Влияние опиоидных пептидов на функциональное состояние желудка домашних животных

Размещено на http://www.allbest.ru//

Размещено на http://www.allbest.ru//

03.03.01 - Физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Влияние опиоидных пептидов на функциональное состояние желудка домашних животных

Григорьев Денис Александрович

Курск - 2013

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова»

Научный руководитель:	Заслуженный ветеринарный врач РФ, доктор биологических наук, профессор Сеин Олег Борисович
Официальные оппоненты:	Самбуров Николай Васильевич, доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова», профессор кафедры разведения с.-х. животных и зоогигиены
	Масалов Владимир Николаевич, доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет», декан факультета биотехнологии и ветеринарной медицины
Ведущая организация:	ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я. Горина»

Защита состоится 28 февраля 2013 года в 1000 часов на заседании диссертационного совета Д 220.040.03 при ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова» по адресу: 305021, г. Курск, ул. К. Маркса, 70. Тел. (4712) 53-13-30, факс (4712) 53-84-36.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова».

Автореферат разослан « » января 2013 г.

Учёный секретарь диссертационного совета Г.Ф. Рыжкова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Достигнутые успехи экспериментальной физиологии стали возможными в значительной степени благодаря прогрессу в области методов исследования. Разработка, в частности радиоиммунологических и иммуноферментных методов, открыла широкие возможности для определения профиля большого числа биологически активных веществ, участвующих в регуляции физиологических функций. К таким веществам можно отнести регуляторные пептиды, представляющие собой полифункциональную группу биологически активных пептидов, действующих в организме в качестве нейромедиаторов, нейромодуляторов и гормонов. Они широко представлены в центральной и периферической нервной системе, а также в некоторых биологических жидкостях организма и периферических органах.

Из всех известных в настоящее время регуляторных пептидов особое место отводится эндогенным опиоидам. Это большая группа физиологически активных пептидов с выраженным сродством к рецепторам опиоидного типа. Опиоидные пептиды являются универсальными химическими регуляторами, значимость которых простирается от влияния на функции отдельных групп клеток до управления работой целых систем и органов. Установлено, что эндогенные опиоиды принимают участие в регуляции таких процессов, как память, обучение, сон, поведение, кроветворение и др. (Т.В. Костерлиц и др., 1981; Р.И. Кругликов и др., 1987; Ю.Б. Лишманов и др., 1987, 1994; Е.О. Брагин, 1991; Е.Д. Гольдберг и др., 1990; О.А. Гомазков, 1993; T.A. Patterson et al., 1989; E.J. Simon, 1991 и др.). В свою очередь, большинство опиоидных пептидов обладают плейотропией - способностью каждого соединения оказывать влияние на несколько физиологических функций.

Учитывая биологические эффекты, которые вызывают эндогенные опиоидные пептиды, учёные стали работать над получением их синтетических аналогов, в результате появился отечественный препарат даларгин (аналог лей-энкефалина). Данный препарат обладает выраженным цитопротективным действием. Он уменьшает секрецию и моторику желудка и кишечника (С.В. Рычкова, 1993), вызывает достаточно продолжительную анальгезию (В.В. Лихванцев и др., 1994; А.В. Николаев и др., 1998), оказывает иммуностимулирующее действие и способен стимулировать регенерацию тканей (В.Д. Слепушкин, 1991, 1993; С.А. Алексеенко и др., 1996), обладает антистрессорными эффектами (В.Д. Слепушкин и др., 1988; А.В. Николаев и др., 1997, 1998). В клинической практике даларгин чаще всего используют при язвенной болезни.

Однако не только синтетические аналоги опиоидных пептидов можно использовать для регуляции тех или иных физиологических функций. В начале 80-х годов прошлого столетия в Институте физиологии имени И.П. Павлова РАН группой учёных под руководством профессора В.П. Лебедева был разработан метод транскраниальной электростимуляции (ТЭС) защитных механизмов мозга, получивших название ТЭС-терапия, и создана оригинальная аппаратура для реализации этого метода. Авторами было установлено, что при определённых режимах ТЭС в крови и ликворе животных и человека содержание бета-эндорфина повышается в несколько раз. На основании этих эффектов ТЭС-терапию стали применять в клинической практике для восстановления работоспособности, нормализации психофизического статуса, купирования болевых синдромов, нормализации артериального давления, стимуляции репаративных процессов (В.П. Лебедев и др., 1987; 1988; 2002; 2003; 2005; 2010).

