Диагностика бешенства крупного рогатого скота

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургская государственная академия

ветеринарной медицины»

Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии

Курсовая работа по вирусологии

Диагностика бешенства крупного рогатого скота

Киселев Алексей

Санкт-Петербург

2019 г.



Содержание

Введение

1. Предположительный диагноз

2. Характеристика возбудителя

2.1 Классификация

2.2 Строение

2.3 Устойчивость

2.4 Восприимчивость

2.5 Источники и резервуары

2.6 Механизм и пути передачи возбудителя

2.7 Патогенез

3. Дополнительные сведения о признаках болезни

4. Дифференциальная диагностика

5. Взятие и подготовка материала для диагностики

5.1 Лабораторная диагностика

5.2 Вирусологический метод

5.3 Серологический метод

6. Биопрепараты

7. Ветеринарно-санитарная экспертиза

Заключение

Список литературы

Приложение



Введение

Напоминающую бешенство болезнь, поражавшую людей и собак, описывали врачи Древнего Востока (3000 лет до н. э.). Но первое официальное упоминание о бешенстве обнаружено в кодексе законов Древнего Вавилона (2300 лет до н. э.). Демокрит (античная литература, около 500 лет до н. э.) и Аристотель (400 лет до н. э.) подробно описали картину болезни у животных, а Цельс (I в. н. э.) - картину гидрофобии у людей.

В древности бешенство существовало в основном как болезнь диких животных. Но дикие плотоядные заносили эту болезнь и в среду обитания людей. Переходившие на собак крупные эпизоотии бешенства волков и лисиц возникали в Европе в XVI -- XVIII вв. и даже в начале XIX столетия. Особенно опасным было бешенство волков, которые в то время представляли главный резервуар рабического вируса. Если численность волков снижалась, на первый план выступали эпизоотии бешенства среди лисиц (Германия и Швейцария, 1803--1830 гг.). Рост городов обусловил возникновение самостоятельных эпизоотии собачьего (городского) бешенства. Его очаги поддерживались путем циркуляции вируса в крупных популяциях бродячих и безнадзорных собак, которые становились главным источником возбудителя для людей и сельскохозяйственных животных.

Эпизоотии такого типа регистрировали еще в XVII в., а в XVIII-XIX вв. они охватили почти все страны мира, включая Россию. Лишь к концу XIX в. бешенство собак удалось ликвидировать в Великобритании и Скандинавских странах, а перед второй мировой войной - резко сократить его распространение и в Центральной Европе.

В нашей стране введение плановой вакцинации собак в городах позволило концу 50-х годов значительно улучшить эпизоотическую обстановку. Однако уже в это время распространялась новая эпизоотия, поддерживаемая дикими хищниками. Теперь она имеет первостепенное значение. Но в республиках Средней Азии и в Грузии не до конца решена и проблема борьбы с бешенством собак Бешенство: (этиология, патогенез, и профилактика) / Академия медицинских наук СССР, Институт вирусологии им. Д. И. Ивановского; ред.: П. Н. Косякова, Р. М. Шен, Л. П. Горшуновой. -- М.: Государственное издательство медицинской литературы, 1958. -- 218 с..

В настоящее время в России наблюдается рост рабической инфекции. Число случаев бешенства, регистрируемых у животных в нашей стране (лисица, енотовидная собака, волк, кошки и крупный рогатый скот) имеет тенденцию к росту со средним темпом в 10%. Наиболее неблагополучные регионы поданному заболеванию находятся в Центральном и Приволжском ФОО ситуации по заболеванию бешенством на территории России [Электронный ресурс]. Режим доступа-https://www.rospotrebnadzor.ru/about/info/news/news_details.php?ELEMENT_ID=9963&sphrase_id=1678349. Дата обращения (13. 04. 19). возбудитель ветеринарный биопрепарат экспертиза

Из-за широкого распространения тема диагностики бешенства еще не скоро потеряет актуальность. В своей работе я рассмотрю весь процесс диагностики заболевания от предположительного диагноза до ветеринарно-санитарной экспертизы и оценки продуктов убоя при данной болезни.



1. Предположительный диагноз

Условия задачи: « В летнее время (выпас в лесной зоне) в стаде крупного рогатого скота заболели две коровы и нетель. Болезнь сопровождалась следующими признаками: отсутствие аппетита, атония рубца, обильное слюнотечение, возбуждение, сменяющееся угнетением и апатией, хриплое воющее мычание, стремление убежать. Двух коров вынужденно убили. У нетели через 3-4 дня появились параличи и животное погибло. При вскрытии вынужденно убитых и павшего животного установлено: катаральное воспаление слизистых оболочек верхних дыхательных путей, кровеносные сосуды головного мозга расширены, на оболочках головного мозга точечные кровоизлияния»

На основании приведенных данных можно сделать вывод том, что данное заболевание поражает нервную систему животных. Об этом свидетельствует нехарактерное поведение и результаты патологоанатомического вскрытия (расширенные сосуды головного мозга и точечные кровоизлияния, воспаление слизистых оболочек верхних дыхательных путей). Заболевание, протекающее с подобными симптомами - бешенство.

