Размещено на http://allbest.ru

Инфекционные болезни индюков

Москва, 2018 г.



Содержание

Введение

1. Обзор вирусов

2. Характеристика возбудителей

2.1 Таксономия вируса

2.2 Морфология вириона

2.3 Этапы репродукции вируса

2.4 Антигенная вариабельность и родство

2.5 Гемагглютинирующие и гемадсорбирующе свойства

2.6 Культивирование

3. Диагностика болезни

3.1 Виды патологического материала, направляемого от больных животных

3.2 Этапы лабораторной диагностики

3.2.1 Индикация и идентификация вируса

3.2.2 Изоляция вируса

3.2.3 Ретроспективная серологическая диагностика

4. Специфическая профилактика

Список использованной литературы



Введение

В последние 2-3 года на бройлерных и яичных птицефабриках России начали появляться птицы с клиническими признаками инфекционного ринотрахеита (Avian Rhino Tracheitis) - ринит, коньюнктивит, угнетенность, снижение яйценоскоти. Эта болезнь довольно широко распространена в странах Западной Европы, Северной Африки, Северной и Латинской Америке. Первый случай ринотрахеита был зафиксирован в 1970 году в ЮжнойАфрике, в Европе впервые обнаружен в 1981 году во Франции у индеек. В 1985 году, после сильной вспышки болезни в Великобритании, учёные сделали вывод, что ринотрахеит индейки и инфекционный ринотрахеит птицы вызывает один и тот же вирус.

Актуальность. Несмотря на то, что болезнь не вызывает высокий отход у взрослой птицы, но снижение продуктивности несушек, родительского стада и падёж молодняка приводят к значительным экономическим потерям, особенно проявляющимся при бактериальных осложнениях. Болезнь Марека - вирусное заболевание, поражающее нервную систему и внутренние органы птицы. Впервые заболевание было описано в 1907 году венгерским учёным Мареком. Сам исследователь назвал недуг куриным полиневритом. Но впоследствии болезни было дано имя её первооткрывателя. На территории России о болезни Марека впервые заговорили в 1930 году. Заболевание протекает в двух формах: острой и хронической. Болезнь имеет три разновидности: невральную, которая поражает нервную систему птицы, сопровождается параличом и парезами; окулярную, которая поражает глаза птицы вплоть до полной слепоты птицы; висцеральную, при которой образуются опухоли на внутренних органах.

Актуальность. Болезнь Марека - серьёзная проблема современного птицеводства, поскольку приводит к потере поголовья.



1. Обзор вирусов

Возбудитель ринотрахеита индеек - метапневмовирус птицы (Avian Metapneumovirus). Это РНК-содержащий вирус, относится к семейству Paramyxoviridae, роду Metapneumovirus. На данный момент известно 4 подтипа вируса: A, B, C и D. Все они очень чувствительны к дезинфектантам, быстро погибают при неблагоприятных условиях. Это важно учитывать при обработке помещений и птичников. Болезни подвержены куры и индейки всех возрастов, вирус выделяли у воробьёв, чаек, цесарок, диких гусей и уток. [7] Болезнь Марека (нейролимфоматоз птиц), Mareks desease -- высококонтагиозная болезнь преимущественно кур, вызываемая ДНК-содержащим вирусом, не классифицированным внутри подсемейства Gammaherpesviridae.

Семейство Parvovirinae. группа вирусов, поражающая позвоночных, как правило, млекопитающих и птиц. Вирионы по размеру и форме неоднородны, однако многие из них имеют округлую или нитевидную форму, диаметр 150нм и более. Вирионы состоят из нуклеокапсида спиральной симметрии и липопротеидной оболочки, на поверхности которой имеются выступы (отростки) длиной 8--12 нм. Геном вируса представлен единой односпиральной линейной минус-РНК с молекулярной массой 5--7 МД, не обладающей инфекционной активностью и составляющей 0,5--1,0 % массы вириона.

В вирионах содержится 70 % белка, 20--25 % липидов и 6 % углеводов. Липиды образуют двойной центральный слой вирусной мембраны и являются ее структурным каркасом. Белки расположены снаружи и изнутри двойного липидного слоя. Гликолипиды составляют наружный белковый слой, образованный двумя гликопротеидами -- HN (гемагглютинин и нейраминидаза) и F (белок слияния), а негликолизированный мембранный белок образует внутренний слой, который называют матриксом вириона (М-белок). Липопротеидная мембрана вирионов представляет собой измененную часть клеточной поверхности, в которой белки клетки хозяина заменены на вирусспецифические. Молекулярная масса вирионов -- 500--700 МД, плавучая плотность в CsCl 1,20--1,24 г/см³, коэффициент седиментации 1000S. В вирионах парамиксовирусов содержится шесть полипептидов, из которых три -- белки нуклеокапсида (NP, P, L) и три -- белки в составе липопротеидной оболочки (HN, F, М).

Белок HN ответственен за гемагглютинирующую и нейраминидазную активности вируса и его адсорбцию на клеточной поверхности. Белок F ответственен за слияние клеток, гемолитическую активность вируса и принимает участие при проникновении вируса в клетку. Белок М участвует в заключительной стадии морфогенеза вируса в зараженной клетке и стабилизирует вирусную частицу. В составе нуклеокапсида вирусов находится фермент РНК-полимераза (транскриптаза).

