Дифференциальная диагностика Классической и Африканской чумы свиней

Размещено на http://www.allbest.ru/

ФГБОУ ВО «Санкт-петербургская государственная академия

ветеринарной медицины»

Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии

Курсовая работа по вирусологии

ВАРИАНТ № 19

Дифференциальная диагностика Классической и Африканской чумы свиней

Выполнила студентка 2 курса

Факультета ветеринарной санитарной экспертизы

КУЗНЕЦОВА ОКСАНА АНДРЕЕВНА

Проверил преподаватель:

Кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии

СМИРНОВА ЛЮБОВЬ ИВАНОВНА

Санкт-Петербург 2018г.



Оглавление

Введение

Глава 1. Диагностическая задача

Глава 2. Характеристика возбудителей африканской и классической чумы свиней

2.1 Характеристика вируса классической чумы свиней

2.2 Характеристика вируса африканской чумы свиней

Глава 3. Эпизоотологические данные

Глава 4. Патогенез

Глава 5. Клинические признаки

Глава 6. Патологоанатомические признаки

Глава 7. Подготовка патологического материала к исследованию

Глава 8. Лабораторная диагностика

8.1 Вирусологический метод

8.1.1 Обнаружение вирусов

8.1.2 Выделение вирусов

8.1.3 Идентификация и типизация вирусов

8.2 Серологический метод

8.3 Дифференциальная диагностика

Глава 9. Иммунитет и профилактика

Глава 10. ВСЭ

Заключение

Список использованной литературы

Приложения



Введение

Вспышки африканской и классической чумы свиней характеризуются в отдельных случаях 100 % летальностью, что влечёт за собой огромный экономический ущерб. Наиболее опасна африканская чума свиней, так как средств для терапии и вакцин для специфической профилактики этой болезни пока нет. Сжигается огромное количество поголовья. Ситуацию усугубляет высокая контагиозность данных заболеваний среди диких и домашних свиней.

По клиническим, патологоанатомическим признакам и эпизоотии данные заболевания дифференцировать невозможно. Ключевую роль в дифференцировке играет лабораторная диагностика.

Очень важно дифференцировать данные заболевания своевременно для принятия соответствующих мер борьбы и профилактики. Это поможет предотвратить широкое распространение данного заболевания.

В данной работе подробно характеризуются возбудители африканской и классической чумы свиней, эпизоотологические данные, клинические и патолоанатомические признаки, патогенез, лабораторная диагностика, методы дифференцировки, лечения и профилактики, а также ветеринарно-санитарная экспертиза.

африканский чума свинья патолоанатомический



Глава 1. Диагностическая задача

В данной диагностической задаче показан случай вспышки заболевания на частной свиноферме, которое затронуло свиней всех возрастов. При этом гибель составляет около 70 % от общего количества животных. Из клинических признаков были обнаружены: повышение температуры тела до 40?41° C, угнетение, слабость, отказ от корма, слизисто-гнойные истечения из глаз, веки опухшие, у некоторых животных рвота и понос. На коже ушей, живота, внутренней поверхности конечностей были обнаружены кровоизлияния. У отдельных животных болезнь сопровождалась судорогами и парезами задних конечностей. На вскрытии павших и вынуждено убитых животных было установлено, что лимфатические узлы чёрно-красные с мраморным рисунком на разрезе. А также на селезёнке, слизистых оболочках гортани, мочеточников, мочевого пузыря, кишечника были обнаружены кровоизлияния. Почки отёчны, с кровоизлияниями, анемичны.

На основе этих данных можно диагностировать классическую чуму свиней (лат. Pestis suum). Это высококонтагиозная вирусная болезнь, характеризующая при остром течении септицемией и геморрагическим диатезом, постоянным типом лихорадки, а при подостром или хроническом часто осложняется секундарной инфекцией, что проявляется в виде крупозных пневмоний и крупозно-дифтерическом колитом. [6]

Но в данном случае также можно диагностировать африканскую чуму свиней (лат. Pestis Africana suum) или болезнь Монтгомери. Это особо опасная высококонтагиозная вирусная болезнь, характеризующая лихорадкой, цианозом кожи, обширными геморрагиями во внутренних органах и большой летальностью. [6]



Глава 2. Характеристика возбудителей африканской и классической чумы свиней

2.1 Характеристика вируса классической чумы свиней

Возбудителем классической чумы свиней является РНК-содержащий вирус рода Pestivirus семейства Flaviviridae. Вирион сферической формы размером 35-40 нм. (Приложение 1) Вирус находится во всех тканях и во всех органах больной свиньи. [3]

В свинарниках вирус не теряет вирулентности в течение года. При +56°С вирус инактивируется через 60 мин., при +60°С - через 10 мин. Низкие температуры консервируют возбудитель, а кипячение моментально инактивирует. В навозе и трупах он сохраняется 3-5 дней, в почве - 1-2 нед., в охлаждённом мясе - 2-4 мес., в замороженном мясе - несколько лет, в крови при -50°С - до 6 мес. Быстро инактивируется под воздействием эфира и хлороформа; растворы едкого натра (2-3%), формальдегида (2,5%) и водная взвесь хлорной извести (15-20%) убивают вирус в течение 1 ч. [6]

Имеется иммунологический тип вируса с тремя серологическими группами: A, B и C. В группу А входят штаммы, вызывающие остро протекающую болезнь у свиней всех возрастов, в группу В - вирулентные для поросят и вызывающие атипичную или хроническую чуму, в группу С ? слабовирулентный штамм 331. В сыворотке крови свиней на стадии выздоровления обнаруживают вируснейтрализующие, преципитирующие и комплементсвязывающие антитела. [6]

Вирус пантропен, но наибольшей концентрации достигает в лимфатических узлах, костном мозге, слизистой оболочке кишечника и в эндотелии кровеносных сосудов. Выделение вируса начинается в инкубационный период с фекалиями, мочой, истечениями из носа и глаз. Вирусоносительство продолжается до 3-10 мес.

