Биотехнология оздоровления и сохранения аборигенных донских сортов винограда

Размещено на http://www.allbest.ru/

Биотехнология оздоровления и сохранения аборигенных донских сортов винограда

Дорошенко Наталья Петровна

Ребров Антон Николаевич

Трошин Леонид Петрович

Аннотации

В статье приведены результаты микроклонального размножения и оздоровления аборигенных сортов винограда, создания базисных маточников. Дополнительно к культуре апикальных меристем разработана хемотерапия с применением салициловой кислоты. Разработан способ деконтаминации растений от микоплазменной инфекции, который включает введение в питательную среду антибиотика Цефотаксим в концентрации от 50 до 450 мг/л в зависимости от степени инфицирования маточных растений. Добавление в состав питательной среды препарата Эмистим снижает гибель меристем от инфекции в 3-5 раз, улучшает их дифференциацию. Применение препарата Мелафен способствует улучшению морфогенеза и качественных характеристик растений. Отмечена высокая приживаемость мериклонов во время адаптации к нестерильным условиям. Биологическое тестирование на травянистых индикаторах показало отсутствие хронических заболеваний. Растения после адаптации к нестерильным условиям высажены, в виде вегетирующих саженцев с закрытой корневой системой, на базисном маточнике. Приживаемость растений составила 70-80%, у некоторых сортов она выше: 96,4% (Сыпун черный) - 98,6 % (Крестовский). Доказано, что при клональном микроразмножении растений in vitro не происходит изменений на генетическом уровне даже через 8 лет культивирования, что подтверждает надежность разработанной технологии размножения и оздоровления аборигенных сортов винограда in vitro

Ключевые слова: АБОРИГЕННЫЕ ДОНСКИЕ СОРТА ВИНОГРАДА, IN VITRO, ХЕМОТЕРАПИЯ, ЭМИСТИМ, МЕЛАФЕН, АДАПТАЦИЯ, МАТОЧНИК

DOI: http://dx.doi.org/10.21515/1990-4665-154-031 The article presents the results of microclonal reproduction and recovery of native grape varieties, the creation of basic nursery. In addition to the culture of apical meristems, we have developed a chemotherapy using salicylic acid. A method of decontamination of plants from mycoplasma infection has also been developed, which includes the introduction of the antibiotic Cefotaxim in the nutrient environment at a concentration of 50 to 450 mg/L, depending on the degree of infection of plants. Adding to the nutrient medium of the drug Emistim reduces the death of meristems from infection by 3-5 times, improves their differentiation. The use of the drug Melafen helps to improve morphogenesis and quality characteristics of plants. The high survival rate of meristems during adaptation to non-sterile conditions has been noted. Biological testing on herbaceous indicators showed no chronic diseases. Plants after adapting to non-sterile conditions are planted, in the form of vegetative seedlings with a closed rootsystem, on the basic nursery. The survival rate of plants was 70-80%, in some varieties it is higher: 96.4% (Sypun black) - 98.6% (Krestovsky). It has been proved that in vitro clonal microbreeding there is no change at the genetic level even after 8 years of cultivation, which confirms the reliability of the developed technology of reproduction and recovery of native grape varieties in vitro виноград сорт маточник

Keywords: ABORIGINE DON'S VARIETIES, IN VITRO, HEMOTHERAPY, EMISTEM, MELAFEN, ADAPTATION, NURSERY

Введение

Производство высококачественных и уникальных вин, прославивших виноградарство и виноделие Дона [1], связано с использованием аборигенных донских сортов винограда. Это известные всему миру красные вина высочайшего качества из урожая сортов Красностоп золотовский, Цимлянский черный, Плечистик, донские белые вина из урожая сортов Сибирьковый, Кумшацкий белый, Пухляковский и др. В настоящее время их площади значительно сократились, и возникла необходимость закладки новых насаждений этих ценных сортов винограда для высококачественного виноделия. Многие аборигенные донские сорта винограда представляют значительную ценность для использования в селекционной работе [2]. Их необходимо также сохранить для поддержания генетического разнообразия. Перспективные аборигенные сорта винограда до сих пор являются большим нераскрытым потенциалом производства ценной продукции виноградовинодельческой отрасли нашей страны [3]. Наряду с традиционными способами сохранения растений ex situ, все большее значение приобретает использование для этих целей культуры изолированных тканей и органов.