Бешенство: Инфекционное заболевание человека и животных, вызываемое представителями семейства Rhabdoviridae рода Lyssavirus (рабдовирус), и приводящее к летальному исходу в 100% случаев ГОСТ 26075-2013. Методы лабораторной диагностики бешенства.[Электронный ресурс]. Режим доступа- https://allgosts.ru/11/220/gost_26075-2013. Дата обращения (11.05.19).

Передаётся со слюной при укусе больным животным. Затем, распространяясь по нервным путям, вирус достигает слюнных желёз, нервных клеток коры головного мозга, гиппокампа, бульбарных центров и, поражая их, вызывает тяжёлые нарушения, приводящие к гибели Ведерников В.А., Седов В.А., Ивановский Э.В. Бешенство животных. -

М.: Колос, 1974.-12 с.

2. Характеристика возбудителя

2.1 Классификация

Сложно устроенный пулевидный РНК-вирус, относящийся к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus (рис. 2).

Классификация вариантов вируса уличного бешенства основана на эволюционно-экологическом принципе (М. А. Селимов, 1978):

· вирус обычного «уличного» собачьего бешенства;

· вирус африканского собачьего бешенства, или возбудитель «безумной собаки»;

· вирус лисьего природного бешенства;

· вирус американского бешенства летучих мышей;

· лиссавирус, выделенный из мышевидных грызунов в Центральной Европе;

· вирус дикования песцов, или арктического бешенства;

· лиссаподобные вирусы, выделенные от землеройки и летучих мышей и насекомых в Африке

Так же есть фиксированный вирус (virus fixe), полученный Л.Пастером в качестве антирабической вакцины многократным пассированием дикого вируса через мозг кроликов, утративший патогенность для человека, не образующий включений, не выделяющийся со слюнойVirus Pathogen Database and Analysis Resource (ViPR) - Rhabdoviridae - Genome database with visualization and analysis tools: http://www.viprbrc.org/brc/home.spg?decorator=rhabdo. Дата обращения (19.04.19).

2.2 Строение

Рабдовирусы отличают пулевидная форма, наличие оболочки, спиральная симметрия; геном образован РНК. Средние размеры вириона - 180 - 75 нм; один конец закруглен, другой плоский; поверхность выпуклая с шарообразными структурами. РНК вириона симметрично закручена внутри оболочки по продольной оси частицы.

Вирусная оболочка состоит из двойного липидного слоя, включающего в себя внешние поверхностные гликопротеиновые структуры. Мембрану образуют поверхностный гликопротеин (G) и два негликозилированных белка (Ml и М2). Нуклеокапсид дополняют многочисленные копии протеина сердцевины (NP) и несколько копий вирусной транскриптазы; последнюю образуют большой (L) и малый (NS) протеины Virus Pathogen Database and Analysis Resource (ViPR) - Rhabdoviridae - Genome database with visualization and analysis tools: http://www.viprbrc.org/brc/home.spg?decorator=rhabdo. Дата обращения (19.04.19).

Репликативный цикл реализуется в цитоплазме клетки. Выход вирионов из клетки осуществляется путем почкования.

Антигенная структура:

1) нуклеопротеид - группоспецифический антигеном;

2) гликопротеид внешней оболочки - типоспецифический антиген, ответственный за инфекционную и гемагглютинирующую активность вируса.

По проникновению вируса в организм, а также после вакцинации организм вырабатывает нейтрализующие вирус антитела,

которые связываются и инактивируют вирус. Конкретные области белка G, которые являются наиболее антигенными, приводят к производству антител, нейтрализующих вирус (эпитопы). Другие белки, такие как нуклеопротеиды, как было доказано, не могут вызывать выработку антител, нейтрализующих вирус. Эпитопы, которые связываются в нейтрализующие антитела, являются линейными и конформационными

2.3 Устойчивость

Возбудитель бешенства является устойчивым как к физическим, так и к химическим факторам. Низкие температуры консервируют вирус, и в течение всей зимы он сохраняется в мозге зарытых в землю трупов животных. Вирус при 60 єС инактивируется через 10 минут, а при 100 єС - моментально. Ультрафиолетовые лучи убивают его за 5-10 минут. В гниющем материале сохраняется в течение 2-3 недель. Аутолитические процессы и гниение вызывают гибель возбудителя в головном мозге трупов в зависимости от температуры через 5-90 дней.

В поверхностных слоях почвы вирус может сохраняться 2-3месяца. На время, необходимое для инактивации вируса, кроме дезинфектанта, условий окружающей среды (температуры, влажности) оказывает влияние содержание вируса в инфицированных тканях: чем выше первоначальная инфекционная активность вируса, тем дольше сохраняется риск инфицированияГруздев К.Н., Недосеков В.В. Бешенство животных: практическое руководство - М.: Аквариум ЛТД, 2001. - 303 с.

2.4 Восприимчивость

К вирусу бешенства чувствительны все виды теплокровных животных. Врожденная невосприимчивость наблюдается только у рыб, змей, черепах и других холоднокровных. Комитет экспертов ВОЗ по бешенству рекомендует разделять различные виды позвоночных животных по степени чувствительности к вирусу бешенства на 4 группы: чрезвычайно высокая, высокая, средняя и низкая.