Изучение белков наружной оболочки вирионов у разных штаммов вируса болезни Ньюкасла показало наличие связи между структурой гликопротеидов и патогенностью вируса. У патогенных штаммов оба поверхностных гликопротеида (HN и F) включаются в вирионы только в расщепленной форме, тогда как у апатогенных штаммов -- в виде предшественников F₀ и HN₀. Вирусы с нерасщепленными гликопротеидами обладают очень низкой биологической активностью.

Парамиксовирусы размножаются в цитоплазме, проникают в клетки в основном путем сплавления оболочки вириона с клеточной мембраной, иногда путем виропексиса. В процессе сплавления оболочки вируса с плазматической мембраной внутрь клетки проникает нуклеокапсид. Транскрипция геномной минус-РНК осуществляется в составе нуклеокапсида вирусной транскриптазой. При первичной транскрипции синтез иРНК происходит на матрице геномной РНК, тогда как при вторичной транскрипции иРНК образуется на матрице вновь синтезированной вирионной минус-РНК.

Информационные РНК обеспечивают на рибосомах синтез всех вирусспецифических белков. Репликация геномной РНК включает два этапа:

1) синтез плюс-нити РНК, комплементарной геномной РНК;

2) образование дочерних геномных минус-РНК на комплементарной плюс-нити РНК.

Затем из минус-нити РНК и белка формируются нуклеокапсиды, в это же время происходит включение в определенные участки клеточной мембраны вирусных гликопротеидов. Главная роль в процессе почкования принадлежит белку М, который «узнает» гликопротеиды на поверхности плазматической мембраны и фиксирует их в определенном участке мембраны. Одна из особенностей парамиксовирусов -- образование телец-включений и синцития с образованием многоядерных гигантских клеток. Инфекция клеток в культуре обычно литическая, но может быть и персистентная, важную роль в установлении которой, возможно, играют ДИЧ (дефектные интерферирующие частицы). Распространение вируса происходит горизонтально, чаще аэрозольно. [5-7]

В семействе Paramyxoviridae выделено два подсемейства: Paramyxovirinae и Pneumovirinae.

Подсемейство Paramyxovirinae. Включает три рода: Respirovirus, Rubulavirus и Мorbillivirus.

Род Respirovirus. Включает вирус парагриппа 3 крупного рогатого скота, вирусы парагриппа человека 1 и 3, вирус обезьян 10 и вирус Сендай (прототипный вирус). Вирусы данного рода имеют гемагглютинин и нейраминидазу.

Род Rubulavirus. Включает парамиксовирусы птиц (9 типов), в том числе вирус болезни Ньюкасла (парагрипп 1 птиц), несколько типов вирусов парагриппа человека, рубулавирус свиней, вирус обезьян (5 и 41) и вирус эпидемического паротита (свинка) -- прототипный вирус. Вирусы данного рода проявляют гемагглютинирующую и нейраминидазную активности.

Род Morbillivirus (от лат. morbillus -- корь). Включает вирусы чумы собак, крупного рогатого скота, мелких жвачных, тюленей; морбилливирус китовых и вирус кори -- прототипный вирус.

Подсемейство Ptieumovirinae. Включает два рода: Pneumovirus и Metapneumovirus.

Род Pneumovirus. Включает респираторно-синцитиальные вирусы крупного рогатого скота и человека -- прототипный вирус и вирус пневмонии мышей.

Род Metapneumovirus. Включает один вид -- вирус ринотрахеита индеек -- прототипный вирус.

Подсемейство Gammaherpesvirinae группа лимфопролиферативных вирусов. ДНК состоит из 170 тыс. пар нуклеотидов, оба конца молекулы содержат тандемно повторяющиеся последовательности (В-тип генома). Вирусы обладают тропизмом к В - или Т-лимфоцитам. Латентную инфекцию часто обнаруживают в лимфоидной ткани. Подсемейство состоит из двух родов.

1. Род Lymphocryptovirus, В состав которого входят герпесвирусы человека 4 (вирус Эпштейна -- Барр -- прототипный вирус); подтип 1 (герпесвирус шимпанзе); церко-питек 2 (герпесвирус павианов). Вирусыспецифичны для В-лимфоцитов. ДНК состоит из 170 тыс. пар нуклеотидов.

2. Род Rhadinovirus. В Состав рода входят: герпесвирусы ателе 4 (прототипный вирус) и саймири 1. ДНК состоит из 105 тыс. пар нуклеотидов. Уникальная последовательность молекулы с обоих концов фланкирована повторяющимися последовательностями с высоким содержанием гуанина и цистеина. [4-7]



2. Характеристика возбудителей

2.1 Таксономия вируса

Семейство Paramyxoviridae

Подсемейство Paramyxoviridae

Род Metapneumovirus

Возбудитель: Avian Metapneumovirus

Вирус ринотрахеита индеек (ВРТИ) впервые выделил во Франции Cavanagh в 1986 г. (1). Не классифицирован. По морфологическим и биологическим свойствам отнесен к семейству Paramyxoviridae, роду пневмовирус. Это РНК-содержащий вирус, относится к семейству Paramyxoviridae, роду Metapneumovirus. На данный момент известно 4 подтипа вируса: A, B, C и D. Все они очень чувствительны к дезинфектантам, быстро погибают при неблагоприятных условиях.

