенции, с плоскими, напоминающими кружева бесцветными краями. Через 24 ч инкубации при 37° С диаметр колоний до 0,1 мм, через 48 ч -- 1--1,5 мм. Использование сред, обогащенных кровью, сывороткой крови, сульфитом натрия, дрожжевым экстрактом, повышает частоту выделения из первичного материала, но не влияет на размер образуемых колоний. На МПБ растут в виде взвешенных хлопьев в прозрачном бульоне с образованием рыхлого осадка.

По ферментативной активности и эколого-географическим признакам подразделяют на три биовара: antiqua -- распространяется в Центральной Азии и Центральной Америке; medievalis -- в Иране и на территории нашей страны; orieritalis (син. Oceania) -- повсеместно. Патогенны для большинства видов животных. Наиболее восприимчивы белые мыши и морские свинки, а из сельскохозяйственных животных -- верблюды.

Y. pseudotuberculosis. Возбудитель псевдотуберкулеза (синрозенгиоз ложный туберкулез). Природно-очаговая болезнь животных, характеризующаяся узелковыми поражениями паренхиматозных органов. Распространены повсеместно. Наиболее восприимчивы птицы и грызуны, из лабораторных животных - белые мыши, морские свинки, кролики.

Как и все иерсинии, хорошо растут на обычных питательных средах, но в отличие от других видов рода способны расти на средах, содержащих 0,06 % теллурита. Не растут на среде Плоскирева. Хорошо растут на дезоксихолатцитратном агаре. На плотных средах при 22--28°С образуют мелкие (0,1--0,5 мм) круглые, выпуклые, прозрачные, серовато-желтые, блестящие колонии с приподнятым центром. При 37°С может отмечаться полиморфизм колоний, проявляющийся появлением R-форм с выпуклым, коричневого цвета центром и волнистыми истонченными краями. На скошенном агаре растут в виде сплошного налета, серовато-желтого цвета с блестящей волнистой поверхностью. В бульоне вызывают равномерное помутнение с последующим выпадением хлопьевидного или вязкого осадка.

Антигенная схема включает 6 серогрупп термостабильных антигенов (I-VI) и 5 термолабильных жгутиковых антигенов.

Y. enterocolitica. Распространен повсеместно. Патогенен для животных и человека.

Морфология типична для рода. В отличие от Y. pseudotuberculosis в жидких средах не образуют цепочек. При 18--20°С обладают подвижностью. Хорошо растут на обычных питательных средах. На среде Плоскирева растут только при обильном посеве, образуя очень мелкие колонии.

На агаре (МПА, Хоттингера) образуют мелкие (диаметром 0,1 -- 0,5 мм) выпуклые прозрачные, с голубоватым оттенком блестящие колонии. На агаре Эндо 48-часовые культуры приобретают розовый оттенок. При росте на бульоне вызывают равномерное помутнение.

Реакция Фогес -- Проскауэра при 22--28° С положительна, при 37 С -- отрицательна. При 20°С продуцируют маннозо-резистентный гемагглютинин, который утрачивают в процессе роста при 37 °С. По ферментативной активности различают 5 биоваров (табл. 13). Антигенная схема включает 34 сероварианта по 0-антигену и 20 -- по Н-антигену.

Таблица13.

Дифференцирующие признаки рода Yersinia и морфофизиологически сходных с ним родов (Rcrcovier, Mollaret, 1984)

Тест	Yersinia	Hafnia	Citro-bacter	Kscheri-chia	Entero-bacter	Klehsi-ella	Salmo-nella	Pro teus	Pasteu-rella
Оксидаза	-		-						+
Размер колоний больше 1 мм1	-	+	+	+	+	+	+	+
Подвижность:
при 37 °С	-	+	+	P	+		+	+
при 25 ° С	Р	+	+	+	+		+	+
Газ из глюкозы	ср	+	+	+	+	P	+-	+
Цитрат Симоиса			+		+	P	+	P
Реакция Фогес Проскаура	Р	+	-		P	P	-	P
Лизиндекарбоксилаза	Р	+	-	+	P	P	+
Сероводород	-		Р	-			.+	P
Фенилаланиндезаминаза								+

Таблица 14.