Максимальная продуктивность растений может быть достигнута при отсутствии заражения их наиболее опасными вирусами, фитоплазмами, грибными, бактериальными болезнями, нематодами и другими вредителями. Вирусным инфекциям подвержены практически все виды растений, постоянный экономический ущерб они наносят и виноградным насаждениям.

Основным методом получения безвирусного посадочного материала является культура апикальных меристем. Использование метода культуры апикальных меристем для оздоровления растений от вирусной инфекции основано на принципе отсутствия вирусных частиц в верхушке роста растений. В 1952 году Морель и Мартен [4] установили, что эффективные результаты дает культивирование меристематических верхушек в асептических условиях на искусственных средах. Авторы установили, что вирус не может существовать в клетках меристемы.

Вскоре, начиная с 50-х годов ХХ века, были предприняты первые успешные опыты по получению свободных от вирусов растений из точки роста [5]. С тех пор техника оздоровления растений, основанная на выделении апикальных меристем, стала интенсивно совершенствоваться.

Теоретически концепции, положенные в основу этого метода, стали уточнятся в последнее время. Авторы метода Morel и Martin [4] полагали, что в больном растении вирус распространяется с отставанием от быстро растущих молодых органов, особенно в молодых недифференцированных тканях, где концентрация вируса может снижаться вплоть до полного отсутствия.

В настоящее время применение электронной микроскопии часто обнаруживает наличие вирусов в меристеме пораженных ими растений. Особенность строения апикальной меристемы исключает проникновение в нее вируса путем быстрого транспортирования по проводящей системе, но допускает возможность медленного распространения через плазмодесмы, соединяющие меристематические клетки.

Таким образом, возможно присутствие вирусов в точке роста зараженного растения и репродукция их в меристематических тканях. Доказательством являются исследования, выполненные в Никитском ботаническом саду [6], подтвердившие наличие вирусных частиц в апикальных и латеральных меристемах сильно пораженного вирусами сорта цимбидиума и растений гвоздики, пораженных вирусом крапчатости (CarMV).

Исходя из этого, значительный интерес в освобождении растений от вирусов представляет использование культуры апикальных меристем в сочетании с хемотерапией. Сочетая культуру верхушечных меристем с хемотерапией, можно повысить эффект оздоровления от вирусов и коэффициент размножения оздоровленных растений.

Цель исследований - разработать методы оздоровления аборигенных донских сортов винограда от хронических заболеваний, размножить и сохранить оздоровленные растения в коллекции in vitro и на базисном маточнике.

Предметом исследования являлись аборигенные донские сорта винограда: Варюшкин, Красностоп золотовский, Крестовский, Кукановский, Кумшацкий. Пухляковский, Сибирьковый, Сыпун черный, Цимладар, Цимлянский белый и Цимлянский черный (два клона).

Материалы и методы

Исследования проводились по общепринятым в биотехнологии методикам Ф.Р. Уайт, 1949 [7], Бутенко Р.Г., 1964 [8]; Голодрига П.Я. и др., 1986 [9], Дорошенко Н.П., 1992 [10] в стационарных лабораторных условиях и на созданном базисном маточнике. За основу нами взят способ оздоровления растений при помощи культуры апикальных меристем при относительном размере эксплантов 0,1-0,2 мм, в сочетании с хемотерапией, проводимой салициловой кислотой и с антибактериальной хемотерапией, основанной на применении антибиотика Цефотаксим. Кроме этого, в изучение были включены ФАВ Эмистим и Мелафен.

Салициловая кислота, которую некоторые авторы относят к новому классу фитогормонов [11, 12], способна поддерживать целостность мембранных структур клеток при воздействии стрессовых факторов. Доказано [13], что в присутствии салициловой кислоты происходит ингибирование распространения вируса ВТМ, одной из причин которого является снижение проводимости плазмодесм и межклеточного транспорта вируса. М.Т. Упадышев, А.Д. Петрова [14], в процессе хемотерапии выявили антивирусную активность салициловой кислоты в отношении вирусов различной природы у ягодных и плодовых культур. Показано положительное влияние салициловой кислоты при клональном микроразмножении подвойных сортов винограда [15].