Семейство Gammaherpesvirinae

Род Lymphocryptovirus

Возбудитель Mareks disease gammaherpesvirus

Вирус сохраняет активность при условии структурной целостности клеток. Поэтому вируссодержащая кровь и опухолевый материал могут длительно сохраняться лишь при минус 196°С (в жидком азоте). При температуре выше минус 70°С такой материал быстро теряет патогенность. В высохших эпителиальных клетках перьевых фолликул (которые попадают в помет, подстилку и воздух птичника) патогенность вируса может сохраняться до года. Центрифугирование при 50 000 оборотах осаждает вирус за 1 ч. Полностью инактивируется он при 4°С за 2 нед, при 20--25°С -- за 4 дня, при 37°С -- за 18 ч, при 62°С -- за 10 мин. [8]



2.2 Морфология вириона

Ринотрахеит индеек. Размер вирионов от 120 до 300 нм. Оболочка вирионов имеет выступы - нити длиной 8 нм и содержит АГ-компоненты. Внутренний компонент - нуклеокапсид (G-АГ) представляет собой длинную заостренную пуговку диаметром 13 нм.

Структурные единицы - протеины этой трубки (капсомеры) расположены по спирали вокруг центральной оси, внутри них находится РНК. В составе вируса обнаружены 3 основных и 5 минорных белковых компонентов. К основным относятся гемагглютинин, белок внутренней оболочки и белок РНП.

Нейраминидаза - один из минорных компонентов. Кроме этого, в вирионах вируса обнаружена эндорибонуклеаза, а в вирусе, полученном из хронически инфицированных клеток РНК-зависимая ДНК-полимераза (обратная транскриптаза).

Возможно, имеется связь между наличием обратной транскриптазы и способностью вируса вызывать хронически протекающую инфекцию. Очищенный нуклеокапсид не обладает РНК-полимеразной активностью, так как не содержит необходимых белков, либо в процессе приготовления препарата нуклеокапсидов инактивируется сам энзим. [7]

Болезнь Марека. Возбудитель -- Mareks disease gammaherpesvirus. Под электронным микроскопом диаметр его 85--100 нм, но иногда встречаются более крупные вирионы с оболочкой размером 150--170 нм. Они могут содержать плотный нуклеоид, располагающийся обычно в ядре.

В препаратах лизированного эпителия перьевых фолликул присутствуют крупные бесструктурные вирионы диаметром 275--400 нм. Вирус сохраняет активность при условии структурной целостности клеток. Поэтому вируссодержащая кровь и опухолевый материал могут длительно сохраняться лишь при минус 196°С (в жидком азоте).

При температуре выше минус 70°С такой материал быстро теряет патогенность. В высохших эпителиальных клетках перьевых фолликул (которые попадают в помет, подстилку и воздух птичника) патогенность вируса может сохраняться до года. Центрифугирование при 50 000 оборотах осаждает вирус за 1 ч. Полностью инактивируется он при 4°С за 2 нед, при 20--25°С -- за 4 дня, при 37°С -- за 18 ч, при 62°С -- за 10 мин. [5]

Рис.1 Строение Avian Metapneumovirus

Рис.2 Mareks disease gammaherpesvirus

.

2.3 Этапы репродукции вируса

Вирус ринотрахеита индеек размножается в верхних отделах респираторного тракта: в носовой полости, трахее, в меньшей мере в легких и воздухоносных мешках. Также отмечены случаи репликации данного вируса в репродуктивных органах индюшек родительских стад. Через 24 часа он может быть выявлен в носовой полости и трахее, где максимальное количество вируса достигается через 3-5 дней. Вирус связывается гликопротеинами оболочки с поверхностью клетки и сливается с плазмалеммой. С геномной минус нити РНК вируса транскрибируются неполные плюс нити РНК, являющиеся иРНК для отдельных белков и полная минус нить РНК - матрица для синтеза геномной минус РНК вируса. Нуклеокапсид связывается с матриксным белком и гликопротеин-модифицированной плазмалеммой. Выход вирионов - почкованием. [8]

Вирус болезни Марека передается от больных птиц и вирусоносителей аэрогенно, прямым и непрямым контактом, трансовариально (на скорлупе) и даже трансмиссивно жуком чернотелкой.

Через слизистые оболочки вирус проникает в кровь и, адсорбируясь на лейкоцитах, разносится по организму. Размножается в клетках с образованием опухолевых очагов в лимфоидных органах, эпителии почечных канальцев и перьевых фолликул.

Возбудитель прорывает гемоэнцефалический барьер, поражает головной и спинной мозг со стволами и сплетениями. Строма нервов прорастает соединительной тканью; нерв утолщается, нарушается нервная трофика, обменные процессы, наступают истощение и гибель.

От больной птицы вирус выделяется с десквамированным эпителием кожно-перьевых фолликулов, с секретом респираторного тракта, с калом. Переболевшая птица пожизненно остается вирусоносителем и вирусовыделителем.

Цикл репродукции вирусов можно подразделить на отдельные стадии.

1 стадия - хемосорбция вирусов на поверхности клетки хозяина

Хемосорбция возможна лишь при условии, если клетка несет на своей поверхности чувствительные рецепторы, комплементарные рецепторам данного вируса. В клетках животных и человека функцию рецепторов для пикорно- и арбовирусов выполняют липопротеиды, для миксо- и парамиксовирусов и аденовирусов - мукопротеиды.

У простоорганизованных вирусов рецепторами являются уникальные сочетания белковых субъединиц, находящихся на поверхности капсида. У более сложноорганизованных вирусов функцию рецепторов выполняют выросты суперкапсида в виде шипов или ворсинок.

2 стадия - проникновение вируса в клетку хозяина.

Пути проникновения вирусов в клетку могут быть различны. Предполагается, что многие вирусы проникают в клетку путем пиноцитоза, или виропексиса. При пиноцитозе в районе хемосорбции вируса клеточная мембрана образует инвагинацию и заглатывает вирус. В составе пиноцитарной вакуоли вирус попадает в цитоплазму. Некоторые вирусы проникают в клетку за счет слияния клеточных и вирусных мембран.

