Экспресс-метод определения степени зрелости гонад у производителей осетровых

Размещено на http://www.allbest.ru/

экспресс-метод определения степени зрелости гонад у производителей осетровых

Казанский Б.Н., Феклов Ю.А., Подушка С.Б., Молодцов А.Н.

В настоящее время в результате гидростроительства динамика хода осетровых в реки бассейнов южных морей нашей страны очень изменилась. Возникли большие затруднения в отборе производителей для рыбоводных целей. Особенно остро это ощущается в отношении осетровых Дона, Кубани и севрюги в низовьях Волги.

Ранее (Казанский, 1957; 1962; 1975) было показано, что при завершении преднерестовой IV стадии зрелости гонад в яйцеклетках старшей генерации усиливается поляризация, ядро выходит из зоны крупнозернистого желтка и приближается к оболочкам в район микропиле. Только после того, как ядро займет определенное положение, возможен нормальный ответ на однократную гипофизарную инъекцию: Воздействуя малыми дозами суспензии гипофиза, можно ускоренно завершить процесс поляризации и подготовить производителя к нормальному созреванию после обычной гипофизарной инъекции. На основе этого возник вариант градуальных (дробных, по Конрадту и Сахарову, 1966) гипофизарных инъекций. Оценку степени поляризации ооцитов по щуповым пробам с целью отбора производителей осетра для рыбоводных целей под плотиной Волгоградской ГЭС применял В.3. Трусов (1963, 1967). Для этого использовался замораживающий микротом, что усложняло методику.

В нашей работе для определения степени поляризации ооцитов у производителей осетровых брали щуповые пробы. Щуп (рис. 1), которым мы пользовались, несколько отличается от применяемых на приемных рыбоводных пунктах точностью исполнения и размерами. Пробы брали из каудальной части яичника. Щуп вводили в полость тела под углом 30°, что позволяло не задевать жизненно важные органы.

Рис. 1. Щуп в собранном виде (ст. 4Ч13) для экспресс-анализа состояния гонад при отборе производителей осетровых: 1 -- наконечник; 2 -- стержень.

Для определения степени завершения IV стадии зрелости извлеченные щупом икринки в течение 2 мин кипятят в пробирке с водой. Достаточно отвердевшие икринки разрезают острым лезвием безопасной бритвы точно по оси от анимального полюса к вегетативному (Детлаф, Васецкий, Давыдова, 1965), а затем рассматривают и измеряют под лупой или бинокуляром. По положению ядра относительно анимального полюса определяют степень поляризации ооцита (рис. 2). В целях объективной оценки этого процесса сотрудником кафедры ихтиологии и гидробиологии ЛГУ Ю.А. Фекловым предложен удобный показатель поляризации l:

l = A : B,

где A -- расстояние от ядра до оболочки анимального полюса ооцита; B -- наибольшее расстояние по оси от анимального до вегетативного полюса.

Чем меньше значение l, тем боль-ше поляризован ооцит и тем большая завершенность IV стадии зрелости гонад.

На основании экспериментов установлено, что нормальная реакция на гипофизарную инъекцию наступает в случае, если l ? 1/14 ? 0,07 (см. рис. 2). Наибольшая поляризация ооцита обычно характеризуется показателем l = 1/30 ч 1/40. Коме этого, для приблизительной ориентировки можно использовать показатель положения ядра, выраженный в его диаметрах от оболочек анимального полюса. Если этот показатель равен или меньше 1/2 диаметра, то ооцит уже достаточно подготовлен к реакции на обычную гипофизарную инъекцию. Но так как форма ядра варьирует, этот показатель менее надежен. Сопутствующим признаком является выход всего или почти всего ядра в зону мелкозернистого желтка.

Рис. 2. Ооцит волжского ходового раннего ярового осетра.

Показатель поляризации l = 1/14 = 0,07. После гипофизарной инъекции произошло полное созревание. Оплодотворяемость составила 92,3%, развитие нормальное (буэн, азан по Гейденгайну, увеличение 25Ч.)

