Молекулярно-генетический мониторинг безопасности спермы быков производителей и репродуктивных нарушений у коров

Размещено на http://www.allbest.ru//

Размещено на http://www.allbest.ru//

ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии

Молекулярно-генетический мониторинг безопасности спермы быков производителей и репродуктивных нарушений у коров

Ефанова Л.И.

ПЦР-диагностика основана на обнаружении в исследуемом биологическом материале небольшого фрагмента ДНК или РНК возбудителя инфекции. При проведении ПЦР-анализа ведется поиск такого фрагмента ДНК инфекции, который специфичен только для данного микроорганизма. Сама полимеразная цепная реакция используется для амплификации найденного фрагмента, чтобы однозначно его детектировать. Метод ПЦР-диагностики обладает рядом преимуществ, таких как: прямое определение наличия возбудителей заболеваний, высокая специфичность и чувствительность анализа, универсальность процедуры выявления различных возбудителей, высокая скорость получения результата анализа и возможность диагностики не только острых, но и латентных инфекций (Донник И.М., 2007; Гусева Е.В., 1995; Иноземцев В.П., 2000)

Таким образом, молекулярно-генетический анализ остается наиболее доступным и информативным на сегодняшний день приемом диагностики инфекционных заболеваний.

Материал и методы. Молекулярно-генетическому исследованию на хламидиоз, вирусную диарею (ВД-БС), инфекционный ринотрахеит (ИРТ), лептоспироз, микоплазмоз, парагрипп-3 (ПГ-3), кампилобактериоз подвергнуто 138 проб спермы быков-производителей из 11 хозяйств, 98 проб влагалищных смывов коров с нарушениями репродуктивной функции из 23 хозяйств, 58 проб патматериала от абортированных, мертворожденных плодов из 17 хозяйств Центрально-черноземного региона РФ. Абортплоды, кроме того, исследовали на сальмонеллез, листериоз. Указанные материалы для исследования поступили в лабораторию в 2007-2012 годах из хозяйств, где регистрировались нарушения воспроизводительной функции у коров и отмечалась респираторная, желудочно-кишечная патология у телят профилакторного периода.

Исследование проводили с использованием тест-систем «Хла-Ком» на хламидиоз, «Мик-Ком» на микоплазмоз, «Кам-Бак» на кампилобактериоз, «Сал-Ком» на сальмонеллез, «Аденовир» на аденовироз, «Листер» на листериоз, «ЛПС» на лептоспироз производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва и тест-систем для обнаружения вируса диареи КРС, инфекционного ринотрахеита КРС, парагриппа-3 производства ЗАО «НПО Нарвак», г. Москва.

Полимеразная цепная реакция в реальном времени осуществлялась на амплификаторе «Rotor-Gene 6000» (Corbett Research, Австралия) и на амплификаторе «Терцик» (ДНК-технология, г. Москва) с детекцией продуктов ПЦР-амплификации методом электрофореза в агарозном геле.

Результаты исследования. Проведенными исследованиями 138 проб спермы быков, поступивших в лабораторию в 2010-2012 гг., установлена ее контаминированность в 26,9% случаев вирусом диареи крупного рогатого скота и в 21,6% - патогенными микоплазмами. Контаминированность спермы быков указанными патогенами диагностирована в 7 хозяйствах из 11 (63,6%). В сперме быков 4-х хозяйств из 11 (36,4%) выделен геном вируса диареи, 6-ти (54,5%) - геном патогенных микоплазм, при этом в 3 хозяйствах (27,3%) сперма быков в разное время была контаминирована двумя указанными патогенами, в 3-х (27,3%) - патогенными микоплазмами и в 1-ом (9,1%) - вирусом диареи.

Ни в одной из исследованных проб спермы быков не было обнаружено хламидий, вируса ИРТ, ПГ-3, патогенных лептоспир, кампилобактерий (табл.).

Установлено увеличение контаминированности спермы быков в 2012 году в сравнении с 2010г, как вирусом диареи (с 22,2% до 36%), так и патогенными микоплазмами (с 0% до 30%).

Как правило, уровень инфицированности спермы быков-производителей был невысоким, при этом у отдельных животных результат ПЦР на ВД-БС при исследовании эйякулятов, полученных в разное время, не совпадал, что косвенно свидетельствует о персистенции этого патогенна в организме. Не исключено, что активная эксплуатация инфицированных вирусом диареи быков приводит к увеличению контаминированности их спермы и наоборот.

Доказательством опасности такой спермы для коров было обнаружение генома ВД-БС в абортплодах осемененных коров, в патматериале от павших и вынужденно убитых в первые недели после отела животных, у которых развился бактериальный послеродовой сепсис.

Выявлен и разный уровень инфицированности спермы быков патогенными микоплазмами при положительном результате ПЦР на микоплазмоз.