Проникновение фаговой ДНК в бактериальную клетку происходит за счёт частичного разрушения оболочки клетки фаговым лизоцимом и сократительной реакции остатка фага.

3 стадия - депротеинизация вируса.

Процесс депротеинизации вируса предусматривает освобождение его нуклеиновой кислоты от белков капсида. Как только вирусная нуклеиновая кислота освобождается от белков капсида, наступает так называемый скрытый период - период эклипса. Предполагается, что в период эклипса вирусная нуклеиновая кислота проходит по цитоплазме клетки в район ядра.

4 стадия - синтез компонентов вируса.

Совокупность процессов этой стадии можно подразделить на три этапа:

Первый этап - подготовительный. Он предусматривает две цели: подавить функционирование генетического аппарата клетки, прекратить синтез клеточных белков и нуклеиновых кислот, перевести белок-синтезирующий аппарат клетки под контроль генома вируса; подготовить условия для репликации нуклеиновой кислоты и синтеза белков капсида вируса.

Второй этап - репликация нуклеиновой кислоты вируса. Для двухцепочечных ДНК - геномных вирусов характерен такой же путь реализации генетической информации, как и для других живых организмов. Процессу репликации ДНК предшествует транскрипция иРНК. Информационная РНК вируса транслируется рибосомами клетки и на вирус - полисоме по матрице иРНК идет синтез ранних вирусспецифических белков.

Как только синтезировались ранние вирусспецифические белки, начинается процесс репликации ДНК вируса. Репликация двух - цепочечной ДНК вируса идет по принципу репликации ДНК клеточных организмов полуконсервативным путем. Процесс репликации одноцепочечной ДНК начинается с синтеза ее комплементарной пары. В результате образуется двухцепочечная кольцевая родительская ДНК.

Изучение механизма репликации РНК - геномных вирусов началось с 1961., когда были открыты РНК-геномные фаги.

У РНК-геномных вирусов молекула РНК одновременно является генетическим материалом и выполняет функцию иРНК и ДНК.

Третий этап - синтез белков капсид.

Этот процесс отстает во времени от процесса репликации нуклеиновой кислоты вируса и начинается, когда репликация в полном разгаре. Синтез белков капсида происходит как в ядре, так и в цитоплазме клетки. Вирусспецифическая иРНК транслируется рибосомами клетки, и на вирус-полисоме идет синтез белков-предшественников. Из этого «фонда» белков-предшественников и формируются белки капсида вируса.

5 стадия - сборка вирионов, или морфогенез вируса.

У простоорганизованных вирусов белковые субъединицы капсида в строго упорядоченном соединении располагаются вокруг нуклеиновой кислоты. У сложноорганизованных вирусов в процессе сборки вирионов принимают участие и клеточные структуры - ядерная и цитоплазматическая мембраны.

6 стадия - выход вируса из клетки.

Этот процесс у разных вирусов осуществляется по-разному. Выход ДНК-геномных фагов происходит при полном лизисе клетки фаговым лизоцимом. Сложноорганизованные вирусы человека и животных выходят из клетки с участком цитоплазмы путем почкования через цитоплазматическую мембрану и оболочку, одновременно приобретая суперкапсид. Нередко выходу вирусов из клетки способствует переваривание ее фагоцитами крови. Вирусы растений из клетки в клетку могут переходить через межклеточные соединения - плазмодесмы.

Наиболее часто цикл репродукции вируса завершается продуктивной инфекцией - образованием многочисленной популяции (100-200) полноценных вирионов, что обычно сопровождается гибелью хозяина. [4-7]

Рис.3. Схема репродукции вирусов

2.4 Антигенная вариабельность и родство

Вирус ринотрахеита индеек содержит гемагглютинин и нейраминидазу, М-, F-белки и S (РНП) - антигены, различающиеся по локализации в вирионе, иммуногенности и АГ-активности. Каждый вирион содержит определенное число идентичных молекул HN, каждая молекула HN содержит 2 домена: НА и NA. Различия в вирулентности штаммов вируса связаны с изменением в структуре HN-гена, кодирующего ГА-нейраминидазу. Большинство аминокислотных замен располагается в четырех участках N-конца HN-белка. Гликопротеидный ГА-нейраминидазный комплекс вируса обладает выраженной антигенной и протективной активностью на индейках. Подавляющее большинство штаммов вируса ринотрахеита птиц антигены в иммунобиологическом отношении.

У вируса болезни Марека антигенная структура совпадает с его серологической классификацией. Серотип 1 включает все онкогенные вирусы и аттенуированные варианты, серотип 2 -- все неонкогенные вирусы, серотип 3 -- антигенно-родственный вирусу болезни Марека вирус герпеса индеек. В его составе выявлено 6 анти­генов. Благодаря общему А-антигену не отмечают различий в антигенной характеристике штаммов данного вируса. По А-антигену вирусы болезни Марека и герпеса индеек родственны, но не идентичны. [1-3]

2.5 Гемагглютинирующие и Гемадсорбирующе свойства

Вирус ринотрахеита индеек агглютинирует эритроциты амфибий, рептилий, птиц, человека, мышей и морских свинок. Эритроциты КРС, овец, коз, свиней и лошадей агглютинируются не всеми штаммами вируса. Гемагглютинирующие и гемадсорбирующие свойства болезни Марека не установлены. [4]