Цефотаксим является полусинтетическим аналогом цефалоспорина - антибиотика третьего поколения. Цефалоспорины выделяются грибами рода Cephalosporum. основной продуцент этого антибиотика - гриб вида C.acremonium. По химическому строению антибиотик принадлежит к группе лактамных соединений, близких к пенициллинам. Биологическая активность Цефотаксима связана с образованием при его разложении стимуляторов роста и морфогенеза [16].

Препарат Эмистим имеет широкий спектр действия. Он обладает слабой гибберелловой и цитокининовой активностью [17], положительно влияет на процессы роста и развития растений, снижает влияние неблагоприятных и стрессовых факторов, активирует защитные механизмы против многих патогенов [18], является индуктором устойчивости к вирусным болезням [19].

Мелафен создан в институте органической и физической химии им. А.Е. Арбузова КазНЦРАН, представляет собой меламиновую соль бис (оксиметил)-фосфиновой кислоты. Мелафен обладает высокой полифункциональной физиологической активностью в низких концентрациях, рекомендован в качестве регулятора роста растений, отвечающего современным требованиям технологий для испытания на ведущих сельскохозяйственных культурах [20]. Известно применение Мелафена в биотехнологии [21, 22, 23], а именно в способах получения алкалоидов при выращивании культуры клеток ткани, например, Раувольфии змеиной Rauwolfia Serpentina Benth.

Культивирование проводили в культуральной комнате при освещенности 2500 лк, температуре 25-270С и фотопериоде 16 часов. Повторность каждого варианта трехкратная, в повторности 14 растений, в варианте 42 растения.

Результаты исследований

Салициловая кислота. На этапе ввода в культуру in vitro сорта Красностоп золотовский под действием салициловой кислоты уменьшилась гибель меристем от инфекции: первый этап ввода завершило в 2,8 - 3,5 раза больше меристем, чем в контроле.

Улучшилось прохождение следующего этапа собственно микроразмножения, образование новых узлов и побегов. Наибольшее число побегов образовалось и было срезано для укоренения в варианте с концентрацией СК - 0,14 мг/л больше, чем в контроле в 2,6 раза. При повышении содержания СК в составе питательной среды на этапе ввода до 1,4 мг/л новообразование побегов снижается, но всё-таки остается выше, чем в контроле (табл. 1).

Таблица 1 - Продуктивная регенерация меристем при добавлении в состав питательной среды салициловой кислоты, Красностоп золотовский, 2006 г.

Салициловая кислота отрицательно повлияла на приживаемость меристем сорта Крестовский. Из-за отсутствия развития и последующего некроза тканей погибло 39,2 % выделенных меристем. Сохранившиеся меристемы развивались медленнее, чем в контроле. Пролиферация, образование побегов, коэффициент размножения, при введении её в питательную среду, также были намного ниже, чем в контроле (табл. 2).

Таблица 2 - Репаративная и продуктивная регенерация меристем сорта Крестовский при добавлении в питательную среду салициловой кислоты и Цефотаксима, 2009 г.

Под действием салициловой кислоты произошло уменьшение растений со скрученными шиповатыми листьями и с тонкими корнями, то есть происходит оздоровление растений, дополняющее оздоровление апикальными меристемами.

Салициловая кислота, добавленная в состав питательной среды на этапе ввода, способствует улучшению адаптации меристем к условиям культивирования и регенерации из них растений; на этапе микрочеренкования применение СК в диапазоне концентраций 0,14-1,0 мг/л улучшает приживаемость микрочеренков, стимулирует корнеобразование, но ингибирует рост растений. Отмечена различная реакция отдельных сортов винограда на её применение: для подвойных сортов винограда лучшей оказалась концентрация 1,4 мг/л; для сорта Красностоп золотовский - 0,14 мг/л. Салициловая кислота способствовала улучшению качественных характеристик растений сорта Крестовский, регенерированных из меристем.

Следовательно, салициловая кислота в оптимальных концентрациях отличается низкой фитотоксичностью и даже проявляет стимулирующее действие на процессы органогенеза у растений, повышая коэффициент размножения и ризогенную способность. Учитывая это и антивирусную активность, её следует применять для оздоровления растений в дополнение к культуре меристем.

Цефотаксим в концентрациях 200, 300, 400, 500, 600 мг/л изучен на аборигенных сортах винограда Красностоп золотовский и Крестовский. При добавлении в состав питательной среды Цефотаксим способствовал повышению регенерационной способности растений сорта Красностоп золотовский. При культивировании выделился вариант с концентрацией 200 мг/л, в котором отмечена самая высокая приживаемость растений - 90,4% и увеличение скорости роста, высоты и облиственности растений. Достаточно высокие показатели ростовых процессов надземной части растений зафиксированы и при концентрациях Цефотаксима 400 и 600 мг/л.