Дифференциальные признаки видов рода Yersinia (Bercovier, Mollaret, 1984)

Признаки	Y. pes-tis	Y. pseudotu-berculosis	Y. entero-colitica	Y. inter-media	Y. frede-riksenii	Y. kris-tensenii	Y. ruc-keri
Подвижностьпри 25 ° С		+	+	+	+	r" +	x
Лизиндекарбоксилаза	-		-				+
Орнити нде карбоксила за		_	+	+	+	+	+
Уреаза		+	+	+	+	+
Гидролиз желатина							+
Цитрат Сименса, 25 °С	-	.i		+
Реакция Фогес - Проскауэра, 25 °С			+	+
Индол	„	._	x	+			x
Кислота из:						X
рамнозы		+	-	+	+
сахарозы	-		+	+	+
целлобиозы	-		+	+	+	+
мелибиозы	x	+
сорбозы		-	+	-t-	+	+
сорбита	-	-	+	+	+	+
рафинозы		x	-	-f
1 Штаммы IV сероварианта утилизируют цитрат Сименса --

Серовариант 09 имеет общие антигены с бруцеллами, а 012 -- с сальмонеллами.

Y. ruckeri. Возбудитель "красного рта" радужной форели и других видов рыб.

Y. intermedia, Y. frederiksenii, Y. kristensenii. Широко распространены в природе. Выделяют от млекопитающих, рыб, из водоемов и почвы. Патогенность для животных не установлена.

Y. philomiragia. Вид с неустановленным систематическим положением. Патогенен для ондатр и выхухолей. Представляют собой неподвижные грамотрицательные палочки. Каталазоположительны. Оксидазоотрицательны. Образуют индол и гидролизуют желатин. Дают положительную реакцию Фогес -- Проскауэра, ферментируют с образованием кислоты без газа глюкозу, мальтозу, сахарозу. Не редуцируют нитраты и не образуют сероводород. Не имеют уреазы, аргининдегидролазы, лизин- и орнитиндекарбоксилазы, фенилаланиндезаминазы. Не утилизируют цитрат Симонса. Не ферментируют арабинозу, рамнозу, лактозу, маннит, сорбит, инозит, салицин

1.10 Род Edwardsiella

Род включает три вида: Е. tarda, Е. ictaluri и Е. hoshinae (табл. 15).

Е. tarda. Вызывает диареи у молодняка разных видов животных, а также вспышки эдвардсиллеза угрей и других рыб.

Е. ictaluri. Возбудитель кишечной септицемии канальных сомов. Представляют собой прямые подвижные грамотрицательные палочки длиной 2--3 мкм и шириной 1 мкм. Каталазоположительны. Оксида-зоотрицательны. Редуцируют нитраты. Имеют орнитин- и лизиндекарбоксилазу, ферментируют маннозу, мальтозу. Дают отрицательную реакцию Фогес -- Проскауэра, не утилизируют цитрат в среде Симонса. не гидролизуют мочевину. Не имеют фенилаланиндезаминазы и аргининдегидролазы, не гидролизуют желатин, не растут в присутствии цианида калия, не имеют 0-галактозидазы. Не ферментируют лактозу, дульцит, ксилозу.