2.6 Культивирование

Помимо восприимчивой птицы вирус ринотрахеита индеек культивируется в куриных эмбрионах при любом способе заражения, в культуре фибробластов куриных эмбрионов, некоторых первичных и перевиваемых клетках. Через 48 часов вирус ринотрахеита птиц накапливался в значительных количествах в харионной оболочке и в низких титрах определялся в аллантоисно-амниотической жидкости. Если эмбрионы инкубируют до 60 часов, то вирус выходил из ткани мембран и в больших количествах накапливался в экстраэмбриональной жидкости [14]. Вирус развивается в культурах клеток 18 первичных и 11 перевиваемых линий, вызывая цитологические изменения. Репродукция его в культуре тканей сопровождается уплотнением цитоплазмы клеток, появлением в них вакуолей и вирусных частиц. Через 40 часов в цитоплазме некоторых клеток обнаруживали множество малых аморфных эозинофильных включений, окруженных прозрачной зоной. В одной клетке могло быть до 12 (и более) таких включений. Через 2 дня в зараженных культурах увеличивалось количество клеток с пикнотическим ядром, а через 7 дней поражались все клетки [7].

Культивирование возбудителя болезни Марека осуществляют в организме 1-дневных цыплят и в куриных эмбрионах 4- и 10--12-дневного возраста при заражении на ХАО и в желточный мешок. Заражение куриных эмбрионов в желточный мешок ведет к образованию характерных бляшек на ХАО. Кроме того, вирус хорошо репродуцируется в культуре фибробластов и почечных клеток куриных и утиных эмбрионов. В культурах клеток вирус образует характерные бляшки. [5, 8]



3. Диагностика болезни

3.1 Виды патологического материала, направляемого от больных животных

Предварительный диагноз на ринотрахеит индеек основан на анализе эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных. Для постановки окончательного диагноза от больных птиц берут кровь и очины вырванных перьев, от трупов -- селезенку, печень, тимус и опухолевые образования. инфекционный ринотрахеит вирус индюк

Диагноз на болезнь Марека ставят на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных, а также результатов лабораторных исследований. В качестве патологического материала отправляют: прижизненно - кровь, очины вырванных перьев; посмертно - селезенка, печень, яичник, сердце, легкие, фабрициева сумка, тимус и опухолевые образования. [5-7]

3.2 Этапы лабораторной диагностики

3.2.1 Индикация и идентификация вируса

Индикация вируса ринотрахеита индеек возможна с помощью биопробы на цыплятах 1--3-месячного возраста путем аппликации вируссодержащего материала на скарифицированную оболочку гортани и клоаки. Положительная реакция на заражение проявляется на 6-- 12-й день в виде катарального, геморрагического или фибринозного воспаления. Идентификацию выделенного вируса проводят в PH на куриных эмбрионах или в культуре клеток. Для этой же цели могут быть использованы ИФА, РИФ и РДП. Наиболее результативен иммуноферментный анализ с моноклональными антителами.

Вирус болезни Марека может быть выделен из патологического материала на куриных эмбрионах. Заражение на хорионаллонтоисной оболочке суспензией очинов пера сопровождается образованием на оболочке очагов клеточной пролиферации. Заражение куриных эмбрионов в желточный мешок кровью и опухолевым материалом больных кур вызывает гибель эмбрионов. Возможно выделение вируса на культуре клеток. [4]

3.2.2 Изоляция вируса

Выделение вируса ринотрахеита индеек проводят на куриных эмбрионах 9--10-дневного возраста при заражении на ХАО и на культурах клеток; характерные изменения появляются на 3--4-й день.

Выделенный вирус болезни Марека идентифицируют в реакции диффузной преципитации. Патогенность его может быть изучена на суточных цыплятах. [4]

3.2.3 Ретроспективная серологическая диагностика

Наиболее приемлемой средой для выделения вируса ринотрахеита идеек служит трахеальная органная культура (ТОК) куриных или индюшиных эмбрионов.

Следует помнить, что наиболее оптимальный момент для вирусовыделсния - это начало появления первых респираторных клинических признаков. Когда же клинические признаки становятся очевидными, есть опасность выделить другие вторичные патогены, которые сосуществуют с вирусом ринотрахеита индеек.

Вирусовыделение следует проводить из носовых истечений. носовых полостей, содержимого инфраорбитальных синусов, трахеи. [2-4]

Серологические исследования. Реакция непрямой иммунофлуоресиетщи (РНИФ). Для исследования данным методом используют ткань или слизь от птицы или проводят исследование клеточной культуры Vero, инфицированной вирусом ринотрахеита индеек. Метод РНИФ можно использовать для выявления антител против вируса ринотрахеита индеек.

Реакция нейтрализации (РН). Данный метод используют при изучении свойств вируса ринотрахеита индеек.

Иммуноферментный анализ (ИФА). В настоящее время известно, что специфичность метода зависит от антигена, который используется в тест-системе. [3]

Молекулярная диагностика (ПЦР). Диагностика при помоши ПЦР путем исследования образцов трахеи и пищевода от пораженной птицы. Данный метод позволяет выявлять специфический вирусный геном до 17 дня после инфицирования.

В настоящее время молекулярная диагностика ринотрахеита индеек чрезвычайно важный инструмент для изучения распространения данного заболевания.

Серологические методы диагностики вируса болезни Марека применяют реакцию диффузной преципитации, которые указывают на наличие особых антигенов в фолликулах перьев. Реакция непрямой гемагглютинации также используется для исследования и выполняет подобную функцию, максимальный титр 1:128--1:1024. Показания могут достигаться на 10-13 недели. Если необходима быстрая диагностика, то прибегают к использованию реакцию иммунофлюоресценции.