В условиях Волги этот способ опробован на озимом осетре осеннего хода (Казанский и Молодцов, 1972). В конце сентября -- октябре мигранты этого типа идут в весьма различном состоянии, из них около 5% имеют гонады в завершенной IV стадии зрелости и могут созревать после обычной гипофизарной инъекции. По предложенному методу нам удалось отобрать зрелых производителей и получить от них потомство, используя обычную гипофизарную инъекцию. К рыбам с незавершенной IV стадией зрелости гонад была применена градуальная инъекция (15 мг дробно + 40 мг через сутки). Цитологический анализ щуповых проб по мере созревания рыб показал, что под влиянием первых доз весьма усилилась поляризация ооцитов, а последняя доза вызвала нормальное созревание половых продуктов (табл. 1).

Таблица 1

Примечание. Данные Б.Н. Казанского и А.Н. Молодцова за 1970 г.

Более полные данные исследований (Казанский и Молодцов, 1970) приведены в табл. 2.

производитель осетровый яичник гипофизарный

Таблица 2

В опытах с производителями озимого осетра с незавершенной поляризацией ооцитов при их выдерживании до весны следующего года щуповые пробы брали через каждые 2 мес., т. е. до 5 раз. Несмотря на это от всех подопытных рыб весной следующего года была получена икра. Оплодотворяемость составила 75--90%. Отхода производителей не было. С севрюгой столь длительные опыты не проводили. Однако аккуратное взятие одной щуповой пробы гарантирует успех при отборе производителей для инъекции при кратковременном (7--10 сут) содержании в хороших условиях.

Эти же принципы анализа могут быть использованы и для выяснения причин нарушения созревания производителей на рыбоводных заводах.

В течение рыбоводного сезона 1977 г. нами было проведено исследование состояния яичников у не созревших после гипофизарных инъекций самок осетра и севрюги на рыбоводном заводе «Взморье» в низовье Дона. Перед инъекцией брали щуповые пробы для выяснения исходного состояния яичников несозревших рыб. Установлено, что перед гормональным воздействием ядро в ооцитах находится в зоне мелкозернистого желтка анимальной области, однако полностью поляризация еще не завершена. Гипофизарная инъекция способствует дальнейшему смещению ядра к анимальному полюсу ооцита и к исчезновению ядрышек, но созревания и овуляции не происходит. Эффект сходен с тем, что наблюдается при градуальных инъекциях, когда в организм самки вводится первая (уменьшенная) доза гормона. При расчете доз гипофиза для инъекции на осетроводных заводах Дона используется «Временная инструкция по заводскому разведению осетровых в Азово-Донском районе» (Гунько, 1971). Рекомендуемые в ней дозы гипофизов следует считать заниженными. Так, например, самкам осетра и севрюги при температуре воды выше 20° С по инструкции положено вводить 1,5 мг ацетонированных гипофизов на 1 кг массы рыбы. Если учесть, что часть гонадотропного вещества теряется при растирании гипофизов и приготовлении порошка, то при инъецировании получается типичный эффект обедненной реакции, завершающей лишь этап поляризации ооцита.

Для повышения эффективности работы осетроводных заводов Дона предлагаем пересмотреть используемые дозы гипофизов. На первом этапе можно рекомендовать увеличение количества вводимого препарата вдвое либо повторное инъецирование несозревших самок по принципу градуальных инъекций. В дальнейшем необходимо внедрить экспресс-методы оценки зрелости производителей по щуповым пробам и выбор на их основе способа гормональной стимуляции.

Щуп нашей конструкции позволяет успешно брать пробы гонад и у самцов. Мазок семенника на предметном стекле рассматривается под микроскопом при среднем увеличении (об. 20Ч или 40Ч, ок. 7Ч) при косом освещении. Наличие множества сформированных сперматозоидов свидетельствует о возможности их нормального созревания.

Экспресс-метод может быть рекомендован для отбора и заготовки производителей осетровых. Однако он не выявляет случаев тонких нарушений гаметогенеза, включая начальные фазы атрезии фолликулов.

Размещено на Allbest.ru