Растут на обычных питательных средах, но более медленно, чем другие виды энтеробактерий, образуя мелкие, до 1 мм в диаметре, полупрозрачные колонии. Для выделения из патологического материала и кишечного содержимого используют среду ЭТ-1 (Калина, 1981)



1.11 Род Serratia

Род включает 6 видов (табл. 16). Обнаруживают у теплокровных, насекомых, в воде, почве, на растениях S. marcescens и S. liquefaciens. Являются патогенными для насекомых, а также выделяют у животных при маститах и при других болезнях инфекционной этиологии

Представляют собой прямые подвижные грамотрицательные палочки с закругленными концами длиной 0,9--2,0 мкм, шириной 0,5-0,8 мкм. Каталазоположительны. Имеют Д-галактозидазу и фенила-ланиндезаминазу и не обладают аргининдегидролазой. Ферментируют лактозу, маннит, сахарозу, салицин, сорбит, глицерин, трегалозу. Гид-ролизуют желатин, дают положительную реакцию Фогес -- Проскауэра. Могут продуцировать два вида пигментов: продигиозин и пирумин. Продигиозин - не диффундирующий в питательную среду водорастворимый пигмент, придающий колониям красную окраску. Более интенсивное образование продигиозина отмечается на пептон-глицериновом агаре при 20-35 °С. Пирумин - диффундирующий в питательную среду водорастворимый пигмент, придающий колониям розовую окраску.

Согласно существующей схеме антигенная структура включает 21 соматический и 25 жгутиковых антигенов.

1.12 Род Hafnia

Представлен одним видом -- Hafnia alvei, который выделяют при кишечных инфекциях и пневмониях от животных, птиц, человека. Возбудитель гафниоза пчел.

Представляют собой прямые грамотрицательные палочки длиной 2--5 мкм, шириной 1 мкм. Подвижность наиболее выражена при 30 °С. при 37° С этот признак непостоянен. Встречаются неподвижные штаммы



1ЧЛ1.Т. Хорошо растут как на простых питательных средах, так и на селективных для энтеробактерий. На плотной среде образуют гладкие влажные прозрачные сероватые колонии диаметром 2--4 мм. Оксидазоотрицательны. В качестве единственного источника углерода могут использовать цитрат, ацетат и малонат. Редуцируют нитраты. Желатин не гидролизуют, не образуют фенилаланиндезаминазу. Имеют лизин-и орнитиндекарбоксилазы и не обладают аргининдегидролазой. Ферментируют глюкозу с образованием кислоты и газа. С образованием кислоты ферментируют арабинозу, мальтозу, маннит, ксилозу, рамнозу. Не ферментируют лактозу, сахарозу, дульцит. рафинозу, сорбит, адонит, инозит.

Тест с метиловым красным положителен при 35 °С и отрицателен при 22 °С. Не образуют сероводород, индол, уреазу.

1.13 Род Erwinia

Род включает 15 видов. Выделяют преимущественно из растений, для которых многие виды патогенны.

Е. herbicola. Выделяют как, из растений, так и от теплокровных, относится к условно-патогенным для животных и человека

Представляют собой прямые длиной 1--3 мкм, шириной 0,5-- 1,0 мкм, подвижные грамотрицательные палочки, располагающиеся поо-диночке, парами и иногда короткими цепочками. Оксидазоотрицатель-ны и Каталазоположительны. Большинство штаммов продуцируют желтый пигмент. Ферментируют с образованием кислоты глюкозу, маннит, мальтозу, арабинозу, ксилозу, рамнозу, фруктозу, галактозу, сахарозу. Не гидролизуют мочевину и не образуют индол и сероводород. Гидролизуют желатин. В отличие от некоторых родов энтеробактерий не имеют лизин - и орнитиндекарбоксилазы, аргининдегидролазы.



2. Питательные среды для культивирования энтеробактерий

2.1 Консервирующие смеси

Консервирующие смеси используют при отсутствии необходимых условий и сред для посева в течение 3-4 ч с момента взятия материала. Объем консервирующей смеси должен составлять ²/з от объема, взятого для исследования материала.

Глицериновая смесь. Смешивают 1000 мл изотонического раствора хлорида натрия и 500 мл глицерина, затем добавляют 20 %-ный раствор фосфорнокислого натрия (Na₂HP0₄) в таком количестве, чтобы рН смеси соответствовал 7,8--8,0. Смесь стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин.