Культивирование вируса можно проводить на неимунных свиньях, в первичной (лёгкие, селезёнка, почка и лейкоциты свиней) и перевиваемой (почки поросёнка) культуре клеток. Репродукция вируса в культуре клеток не сопровождается выраженным ЦПД. [5]

2.2 Характеристика вируса африканской чумы свиней

Возбудитель африканской чумы свиней является, в отличие от возбудителя классической чумы свиней, ДНК-содержащим. Данный вирус единственный представитель семейства Asfarviridae рода Asfivirus. Вирионы данного вируса представляют собой округлые частицы, которые обладают значительно большим диаметром, чем вирионы вируса классической чумы свиней (175-225 нм). Они состоят из плотного нуклеоида, икосаэдрического капсида и наружной липопротеидной оболочки. (Приложение 2) Нуклеоид содержит ДНК с двунитчатой структурой и молекулярной массой 10·107 Д. Капсид имеет двухслойное строение и состоит из 1892-2171 капсомеров. Наружная липопротеидная оболочка представлена 2 слоями. [1]

У возбудителя африканской чумы свиней довольно высокая устойчивость. Он сохраняет активность при +5°С в течение 5-7 лет, при +20-22°С - до 18 мес., при +37°С - 10-30 дней, при +60°С - 20 мин. В трупах свиней инактивируется через 2 мес., в кале - 16 дней, в почве - за 190 дней, в холодильнике при температуре от -30° до - 60°С - от 6 до 10 лет, под действием солнечных лучей погибает через 40-45 мин., в мясе инфицированных свиней ? через 5-6 мес., в свинарниках - через 3 мес. Из дезинфицирующих средств наиболее эффективными являются него оказывает хлорактивные препараты (5%-ный хлорамин, хлорная известь, гипохлориты натрия и кальция с 1-2%-ным активным хлором). Также вирус устойчив к изменениям рН среды, к высушиванию и гниению. [4] Вирус обнаруживается во всех органах и тканях больных животных. Из организма он выделяется с кровью, носовыми истечениями, фекалиями, мочой, слюной и выдыхаемым воздухом. У большинства переболевших животных формируется практически пожизненное вирусоносительство.

Вирус африканской чумы свиней обладает сложной антигенной структурой. Он содержит групповые комплементсвязывающий, преципитирующий и типовой гемадсорбирующий антигены. [3] У вируса установлено две антигенные группы (А, В) и одна подгруппа (С), в пределах которых выявлено много серотипов. В организме вирус продуцирует общие для всех штаммов преципитирующие, комплементсвязывающие и задерживающие гемадсорбцию антитела. Вируснейтрализующих антител не образуется. [5]

Данный вирус культивируют с проявлением цитопатического действия в культуре клеток костного мозга, лейкоцитов, в перевивамых культурах. При этом в культурах лейкоцитов или клетках костного мозга свиней наблюдается явление адсорбции эритроцитов на поверхности поражённых клеток. Эритроциты прикрепляются к стенке лейкоцита, образуя вокруг него характерный венчик, и иногда закрывают клетку со всех сторон. Через 48-79 ч возбудитель вызывает образование цитоплазматических включений с последующим вытеканием цитоплазмы и появлением многоядерных гигантских клеток. Для культивирования вируса могут быть использованы подсвинки 3-4-месячного возраста, которых заражают любым способом, но чаще внутримышечно. При развитии клинических признаков болезни на 4-6-е сутки после заражения животных убивают и в качестве вируссодержащего материала используют кровь и селезенку. [1]



Глава 3. Эпизоотологические данные

Классическая чума свиней впервые была описана в Северной Америке в 1833г. В 60-х гг. XIX в. она распространилась в большинстве стран Европы, и до 50-х гг. XX в. ее отмечали во многих странах мира. В Россию вирус чумы занесен в 1903 г. из Западной Европы. В свою очередь африканская чума свиней впервые была зарегистрирована гораздо позже, в 1903 г. в Восточной Африке. Африканская чума свиней до конца 1950-х годов встречалась только в Африке. Португалия оказалась первой страной в Европе, в которой в 1957г. была зарегистрирована африканская чума свиней. Впоследствии это заболевание проявилось в других Европейских странах. [9]

В естественных условиях африканской и классической чумой свиней болеют только домашние и дикие виды свиней всех пород и возрастов. Причём африканской чуме свиней также подвержены дикие африканские свиньи (бородавочники, кустарниковые, лесные) с субклиническим течением. Животные других видов, а также человек невосприимчивы к вирусу.

Источниками возбудителей инфекций являются больные свиньи, выделяющие вирус во внешнюю среду с мочой, фекалиями, истечениями из носа и глаз. [6]

При классической чуме свиней возбудитель передаётся в основном горизонтальным путём: алиментарно, респираторно, через слизистые оболочки половых органов, глаз и повреждённую кожу. При атипичной форме классической чумы свиней возможен вертикальный путь заражения через плаценту матери. При африканской чуме свиней основными воротами инфекции являются респираторный тракт, слизистые оболочки ротовой полости, носоглоточного кольца, глаза и поврежденные кожные покровы.

К факторам передачи возбудителей классической и африканской чумы свиней относят контаминированные объекты внешней среды, трупы больных животных, боенские отходы. Так же вирус переносят домашние и дикие животные, мухи, птицы, обслуживающий персонал, ветеринарные специалисты. При африканской чуме свиней вирусоносителями также являются дикие африканские свиньи и клещи рода Ornithodoros. [1] Особое значение как фактор передачи приобретают необеззараженные мясо свиней и мясные продукты, отходы пищевых предприятий. Переносчиками вируса могут быть кровососущие насекомые. [3]

Классическая и африканская чума свиней могут наблюдаться в любое время года. Но классическую чуму свиней чаще всего отмечают осенью при массовых перемещениях животных. Заболеваемость при данных заболеваниях достигает 95-100%, летальность при молниеносном течении ? 60-100%.

Возвращаясь к диагностической задаче, из приведённых эпизотологических данных на классическую и африканскую чуму свиней в первую очередь указывает нам то, что заболевание затронуло свиней всех видов, а также высокая смертность. Так как это наблюдалось на частной свиноферме, можно сделать вывод, что свиньи оказались не вакцинированными против чумы свиней, что и поспособствовало широкому распространению и высокой летальности.



Глава 4. Патогенез

При развитии классической и африканской чумы свиней возбудитель, попав в организм животного, размножается в лимфоидно-ретикулярной ткани. Затем возбудители распространяются гематогенным и лимфогенным путём по всему организму. Для вируса классической чумы свиней характерна пантропность, но в основном он локализуетс и размножается во внутренних органах, богатых лимфоидно-ретикулярными клетками, особенно в лимфатических узлах, селезенке, костном мозге, печени, почек.