Таблица 3 - Влияние антибиотика Цефотаксим на ростовые процессы сорта Красностоп золотовский, 2009 г.

Анализ полученных данных показывает, что под действием антибиотика Цефотаксим снижается заражение растений бактериальной инфекцией, что выражается в улучшении приживаемости микрочеренков и регенерации из них растений. При слабом инфицировании растений применение антибиотика улучшает регенерацию на 5,0-15,0 % по сравнению с контролем (Красностоп золотовский, Крестовский). В данном случае эффективны низкие концентрации Цефотаксима 50-250 мг/л. При заражении от 15,0 до 50,0% растений (Крестовский) эффективность применения Цефотаксима возрастает: приживаемость микрочеренков увеличивается по сравнению с контролем на 35,0-45,0%. При этом эффективны концентрации 250-450 мг/л.

Изучение антибиотика Цефотаксим и салициловой кислоты на этапе оздоровления и ввода в культуру аборигенного донского сорта Крестовский. Следует отметить, что в коллекции ВНИИВиВ им. Я.И. Потапенко остался единственный куст этого сорта. Куст имел признаки короткоузлия и был заражен бактериальным раком.

При учете, проведенном через 20 дней после выделения меристем, отмечено их интенсивное развитие в контроле и в варианте с Цефотаксимом, слабое развитие меристем наблюдалось в варианте с салициловой кислотой (табл. 4).

Интенсивное развитие меристем продолжалось во всех вариантах опыта в следующие десять дней. Интенсивно развивались меристемы второго варианта, на эту дату учета уже можно было пересадить 21 меристему, у которых началось развертывание листьев. Положительным является тот факт, что тронулись в рост отстающие, мелкие меристемы.

Приведенные данные (табл. 4) указывают на то, что салициловая кислота и Цефотаксим оказали отрицательное влияние на приживаемость меристем, гибель которых во время культивирования произошла из-за отсутствия развития и последующего некроза тканей. Салициловая кислота, кроме этого, отрицательно подействовала на пролиферацию и образование побегов. По-видимому, это связано с высокой концентрацией её в опыте.

Таблица 4 - Состояние меристем в опыте с изучением Цефотаксима и салициловой кислоты, сорт Крестовский, 2009 г.

Антибиотик Цефотаксим положительное повлиял на пролиферацию и образование побегов (табл. 5).

Таблица 5 - Репаративная и продуктивная регенерация меристем сорта Крестовский при добавлении в питательную среду салициловой кислоты и цефотаксима, 2009 г.

На основании проведенных исследований разработан способ деконтаминации растений от микоплазменной инфекции при микроразмножении, который включает добавление в питательную среду антибиотика цефотаксим в концентрации от 50 до 450 мг/л в зависимости от степени инфицирования пробирочных растений.

Применение препарата Эмистим на этапе ввода меристем в культуру in vitro имеет особое значение. Меристемы, выделенные и высаженные на питательную среду, нуждаются в защите от стресса, в стимуляции клеточного деления для их роста и усиления пролиферации на следующем этапе собственно микроразмножения. Кроме этого, Эмистим включает защитные механизмы меристематических тканей, которые приобретают способность активно сопротивляться инфекции, в результате чего повышается их устойчивость к патогенам и приживаемость меристем.

Выявлено, что адаптационные способности к условиям in vitro у аборигенных сортов существенно различаются. Следует отметить высокую пластичность сортов Цимлянский черный и Цимлянский белый. При вводе в культуру in vitro сортов Красностоп золотовский, Кумшацкий белый, Сибирьковый их культивирование было затруднено.

Добавление в состав питательной среды препарата Эмистим способствовало улучшению регенерации меристем: увеличивался их размер и ускорялась дифференциация. Лучшей концентрацией по этим показателям для сортов Красностоп золотовский и Сибирьковый явилась 10-12%, а для сорта Кумщацкий - 10-8.