Фосфатная буферная смесь. В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 0,45 г фосфата калия однозамещенного (КН₂Р0₄) и 5,34 г фосфата натрия двузамещенного выветренного (NajHP0₄). Стерилизуют 30 мин при 121 ° С.

Боратно-буферный раствор. Смешивают 57 г кристаллической буры, 84 г борной кислоты, 99 г хлорида натрия. Затем 20 г полученной смеси растворяют в 1000 мл дистиллированной воды. Стерилизуют 10 мин при 121°С.

2.2 Среды обогащения

Желчный бульон. Применяют в качестве среды обогащения для сальмонелл, выделяемых из крови или материалов, не содержащих или содержащих в незначительных количествах другие виды бактерий.

Желчь крупного рогатого скота наливают в колбу и нагревают 1 ч текучим паром. После отстаивания фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин. К 800 мл МПБ добавляют 200 мл желчи, разливают по пробиркам и стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин.

Среда Мюллера. Используют для накопления сальмонелл.

К 4,5 г простерилизованного сухим жаром химически чистого мела (СаССц) добавляют 90 мл МПБ или бульона Хоттингера и стерилизуют 30 мин при 121°С. Перед посевом к бульону с мелом асептически добавляют 2 мл раствора Люголя (иодид калия - 25 г, иод кристаллический - 20 г, вода дистиллированная - до 100 мл) и 10 мл раствора тиосульфата натрия (тиосульфат натрия - 50 т, вода дистиллированная -- до 100 мл). Смесь перемешивают и разливают по пробиркам.

Среда Кауфмана. Используют для накопления сальмонелл.

К 100 мл стерильной среды Мюллера асептически добавляют 5 мл стерильной желчи (желчь стерилизуют дробно, текучим паром 3 дня подряд по 20 мин) и 5 мл 0,1 %-ного водного раствора бриллиантового зеленого. Разливают по пробиркам. Не стерилизуют.

Селенитовая среда. Используют для накопления сальмонелл. Для приготовления используют два раствора.

Раствор 1. К 950 мл раствора фосфатов (натрия гидрофосфат безводный -- 7 г, натрия дигидрофосфат безводный -- 3 г) на дистиллированной воде добавляют 5 г пептона и 4 г лактозы. Разливают во флаконы по 50 мл и стерилизуют текучим паром 2 дня подряд по 30 мин или 30 мин при 112°С. При приготовлении раствора количественное соотношение фосфатов подтитровывают, чтобы при добавлении пептона и селенита натрия готовая среда имела рН 6,9-7,1. Раствор хранят при 4-10°С 1-2 мес.

Раствор 2. 4 г натрия гидроселенита (NaHSe0₃) растворяют в 40мл стерильной дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед приготовлением среды.

В каждый флакон с 50 мл раствора 1 асептически добавляют 2 мл раствора 2, перемешивают и разливают по пробиркам.

Среда Киллиана. Используют для накопления сальмонелл.

К 100 мл стерильного МПБ или бульона Хоттингера (рН 6,7-6,9) непосредственно перед применением добавляют 1 мл ОД %-ного водного раствора бриллиантового зеленого.

Магниевая среда. Используют для накопления сальмонелл. Готовят два раствора.

Раствор 1. К 890 мл дистиллированной воды добавляют 4,2 г пептона, 7,15 г хлорида натрия, 1,43 г дигидрофосфата калия (КН₂Р0₄) и 9 мл дрожжевого диализата.

Раствор 2. В 90 мл дистиллированной воды растворяют 35,7 г хлорида магния (MgCl₂ * 6Н₂0).

Оба раствора смешивают и добавляют 0,9 мл 0,5 %-ного водного раствора бриллиантового зеленого. Разливают по пробиркам и стерилизуют 30 мин при 112°С.

Среда ЭТ-1 (Калина, 1975). Используют для накопления сальмонелл, эдвардсиелл.

К 1000 мл МПБ или бульона Хоттингера (рН 7,4-7,6) добавляют 2 г глюкозы и 2 мл 5 %-ного спиртового раствора розоловой кислоты. Смесь кипятят на водяной бане 15-20 мин, добавляют 25 000 ЕД полимиксина и асептически разливают по пробиркам.