Из 58 абортплодов и мертворожденных телят, поступивших для исследования в 2007-2012 гг., в том числе 48 в 2010-2012гг., из 17 хозяйств региона в 25 случаях (43,1%) в 12 хозяйствах (70,6%) выявлены геномы инфекционных патогенов, в т.ч. в 1-ом хозяйстве 3-х видов, 5-ти - 2-х, в 6-ти - 1 вида. микоплазмоз инфекционный бык

Таблица

Сводные данные по контаминированности спермы быков, абортплодов, влагалищных смывов коров

Проведенными исследованиями, в целом, установлена инфицированность абортплодов 7 видами патогенов (таблица 1), среди которых доминировали патогенные микоплазмы (31,6%), ВД-БС (12,1%), кампилобактерии (8,7%); в 5,5% установлена инфицированность сальмонеллами, в 3,2% - вирусом ПГ-3, в 2% - вирусом ИРТ, в 2% - патогенными лептоспирами. Геномы вирусов ИРТ и ПГ-3 были выделены из абортплодов, доставленных для исследования в 2007 году. В последующие годы эти патогены в абортплодах коров не обнаруживались, что связано с проведением активной профилактики этих инфекций у коров в специализированных молочных хозяйствах, формированием у животных поствакцинального гуморального иммунитета к этим патогенам.

Геномы 5 видов патогенов (патогенные микоплазмы, ВД-БС, кампилобактерии, лептоспиры, хламидии) обнаружены в слизи с наружных половых путей коров с признаками хронического эндометрита, телок случного возраста с признаками вагинита (таблица).

Из 98 проб влагалищной слизи животных 23 хозяйств у коров 15 хозяйств (65,2%) обнаружены инфекционные патогены, способные вызвать нарушения репродуктивной функции, при этом доминировали патогенные микоплазмы (75% от числа исследованных проб), ВД-БС (23,3%); 10% проб из числа исследованных были инфицированы патогенными лептоспирами, 7,7% - кампилобактериями, 1,3% - хламидиями.

Проведенными исследованиями установлена циркуляция среди крупного рогатого скота инфекционных патогенов, способных вызвать как репродуктивные нарушения у коров, телок случного возраста, быков-производителей, так и желудочно-кишечную, респираторную патологию у телят. В 70,6% хозяйств, из которых исследовали патматериал, выявлено участие инфекционных патогенов в прерывании беременности, мертворождаемости; в 65,2% - в развитии различных форм эндометритов у коров, вагинитов у телок случного возраста; в 63,6% хозяйств, из которых доставлена сперма быков, инфицированность ее вирусом диареи, патогенными микоплазмами.

Исследованная сперма быков-производителей оказалась контаминирована вирусом диареи в 26,9% и патогенными микоплазмами в 21,6% случаев, что свидетельствует о ее роли как одного из факторов передачи этих возбудителей восприимчивым коровам. Однако, помимо спермы, в передаче патогенных микоплазм среди коров имеют значение и другие факторы, на что указывает 75% инфицированность исследованных влагалищных смывов больных эндометритом коров и телок случного возраста, при этом в последние 2 года отмечается рост уровня инфицированности патогенными микоплазмами как спермы, так и слизистых половых путей коров, что оказывает влияние на уровень контаминации этими патогенами телят профилакторного и послепрофилакторного периода, уровень их заболеваемости.

Наибольшее число патогенов обнаружено в абортированных плодах коров - 7 патогенов, против 2 - в сперме быков и 5 - во влагалищных смывах коров и телок случного возраста. Только из абортплодов выделены геномы сальмонелл, вируса ПГ-3 и ИРТ (5,5%, 2,0% и 2,0% соответственно); только из влагалищных смывов - геном патогенных хламидий (1,3%). В целом в исследованных материалах выявлено 8 видов патогенов, способных вызвать репродуктивные нарушения у животных, что свидетельствует об их циркуляции в молочных хозяйствах и требует проведения комплекса профилактических противоэпизоотических мероприятий с учетом конкретной ситуации в хозяйстве, жесткого контроля безопасности спермы быков, а также быков-прибников.

Литература

1. Донник И.М., Пелевина Н.А., Бодрова О.Г. ПЦР-диагностика вирусных и бактериальных инфекций домашних животных // Ветеринарная клиника», 2007, №7.- С.5-7.

2. Гусева Е.В. Применение ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний у животных / Гусева Е.В., Сатина Т.А. // Владимир, 1995. - 44 с.

3. Иноземцев В.П., Самсонов О.В., Таллер Б.Т. Ветеринарный контроль за воспроизводством стада крупного рогатого скота // Ветеринария, 2000, № 12 - С.5-8.

Размещено на Allbest.ru