Для обнаружения вируса болезни Марека также применяют реакцию диффузной преципитации, иммуноферментного анализа, а антител в сыворотке крови - реакцию диффузной преципитации и иммуноферментного анализа.

Реакция иммунофлюоресценции - РИФ (метод Кунса).Различают три разновидности метода прямой, непрямой, с комплементом. Реакция Кунса является методом экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител. [4]

Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.

Реакция нейтрализации состоит в том. Что биологические системы заражают смесью вирусного антигена и исследуемой сыворотки, и если в сыворотке выявляются антитела, гомологичные взятому вирусу, ни нейтрализуют вирус и проба оказывается отрицательной, что свидетельствует о наличии комплекса антиген+антитело.

Иммуноферментный анализ заключается в определении качественных и количественных свойств низкомолекулярных соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая реакция антиген-антитело.

Сущность полимеразно-цепной реакции в том, что в малом количестве материала, содержащего ДНК вируса в процессе реакции происходит увеличение его количества, и таким образом происходит его идентификация.

Реакция диффузной преципитации основана на способности специфических антител сыворотки крови и специфических растворимых вирусных агентов диффундировать навстречу друг другу в толще агарового геля и образовывать комплекс антиген+антитело. [6-8]



4. Специфическая профилактика

Поскольку ринотрахеит индеек - вирусное заболевание, антибиотикотерапия не может быть эффективной. Однако лечение птицы антибиотиками становится актуальным, если в патологический процесс вовлечена секундарная микрофлора.

До недавнего времени для контроля ситуации по данному заболеванию использовали только инактивированные вакцины, эффективность которых определяли посредством серологических методов, описанных выше.

Схема вакцинации, которую рекомендовали для родительских стад, включала двукратную вакцинацию поливалентными инактивированными вакцинами в возрасте 12 и 18-19 недель.

Для бройлеров вакцину использовали только в экспериментальных целях. Вакцинация индюков предполагала применение комбинированной вакцины против инфекционного ринотрахеита и болезни Ньюкасла.

В настоящее время схема вакцинации родительских стад и коммерческих несушек включает вакцинацию живой вакциной с последующей ревакцинацией инактивированной вакциной. Для бройлеров и индюков в неблагополучных хозяйствах используют живую вакцину.

Уровень гуморальной зашиты после применения живой вакцины - низкий. Однако экспериментальным путем доказано, что даже при невысоком уровне гуморальных поствакцинальных антител птица невосприимчива к заболеванию.

Несмотря на существующее антигенное многообразие данного вируса, современные вакцины обеспечивают эффективную защиту.

Не рекомендуется использовать живые вакцины в комбинации с другими вакцинами, поскольку они могут сдерживать репликацию вакцинного вируса и затруднять формирование иммунного ответа. [1-4]

Вакцины: ВИР 115-A+B - Вакцина живая лиофилизированная против Инфекционного ринотрахеита птиц.

Каждая доза вакцины содержит не менее 10^2.5KИД50 живого атенуированного штамма "A" и102.5 KИД50 живого атенуированного штамма "B" вируса Инфекционного ринотрахеита птиц (метапневмовирусная инфекция).

Применение вакцины только по указанию и под контролем ветврача. Вакцинации подлежит клинически здоровая птица любого возраста. Вакцинацию проводят методом выпаивания, интраназально, окулярно, или методом крупнокапельного распыления (Спрей).

Метод выпаивания - за сутки до применения вакцины проводят определение объема воды, выпиваемой птицей за 1-2 часа в мл на 1 голову. На следующий день вакцину разводят с таким расчетом, чтобы в ранее определенном объеме воды на 1 голову содержалась 1 доза вакцины.

Содержимое флаконов с вакциной растворяют в чистой охлажденной до комнатной температуры кипяченой воде. С целью нейтрализации хлора необходимо добавлять в воду препарат "Нейтрахлор" производства "Биовак". Поилки, в которые наливают разведенную вакцину, перед вакцинацией должны быть тщательно вымыты без применения дезсредств. Количество емкостей вакцины должно обеспечивать свободный доступ к препарату всего иммунизируемого поголовья. [7]

Перед вакцинацией птицу выдерживают без воды и дачи корма в течение 1-2 часов (в зависимости от температуры птичника). Дача корма и воды птице послевыпаивания вакцины разрешается через 2 часа. За 2-3 дня до вакцинации запрещается обработка системы водоснабжения птичника дезинфицирующими средствами.

Метод крупнокапельного распыления (Спрей) - вакцину разводят в холодной воде, свободной от тяжелых металлов и хлора. Распылитель должен быть свободен от посторонних частиц, коррозии, следов дезинфектанта и использоваться только для проведения вакцинации. Разведенную водой вакцину следует распылять над соответствующим количеством птиц с расстояния 30-60 см, предпочтительно, когда птица сидит вместе при тусклом освещении. Для однодневных цыплят используют 0.25 л воды на 1.000 птиц. Для более старшей птицы разводят 1.000 доз в литре воды. Обязательно выключение вентиляционной системы птичника во время вакцинации. Интраназальный и окулярный метод - вакцину разводят дистилированной стерильной или кипяченной и охлажденной водой из расчета 1.000 доз вакцины на 40 мл. воды. Одну каплю разбавленной вакцины закапывают в одну ноздрю или в один глаз.