Для приготовления 5 %-ного спиртового раствора розоловой кислоты 0,5 г розоловой кислоты растворяют в 10 мл спирта-ректификата, после чего добавляют 90 мл дистиллированной воды.

Среда Минка. Используют для накопления эшерихий, обладающих адгезивными антигенами.

Раствор 1 (фосфатный буферный раствор рН 7,5). Берут 1,36 г калия фосфорнокислого однозамещенного (КН₂Р0₄), 10,1 г натрия фосфорнокислого двузамещенного (Na₂HP0₄ * 7Н₂0) и растворяют в дистиллированной воде до конечного объема 1000 мл. Стерилизуют 30 мин при 115°С.

Раствор 2. 10 г сульфата магния (MgS0₄ * 7Н₂0)] г хлорида марганца (МпС1₂ * 4Н₂0), 0,135 г хлорного железа (РеС1₃ * 6Н₂0) и 0,4 г хлорида кальция (СаС1₂ * Н₂0) растворяют в дистиллированной воде до конечного объема 1000 мл. Стерилизуют 30 мин при 115 °С.

Раствор 3. 5 мл гидролизата лактальбумина (или ферментативного казеиново-дрожжевого гидролизата) растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин.

Раствор 4. 5 г глюкозы растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин.

Раствор 5. 26 г агара "Дифко" растворяют в 1000 мл дистиллированной воды. Стерилизуют 30 мин при 115 °С.

Полученные растворы асептически соединяют в следующем соотношении: раствор 1 -- 500 мл, раствор 2 -- 1 мл, раствор 3 -- 20 мл при 50°С, раствор 4-20 мл, раствор 5 - 460 мл при 50 "С.

Среда П-1 (Калина, 1975). Используют для накопления протеев.

В 1000 мл стерильного бульона Хоттингера растворяют 1 г маннита, 5 г желчных солей по Олькеницкому, 0,8 г дигидрофосфата калия (КН₂РО₄), 20 мл 0,01 %-ного водного раствора кристаллвиолета. Кипятят на водной бане 15--20 мин. Добавляют 10 мл 50 %-ного водного раствора мочевины и 1 000 000 ЕД полимиксина. Асептически разливают по пробиркам.

Приготовление желчных солей по Олькеницкому. К 1000 мл бычьей или свиной желчи добавляют 40 г гидроокиси натрия и автоклавируют 3 ч при 1,5 атм. Добавляют 100 мл 20 %-ного раствора хлорида бария (ВаС1₂ * 2Н₂0), автоклавируют 1 ч при 100°С и оставляют на 12-18 ч при комнатной температуре. Надосадочную жидкость сливают, фильтруют и добавляют 20 %-ный раствор соляной кислоты (до кислой реакции), оставляют на 12-16 ч при комнатной температуре. После этого сливают, промывают водой и добавляют 40 %-ный раствор гидроокиси натрия (до щелочной реакции). Полученный раствор солей высушивают при 115 °С.

Среда К-1 (Калина, 1980). Используют как селективную среду и для накопления клебсиелл.

В 1000 мл стерильной дистиллированной воды растворяют 5 г хлорид натрия, 0,2 г сульфата магния (MgS0₄ * 7Н₂0), 2 г дигидрофосфата калия (КН₂РО₄) , 2 г гидрофосфата калия (К₂НРО₄), 2 г рафинозы, 2 мл 1,6%-ного щелочного раствора бромтимолового синего, 20 мл 0,01 %-ного водного раствора кристаллвиолета. Кипятят 15-20 мин на водяной бане, добавляют 4 мл 50 %-ного раствора мочевины и асептически разливают по пробиркам.

Для приготовления 1,6 %-ного щелочного раствора бромтимолового синего в 80 мл дистиллированной воды растворяют 1,6 г бромтимолового синего и 20 мл 0,25 и. раствора гидроокиси натрия.

