Изучение биологических свойств аттенуированного штамма Salmonella dublin 12

Размещено на http://allbest.ru

Западно-Казахстанский аграрно-технический университет

имени Жангир хана

УДК: 619:616. 9: 636.2

Изучение биологических свойств аттенуированного штамма Salmonella dublin 12

Есенгалиев Г.Г., соискатель

Бияшев К.Б., доктор вет. наук, профессор

Таубаев У.Б., кандидат вет. наук, доцент

Введение

Сальмонеллез относится к числу зоонозов, чрезвычайно распространенных в Казахстане и во многих странах мира. Наиболее эффективными средствами специфической профилактики его являются живые вакцины [1].

Изыскание методов и совершенствование препаратов для специфической профилактики сальмонеллезных инфекций требует детального изучения морфологических, культуральных, биохимических и антигенных свойств вакцинных штаммов [2, 3, 4]. При этом немаловажное значение имеет константность остаточной вирулентности, токсичность, степень диссеминации и сроки элиминации, иммуногенность аттенуированных штаммов.

Одним из важных требований к вакцинным штаммам является сохранение ими так называемой остаточной вирулентности, от чего зависит высокая иммунизирующая способность живой вакцины [3, 5].

Исходя из вышеизложенного, целью данной работы являлось - изучение биологических свойств аттенуированного штамма Salmonella dublin 12.

Материалы и методы

Нами были изучены биологические свойства аттенуированного штамма Salmonella dublin 12 в сравнении с вирулентной культурой Salmonella dublin 373. Особое внимание было обращено на возможность диссоциации культур, биохимические и антигенные свойства, остаточную вирулентность, стабильность биологических свойств при пассировании на питательных средах и в организме животных, а также после лиофильного высушивания. Культуральные свойства штаммов изучались на мясопептонном агаре и на полужидких средах с 0,1 % агара. После 16-18 часового культивирования на скошенном агаре появляется равномерный сочный рост. При рассеве на чашки Петри выросли круглые колонии с голубоватым оттенком на проникающем свете. В мазках культуры аттенуированного и вирулентного штаммов представлялись в виде палочек, располагавшихся беспорядочно или иногда в виде коротких цепочек. Бактерии обладали хорошей подвижностью. По Грамму окрашивались отрицательно.

Биохимические свойства изучались на средах содержащих сахара и многоатомные спирты. Мы постоянно пользовались полужидкими средами с индикатором Андредэ. Результаты учитывали в течение 10 суток (таблица 1). При определении интенсивности образования сероводорода использовали полоски фильтровальной бумаги размером 1Ч8 см, пропитанные насыщенным водным раствором уксусно-кислого свинца и высушенные на воздухе. Бумажки укрепляли между ватной пробкой и стенкой пробирки над верхним краем скошенного агара pH 7,2-7,4. Посевы выдерживали в термостате при 37 °С. Через двое суток проводили учет. Культура штамма S. dublin 12 и вирулентный штамм S. dublin обладали хорошо выраженными свойствами образования сероводорода, что подтверждалось потемнением фильтровальной бумажки.

Таблица 1 - Характеристика биохимических свойств штамма S. dublin 12 и вирулентной культуры S. dublin 373

Агглютинабильные свойства проверяли в развернутой реакции агглютинации и на стекле с общими и монорецепторными сыворотками. В качестве контроля аналогичную реакцию ставили с вирулентной культурой.

Разведения сывороток готовили 1:25; 1:200; 1:400; 1:800; 1:1600; 1:3200; 1:6400; 1:12800.

Затем в пробирки добавляли 0,05 мл антигена, представляющего суточную агаровую культуру штамма S. Dublin 12 с содержанием в 1 мл 5 млрд м.т. Учет реакции проводили макроскопически, а результат ее оценивали по четырехкрестовой системе по интенсивности образования осадка и просветлению надосадочной жидкости.