При африканской чуме свиней также поражаются лимфатические узлы лёгких. Оба возбудителя вызывают некроз сосудистых стенок при поражении эндотелия сосудов, вследствие чего образуются очаги некрозов в лимфатических узлах, кишечнике, других органах. В результате поражения кроветворных органов развиваются анемия и лейкопения, сильное угнетение опсоно-фагоцитарной реакции и резкое снижение бактерицидности сыворотки крови. [1] При остром течении африканской и классической чумы свиней отмечают многочисленные геморрагии. К тому же при африканской чуме свиней мы можем наблюдать дистрофию коллагеновых и ретикулярных волокон. Возбудитель классической чумы свиней размножается в клетках иммунной системы и вызывает их разрушение. Вирус заметно снижает иммунные силы организма, что приводит к активации условно-патогенных микроорганизмов. Развиваются пневмония и дифтеритический колит, вторичная бактериальная септицемия (пастереллез, сальмонеллез). Развиваются воспалительные процессы в головном и спинном мозге (негнойный энцефалит и миелит), что клинически проявляется депрессией, припадками, возбуждением. Всё это в совокупности приводит к истощению животного и его гибели. [10] Нет доказательств, что вирус африканской чумы свиней размножается в Т- и В-лимфоцитах. Но предположение о том, что лимфопения при данном заболевании связана с разрушением лимфоцитов, существует. [1]

Глава 5. Клинические признаки

В диагностической задаче на классическую и африканскую чуму свиней нам указывают следующие клинические признаки: повышение температуры тела до 40?41° C, угнетение, слабость, отказ от корма, слизисто-гнойные истечения из глаз, опухшие веки, а также рвота и понос у некоторых животных, судороги парезы задних конечностей. На коже ушей, живота, внутренней поверхности конечностей были обнаружены кровоизлияния. Данные признаки соответствуют острому течению классической и африканской чумы свиней. Данные признаки характерны для острого и сверхострого течения классической и африканской чумы свиней.

Кроме того при сверхостром течении при классической чуме свиней отмечают: учащаются сердцебиение и дыхание, затруднённое мочеиспускание. Общее число лейкоцитов снижается с 8,5-9,0 тыс/мкл до 2,5-3,0 тыс/мкл, увеличивается доля эозинофильных и базофильных гранулоцитов, число тромбоцитов уменьшается со 180-300 до 100 тыс/мкл. Животные погибают через 1-2 дня. [4]

При остром течении кроме выше указанных симптомов отмечают сгорбленность спины, абортирование супоросных свиноматок, иногда слизисто-гнойный ринит, а у отдельных животных носовое кровотечение.

В обоих случаях, как и указано в диагностической задаче, мы можем наблюдать кровоизлияния, но в дальнейшем они сливаются и образуют темно-багровые пятна, не исчезающие при надавливании. Также в результате сердечной недостаточности кожа пятачка, ушных раковин, живота и конечностей приобретает синюшную окраску. Перед гибелью температура понижается до 35-36 °С, животные погибают в состоянии комы на 7-10-й день. [6]

Клинические признаки африканской чумы свиней при сверхостром течении идентичны таковым при классической чуме свиней (повышение температуры тела до 41-42 °С, учащение дыхания и покраснение кожи). Стоит отметить, что летальность в данном случае составляет около 100%. Гибель наступает через 1-3 дня после появления первых клинических признаков. [1]

При остром течении к вышеуказанным признакам можно добавить признаки пневмонии и отёка легких, абортирование супоросных свиней почти в 100% случаев.



Глава 6. Патологоанатомические признаки

Из патологоанатомических признаков в диагностической задаче отмечены чёрно-красные лимфатические узлы с мраморным рисунком на разрезе, кровоизлияния на селезёнке, слизистых оболочках гортани, мочеточников, мочевого пузыря, кишечника, почек. Кроме того указывались отёчность и анемичность почек.

При вскрытии животных павших от острой формы болезни на классическую чуму свиней также будут указывать: засохшие корочки тёмно-коричневого цвета в уголках глаз и рта, кожа ушей, шеи, брюшной стенки, внутренней поверхности бёдер окрашена в тёмно-красный цвет, лимфатические узлы и селезёнка увеличены. Также на селезёнке отмечают инфаркт по краям. Кровоизлияния также отмечают и на эпикарде. Лёгкие кровенаполненные, отёчные, пятнистые. В желудке и кишечнике мы видим катаральное или геморрагическое воспаление с множеством кровоизлияний в основании желудка и толстом кишечнике. [6]

При вскрытии животных погибших при острой форме африканской чумы помимо вышеуказанных признаков можно увидеть: сохранение упитанности, выраженное трупное окоченение, размягчение миокарда и кровоизлияния на нём, увеличенные лёгкие с точечными кровоизлияниями. Отмечают также синюшность кожи и видимых слизистых оболочек. [2] Соединительная ткань легких пропитана серозно-фибринозным студенистым экссудатом, что придает органу характерное ярко выраженное дольчатое строение. Наблюдается увеличение и набухание печени. Желчный пузырь также будет увеличен, его стенки отёчны, пропитаны серозно-фибринозной студнеобразной жидкостью. Желчь густая, часто с кровью. [4] Ярче выражен геморрагический диатез, увеличена и размягчена селезенка, полнокровие и кровоизлияния в почках. Чаще поражаются, имея вид кровяных сгустков, портальные, почечные и брыжеечные лимфоузлы. Сильно выражен отек интерстициальной ткани легких, скопление в грудной полости кровянистой жидкости. Редко отмечают инфаркт селезенки, постоянно ? тотальный распад лимфоцитов и тканей лимфоидных органов. [5]



Глава 7. Подготовка патологического материала к исследованию

В качестве материала для лабораторной диагностики отправляют кровь, кусочки селезёнки, миндалин, лимфоузлов, почек и лёгких, костный мозг из грудной или трубчатой кости. [5] Материал для лабораторной диагностики отбирают от 3-5 животных, убитых в стадии агонии, или не позже чем через 2-3 ч после гибели. Пробы отбирают в стерильные флаконы массой 5-10 г каждый, герметически укупоривают резиновыми пробками. Флаконы снаружи обрабатывают 5%-ным раствором едкого натра или осветленным 20%-ным раствором хлорной извести, обертывают марлей, смоченной тем же раствором, укладывают в полиэтиленовый пакет и помещают в термос со льдом. В случае длительной транспортировки (более 2 сут) пробы органов замораживают. Термос помещают в металлический контейнер, опечатывают и доставляют с нарочным в лабораторию с сопроводительным документом.[3]

При исследовании сыворотки переболевших животных направляют 5-10 проб крови (по 5-8 смі) от свиней, подозреваемых в переболевании классической чумой. Кровь берут не ранее чем через 10-20 суток после установления признаков болезни.