Без добавления в состав питательной среды препарата Эмистим прохождение этапа ввода ухудшается. Большое число меристем погибает от инфекции и из-за отсутствия развития. Это видно на примере клонов сорта Цимлянский черный. К прохождению следующего этапа приступило у клона 1-1-61-10-3 --39,0 % у клона 1-3-13-2-3 - 50,0 % выделенных меристем. Таким образом, положительное влияние препарата выражалась в снижении гибели меристем от инфекции в 3-5 раз, увеличении ростовых характеристик по сравнению с контролем в 2,2 раза, ускорении перехода ко второму этапу ввода.

Не менее ответственным является следующий этап - этап собственно микроразмножения, от которого зависит успех ускоренного размножения. На этом этапе сказывается влияние предшествующих условий культивирования. Применение препарата Эмистим улучшает репаративную и продуктивную регенерацию изолированных апексов.

У сорта Сибирьковый число образовавшихся побегов под влиянием Эмистима увеличилось в 1,7 раза, у сорта Красностоп золотовский в 4,6 раза, у сорта Кабашный в 1,2 - 2,1 раза в зависимости от концентрации препарата (табл. 6).

Таблица 6 - Влияние Эмистима на продуктивную регенерацию аборигенных сортов винограда, 2007-2009 гг.

References

1. Aliev A.M., Kravchenko L.V., Naumova L.G. Proishozhdenie donskih sortov vinograda [Tekst] / A. M. Aliev, L. V. Kravchenko, L. G. Naumova // Vinodelie i vinogradarstvo. - 2005. - № 3. - S. 27-29.

2. Naumova L.G., Aliev A.M. Donskie aborigennye sorta vinograda [Tekst] // Mobilizacija i sohranenie geneticheskih resursov vinograda, sovershenstvovanie metodov selekcionnogo processa: sb. nauch. st. GNU VNIIViV im. Ja.I. Potapenko Rossel'hozakademii. - Novocherkassk: Izd-vo GNU VNIIViV im. Ja.I. Potapenko, 2008. - S. 19-23.

3. Troshin L.P. Aborigennye perspektivnye sorta vinograda // Nauchnyj zhurnal KubGAU, №56(02), 2010.

4. Morel G., Martin C., Guirisan de Dahlaias atteints d,une mala a virus,//Acad.Sci.-1952.-235/21.

5. Galsy (Rose) Culture in vitro des apex -de Vitis rupestris.C.R/ Acad.Sc. Paris, Serle D. 1972. 274.- PP. 210-213.

6. Mitrofanova O.V., Mitrofanova I.V., Lesnikova N.P. Sedoshenko, Ivanova N.N. Primenenie biotehnologicheskih metodov v ozdorovlenii rastenij i razmnozhenii bezvirusnogo posadochnogo materiala perspektivnyh cvetochno-dekorativnyh kul'tur // ISSN 0201-7997. Sbornik nauchnyh trudov GNBS, 2014. Tom 138. - 5-57.

7. Uajt F.R. Kul'tura rastitel'nyh tkanej - M.: Inostrannaja literatura, 1949. - 160 s.

8. Butenko R.G. Kul'tura izolirovannyh tkanej i fiziologija morfogeneza rastenij. - M.: Nauka,1964. - 272 s.

9. Golodriga P. Ja. Metodicheskie rekomendacii po klonal'nomu mikrorazmnozheniju vinograda. - Jalta: VNIIViPP "Magarach", 1986. - 56 s.

10. Doroshenko N.P. Klonal'noe mikrorazmnozhenie i ozdorovlenie posadochnogo materiala vinograda dlja sozdanija iz nego sortovyh matochnikov intensivnogo tipa (rekomendacii) / Ministerstvo sel'skogo hozjajstva i prodovol'stvija RSFSR. - Moskva, 1992.

11. Hayat, Q. Effect of exogenons salicylic acid under changing environment. A review/Q. Hayat, S. Hayat, M. Irfan, A. Ahmad / Environ.Exp.Bot. - 2010. - 68. - P.14-25.

12. Loake, G. Salicylic acid in plant defence - the players and protagonists/G. Loake, M. Grant / Curr.Opin.Plant.Biol. - 2007. - 10. - P. 466 - 472

13. Krasavina M.S., Malyshenko I., Raldigina G.N., Burmistrova N.A., Nosov A.V. Mozhet li salicilovaja kislota vlijat' na mezhkletochnyj transport virusa tabachnoj mozaiki cherez izmenenie provodimosti plazmodesm // Fiziologija rastenij. - 2002, tom 49, № 1. - S. 71 - 77.

