Порівняльна ефективність способів проведення ідентифікації нематод Dirofilaria immitis

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Полтавський державний аграрний університет

Інститут ветеринарної медицини НААН

Порівняльна ефективність способів проведення ідентифікації нематод Dirofilaria immitis

Євстаф'єва В.О., Мельничук В.В.,

Приходько Ю.О., Криворученко Д.О.

Проведеними паразитологічними дослідженнями встановлено високу ефективність запропонованого способу фарбування нематод Dirofilaria immitis, який дозволяє отримати високий ступінь забарвлення та видимості їх морфологічних структур. Спосіб із застосуванням як барвника розчину Люголя перевищував ступінь видимості нематод за мікроскопічного дослідження порівняно із відомими методами із застосуванням 1 %-го спиртового розчину діамантового зеленого та без додавання барвника. Запропонований спосіб призводив до високого ступеня видимості 7 із 9 морфологічних показників у самців та всіх досліджених показників у самок дирофілярій.

Ключові слова: дирофіляріоз, собаки, Dirofilaria immitis, нематоди, ідентифікація, ефективність

Comparative efficiency of identification methods of dirofilaria immitis nematodes

The goal of the work was to establish the effectiveness of the proposed and commonly known methods of identification of Dirofilaria immitis nematodes isolated from dogs.

Materials and methods. The work was performed on the basis of the Laboratory of Parasitology of the Poltava State Agrarian University. In order to establish the effectiveness of the dirofilaries identification methods, the preparation of D. immitis nematodes was carried out using three different methods: Lugol's solution; lactophenol; 1% alcohol solution of diamond green. The degree of visibility of the morphological structures of the nematode body is conventionally divided into: weak, medium, high.

Results of research and discussion. The conducted parasitological studies established the high efficiency of the proposed method of staining nematodes D. immitis, which allows obtaining a high degree of staining of their morphological structures. The method with the use of Lugol's solution as a dye exceeded the degree of visibility of nematodes under microscopic examination compared to known methods with the use of a 1 % alcohol solution of diamond green and without the addition of a dye. The proposed method led to a high degree of visibility of 6 out of 8 morphological indicators in males and all investigated indicators in female dirofilaries.

1. The method of identification of D. immitis with the use of Lugol's solution as a dye exceeded the efficiency of the well-known methods of illumination and staining of nematodes.

2. The proposed method of staining nematodes Dirofilaria immitis provides a high degree of visibility of the cuticle of the head end, the esophagus, the section of the passage of the esophagus into the intestine, in males - the long spicule, tail papillae, ornamentation of the cuticle in the tail area, in females - the nerve ring, the vulva and uterine loops.

Keywords: dirofilariasis, dogs, Dirofilaria immitis, nematodes, identification, efficiency.

Вступ

Згідно з літературними даними та результатами досліджень багатьох авторів, дирофіляріоз собак, викликаний видом Dirofilaria immitis (Nematoda, Onchocercidae), є найбільш патогенним і поширеним у світі. Його небезпечність підтверджується високою летальністю інвазованих тварин, низькими результатами у їх лікуванні та специфічним циклом розвитку паразита, де зараження відбувається через укуси кровосисних комах - комарів [1-3].

Через вплив на здоров'я та добробут тварин-компаньйонів дирофіляріоз має величезне ветеринарне та економічне значення, особливо в Північній Америці, Європі, Азії та Австралії [4-7]. У собак інвазія викликається молодими і дорослими нематодами, що призводять до серцево-легеневої патології, а також мікрофіляріями, що циркулюють у кровоносному руслі тварин. Дирофілярії виду D. immitis можуть інвазувати котів, де захворювання, переважно, протікає важче. У хазяїна цього виду лише невелика кількість незрілих або дорослих дирофілярій можуть викликати загибель тварин. Причому дорослі нематоди, виявлені від котів, морфологічно бувають коротші, а мікрофілярії циркулюють в крові нетривалий час [8-11].

Відповідно до наукових даних розповсюдження дирофіляріозу серед м'ясоїдних тварин поступово зростає в усьому світі, головним чином, через зміни клімату та освоєння нових територій комарами-переносниками мікрофілярій, таких як Ae. albopictus, Ae. koreicus тощо [12, 13].