Глава 8. Лабораторная диагностика

Болезнь диагностируют на основании анализа эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Очень трудно быстро постановить диагноза на основе эпизоотии, клинической картины и патологоанатомических изменений, так как частая вакцинация свиней против чумы создает иммунный фон, влияющий на симптомы болезни и характер патоморфологических изменений. Правильный диагноз может быть поставлен только лабораторными методами. Эффективность любого диагностического метода зависит от ряда конкретных условий, в частности необходимо учитывать биологические свойства вируса, время отбора проб и вид используемого для исследования материала. [8]

8.1 Вирусологический метод

8.1.1 Обнаружение вирусов

Наиболее часто используемой техникой для обнаружения вирусов африканской и классической чумы свиней является ПЦР (полимеразная цепная реакция). Она проводится с использованием диагностических олигонуклеотидов, специфичных консервативному участку генома. Суть реакции заключается в выявлении вирусной ДНК или РНК, затем её подвергают обратной транскрипции и амплифицируют. Данным методом возможно выявить все штаммы вируса африканской чумы свиней (как и гемадсорбирующие, так и не гемадсорбирующие штаммы) с высокой чувствительностью и РНК вируса классической чумы свиней.

С помощью этой реакции вирусы можно обнаружить в инфицированных культурах клеток и в материалах от больных и павших животных, а также у вакцинированных животных. ПЦР может быть использована для исследования образцов плохого качества и малопригодных для исследований другими методами. При помощи ПЦР результаты могут быть получены в течение 5-6 часов. [9]

Весьма ценным и быстрым методом ранней диагностики классичекой чумы свиней является гематологический - резко выраженная лейкопения (2,5-3 тыс. лейкоцитов в 1 мл крови), резкое уменьшение или исчезновение ретикулоцитов, эозинопения.

Для обнаружения вирусного антигена в патологическом материале применяют реакцию прямой иммунофлюоресценции (РПИФ). Исследуют мазки-отпечатки миндалин и других органов павших и убитых животных, а также криосрезы тканей. РПИФ рекомендуется использовать при отсутствии возможности проведения ПЦР. Данный метод лучше использовать совместно с другими серологическими тестами (ИФА и иммуноблотинг), что бы исключить ложноотрицательные результаты, вызванные блокировкой антителами. Это очень быстрый, простой и чувствительный метод, который также может быть использован при исследовании зараженных культур клеток. Микроскопические наблюдения показывают интенсивную флюоресценцию цитоплазматических включений в инфицированных клетках. При активном развитии инфекции флюоресценция может иметь зернистый вид. [4]

При классической чуме свиней данный метод активно используется для определения наличия вируса в перевиваемой линии клеток почки поросенка (РК-15), используемую для выделения вируса, а также в лейкоцитарном концентрате проб крови больных или подозрительных по заболеванию животных, в мазках костного мозга грудной и в срезах органов.

В регионах где африканская чума свиней является эндемичной, и подострая и хронические формы болезни являются предоминантными, чувствительность данного метода уменьшается и составляет всего 40% при исследовании срезов органов и мазков-отпечатков.

В свою очередь при африканской чуме свиней ставят реакцию гемадсорбции. При этом вирус африканской чумы свиней выделяют с использованием первичной культуры клеток свиных макрофагов. В организме животного вирус инфицирует и реплицируется в лейкоцитах периферической крови, где вызывает развитие цитопатического эффекта в зараженных макрофагах. До наступления лизиса клеток вызванного вируса можно отметить феномен гемадсорбции. Микроскопические наблюдения показывают образование морул из эритроцитов вокруг лейкоцитов.[8]

Некоторые штаммы африканской чумы свиней являются не гемадсорбирующими. В этих случаях, должны быть проведены дополнительные исследования осадка клеток методами ПЦР и РПИФ, чтобы подтвердить наличие вируса.

Реакция гемадсобции является наиболее специфичным и чувствительным методом идентификации, поскольку ни один из вирусов поражающих свней не вызывает развитие феномена гемадсорбции. Она является референтной методикой несмотря на трудности в постановке и продолжительности выполнения (5-10 дней). Обычно используется только в референтных лабораториях.

РИОЭФ (реакция иммуноэлектроосмофореза) применяется для диагностики КЧС, в которой антигены и антитела движутся строго навстречу друг другу под действием электрического поля. Вирус выявляется за 30 минут в мезентериальных лимфоузлах и суспензии ткани поджелудочной железы.[10]

Также для обнаружения возбудителя классической чумы свиней применяют биопробу. Биопробу при диагностике ставят в сомнительных случаях. Из благополучного по инфекционным болезням хозяйства берут иммунизированных и неиммунизированных против классической чумы свиней поросят в возрасте 2-3 мес. массой 20-30 кг. В качестве материала для заражения используют 10%-ную суспензию органов (селезенки, лимфоузлов, костного мозга) или кровь от павших животных. Материал вводят подкожно. Диагноз на классическую чуму свиней считают установленным, если неиммунизированные животные на 2-5-й день заболевают и в течение 7-10 дней погибают, а иммунизированные остаются здоровыми. [5]

Гистологические исследования при классической чуме свиней проводят с целью обнаружения специфических изменений нервных тканей. От павших или убитых свиней берут полушария головного мозга, мозжечка, аммоновых рогов, спинного мозга в различных участках. Препараты окрашивают гематоксилин-эозином. В большинстве случаев (70-93%) в ЦНС обнаруживают негнойный лимфоцитарный энцефаломиелит. В срезах, приготовленных из лимфоузлов, сердечной мышцы и печени, можно обнаружить присутствие ацидофильных внутриядерных телец-включений, несколько меньших, чем ядрышки.[5]