14. Hemoterapija virusov plodovyh i jagodnyh kul'tur // M.T. Upadyshev, Ju.N. Prihod'ko, A.D. Petrova. L.V. Cubera, N.N. Mel'nikova, O. Ju. Surkova - Moskva, 2009. - 71 s.

15. Doroshenko N.P. Primenenie salicilovoj kisloty na jetape vvoda v kul'turu invitro podvojnyh sortov vinograda // Mobilizacija i sohranenie geneticheskih resursov vinograda, sovershenstvovanie metodov selekcionnogo processa: Materialy mezhd. nauch.-prakt. konf. 13-14 avgusta 2008 g. - Novocherkassk, 2008. - S.162-167.

16. Danilova S.A., Dolgih Ju.I. Stimuljacija regeneracii rastenij v kul'ture tkanej kukuruzy pod dejstviem antibiotika cefotaksima // Fiziologija rastenij. - 2004.- T.51, - №4. - S.621-623.

17. Ponomarenko S.P., Gashnikov Z.G. Opredelenie tipa fiziologicheskoj aktivnosti jemistima s ispol'zovaniem specificheskih biotestov // Agrarnaja Rossija. - 1999. - №1(2). - S. 15-16.

18. Nasyrova G.F., Beljaeva N.V., Ponomarenko S.P. Vlijanie jemistima na funkcionirovanie protonnoj pompy kornevoj sistemy kukuruzy. / Elementi reguljacij v roslinnictv. - Kiev, 1998. - S. 41-46.

19. Rozhnova N. A., Gerashhenkov G.A., Janina M.M., Giljazetdinov Sh.Ja. Jemistim induktor ustojchivosti k virusnym boleznjam paslenovyh. // Agrarnaja Rossija. - 1999. - .№1(2). - S.9-13.

20. Fattahov S.G., Reznik V.S., Konovalov A.I. Melafen - perspektivnyj reguljator rosta rastenij dlja sel'skogo hozjajstva i biotehnologii // Materialy Vserossijskogo seminara-soveshhanija "Sostojanie issledovanij i perspektivy primenenija reguljatora rosta novogo pokolenii Melafen v sel'skom hozjajstve i biotehnologii". - Kazan', 2006. - S.3-12.

21. Kozlova R. Ju., Vinter V.G. Melafen kak reguljator sinteza farmacevticheski cennyh alkaloidov pri biotehnologicheskih sposobah ih poluchenija // Materialy Vserossijskogo seminara-soveshhanija "Sostojanie issledovanij i perspektivy primenenija reguljatora rosta novogo pokolenii Melafen v sel'skom hozjajstve i biotehnologii". - Kazan', 2006. - S. 102-114.

22. Zagoskina N.V .Aljavina A.K., Gladyshko T.O. Vozmozhnost' ispol'zovanija melafena pri kul'tivirovanii kletok rastenij v uslovijah invitro // Materialy Vserossijskogo seminara - soveshhanija "Sostojanie issledovanij i perspektivy primenenija reguljatora rosta novogo pokolenii Melafen v sel'skom hozjajstve i biotehnologii". - Kazan', 2006. - S.114.-120.

23. Savina T.A., Cybul'ko N.S. Primenenie melafena dlja uvelichenija produktivnosti kletochnyh kul'tur invitro // Materialy Vserossijskogo seminara - soveshhanija "Sostojanie issledovanij i perspektivy primenenija reguljatora rosta novogo pokolenii Melafen v sel'skom hozjajstve i biotehnologii". - Kazan', 2006. - S. 138 - 143.

24. Il'nickaja, E.T. Stabil'nost' genotipov donskih sortov vinograda po ssr-lokusam pri kul'tivirovanii in vitro / E.T. Il'nickaja, S.V. Tokmakov, A.N. Rebrov // Vinodelie i vinogradarstvo, 2014. - № 2. - S. 24-26.

25. Il'nickaja, E.T. Izuchenie stabil'nosti genotipov sortov vinograda pri kul'tivirovanii invitro na osnove analiza polimorfizma mikrosatelitnyh lokusov / E.T. Il'nickaja, S.V. Tokmakov, A.N. Rebrov // Molekuljarnaja diagnostika. Sb.trudov. - T. 2. - M.: OOO "Izdatel'stvo MBA", 2014. - S. 418-419

Размещено на Allbest.ru