Исследования показали, что вакцинный штамм 12 и вирулентная культура S. dublin примерно в одинаковых титрах агглютинируются О-сыворотками - 1, 9, 12 (1:25; 1:800), Н-сывороткой - q, p (1:600) и в высоких титрах ОН-сывороткой S. dublin (1:6400).

Культуры штаммов при постановке реакции агглютинации на стекле реагировали с О-сыворотками 1, 9, 12 (+ + + +), Н-сыворотками q, p (+ + + +) и с общей «ОН» сывороткой (+ + + +).

Следовательно, аттенуированный штамм 12 по антигенным свойствам является полноценным. Как известно, главным преимуществом вакцинных штаммов является пониженная их вирулентность. В этой связи на протяжении всех опытов наше внимание обращалось на константность вирулентности.

В виду большой чувствительности к гертнеровской инфекции молодых животных, остаточную вирулентность проверяли на белых мышах (весом 16-18 г) и телятах (в возрасте 8-10 суток) с учетом их выживаемости, диссеминации процесса и сроков элиминации культуры вакцинного штамма.Подкожное заражение белых мышей проводили в дозах 50, 100 тыс. 1,10 и 100 млн. микробных тел, энтерально - 100 млн м.т.

Результаты опытов показывают, что все мыши, зараженные культурой штамма 12, в течение 20 суток оставались живыми, тогда как контрольные, зараженные вирулентной культурой в дозе 100 тысяч микробных тел, все пали. Это свидетельствует о том, что штамм S. dublin 12 обладает слабой остаточной вирулентностью. В опытах на телятах остаточная вирулентность штамма S. dublin 12 изучалась при подкожном, внутривенном и энтеральном введении. Подкожное заражение проводилось в дозах 0,5; 1 и 2 млрд. м.т. Каждую дозу испытывали не менее чем на 10 телятах.

Внутривенное заражение осуществлялось путем введения в яремную вену суточной культуры вакцинного штамма в дозе 3 млрд. м.т. При энтеральном заражении телятам с небольшой порцией молока выпаивалось 20 мл (два теленка) и 40 мл (один теленок) смыва суточной агаровой культуры содержанием в 1 мл 1 млрд. м.т. Вирулентность штамма контролировалась по выживаемости, температурной реакции и гастроэнергетическим расстройствам.

Результаты исследований

Установлено, что подкожное и энтеральное заражение штаммом 12 не вызывало у животных заметного переболевания. Внутривенное заражение в больших дозах (3 млрд. м.т.) сопровождалось значительным угнетением, повышением температуры, но не приводило к гибели телят. Контрольные телята, зараженные вирулентной культурой S. dublin, погибали с симптомами острого сальмонеллеза.

Слабая остаточная вирулентность вакцинного штамма иллюстрируется в опыте по энтеральному заражению белых мышей и телят; при введении массивных доз мышам (100 млн. м.т. и более) и телятам (20 и 40 млрд. м.т.) инфицирования не наступает, что подтверждается бактериологическим исследованием.

Стабильность остаточной вирулентности аттенуированного штамма проверена при 10-кратном пассировании на белых мышах и 3-кратном на телятах. Пассирование на белых мышах проводилось посредством внутрибрюшинного смертельного заражения в дозе 300 млн. м.т. Мыши погибали на 3-4 сутки.

На 8-10-дневных телятах вакцинный штамм пассировался путем внутривенного заражения в дозе 3 млрд. м.т. После заражения телята тяжело переболевали и на 4-5 сутки убивались для бактериологического исследования.