2.5 Источники и резервуары

Источниками возбудителя бешенства служат больные дикие и домашние животные, а в некоторых странах - летучие мыши. Выделение рабического вируса из организма этих животных происходит со слюной Инфекционные болезни животных: учеб. пособие / Б.Ф. Бессарабов, А.А. Вашутин, Е.С. Воронин [и др.]. - М.: КолосС, 2007.-631 с.

В крайне упрощенном варианте считается, что рабическая инфекция имеет два самостоятельных экологических типа:

а) сильватическое/природноочаговое;

б) городское/антропургическое.

На взаимодействие этих экотипов существует две диаметрально противоположные точки зрения. Одна исходит от Р.А. Кантарович (1968), он утверждает, что переход возбудителя от домашних плотоядных к диким животным невозможен, другая сводится к возможности активной циркуляции возбудителя в обоих направлениях Дудников С.А. Количественная эпизоотология: основы прикладной эпидемиологии и биостатистики. - Владимир: Демиург, 2004. - 460 с. .

Используя общепринятую классификацию очагов зоонозных инфекций, различают следующие типы очагов бешенства Груздев К.Н., Недосеков В.В. Бешенство животных: практическое руководство - М.: Аквариум ЛТД, 2001. - 313 с:

· Сильватический / природный очаг, резервуаром инфекции являются дикие хищные животные, в первую очередь представители семейства псовых и куньих, реже представители других семейств (виверровые) и отрядов (рукокрылые);

· Городской / антропургический очаг, резервуаром инфекции являются домашние плотоядные (собаки и кошки);

· Природно-антропургический/переходный/смешенный очаг, в котором осуществляется обмен вирусом между популяциями диких и домашних животных

2.6 Механизм и пути передачи возбудителя

Заражение человека и животного происходит при непосредственном контакте с источниками возбудителя бешенства в результате укуса или ослюнения поврежденных кожных покровов или слизистых оболочек. В последние годы доказано, что помимо контактного возможны аэрогенный, алиментарный и трансплацентарный пути передачи вируса.

Механизм передачи инфекции при бешенстве зависит от многих факторов: места проникновения вируса в организм, количества проникшего в организм вируса, вирулентности и других биологических свойств вируса.

Чем богаче нервными окончаниями ткань в области ворот инфекции, тем больше возможность развития инфекции. Наиболее опасны раны в голову, шею, плечи, а у людей - кисти рук. Укусы на бесшерстных местах кожи животных и на незащищенных частях тела людей особенно опасны, так как одежда людей и шерсть животных задерживают значительную часть слюны бешеного животного. Имеет значение и степень резистентности организма, зависящая от вида и возраста животного

2.7 Патогенез

Условно время, необходимое вирусу для размножения делят на 3 этапа:

1. Время нахождения вируса у входных ворот

Вирус проникает через поврежденные покровы в мышечную и соединительную ткань

2. Время продвижения вируса к ЦНС и размножение в ней.

Проникнув в аксон нервной клетки, вирус сбрасывает оболочку и высвобождает в тело нейрона РНК и белки. Для транскрипции своей РНК и трансляции (синтеза пяти белков) вирус использует аппарат клетки. Новосинтезированные вирусные РНК и белки соединяются и образуют следующее поколение вирусных частиц, выходящих через дендриты и атакующие соседние нервные клетки. В это время никакие иммунологические защитные реакции организма еще не срабатывают Инфекционные болезни животных: учеб. пособие / Б.Ф. Бессарабов, А.А. Вашутин, Е.С. Воронин [и др.]. - М.: Колосс, 2007.-671 с.

3. Время появления вируса бешенства в слюне

Процесс размножения сопровождается уже центробежным движением вирусов по эфферентным волокнам периферических нервов. Вирус попадает во все органы и ткани, особенно в больших количествах накапливается в слюнных и слезных железах, роговице. В результате вирус появляется в слюне гораздо раньше наступления клинических признаков болезни.



2. Дополнительные сведения о признаках болезни

С момента проникновения возбудителя бешенства в рану человека или животного и до проявления первых признаков болезни проходит определенный промежуток времени, он называется скрытым или инкубационным периодом.

Инкубационный период продолжается: у собак от 1 до 3 месяцев; у КРС от 1 до 2 месяцев; у лошадей в среднем от 15 до 60 дней. Более коротким он бывает при многочисленных ранах от покусов в голову. Скрытый период от 3 до 6 месяцев наблюдается редко; от 6 месяцев до 1 года.

Болезнь протекает, как правило, в двух формах -- буйной и тихой. Отмечают также абортивную, атипическую и возвратную формы.

При буйной форме симптоматика проявляется в трех стадиях болезни: продромальной, стадии возбуждения и паралитической.

· В продромальной стадии (стадия предвестников) у животных начинается изменяться типичное поведение, проявляется беспричинное беспокойство. Иногда отмечается повышенная чувствительность к свету, шуму, расстраивается зрение, извращается аппетит, несколько повышается температура тела.