Більшість науковців доводять необхідність ідентифікації D. immitis з використанням визначення основних та додаткових морфологічних структур як у самок, так і у самців паразитів [14, 15]. Зокрема, було описано декілька нових анатомічних варіацій D. immitis, де дослідники обстежили нематод цього виду, виділених з леопардів і пінгвінів у японському зоопарку. Вони повідомили про наявність тонких поздовжніх кутикулярних валиків по всій довжині тіла, які були виявлені за допомогою звичайної світлової мікроскопії [16]. Тому, актуальним є визначення ефективності загальновідомих та нових способів проведення ідентифікації D. immitis, що дозволить підвищити інформативність та точність проведення діагностики дирофіляріозу.

Метою роботи було встановити ефективність запропонованого та загальновідомих способів проведення ідентифікації нематод Dirofilaria immitis, виділених від собак.

Матеріали і методи досліджень. Роботу виконували впродовж 2022-2023 рр. на базі лабораторії паразитології Полтавського державного аграрного університету. З метою встановлення ефективності способів проведення ідентифікації дирофілярій було здійснено підготовку нематод D. immitis за трьома різними методиками по 5 екземплярів гельмінтів (5 самців і 5 самок), а саме:

1) спосіб І - запропонований спосіб ідентифікації D. immitis із застосуванням як барвника розчину Люголя;

2) спосіб ІІ - просвітлення нематод D. immitis із застосуванням лактофенолу [17];

3) спосіб ІІІ - ідентифікація нематод D. immitis із застосуванням як барвника 1 % спиртового розчину діамантового зеленого [18].

Визначали ступінь видимості та забарвлення: кутикули головного кінця, нервового кільця, стравоходу, ділянки переходу стравоходу в кишківник; у самців - спікул, хвостових сосочків, орнаментацію кутикули в ділянці хвоста; у самок - ділянки вульви та петель матки.

Ступінь забарвлення морфологічних структур тіла нематоди D. immitis визначали шляхом перегляду препаратів під мікроскопом за збільшення х 100, х 400. Ступінь видимості морфологічних структур тіла нематод умовно поділили на: слабкий, середній, високий.

Результати досліджень та обговорення

Проведеними дослідженнями встановлено, що запропонований спосіб ідентифікації D. immitis із застосуванням як барвника розчину Люголя (спосіб І) проявив високий ступінь видимості 7 із 9 морфологічних показників у самців (табл. 1).

Зокрема, запропонований спосіб проявив високий ступінь просвітлення у самців головного кінця, стравоходу, ділянки переходу стравоходу в кишківник, хвостового кінця (рис. 1 а) довгої спікули (рис. 2 а), хвостових сосочків (рис. 3 а), орнаментації кутикули в ділянці хвоста. Середній ступінь видимості відзначали під час дослідження нервового кільця та короткої спікули дирофілярій.

Таблиця 1

Ступінь видимості морфологічних структур тіла самців нематод Diroflaria immitis

Примітка: ступінь видимості - * - слабкий; ** - середній; *** - високий; * - не візуалізується.

Водночас за використання способу ІІ (із застосуванням лактофенолу) кутикула головного кінця, хвостовий кінець (рис. 1 b), довга спікула (рис. 2 b) мали середній ступінь видимості. Стравохід, ділянка переходу стравоходу в кишківник, коротка спікула (рис. 2 b), хвостові сосочки (рис. 3 b) та орнаментація кутикули в ділянці хвоста мали слабкий ступінь видимості. Саме тоді нервове кільце за використання цього способу не візуалізувалося.

Під час проведення ідентифікації нематод D. immitis із застосуванням як барвника 1 % спиртового розчину діамантового зеленого (спосіб ІІІ) кутикула головного кінця хвостовий кінець (рис. 1 с) та орнаментація кутикули в ділянці хвоста мали середній ступінь видимості. Нервове кільце, стравохід, ділянка переходу стравоходу в кишківник, спікули (рис. 3 b) та хвостові сосочки (рис. 3 с) мали слабкий ступінь видимості.

а b с

Рис. 1. Ступінь видимості хвостового кінця у самців нематод D. immitis за використання: а - способу І, b - способу ІІ, c - способу ІІІ (х 100)

а b с

Рис. 2. Ступінь видимості спікул у самців нематод D. immitis за використання: а - способу І, b - способу ІІ, c - способу ІІІ (х 400)