Интервал между вакцинациями против болезни Ньюкасла и Инфекционного ринотрахеита должен составлять 7-10 дней. При нарушении целостности и укупорки флаконов, изменении цвета и консистенции вакцины, наличии плесени и посторонней примеси, при отсутствии этикетки, а также в случае не использования ее в течение 2 часов после разведения, вакцину выбраковывают и инактивируют кипячением в течение 30 минут. Флаконы с остатками вакцины а также инвентарь обеззараживают кипячением в течение 30 минут. [2, 5]

Вакцина Пулкак TRT -вакцина против метапневмовирусной инфекции птиц живая сухая. В одной прививной дозе вакцины содержится не менее 10і·І ТЦД₅₀ аттенуированного вируса инфекционного ринотрахеита индеек (штамм Clone K серотип А).

Вакцина предназначена для профилактики метапневмовирусной инфекции (инфекционного ринотрахеита индеек / синдрома опухшей головы кур) в племенных и товарных хозяйствах различного направления выращивания. Вакцинации подлежат индюшата и цыплята в суточном возрасте. Вакцину вводят интраназально (окулярно) и методом крупно-дисперсного распыления. [5-7]

Болезнь Марека -- единственная поддающаяся вакцинопрофилактике опухолевая болезнь. Наиболее широкое распространение в мире получила вакцина на основе герпесвируса индеек (ГВИ) штамма FC-126. Причиной тому послужило то, что вирус не требовал аттенуации, не опасен в плане реверсии и подвергается стабилизации во внеклеточном состоянии. Вакцина из ГВИ предотвращает заболевание и развитие опухолей. В то же время она не препятствует инфицированию патогенным вирусом и его выделению во внешнюю среду. Положительным фактором является и то, что аэрозольная вакцинация кур ГВИ оказалась также эффективной, как и внутримышечные введения препарата.

Установлено, что наиболее высокие защитные свойства имеют поливалентные вакцины, включающие штаммы группы ВБМ-ГВИ серотипов 1, 2 и 3. Причем в этом случае возрастание эффекта оказалось не возникновением интерференции, а протективным синергизмом.

Хорошие результаты получены авторами как от природно-ослабленного (полевого), так и от модифицированного (аттенуированного) штаммов вируса.

Установлена корреляция между способностью аттенуированных штаммов вируса болезни Марека передаваться горизонтально и иммуногенно. Поствакцинальная виремия, особенно уровень размножения вируса в эпителиальных клетках перьевых фолликул привитых цыплят, служит хорошим тестом иммуногенности вакцин.

При иммунизации против болезни Марека клеточно-опосредованный иммунитет и гуморальный ответ в отдельности не могут обеспечить защиту. Функциональная роль антивирусных антител заключается в нейтрализации свободного от клеток вирулентного вируса болезни Марека и в кооперации с нормальными лимфомами хозяина в лизисе клеток, инфицированных вирусом. [1-4]

Получены инактивированные вакцины из цельного вируса различной степени очистки и с добавлением разных инактивантов и адъювантов. Показана возможность получения иммуногенных препаратов, не содержащих нуклеиновую кислоту, но имеющих соответствующие протеины. Препараты клеточных мембран, зараженных герпесвирусом индеек, эмульгированных с адъювантом Фрейнда, оказались высокоиммуногенными в отношении патогенных штаммов вируса болезни Марека.

Иммунизация кур растворимыми антигенами, экстрагированными из клеток, зараженных аттенуированным штаммом вируса болезни Марека, снижала заболеваемость птицы в 2--5 раз.

Одно из наиболее перспективных направлений -- создание рекомбинантных вирусных вакцин, экспрессирующих антиген вируса болезни Марека. Так, например, патентуется использование рекомбинантного вируса оспы птиц с генами, соответствующими одному или нескольким антигенам вируса болезни Марека. Патентуется и другой способ создания новых вакцин против болезни Марека, который основан на изучении последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующей иммуногенные полипептиды 18 и 20 вируса болезни Марека.

Таким образом, накопилось много данных, свидетельствующих в пользу гипотезы двухступенчатого вакцинального иммунитета при болезни Марека. На первой ступени он направлен против вирусных антигенов, на второй -- против опухолевых клеток -- носителей поверхностного опухолеассоциированного антигена. [5, 8]

Вакцины: Марек-З - вакцину применяют в птицехозяйствах различного направления выращивания для профилактики болезни Марека. Вирусвакцину против болезни Марека изготавливают из первичной культуры клеток ФЭК, содержащей вирус герпеса индеек (шт. «Владимир»). Вирусвакцина индуцирует у привитых птиц иммунитет против болезни Марека на 21-28 сутки после однократного введения, который сохраняется в течение всего продуктивного периода использования птицы.

Вирусвакцина предотвращает появление клинических и патологоанатомических признаков болезни Марека у привитых птиц, но не препятствует их инфицированию патогенным вирусом с последующим его персистированием и выделением во внешнюю среду. Вакцина ареактогенна и безвредна. Лечебными свойствами не обладает. [3]

Вакцинации подлежат клинически здоровые цыплята суточного возраста (в первые часы жизни). Вакцину вводят цыплятам однократно внутримышечно в верхнюю треть внутренней стороны бедра или подкожно в область шеи в объеме 0,2 см³ помощью обычных или автоматических шприцев или специальных дозаторов.

Непосредственно перед началом иммунизации ампулы с вирусвакциной извлекают из сосуда Дьюара в количестве, необходимом для работы в течение 30 минут и быстро (в течение 1 минуты) размораживают, погружая их в воду, подогретую до температуры 27°С.