8.1.2 Выделение вирусов

Наиболее достоверным и надежным лабораторным методом для выделения вируса африканской чумы свиней в клеточных культурах и его идентификации является реакция гемадсорбции. Он состоит в том, что зараженные вирусом африканской чумы свиней мононуклеарные фагоциты в ККМС (культура клеток мозга свиней) или КЛС (культура лейкоцитов свиней) приобретают способность адсорбировать на себя эритроциты крови свиньи, образуя при этом скопления в виде ягоды малины. Для получения ККМС и КЛС используют клинически здоровых подсвинков 2-4-мес возраста массой 25-30 кг из хозяйств, благополучных по инфекционным болезням. Лейкоциты получают из гепаринизированной крови подсвинков. [3]

О размножении вируса также судят по РГАд. Для заражения используют 2-3-сут культуру лейкоцитов или клеток костного мозга свиней. Вирус африканской чумы свиней характеризуется рядом уникальных особенностей. Во-первых, популяция его гетерогенна, во-вторых, некоторые штаммы вируса способны вызывать атипичную «рыхлую» ГАд, в отличие от типичной «многослойной» ГАд . Некоторые варианты АЧС не обладают ГАд свойствами, а вызывают только ЦПД, которое проявляется лизисом зараженных клеток. При выделении негемадсорбирующих изолятов вируса идентификацию проводят в ИФ или ставят биопробы. [4]

Выделение вируса при классической чуме свиней проводят на перевиваемой линии культуры клеток РК-15 (почки поросенка), выращенной на покровных стеклах в пробирках. Вирус классической чумы свиней в культуре РК-15 не вызывает ЦПД, поэтому индикацию его проводят с помощью серологических реакций иммунофлюоресценции и непрямой гемаглюгглютинации.

8.1.3 Идентификация и типизация вирусов

Идентификация вируса КЧС проводится реакцией иммунофлюоресценции, реакцией диффузной преципитации, реакцией иммуноэлектроосмофореза, а также с помощью ПЦР.

При диагностике классической чумы свиней реакцию иммунофлуоресценции ставят следующим образом. Из проб органов готовят замороженные срезы. Из проб костного мозга и лейкоцитарного концентрата - мазки. Для приготовления последних берут грудную кость, делают продольный разрез и вынимают красный костный мозг, из которого делают несколько мазков. Для приготовления мазков из лейкоцитарного концентрата от больных или подозреваемых в заболевании свиней берут 15 мл крови с антикоагулянтом, энергично встряхивают, оставляют на 1 ч при комнатной температуре, затем отбирают плазму с лейкоцитами и центрифугируют, из осадка лейкоцитов (беловатый осадок) делают 2-3 мазка. Приготовленные препараты (срезы и мазки) фиксируют в охлажденном ацетоне 10 мин, после испарения ацетона промывают 15-20 мин в физиологическом растворе рН 7,2 и окрашивают при 37°С 30 мин конъюгатом в рабочем разведении, к которому добавляют краситель Эванса в соотношении: 3 части конъюгата и 1 часть красителя, затем препарат промывают в фосфатном буфере и оставляют на 10 мин в дистиллированной воде. После частичного подсушивания на воздухе на препарат наносят забуференный глицерин (9 частей глицерина и 1 часть ФБР рН 8), покрывают покровным стеклом и микроскопируют.

Аналогично ставят контроли: а) исследуемый материал и нормальный конъюгат с красителем Эванса; б) неинфицированный материал и специфический конъюгат с красителем Эванса. При микроскопии фон препарата флюоресцирует красно-оранжевым цветом, ядра клеток темные, специфическое свечение характеризуется зеленым цветом цитоплазмы. В мазках из красного костного мозга и лейкоцитарного концентрата специфическая флюоресценция отличается большой яркостью и количеством флюоресцирующих клеток. Специфическое свечение в цитоплазме даже в отдельных клетках препаратов, полученных от подозрительных по заболеванию животных, указывает на наличие вируса классической чумы свиней. В контрольных препаратах подобного свечения не должно быть. [10]

Указанный метод отличается специфичностью и быстротой. Однако во избежание погрешностей метода при внедрении его в лаборатории следует иметь в виду, что специфичность результатов зависит от следующих факторов: качества сыворотки-маркера (она должна иметь высокие титры, быть моновалентной, полученной от свиней, не обработанных другими АГ), качества исследуемого материала (должен быть отобран не позже 2-3 ч после смерти животного, фиксирован в ацетоне или замораживанием и сразу же отправлен на исследование). В сопроводительном письме необходимо указывать клиническую и эпизоотологическую характеристику болезни, даты и названия прививок. При учете реакции следует знать, что вакцинный вирус сохраняется в вакцинированных свиньях до 15 дней после вакцинации и в ИФ не дифференцируется от полевого вируса.

Реакцию непрямой гемагглютинации ставят для обнаружения АГ вируса в патологическом материале из органов и тканей свиней. При этом используют следующие компоненты: а) АТ-эритроцитарный диагностикум; б) специфический АГ - вирус-вакцина КЧС; в) нормальный (контрольный) АГ; г) 1%-ный раствор нормальной лошадиной сыворотки в забуференном физиологическом растворе с рН 7,2; д) формалинизированные и танизированные эритроциты барана; е) исследуемый материал.

РНГА ставят микрометодом в объеме 0,075 мл с помощью аппарата Такачи или Титертек. Готовят двукратные разведения исследуемого материала (от 1:2 до 1:512) в объеме 0,05 мл и такие же разведения контрольных АГ (специфического и нормального). Затем во все луночки вносят 0,025 мл 3%-ной суспензии эритроцитарного диагностикума. Кроме того, ставят дополнительно контроли; а) 0,05 мл 1%-ного р-ра нормальной сыворотки лошади и 0,025 мл эритроцитарного диагностикума; б) 0,05 мл исследуемого материала в разведениях и 0,025 мл формалинизированных и танизированных эритроцитов. После этого пластинки встряхивают и оставляют на 1,5-2 ч при комнатной температуре. Учет проводят в крестах. РНГА считают положительной при обнаружении агглютинации не менее чем на три креста в разведениях 1:8 и выше. [4]

Реакции диффузной преципитации и иммуноэлектроосмофореза различаются методами получения линий преципитации: в РДП это происходит посредством свободной диффузии растворов АГ и AT из лунок в агаровом геле равномерно во все стороны, а в ИЭОФ АГ и AT движутся строго навстречу друг другу под действием электрического поля, в результате чего увеличивается их концентрация в месте встречи и там образуются более выраженные полосы преципитации.