· В стадии возбуждения отмечаются приступы буйства, ярости, температура тела повышена, изменяются приобретенные рефлексы, теряется сознание, развиваются судороги, парезы жевательных мышц и мускулатуры глотки. Нередко у больных отмечается обильное слюноотделение, сужение зрачков, учащенное мочеиспускание, дефекация, иногда рвота. В начале стадии имеет место половое возбуждение животного. Количество и продолжительность приступов нарастает, снижается чувствительность, животное начинает слабнуть,

· В стадии параличей теряется болевая чувствительность, развиваются параличи мускулатуры глотки, гортани, языка, мышц глаз, жевательных мышц. Снижается температура тела. Затем быстро парализуются мышцы конечностей и всего туловища. Смерть наступает от паралича центра

При тихой (паралитической) форме бешенства возбуждение выражено слабо или вообще не выражено. У животного при полном отсутствии агрессивности отмечаются сильное слюнотечение и затрудненное глотание. У несведущих людей эти явления нередко вызывают попытку удалить несуществующую кость, и при этом они могут заразиться бешенством. Затем у собак наступает паралич нижней челюсти, мышц конечностей и туловища. Болезнь длится 2-4 дня.

Атипичные формы проявления бешенства, бывшие раньше редкостью, в настоящее время встречаются все чаще. Некоторые исследователи связывают это с новыми вариантами вируса бешенства или с недостаточностью иммунитета после антирабических прививок. Атипичная форма болезни не имеет стадии возбуждения. Отмечаются истощение и атрофия мускулатуры. Зарегистрированы случаи бешенства, которые протекали только при явлениях геморрагического гастроэнтерита: рвота, полужидкий кал, содержащий кроваво-слизистые массы. Животные быстро худеют, параличи проявляются перед смертью Ведерников В.А., Седов В.А., Ивановский Э.В. Бешенство животных. -М.: Колос, 1974.-114 с.

Так как в задании курсовой работы указан крупный рогатый скот, то рассмотрим характерное им течение болезни:

Инкубационный период более 3 месяцев. Он может быть короче - 14-18 дней, или растягиваться до года. Болезнь клинически проявляется также в двух формах: буйной и паралитической.

При буйной форме заболевание начинается с возбуждения. Животное часто ложится, вскакивает, бьет хвостом, топает, бросается на стену, наносит удары рогами. Агрессивность особенно выражена по отношению к собакам и кошкам. Отмечают слюнотечение, потливость, частые позывы к мочеиспусканию и дефекации, половое возбуждение. Такие приступы буйства чередуются с периодами ремиссии. Нередко в припадке бешенства животные погибают. Вскоре развиваются парезы и параличи в области глотки, тазовых, а впоследствии и передних конечностей. Затрудняется глотание, выделяется пенистая слюна. Припадки буйства становятся более редкими и менее сильными. Перед гибелью наблюдаются судорожные сокращения отдельных мышечных групп.

При тихой форме признаки возбуждения выражены слабо или отсутствуют. Наблюдаются угнетение, отказ от корма. У коров прекращаются секреция молока и жвачка. Затем появляются параличи гортани, глотки, нижней челюсти (хриплое мычание, слюнотечение) а затем задних и передних конечностей. Смерть наступает на 2- 4 день Инфекционные болезни животных: учеб. пособие / Б.Ф. Бессарабов, А.А. Вашутин, Е.С. Воронин [и др.]. - М.: Колос, 2007.-671 с.



3. Дифференциальная диагностика

Необходимо исключить болезнь Ауески, при которой больные животные неагрессивны, не бывает извращении аппетита, паралича нижней челюсти. У собак исключают нервную форму чумы, отличающуюся затяжным течением, высокой контагиозностью, возможностью выздоровления больных животных. Бешенство лошадей сходно по клинической картине с инфекционным энцефаломиелитом. Отличия: сильная желтушность слизистых оболочек, отсутствие агрессивности, выздоровление некоторых больных. Подозрение на бешенство может возникнуть при отравлениях, коликах и других незаразных болезнях, для которых характерны сильные боли и беспокойство животных, а также при наличии инородных тел в ротовой полости или глотке, закупорке пищевода. Но в таких случаях не развиваются типичные для бешенства параличи. Однако для точной дифференциации всех этих болезней от бешенства необходимы лабораторные исследования.



Взятие и подготовка материала для диагностики

При работе с больными животными и инфекционным материалом необходимо строго соблюдать меры личной безопасности: надевать резиновые перчатки, халаты с нарукавниками, резиновый или полиэтиленовый фартук, защитные очки, защитную маску для лица МУ 3.1.3114/1--13 Организация работы в очагах инфекционных и паразитарных болезней. [Электронный ресурс]. Режим доступа- https://rospotrebnadzor.ru/documents/details.php?ELEMENT_ID=4872. Дата обращения (19.04.19) .

Скрывать подозрительных на заболевание бешенством животных в полевых условиях запрещено.

В лабораторной диагностике вирусных болезней точность диагноза, прежде всего, зависит от правильности взятия патологического материала, его транспортировки. Материал для исследования от павших или вынужденно убитых животных следует брать как можно быстрее.