Среда Ворфеля - Ферпосона. Используют для лучшего образования капсулы у клебсиелл.

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 2 г хлорида натрия, г сульфата калия (K₂S0₄), 0,25 г сульфата магния (MgS0₄ x х 7Н₂0), 20 г сахарозы, 88 мл дрожжевого экстракта (или 2 г сухого дрожжевого экстракта), фильтруют через бумажный фильтр, разливают по пробиркам и стерилизуют 15 мин при 121°С.

Бульон с 0,2 % глюкозы. Используется для лучшего образования у клебсиелл капсулы.

Берут 1000 мл МПБ или бульона Хоттингера (рН 7,2-7,4). В не-большом его объеме, нагретом до 40--50°С, растворяют 2 г глюкозы и смешивают с оставшимся бульоном. Разливают по пробиркам и стерилизуют 30 мин при 112 °С.

Среда Ющенко, Дунаева (1980). Используют для накопления иерсиний.

В 990 мл дистиллированной воды растворяют 8,5 г хлорида натрия, добавляют 3 мл 1/15 М раствора гидрофосфата натрия (Na₂HP0₄ x х 12Н₂0) и 7 мл 1/15 М раствора дигидрофосфата калия (КН₂Р0₄). Устанавливают рН 7,2, фильтруют, разливают по пробиркам и стерилизуют 10 мин при 116°С или 30 мин текучим паром.



2.3 Селективные среды

Среда Эндо. Селективная среда для энтеробактерий. Выпускается в сухом виде. Состоит из агара, основного фуксина, сульфата натрия, фосфата натрия, лактозы. Для посевов используют свежеприготовленную среду. В 100 мл дистиллированной воды растворяют 5 г сухой среды, кипятят при постоянном помешивании 2--3 мин и разливают по чашкам Петри. Для предотвращения образования большого количества конденсата среду после кипячения охлаждают до 50 °С. Готовая среда имеет розовый цвет. Колонии лактозоположительных штаммов красные, лактозоотрицательных -- бесцветные или слегка розоватые.

Агар Плоскирева. Селективная среда для сальмонелл.

Выпускается в сухом виде. Состоит из агара с желчными солями, цитрата натрия, тиосульфата натрия, фосфата натрия, лактозы, нейтрального красного, бриллиантового зеленого, соды кальцинированной, йода, хлорида натрия. Готовая среда прозрачная или розовато-желтого цвета. Лактозоположительные сальмонеллы образуют колонии красного цвета, лактозоотрицательные -- бесцветные. Висмут-сульфит-агар. Селективная среда для сальмонелл.

Выпускается в сухом виде. Состоит из агара, гидролизата рыбы, глюкозы, цитрата висмута, сульфита натрия, соли Мора, фосфата натрия, бриллиантового зеленого. Готовая среда имеет зеленоватую окраску. Сальмонеллы, продуцирующие сероводород, образуют черные колонии с прокрашиванием агара под колонией в черный цвет. Сальмонеллы, не продуцирующие сероводород, образуют бесцветные или зеленовато-коричневые колонии.

Среда Левина. Селективная среда для энтеробактерий.

К 100 мл расплавленного и охлажденного до 60--70° С 2 %-ного агара Хоттингера (рН 7,2--7,4) добавляют 2 мл 0,5 %-ного водного раствора мегиленового синего (подогретого на водяной бане до 60-- 70°С) , 1,5 мл 2 %-ного раствора эозина, 2 г лактозы и 0,2 г двуосновного фосфорнокислого калия (КН₂РО₄). Перемешивают, разливают по чашкам и подсушивают. Перед добавлением в среду раствора красителей стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин. Готовая среда имеет фиолетовый цвет. Колонии эшерихий синего или черного цвета, сальмонелл -- бесцветные или розовые, протея -- оранжевые, с измененным цветом среды вокруг колонии.

2.4 Дифференциально-диагностические среды

Среда Штерна. Используют для дифференциации сальмонелл.