Для постановки ИЭОФ необходим специальный прибор для электрофореза, дающий регулируемое напряжение постоянного тока до 300В. ИЭОФ в несколько раз чувствительнее метода РДП, требует незначительного количества материала и позволяет получать результаты через 30 мин. Метод стандартизован, описана методика приготовления агарозного геля. Он используется для выявления АГ вируса классической чумы свиней в мезентериальных лимфоузлах и суспензии ткани поджелудочной железы при клинических случаях болезни. Данный метод позволяет выявлять и специфические AT. Метод быстрый, легко осуществим и более чувствителен для лабораторной диагностики классической чумы свиней, чем РДП. [7]

Для идентификации и типизации вируса африканской чумы свиней ставят тест ауто-ГАд, РЗГАд, РДП, РИФ.

Метод постановки ауто-ГАд основывается на выявлении ГАд клеток, образовавшихся в крови больного животного. Его применение позволяет получить предварительный результат в течение 1-3 ч после отбора пробы крови без убоя животного. Реакция считается положительной, если в культуре клеток, зараженной одним из материалов, обнаружена четкая ГАд, при отсутствии её в контроле. Результат выделения вируса отрицательный при отсутствии ГАд и ЦПД в культурах клеток в течение 3-х пассажей.

Постановка РЗГАд предназначена для определения типовой принадлежности ГАд штаммов вируса африканской чумы свиней и основана на способности специфических сывороток задерживать ГАд в культурах клеток КМС и ЛС, зараженных гомологичным типом вируса африканской чумы свиней. РЗГАд ставят со стандартными специфическими сыворотками серотипов 1, 2, 3 и 4, полученными, на соответствующие эталонные штаммы вируса АЧС («Лиссабон-57» -1-й тип, «Конго-73» - 2-ой тип, «Мозамбик-78» - 3-й тип, «Португалия-бО» - 4-й тип). Зараженные и контрольные культуры клеток инкубируют при 37- 38°С. Учет результатов реакции проводят ежедневно в течение 2 суток при отсутствии неспецифической дегенерации в контроле культур клеток и сывороток, наличии ГАд в контроле. [1]

РДП успешно применяется для обнаружения специфического АГ в органах павших свиней (печень, селезенка), а также для выявления специфических АТ в сыворотках и тканях хронически больных животных. РДП - относительно низкочувствительная. Она проявляется с тканями, полученными через 24 ч и после подъема температуры, перед появлением других симптомов болезни. Поскольку специфичность РДП была доказана и при европейской чуме свиней, ее предложили для дифференциации двух видов чумы свиней. Для этого используют сыворотку свиней, иммунизированных аттенуированным вариантом вируса, которая дает преципитацию с материалами от свиней и с детритом инфицированных клеток. [8]

Реакцию считают положительной, если между лунками со специфическим и испытуемым компонентами (АГ и сыворотками) через 12-24 ч появляются одна или две линии преципитации. Они должны быть тонкими и иметь четкие границы. При отсутствии их между указанными компонентами реакцию считают отрицательной.

РИФ применяют для выявления специфического АГ африканской чумы синей в мазках-отпечатках, приготовленных из проб органов больных или павших свиней, а также в культуре клеток, инфицированных вируссодержащим материалом. При сомнительных результатах дальнейшие исследования с помощью РИФ проводят в культуре ЛС и КМС, инокулированной подозреваемым в заражении вирусом африканской чумы свиней материалом, через 24-72 ч после его внесения [1]

8.2 Серологический метод

Серологическая диагностика классической чумы свиней в последние годы базируется на использовании преимущественно трех серологических реакций: реакция нейтрализации флюоресцирующих микробляшек, реакция непрямой ИФ и непрямой вариант твердофазного ИФА.

НИФ применяется для выявления и титрования AT в сыворотках крови переболевших свиней. Используют зараженные вирусом перевиваемые клетки (РК-15) на стеклышках, на которых титруют испытуемые сыворотки в 2-кратных разведениях от 1:20 до 1:640 в непрямой ИФ по общепринятой методике с использованием во втором этапе реакции антисвиного ФИТЦ-Ig. Титром AT к КЧС считают последнее разведение сыворотки, обеспечивающее зеленое свечение (на 2 креста) диффузного цитоплазматического АГ вируса при отсутствии подобного свечения в контролях с интактными тест-объектами и нормальной свиной сывороткой. [4]

При постановке РНФБ в качестве чувствительной системы используют перевиваемую культуру клеток РК-15, выращенную на покровных стеклах в пробирках. РНФБ проводят микрометодом, используя пластиковые панели. Суспензию клеток (в 1 мл 10-800 тыс. клеток) готовят на среде Игла с 5% фетальной сыворотки крови КРС с добавлением буфера HEPES.). Данный метод может успешно применяться и для титрования специфических AT. Пробы сывороток крови берут от животных не ранее 15 дн. после клинического выздоровления. Перед использованием их инактивируют при 56°С 30 мин. Сыворотки разводят от 1:2 до 1:2560 и смешивают с равным объемом вакцинного вируса в количестве 100 ККИД50 (клеточно-культуральных инфекционных доз), встряхивают и выдерживают 60 мин при 37°С. Каждое разведение сыворотки с вирусом вносят по 0,4 мл в 4 пробирки с культурой клеток РК-15 на стеклышках. Адсорбируют 2 ч при 37°С. Смесь сыворотка-вирус сливают, отмывают клетки средой, заливают 2 мл поддерживающей среды и инкубируют при 37°С. [5]

Реакцию учитывают через 48 ч инкубации. Препараты вынимают из пробирок, ополаскивают в физиологическом растворе рН 7,2-7,4 и обрабатывают, как указано выше. Реакция сопровождается соответствующими контролями (смесь вируса со средой, гипериммунной и нормальной сыворотками и незараженная культура клеток). Отсутствие флюоресцирующих микробляшек (при наличии их в контроле вируса в смеси с питательной средой и нормальной сывороткой) в препаратах вируса классической чумы свиней, обработанных гипериммунной и испытуемыми сыворотками в разведении 1:2 и выше, указывает на наличие в материалах специфических AT. Титром AT считают то предельное разведение сыворотки, при котором наблюдается полное подавление образования флюоресцирующих микробляшек.

Во избежание получения ложных результатов при использовании культуры клеток необходимо добавлять в среду бычью сыворотку, свободную от вируса диареи КРС и AT.