Для диагностики бешенства в лабораторию направляют трупы мелких животных, а от крупных и средних животных - голову с двумя первыми шейными позвонками. Для постановки биопробы допускается использовать пробы мозга, консервированные в 30-50% растворе глицерина.

Трупы перед отправкой на исследование обрабатывают инсектицидами.

Патологический материал: труп или голову, упаковывают в пластмассовые мешки, вкладывают в плотно закрывающиеся ящики с влагопоглощающей прокладкой, пропитанной дезинфектантом, мозг в банку с притертой стеклянной или резиновой пробкой, залитую парафином, или в любой другой водонепроницаемый контейнер. Патологический материал сопровождают документом, содержащим следующие данные: имя (название учреждения) и адрес отправителя, вид животного, анамнестические и клинико-эпизоотологические данные и доставляют в лабораторию с нарочным Белоусова Р.В., Троценко Н.И., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии: учеб. пособие. - 3-е изд., перераб. доп. - М.: КолосС, 2005. - 248 с.

Лабораторная диагностика

Методы лабораторной диагностики бешенства строго стандартизированы. Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30-09-2013 г. № 1127-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 26075-2013 введен в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2015 г.

Настоящий стандарт распространяется на все виды млекопитающих животных и устанавливает следующие методы лабораторной диагностики бешенства: метод флуоресцирующих антител (МФА); метод выделения вируса бешенства в культуре клеток мышиной нейробластомы CCL-131 (или невриномы Гассерова узла крысы - НГУК-1); биопроба на белых мышах; метод иммуноферментного анализа (ИФА); реакция диффузионной преципитации (РДП). Так же основанием для постановки диагноза является обнаружение в пат. материале телец Бабеша-Негри.

Вирусологический метод

Задача - поиск антигена возбудителя. В этот метод входит:

· Обнаружение телец-включений

· Выделение вируса в лабораторных моделях

· Идентификация, типизация и дифференциация вируса в МФА, ИФА,

Поиск телец Бабеша-Негри:

На предметных стеклах делают тонкие мазки или отпечатки из всех отделов головного мозга, не менее двух препаратов с каждого отдела мозга, и окрашивают по одному из методов (по Селлерсу, Муромцеву, Михину и т.д.).

При окраске по Михину мазки-отпечатки фиксируют в смеси спирта и эфира 5-10 мин, после чего просушивают фильтровальной бумагой и окрашивают в течение 30-40 мин краской Романовского-Гимза (1-2 капли на 1 мл дистиллированной воды). Быстро промывают подкисленным спиртом (1 капля ледяной уксусной кислоты на 30 мл 96%-го спирта), а затем водой, просушивают фильтровальной бумагой и приступают к исследованию Белоусова Р.В., Троценко Н.И., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии: учеб. пособие. - 3-е изд., перераб. доп. - М.: КолосС, 2005. - 237 с.. Пирамидальные нервные клетки приобретают синеватый цвет, ядро черное, интенсивно окрашенное, а тельца Бабеша-Негри розовато-красные с точечными включениями темно-синего цвета.

Выделение вируса

Согласно ГОСТу 26075-84, в качестве метода выделения возбудителя бешенства рекомендуется биологическая проба на белых мышах и культуре клеток мышиной нейробластомы CCL-131 (или невриномы Гассерова узла крысы - НГУК-1) ГОСТ 26075-2013. Методы лабораторной диагностики бешенства.[Электронный ресурс]. Режим доступа- https://allgosts.ru/11/220/gost_26075-2013. Дата обращения (11.05.19)

Для биопробы используются мышата-сосуны или отъемыши весом 8-12 г. Мышей в количестве 6-10 штук заражают 10%-й суспензией патологического материала, при этом половину из них заражают интрацеребрально в дозе 0,015-0,03 мл., остальных подкожно в область верхней губы в дозе 0,1-0,2 мл. Предпочтительнее использовать мышат- сосунов, так как они более чувствительны. Наблюдают 30 дней. При оценке результатов учитывают наличие клинических признаков у зараженных мышей (взъерошенность шерсти, поедаемость корма, нарушение координации движения, параличи, тремор, прострация). Гибель мышей в первые двое суток после заражения не учитывают, так как чаще всего они погибают по другим причинам (бактериальная контаминация инокулята, его токсичность, травма во время заражения и т.д.). Пробы мозга от больных и погибших животных, начиная с третьих суток, исследуют в МФА.

Биопробу считают положительной, если, начиная с третьих суток после заражения, заболела и погибла хотя бы одна мышь и в пробе мозга с помощью МФА обнаружены специфические включения вируса бешенства.

Отрицательный диагноз может быть дан только по истечении 30 сут. наблюдения при условии, что все зараженные животные останутся живыми и здоровыми. Результаты биопробы считаются окончательными, дальнейшие исследования не проводят ГОСТ 26075-2013. Методы лабораторной диагностики бешенства.[Электронный ресурс]. Режим доступа- https://allgosts.ru/11/220/gost_26075-2013. Дата обращения (11.05.19).

Альтернативным методом выделения вируа является использование как биологической модели культуры клеток мышиной нейробластомы CCL-131 или невриномы Гассерова узла крысы - НГУК-1.