Разбавитель перед использованием выдерживают при температуре от 20°С до 22°С в течение 8-12 ч. После полного размораживания вирусвакцины ампулы вскрывают и с помощью стерильного шприца их содержимое медленно переносят во флакон с разбавителем, соблюдая правила асептики и антисептики, из расчета: в одном флаконе разбавителя (160,0 см³) разводят 1 ампулу вирусвакцины, содержащую 800 иммунизирующих доз или 2 ампулы, содержащие 400 иммунизирующих доз. [5]

Вакцинированных цыплят в течение 3 недель необходимо содержать изолированно от птиц других возрастных групп для исключения заражения полевым возбудителем болезни Марека.

Запрещается одновременное введение вакцины «Марек-3» с другими живыми иммунобиологическими препаратами, а также запрещается прививать цыплят живыми вакцинами в течение 5 суток после иммунизации.

Nobilis THV LYO (болезнь Марека) - cухая культуральная аттенуированная вакцина против болезни марека. Лиофильно высушенная бледно-розовая пористая таблетка.

Стерильный растворитель по внешнему виду представляет собой прозрачную жидкость светло-красного цвета. Каждая доза содержит не менее 1000 ФОЕ герпес вируса индеек (штамм PB-THV1). Иммунитет вырабатывается в течение 2-х недель после вакцинации. Его напряженность достаточна для предохранения птицы от болезни Марека на протяжении всего периода использования. Вводится суточным цыплятам, но может эффективно использоваться для цыплят до 3-недельного возраста.

Подкожно в область шеи, или внутримышечно в бедро в дозе 0,2 мл на голову. Подготовка вакцины проводится в стерильных условиях. В одном флаконе растворителя (400 мл) растворяют 2000 доз вакцины.

Ампулы с вакциной размораживают на водяной бане при 18-20°С, стерильным шприцем вносят 1 мл растворителя в ампулу с вакциной. Хорошо встряхивают, смешивают и переносят содержимое обратно во флакон с растворителем.

Ополаскивают ампулу из-под вакцины растворителем и переносят содержимое во флакон с растворителем. Флаконы с растворенной вакциной хранят в емкостях с тающим льдом. Растворенный препарат необходимо использовать в течение 30 минут. Перед и во время применения флаконы с вакциной периодически встряхивают. [4]

«АВИВАК-МАРЕК» штамм «ФС-126» - вакцина против болезни Марека с разбавителем Штамм «ФС-126».

Вакцина представляет собой однородную сухую мелкопористую массу бело-жёлтого цвета, изготовленную из культуры клеток фибробластов эмбрионов перепелов, инфицированной герпесвирусом индеек (ВГИ штамм «ФС-126»), дезинтегрированной ультразвуком и лиофильно высушенной с добавлением стабилизатора, в состав которого входят растворы сахарозы и желатозы на буфере.

Вакцина поставляется в комплекте с разбавителем «АВИВАК-МАРЕК».По внешнему виду разбавитель представляет собой прозрачную жидкость оранжево-красного цвета. Одна доза разбавителя составляет 0,2 см³.

Вакцину выпускают в стеклянных герметически укупоренных флаконах по 500-2000 доз. Разбавитель расфасован в стеклянные флаконы по 200, 400 см³. У привитых цыплят вакцина вызывает формирование иммунитета к вирусу болезни Марека на 14 сутки, который сохраняется пожизненно. Одна иммунизирующая доза вакцины составляет 2000 ФОЕ.

Вакцина безвредна, ареактогенна, лечебными свойствами не обладает. Вакцинации подлежат только клинически здоровые птицы. Вакцинируют цыплят в первые часы жизни однократно, непосредственно в инкубатории в специально приспособленном помещении.

Вакцину вводят внутримышечно с помощью шприцев или специальных автоматических инъекторов в областьверхней трети внутренней поверхности бедра или подкожно в область верхней трети шеи в объёме 0,2 см³. При наличии инъекционного оборудования типа «Оводжек» препарат рекомендуется вводить на 18 сутки инкубирования непосредственно в эмбрион.[7]



Список использованной литературы

1. Моисеенко, Л.С. Болезни сельскохозяйственной птицы. Диагностика, лечение и профилактика / Л.С. Моисеенко. - М.: Феникс, 2016. - 791 c

2. Кисленко, В.Н. Ветеринарная микробиология и иммунология. Практикум: Учебное пособие / В.Н. Кисленко. - СПб.: Лань, 2012. - 368 c.

3. Кэлнек, Б.У. Болезни домашних и сельскохозяйственных птиц. Комплект в 3-х частях (количество томов: 3) / Б.У. Кэлнек. - М.: Аквариум, 2011. - 447 c.

4. Колычев, Н.М. Ветеринарная микробиология и микология: Учебник / Н.М. Колычев, Р.Г. Госманов. - СПб.: Лань, 2014. - 624 c.

5. Бессарабов, Б. Ф. Воспроизводство сельскохозяйственной птицы. Учебное пособие / Б.Ф. Бессарабов, С.В. Федотов. - М.: ИНФРА-М, 2015. - 368 c.

6. Максимович, В.В Частная эпизоотология / Учебное пособие для студентов высших учебных сельскохозяйственных заведений: Под общей редакцией В.В. Максимовича. - Минск: ИВЦ Минфина, 2010.- 565 с.

7. Мирось, В.В. Основы птицеводства. Куры, утки, индюки, перепела / В.В. Мирось. - М.: Феникс, 2017. - 953 c

8. Vidal 2013. Справочник Видаль ветеринар. - М.: АстраФармСервис, 2013. - 462 c

Размещено на Allbest.ru