ИЭОФ при диагностике классической чумы свиней используется для выявления AT к вирусу классической чумы свиней в сыворотках зараженных свиней. Для исследования применяется АГ, экстрагированный из зараженных вирусом классической чумы свиней клеток РК-15. [7]

ИФА в непрямой модификации заключается в том, что на миллипоровские фильтры, смоченные раствором АГ вируса классической чумы свиней, наносят свиные сыворотки. Затем фильтры инкубируют в растворе кроличьего IgG (против IgG свиньи), меченого пероксидазой хрена. Активность связанной пероксидазы определяют в растворе субстрата 3,3-диаминобензидина. Опытные образцы окрашивались в коричневый цвет, контрольные оставались бесцветными. Реакция громоздкая.

Метод ELISA разработан для определения AT к вирусу классической чумы свиней на микроплатах, поддающийся автоматическому анализу. Очищенного и концентрированнный АГ для теста ELISA получают из штамма Альфорт, размноженного в культуре клеток РК-15. ELISA легок в выполнении, дешев, позволяет быстро исследовать большое количество образцов, высокочувствителен и рекомендован в качестве метода оценки при крупномасштабных обследованиях.

Серологический метод в случае диагностики вируса африканской чумы свиней включает в себя следующие реакции: НИФ, ИФА, ELISA, ВИЭОФ. Определение АТ к вирусу африканской чумы свиней имеет большое эпизоотологическое значение в виду длительной персистенции вируса в организме свиней без проявления клинических признаков болезни. Такие животные-вирусоносители могут явиться источником инфекции. А обнаружение АТ позволяет судить о количестве хронических и субклинических случаев африканской чумы свиней [8]

НИФ может применяться в лабораторной диагностике для определения специфических AT к вирусу африканской чумы свиней. В качестве АГ для непрямого метода ИФ используют КЛС, зараженные вирусомафриканской чумы свиней. Через 24-48 ч после заражения культуры фиксируют в ацетоне, после чего наслаивают на 60 мин исследуемые сыворотки и еще на 30 мин антисвиную коньюгированную сыворотку. При положительной реакции в цитоплазме наблюдают ярко-зеленое свечение вирусных включений. Для контроля используют зараженные клеточные культуры, обработанные сывороткой здоровых свиней.

ИФА используют для обнаружения специфических AT в сыворотках крови больных африканской чумой свиней. Полистироловые пластины для ИФА сенсибилизируют специфическим и нормальным АГ, взятыми в рабочих разведениях, в течение ночи при комнатной температуре во влажной камере в карбонатно-бикарбонатном буферном растворе. Учет результатов проводят через 20 мин после проявления окраски на сканирующем спектрофотометре при длине волн 492 нм или визуально. Для визуального учета необходимо остановить реакцию, внося в лунки по 25 мкл H2SO4. Реакцию учитывают по разности поглощения сыворотки в испытуемых разведениях против специфического и контрольного АГ. Результат считают положительным, если разница поглощения при разведении сыворотки 1:125 превышает 0,1.[1]

Метод ингибирования твердофазного ИФА предназначен для выявления специфических к вирусу африканской чумы свиней антител в сыворотке крови или суспензиях проб органов животных с низким их уровнем (1:5-1.25) в ранние сроки после вакцинации или заражения (3-5 сут). Преимущество его заключается в том, что он позволяет выявлять AT в цельной пробе и проще в техническом исполнении, не уступая по чувствительности непрямому методу

Инструментальный учет проводят после внесения субстрата и инкубирования пластин в темноте при комнатной температуре аналогично непрямому ИФА. Если интенсивность (оптическая плотность) окрашивания в лунках с испытуемыми пробами снижается на 50% и более по отношению к оптической плотности содержимого лунок с нормальной сывороткой, то есть оптическая плотность содержимого лунок с исследуемой сывороткой в 2 раза и более ниже, то данная сыворотка считается положительной. [10]

ВИЭОФ используют для выявления специфических AT в сыворотках крови больных свиней при хроническом и латентном течении АЧС.

8.3 Дифференциальная диагностика

Для дифференциации ставят РИФ, тест перекрёстного иммунитета и тест гемадсорбции.

РИФ мазков-отпечатков, несмотря на низкую чувствительность широко применяют в зональных специализированных лабораториях при предварительной оценке материала для последующего направления в региональный центр. Исследуемым материалом для выделения вирусов африканской и классической чумы свиней сразу же инокулируют культуры ККМС (КЛС) и РК-15. В течение 1-5 сут инкубирования культуры клеток 1-го пассажа контролируют РГА и ИФ на наличие вируса африканской чумы свиней, исключая возможную неспецифическую ГАд или наличие негемадсорбирующего вируса. Для обнаружения вируса классической чумы свиней в культуре клеток РК-15 ИФ проводят ежедневно в течение 4 сут. При отрицательных результатах делают 3 пассажа с обязательной ИФ. [3]

В случае выделения вируса африканкой чумы свиней его типируют в РЗГА. Одновременно пробы исследуют на наличие специфических АТ в сыворотке и органах (20%-ная суспензия) унифицированной ИФ на оба вируса, методом ингибирования твердофазного ИФА возбудителя африканской чумы свиней и PH флюоресцирующих микробляшек (РНФБ) вируса классческой чумы свиней. Положительные результаты ИФ и РНФБ на классическую чуму свиней оценивают в зависимости от сроков проведения вакцинации, а на африканскую чуму свиней - дают основание поставить окончательный диагноз.

Тест гемадсорбции основан на том, что вирус классической чумы свиней не вызывает склеивание эритроцитов, а некоторые штаммы вируса африканской чумы свиней проявляют гемадсорбцию. [1]

При первичном подозрении на африканскую чуму свиней постановка биопробы обязательна. Её ставят с разрешения Департамента ветеринарии. Существует два варианта постановки.