Культуру клеток инкубируют и добавляют суспензию мозга зараженных мышей. Выдерживают 42-48ч в термостате. Далее готовят мазок фиксируют химическим способом и окрашивают. На окрашенные препараты наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло и просматривают в люминесцентном микроскопе.

В окрашенных препаратах не пораженная вирусом бешенства культура клеток светится тусклым, серовато-желтым цветом (отрицательный контроль). Антиген вируса бешенства выявляется в цитоплазме культуры клеток в виде ярких зеленых гранул различной формы и величины с четкими очерченными краями (положительный контроль).

Диагноз на бешенство считается установленным, если в нескольких полях зрения микроскопа в исследуемом препарате обнаруживают типичные желто-зеленые гранулы. Если в культуре клеток вирус бешенства не выявлен, то ставится отрицательный диагноз. Результаты выделения вируса бешенства в культуре клеток окончательные, дальнейшие исследования не проводят.

Идентификация, типизация и дифференциация вируса.

Метод флуоресцирующих антител (МФА)

Сущность метода флуоресцирующих антител заключается в специфическом взаимодействии флуоресцирующих антирабических антител с гомологичным антигеном вируса бешенства. Образующийся при этом комплекс "антиген-антитело", меченный ФИТЦ, обнаруживается визуально по характерному свечению в поле зрения при рассмотрении под люминесцентным микроскопом.

В окрашенных препаратах не пораженная вирусом бешенства мозговая ткань светится тусклым, серовато-желтым цветом. Антиген вируса бешенства выявляется в нейронах и вне клеток в виде ярких зеленых гранул различной формы и величины - от едва заметных до имеющих размер в диаметре 15-20 мкм. Иногда отмечается большое количество мелких ярких зеленых частиц (размером до 1 мкм) округлой и овальной формы.

Диагноз бешенство считается установленным, если в нескольких полях зрения микроскопа в исследуемом препарате обнаруживают типичные желтовато-зеленые гранулы. При этом в контрольных препаратах подобных образований быть не должно ГОСТ 26075-2013. Методы лабораторной диагностики бешенства.[Электронный ресурс]. Режим доступа- https://allgosts.ru/11/220/gost_26075-2013. Дата обращения (11.05.19).

Метод иммуноферментного анализа (ИФА)

В основе ИФА лежит специфическое взаимодействие антигена вируса бешенства с антителом, иммобилизованным на твердом носителе. Связанный антиген выявляется с помощью второго антирабического антитела, меченного пероксидазой, продукт реакции которой окрашивается при добавлении хромогена. Интенсивность окрашивания продукта реакции прямо пропорциональна количеству антигена. Учет реакции проводят визуально или на сканирующем спектрофотометре в соответствии с инструкцией по применению набора.

Серологический метод

Реакция диффузионной преципитации (РДП).

Метод, основанный на способности антител и вирусного антигена бешенства диффундировать в агаровом геле и при специфическом взаимодействии образовывать комплекс «антиген-антитело», наблюдаемый в виде линии преципитации. Реакция применяется для обнаружения специфического рабического антигена в неконсервированном головном мозге животных, павших от уличного бешенства, а также у животных, на которых ставилась биопроба. Для реакции можно использовать несвежий (до 1 мес.) головной мозг.

Готовые разведения антирабической сыворотки вносят в приготовленные лунки в агаровом геле. Чашки Петри помещают в термостат при 37±1°С на 48 часов. Реакцию считают положительной при появлении одной или 2-3 линий преципитации любой интенсивности между лунками, содержащими суспензию мозга и антирабический гамма-глобулин. Отрицательный результат подтверждается другими методами.

При отрицательных показаниях реакции преципитации ставят биопробу.

Реакция иммунофлуоресценции:

Сущность данного метода заключается в соединении меченых антител со специфическим антигеном с образованием светящихся комплексов антиген-антитело. При положительных результатах исследования в препаратах обнаруживают разной величины и формы светящиеся желто-зеленым цветом гранулы в нейронах и вне клеток. Размер их колеблется от едва заметных в виде песчинок образований до 15 - 20 мм. Непораженная вирусом бешенства мозговая ткань светится серовато-желтым цветом. Чувствительность метода по различным данным составляет 98-100%. РИФ часто ставят параллельно с биопробой на мышах.



4. Биопрепараты

К настоящему времени в предупреждении бешенства наиболее эффективными и безопасными признаны культуральные антирабические вакцины (КАВ), полученные на основе клеточных культур или куриных эмбрионов. Вакцины, для производства которых используют нервные ткани животных, обладают меньшей иммуногенностью, чем КАВ, и вызывают сильные побочные эффекты. В связи с этим Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) не рекомендует их производство и применение Вакцины против бешенства: современное состояние и перспективы развития. молекулярная биология, 2015, том 49, № 4, с. 578.