Все пассированные штаммы контролировали по характеру роста и агглютинабельности и проверяли на вирулентность путем подкожного заражения белых мышей в дозе 10 млн. м.т. Установлено, что остаточная вирулентность штамма после пассирования на животных остается стабильной. На отсутствие реверсии указывали многочисленные иммунологические опыты на лабораторных животных и телятах. Изучение свойств аттенуированного штамма S. Dublin 12 после лиофильного высушивания показало хорошую выживаемость, сохранение морфологических, культурально-биохимических и агглютинабильных свойств, что обеспечивает стандартность и длительность сохранения препарата. Несмотря на низкую остаточную вирулентность штамм довольно длительное время приживается в организме. При подкожном заражении белых мышей в дозе 1 млн. м.т. культура вакцинного штамма высевается из органов и крови в течение 15 суток, из паховых лимфатических узлов до 30 суток. сальмонеллезный штамм вакцина вирулентность

У телят, подкожно привитых вакцинным штаммом в дозе 2 млрд. м.т., в первые трое суток отмечается генерализованная вакцинальная инфекция; спустя 7 суток культура хорошо высевается из лимфатических узлов и селезенки, слабая высеваемость из печени и костного мозга; через 14 суток в виде единичных колоний высевается только из селезенки, предлопаточных, средостенных и брыжеечных лимфатических узлов.

Приживаемость вакцинного штамма в организме животных обеспечивает длительное иммунизаторное раздражение на больших тканевых поверхностях, но не сопровождается хроническим бактерионосительством.

Выводы

Таким образом, полученные результаты по изучению биологических свойств аттенуированного штамма S. Dublin 12 свидетельствуют, что штамм находится в устойчивой S-форме, обладает стабильными и типичными для S. dublin морфологическими, культуральными, биохимическими и антигенными свойствами, а также слабой остаточной вирулентностью и не реверсирует при длительном пассировании на восприимчивых животных.

Литература

1. Малахов, Ю.А. Специфическая профилактика и диагностика бактериальных болезней животных / Ю. А. Малахов, Р. В. Душук // Ветеринария. - 2001. - № 1. - С. 35-38.

2. Pelser, K. D. Salmonellosis / K. D Pelser // J. Am. Veter Med. Assn. - 1989. - 195. 4. 456-463.

3. Laval, A. Salmonellosis in traitment raisonne / A. Laval // Сultivar. - 2000. - 1989. - 248. supl. - 13-17. Fr.

4. Hertrampf, I. Salmonella -world wide hasard / I. Hertrampf // Poultry inter. - 1989. - 28.4. 40-49.

5. Wray, C. Salmonella vaccines for cattle Their use and future developments / C. Wray // State veter J. - 1987. - 41. 119: 147-152.

Резюме

УДК: 619:616. 9: 636.2

Изучение биологических свойств аттенуированного штамма Salmonella dublin 12.

Есенгалиев Г. Г., соискатель; Бияшев К. Б., доктор вет. наук, профессор; Таубаев У. Б., кандидат вет. наук, доцент. Западно-Казахстанский аграрно-технический университет имени Жангир хана

Проведенными исследованиями установлено, что аттенуированный штамм Salmonella dublin12 находится в устойчивой S-форме, обладает стабильными и типичными для Salmonella dublin биологическими свойствами, слабой остаточной вирулентностью, хорошо приживается в организме и не реверсирует при пассировании на восприимчивых животных.

Т?йіндеме

Ма?алада ?лсіретілген Salmonella Dublin 12 штаммыны? биологиялы? ?асиеттері к?рсетілген. Зерттеу н?тижелеріне с?йкес, ?лсіретілген Salmonella dublin 12 штаммы т?ра?ты S-формасында екендігі ж?не осы т?рге т?н биологиялы? ?асиеттерге иелігі, ?алды? уыттылы?ыны? са?тал?анды?ы, жануар организмінде тіршілік етуге тез бейімделіп кететіндігі ж?не ауру?а бейім жануарлар?а егу кезінде ауруды? пайда болуы ?аупін тудырмайтынды?ы аны?тал?ан.

Summary

After the researches, it was determined that attenuated strain Salmonella Dublin 12 is in resistant S-form, has stable and typical for Salmonella Dublin biological properties, weak residual virulence, well traced in the organism and do not reverse during passaging at susceptible animals.

Размещено на Allbest.ru