Первый вариант. Четырех из восьми подсвинков 2-4-мес возраста, иммунных к классической чуме, заражают внутримышечно вирусом КЧС, а 4-х - испытуемым материалом (кровь, суспензия органов). У всех подопытных животных ежедневно измеряют температуру. Если зараженные животные заболеют и погибнут (обычно в течение 10 дн), а все инфицированные вирусом КЧС останутся здоровыми, в испытуемом материале содержится вирус африканской чумы свиней. Специфичность гибели зараженных животных должна быть подтверждена характерными для африканской чумы свиней клиническими симптомами и патологоанатомическими изменениями, а также выделением от павших животных вируса и его идентификацией. Если после заражения останутся здоровыми все 8 подсвинков испытуемый материал содержит вирус классической чумы свиней. [8]

Второй вариант. Восемь подсвинков 2-4-мес возраста массой от 25 до 40 кг (4 из них должны быть иммунны к классической чуме свиней, а 4 - не иммунны) заражают внутримышечно суспензией из испытуемого материала (или кровью). Если иммунизированные против классической чумы свиней животные останутся здоровыми, а не иммунизированные погибнут, значит, в испытуемом материале был вирус классической чумы свиней. Если же погибнут все 8 подсвинков - в испытуемом материале был вирус африканской чумы свиней. В последнем случае специфичность гибели подсвинков от африканской чумы свиней должна быть подтверждена, как указано выше. В случае опасности появления африканской чумы свиней на территории страны диагноз на классическую и африканскую чуму свиней ставят одновременно. Поэтому второй вариант иммунологической пробы предпочтительнее, так как позволяет диагностировать обе болезни одновременно. Биопроба методологически не сложна, но в санитарном отношении должна быть проведена с соблюдением мер, абсолютно исключающих вынос инфекции. [8]



Глава 9. Иммунитет и профилактика

Иммунитет при естественном переболевании классической чумой свиней развивается стойкий, пожизненный. Для активной иммунизации свиней против классической чумы свиней используют живые вакцины: сухую культуральную вирусвакцину ВГНКИ, вирусвакцину ЛК-ВНИИВВиМ, сухую авирулентную лапинизированную вирусвакцину АСВ. При применении этих вакцин иммунитет наступает на 4-7-й день и длится до 1 года.[6]

Кроме того, в РФ разработана инактивированная сухая культуральная вирус-вакцина против классической чумы свиней из штамма ЛК-К для перорального, внутримышечного и аэрозольного применения. Эта вакцина является единственным эффективным средством иммунизации диких кабанов.

О механизме формирования иммунитета при африканской чуме свиней на данный момент нет единого мнения, так как у переболевших животных отсутствуют вируснейтрализующие АТ. У выживших животных обнаруживают комплементсвсязывающие и преципитирующие АТ. Средства специфической профилактики на данный момент не разработаны и вакцины отсутствуют. [1]

Профилактика в первую очередь направлена на предотвращение заноса в хозяйство возбудителя классической чумы свиней, поддержания общего ветеринарно-санитарного порядка. Необходимо комплектовать ферму только здоровыми животными из благополучных по чуме хозяйств. Привезённых животных помещают в карантин на 30 дней перед вводом в основное стадо. Недопустимо включать в стадо животных из хозяйств, использующих в качестве корма боенские отходы. Боенские отходы, используемые в откормочных хозяйствах, подвергают надёжному обеззараживанию. Также необходимо проводить профилактическую вакцинацию. [6]

При подозрении на классическую чуму свиней вводят жёсткие ограничительные меры для недопущения распространения болезни. Больных животных изолируют, перегруппировки запрещены. Проводят клинический осмотр с термометрией поголовья свинарников из неблагополучных хозяйствах. Станки дезинфецируют 2-3 %-м раствором едкого натра.

При подтверждении диагноза хозяйство закрывают на карантин. Проводят мероприятия направленные на локализацию, ликвидацию болезни и обеззараживание окружающей среды.[6]

В откормочных и подсобных хозяйствах убивают все поголовье неблагополучных свинарников. В племенных и репродукторных хозяйствах убивают только больных животных, подозрительных по заболеванию чумой (отставание в росте, клинические признаки алиментарных и респираторных болезней). При убое больных, подозрительных и подозреваемых в заражении чумой свиней шкуры с туш не снимают, а опаливают или ошпаривают; трупы сжигают. Всех остальных животных с нормальной температурой тела в неблагополучных свинарниках немедленно вакцинируют. Навоз обезвреживают биотермически.

Карантин снимают через 40 дней после последнего случая падежа или убоя бальных свиней, обеззараживания мяса, полученного от их убоя, и при условии соблюдения всех ветеринарно-санитарных мероприятий, предусмотренных инструкцией.

Профилактика и меры борьбы при африканской чуме свиней направлены на недопущению заноса вируса в свиноводческие хозяйства из неблагополучных стран. Для этого устанавливают строгий надзор на международном железнодорожном, воздушном, морском транспорте. Строго следят за сбором и обезвреживанием пищевых и других отходов, выгруженных из различных средств транспорта, прибывшего из-за границы, независимо от их благополучия по африканской чуме свиней. Запрещается содержать свиней на территориях международных портов и пограничных станциях.[4]

При подозрении на африканскую чуму свиней срочно отбирают патологический материал и направляют его с нарочным в ветлабораторию или ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (600900, п/о Юрьевец, г. Владимир) для вирусологического исследования и организации противоэпизоогических мероприятий.[1]

В случае установления диагноза африканской чумы свиней на неблагополучные пункты или район немедленно накладывают карантин, определяют границы эпизоотического очага, границы первой угрожаемой зоны (5-20 км от эпизоотического очага) и второй угрожаемой зоны (до 100-150 км от эпизоотическою очага). Организуют необходимые меры по ликвидации болезни и ставят на учет все свиное поголовье в угрожаемой зоне. Всех свиней в эпизоотическом очаге уничтожают, трупы, малоценный инвентарь, навоз, оставшиеся корма, подстилку сжигают, проводят тщательную дезинфекцию, двукратно повторяя ее через 4-5 дней с применением хлорной извести, содержащей 4% активного хлора, формалина. Организуют дезинфекцию и дератизационные мероприятия. В хозяйствах первой угрожаемой зоны всех свиней убивают на мясокомбинате с переработкой продуктов убоя на консервы или вареные колбасы. [9]

Карантин снимают черев 30 дней после уничтожения всех свиней в эпизоотическом очага, убоя свиней в угрожаемой зоне и проведении всех ветерипарно-санитарных мероприятий. Помещения эксплуатируют только через 6 месяцев после снятия карантина.



Глава 10. ВСЭ

В случае классической чумы свиней в сыром виде мясо от больных и подозреваемых в заболевании чумой выпускать запрещено. При наличии дегенеративных изменений в мускулатуре тушу с внутренними органами направляют на техническую утилизацию. При отсутствии изменений -- тушу и органы подвергают бактериологическому исследованию на наличие сальмонелл. При их наличии -- обезвреживают мясо с помощью высокой температуры. Шкуры с туш свиней не снимают, опаливают или ошпаривают. [5]