Рекомендованы к применению и зарегистрированы в Государственном Реестре следующие отечественные и зарубежные вакцины:

1) Вакцина антирабическая, инактивированная, сухая, культуральная из штамма Щелково-51. КРС, МРС, лошадям, собакам, кошкам вакцину вводят подкожно, свиньям - внутримышечно. Для профилактической иммунизации животных, прививаемых против бешенства впервые, вакцину вводят двукратно. Животным, ранее привитым против бешенства, вакцину вводят однократно. Ревакцинацию проводят однократно через два года. Иммунитет сохраняется не менее двух лет. Лошадей, свиней, крупный и мелкий рогатый скот, кошек прививают с трехмесячного возраста, собак с двухмесячного возраста. Вынужденную вакцинацию проводят не позднее 48 часов после возможного инфицирования животного. Вакцину вводят животным трехкратно в дозах, указанных в наставлении, с интервалом 7 и 14 дней. Животным, подозрительным по заболеванию бешенством, вакцину вводить запрещается.

2) Вакцина антирабическая, из штамма Щелково-51, инактивированная, жидкая, культуральная (Рабиков). Профилактическую иммунизацию животных проводят подкожно, однократно, с последующей ревакцинацией через год и в дальнейшем через каждые два года. Вакцина предназначена для крупного и мелкого рогатого скота, лошадей. Вакцину вводят животным, начиная с трехмесячного возраста, в дозах, рекомендованных в наставлении по применению. Вынужденную вакцинацию проводят не позже 48 часов после возможного инфицирования животных. Вакцину вводят двукратно с интервалом в 14 дней согласно наставлению по применению. Животным, подозрительным по заболеванию бешенством, вакцину вводить запрещается.

3) Вакцина антирабическая, инактивированная, жидкая, культуральная (ВНИИЗЖ) предназначена для проведения профилактической и вынужденной вакцинации сельскохозяйственных животных, собак и кошек. Профилактическую иммунизацию животных против бешенства проводят однократно с последующей ревакцинацией через год. Животным, ранее прививавшимся против бешенства, вакцинацию проводят один раз в год. Вынужденную вакцинацию проводят не позже 48 часов после возможного инфицирования животного. Вакцину вводят двукратно с интервалом 7 суток.

4) Вакцина антирабическая, инактивированная, культуральная, сорбированная (ВНИИВВиМ) безвредна для всех видов домашних и сельскохозяйственных животных при внутримышечном введении. Иммунизации подлежат только клинически здоровые животные с двухмесячного возраста. Противопоказаний к применению вакцины нет.

5) Вакцина «Рабизин (Rabisin-R)» предназначена для иммунизации сельскохозяйственных, диких и домашних животных против бешенства. Собаки, кошки, хищные: первая вакцинация в возрасте 3 месяца. Ревакцинация ежегодно. Лошадей прививают в 6 месяцев, далее ежегодно. Если младше 6 месяцев родившиеся от вакцинированных кобыл прививают в 4 месяца, ревакцинация через месяц поле первой прививки, далее ежегодно; родившиеся от не вакцинированных кобыл прививают в 2 месяца, далее ежегодно. КРС, МРС, северные олени вакцинируют в 9 месяцев, ревакцинация ежегодно, ели младше 9 месяцев, родившиеся от вакцинированных животных прививают в 4 месяца, ревакцинация между 9- ю и 12-ю месяцами, далее ежегодно. Родившиеся от не вакцинированных животных прививают в 2 месяца, далее ежегодно.



5. Ветеринарно-санитарная экспертиза

При установлении у животных бешенства убой на мясо запрещен. Если бешенство установлено во время убоя и разделки туш, то все продукты убоя подлежат уничтожению сжиганием Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов. [Электронный ресурс]. Режим доступа- https://www.fsvps.ru/fsvps/laws/1107.html#3. Дата обращения (11.05.19).

Убойных животных, покусанных бешенными животными, но не имеющих клинических признаков заболевания, разрешается убивать непосредственно в хозяйстве. Места укуса зачищают и уничтожают, а ВСЭ продуктов убоя проводят на общих основаниях.

Животных, привитых против бешенства антирабической вакциной, разрешается убивать на мясо спустя 3 месяца после вакцинации. Дезинфекцию помещения, где находились больные животные, а также оборудования проводят горячим 10% раствором едкого натра или 4% раствором формальдегида. Деревянные предметы ухода и остатки корма сжигают. Загрязненную выделениями больных животных почву перекапывают на глубину 30 см с сухой известью и заливают дезинфицирующим раствором. Работники лаборатории, проводя исследования, должны соблюдать установленные меры предосторожности.



Заключение

Несмотря на то, что в настоящее время хорошо известны основные механизмы распространения бешенства, имеются весьма надежные средства профилактики болезни и разработана стратегия борьбы с инфекцией, впереди еще много работы в интересах повышения эффективности защиты животных и человека от смертельно опасного заболевания.

Важно своевременное выявление больных животных, изоляция подозреваемых в заболевании и заражении. Охрана сельскохозяйственных животных от нападения больных, утилизация трупов.

С целью профилактики "дикого бешенства" - отлов, отстрел, дегазация нор, пероральная иммунизация, аэрозольная иммунизация летучих мышей в пещерах, иммунизация крупного рогатого скота.