К 1000 мл МПБ или бульона Хоттингера добавляют 2,5 мл 10 %-ного насыщенного спиртового раствора основного фуксина, 16,6 мл 10%-ного водного раствора сульфита натрия (Na₂S0₄) и 10 мл глицерина. Разливают по пробиркам и стерилизуют 15 мин при 112 °С. Готовая среда имеет желтую окраску. Если испытуемая культура относится к Salmonella typhimurium, которая способна ферментировать глицерин, то среда приобретает фиолетовый оттенок.

Среда Биттера. Используют для дифференциации сальмонелл.

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 0,05 г пептона, 0,5 г трехосновного лимоннокислого натрия (цитрат натрия), 5 г хлорида натрия, 5 г рамнозы (или арабинозы). Кипятят на водяной бане 3--5 мин, фильтруют через бумажный фильтр. Разливают по пробиркам и стерилизуют 30 мин при 112°С или текучим паром 3 дня по 30 мин. Если испытуемая культура относится к сальмонеллам, способным ферментировать рамнозу или арабинозу (S. typhimurium), то при добавлении к суточной культуре (выращенной на данной среде) 2 капель 0,5 %-ного спиртового раствора метилового красного среда приобретает красную окраску.

Среда для посева по Свену - Гарду. Используют для выявления у сальмонелл специфической фазы жгутикового антигена.

К 1000 мл МПБ или бульона Хоттингера добавляют 8 г агара и растворяют путем кипячения на водяной бане. Устанавливают рН 7,2-7,4, фильтруют через бумажный фильтр и стерилизуют 30 мин при 121 С.

Среды с аминокислотами. Используются для определения способности энтеробактерий в анаэробных условиях расщеплять левовращающие аминокислоты - лизин, орнитин, аргинин.

В 600 мл дистиллированной воды растворяют 5г пептона и 1г глюкозы, устанавливают рН 6,0-6,1. Приготовленный раствор разливают по 150мл в четыре колбы. В каждую из трех колб вносят по 10г одной из аминокислот. Четвертая колба остается в качестве контрольной. Содержимое всех колб кипятят на водяной бане 5-10 мин, устанавливают рН 6,0--6,1. Во все четыре колбы вносят по 0,6 мл 1,6%-ного спиртового раствора бромкрезолового пурпурного или бромтимолового синего и по 5 мл 0,1 %-ного спиртового раствора крезолового красного. Разливают в агглютинационные пробирки по 2--3 мл. Стерилизуют 30 мин при 110°С.

Для проведения теста в пробирки, содержащие аминокислоту, и в контрольную пробирку засевают испытуемую культуру, после чего заливают стерильным вазелиновым маслом (слоем толщиной 10 мм) и инкубируют. Учет проводят в течение 4 сут. При положительной реакции среды с аминокислотами приобретают фиолетовую или синюю (если в качестве индикатора взят бромтимоловый синий) окраску, в контрольных пробирках среда имеет желтую окраску.

Состав 1,6 %-ного спиртового раствора бромкрезолового пурпурного: бромкрезоловый пурпурный-- 1,6 г, спирт этиловый 96° -- 100 мл.

Состав 0,1 %-ного спиртового раствора крезолового красного: крезоловый красный -- 0,1 г, спирт этиловый 96 -- 100 мл.

Среда с калием цианидом. В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 10 г пептона, 5 г хлорида натрия, 0,225 г дигидрофосфата калия (КН₂Р0₄), 5,64 г гидрофосфата натрия (Na₂HP0₄). Устанавливают рН 7,6, фильтруют через бумажный фильтр и стерилизуют 30 мин при 112°С. После стерилизации быстро охлаждают. Среду этого состава используют в качестве контрольной. Непосредственно перед применением к 100 мл среды асептически добавляют 1,5 мл свежеприготовленного 0,5 %-ного водного раствора калия цианида (KCN), разливают по пробиркам и закрывают корковыми пробками.