Вследствие этого основными направлениями защиты людей и животных являются контроль и регулирование эпизоотической ситуации, иммунизация животных и людей препаратами и использована методов все более надежных и безопасных.



Список литературы

1. Бешенство: (этиология, патогенез, и профилактика) / Академия медицинских наук СССР, Институт вирусологии им. Д. И. Ивановского; ред.: П. Н. Косякова, Р. М. Шен, Л. П. Горшуновой. -- М.: Государственное издательство медицинской литературы, 1958. -- 218 с.

2. О ситуации по заболеванию бешенством на территории России [Электронный ресурс]. Режим доступа-https://www.rospotrebnadzor.ru/about/info/news/news_details.php?ELEMENT_ID=9963&sphrase_id=1678349. Дата обращения (13. 04. 19)

3. ГОСТ 26075-2013. Методы лабораторной диагностики бешенства.[Электронный ресурс]. Режим доступа- https://allgosts.ru/11/220/gost_26075-2013. Дата обращения (11.05.19)

4. Ведерников В.А., Седов В.А., Ивановский Э.В. Бешенство животных. -М.: Колос, 1974.-12 с

5. Virus Pathogen Database and Analysis Resource (ViPR) - Rhabdoviridae - Genome database with visualization and analysis tools: http://www.viprbrc.org/brc/home.spg?decorator=rhabdo. Дата обращения (19.04.19)

6. Дудников С.А. Количественная эпизоотология: основы прикладной эпидемиологии и биостатистики. - Владимир: Демиург, 2004. - 460 с.

7. Груздев К.Н., Недосеков В.В. Бешенство животных: практическое руководство - М.: Аквариум ЛТД, 2001. - 313 с

8. Инфекционные болезни животных: учеб. пособие / Б.Ф. Бессарабов, А.А. Вашутин, Е.С. Воронин [и др.]. - М.: Колос, 2007.-671 с

9. МУ 3.1.3114/1--13 Организация работы в очагах инфекционных и паразитарных болезней. [Электронный ресурс]. Режим доступа- https://rospotrebnadzor.ru/documents/details.php?ELEMENT_ID=4872. Дата обращения (19.04.19)

10. Белоусова Р.В., Троценко Н.И., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии: учеб. пособие. - 3-е изд., перераб. доп. - М.: КолосС, 2005. - 248 с

11. Вакцины против бешенства: современное состояние и перспективы развития. молекулярная биология, 2015, том 49, № 4, с. 578

12. Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов. [Электронный ресурс]. Режим доступа- https://www.fsvps.ru/fsvps/laws/1107.html#3. Дата обращения (11.05.19)

13. Бешенство. Краткая характеристика заболевания//Ветеринария сельскохозяйственных животных. - 2012. - №3. - 17-25 с.

14. Сюрин В. Н. Вирусные болезни животных - М.: ВНИТИБП, 1998

15. Краткий справочник ветеринарного врача/ Н.М. Алтухов, В.И. Афанасьев, Б.А. Башкиров и др.; М.: Агропромиздат, 1990.

16. Мовсеянц А.А. Современные проблемы бешенства. Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов. 2003.

17. Шевелев А. С., Николаева Р. Ф. Последний подвиг Пастера. -- М.: Медицина, 1988. -- 112 с.



Приложение

Направление

В____________________________________________ветеринарную лабораторию

Адрес:_______________________________________________________________

При этом направляется для _____________________________________________

патологический материал (перечислить какой)_____________________________

_____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________

от ________________________, принадлежащего___________________________

(вид и возраст животного)

_____________________________________________________________________

(название хозяйства, фермы, отделения, фамилия владельца животного)

_____________________________________________________________________

Дата заболевания животного____________________________________________

Дата падежа __________________________________________________________

Клиническая картина___________________________________________________

_____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________

Данные патологического вскрытия_______________________________________

_____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________

Предположительный диагноз____________________________________________ _____________________________________________________________________

Дата отправки материала_______________________________________________

Материал направил____________________________________________________

____________________________ ____________________________

(Должность) (Ф.И.О.)

Приложение 2

Отметка лаборатории

Дата поступления материала__________

Доставлено проб____________________

Забраковано проб___________________

В _________________________________________ветеринарную лабораторию

Адрес_____________________________________________________________

При этом направляется_____________________проб крови (сыворотки крови)

от_________________________________________________________________

___________________________________________________________________

(вид животного)

___________________________________________________________________

(название, адрес хозяйства, № тел., Ф.И.О. владельца животного)

для_________________________ исследования на ________________________

(вид исследования) (название болезни)

Хозяйство (отделение, бригада, табун, отара, питомник) ___________________

___________________________________________________________________

(благополучное, неблагополучное)

___________________________________________________________________

(вакцинировано, указать вакцину, дату вакцинации)

___________________________________________________________________

Исследование проводится первично, вторично (подчеркнуть)

Дата проведения и результат предыдущего исследования__________________

___________________________________________________________________

Дата взятия крови ___________________________________________________

Вет. врач, направивший пробы Специалист, проводивший исследования

___________________________ _________________________

(Ф.И.О. разборчиво, подпись) (Ф.И.О. разборчиво, подпись)

Размещено на Allbest.ru