В последние годы метод ТЭС-терапии нашёл применение и в практике ветеринарной медицины. Его используют для коррекции иммунобиологического статуса, профилактики транспортного стресса, восстановления функциональной активности желудка и печени у домашних животных (О.Б. Сеин, 1996; 2007; 2008; 2009; А.П. Жуков, 1997; М.В. Беседин, С.А. Кизилов, 2003; А.А. Аксёнов и др., 2009; Б.С. Сеин и др., 2009).

Однако, несмотря на то, что в последние годы опубликовано много работ, посвящённых опиоидным пептидам, анализу их биологического действия и роли в организме, сведения, касающиеся влияния опиоидов на функциональное состояние желудочно-кишечного тракта у разных видов домашних животных, немногочисленны. При этом они зачастую носят противоречивый характер.

Цель и задачи исследований. Учитывая вышеизложенное, целью нашей работы являлось изучение влияния опиоидных пептидов на функциональное состояние желудка, а также определение экспериментальным путём возможности использования даларгина и ТЭС для коррекции функциональной активности желудка у домашних животных.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

Определить общие клинические и гематологические показатели у кроликов, собак и овец после введения даларгина и ТЭС.

Изучить сократительную функцию желудка у собак и овец после введения даларгина и ТЭС. желудок секреторный даларгин животное

Определить секреторную активность желудка у собак и овец после введения даларгина и ТЭС.

Выяснить влияние даларгина и ТЭС на сократительную и секреторную активность желудка домашних животных после введения налоксона.

Разработать способ коррекции функциональной активности желудка у домашних животных с использованием даларгина и ТЭС.

Научная новизна исследований. На основании клинических и физиологических исследований впервые проведён сравнительный анализ многостороннего влияния синтетического опиоидного пептида даларгина и транскраниальной электростимуляции на функциональную активность желудка у собак и овец. Изучена сократительная и секреторная функция желудка у домашних животных после применения даларгина, ТЭС, антагониста опиоидных пептидов налоксона.

Теоретическая и практическая значимость работы. Выявленные особенности функциональной активности желудка у разных видов домашних животных после применения синтетического аналога опиоидных пептидов даларгина и ТЭС вносят конкретный вклад в физиологию опиоидных структур мозга и расширяют представления о роли опиоидных пептидов в организме. Полученные результаты апробации разработанного способа коррекции функциональной активности желудка у домашних животных позволяют рекомендовать его использование в практике ветеринарной медицины.

Внедрение результатов исследований. Разработанный способ коррекции функциональной активности желудка у животных с применением даларгина и ТЭС используется в государственных и частных клиниках г. Курска, г. Орла и г. Москвы.

Основные положения, выносимые на защиту:

* Результаты комплексных клинических и физиологических исследований, отражающих функциональную активность желудка у собак и овец после применения даларгина и ТЭС.

* Оптимальные режимы ТЭС для восстановления функциональной активности желудка у разных видов домашних животных.

* Способ коррекции функциональной активности желудка у животных с применением даларгина и ТЭС.

Апробация работы и публикации. Основные материалы диссертационной работы доложены на:

Всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства» (Новочеркасск, 2011г.);

Международной научно-практической конференции «Научное обеспечение агропромышленного производства» (Курск, 2012г.);

Международной научно-практической конференции «Интегративные процессы в образовании и науке - 2012» (Москва, 2012г.);

Международной научно-практической конференции «Инновационные пути развития АПК на современном этапе» (Белгород, 2012г.);

научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава Курской государственной сельскохозяйственной академии им. проф. И.И. Иванова (2009-2012гг.).

По материалам диссертации опубликовано шесть работ, в том числе одна в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

Объём и структура работы. Материал диссертации изложен на 178 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований, выводы, практические предложения, список литературы, содержащий 259 источников, в том числе 69 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 24 таблицами и 40 рисунками.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Диссертационная работа выполнялась в условиях межкафедральной научно-исследовательской лаборатории факультета ветеринарной медицины, ветеринарной клиники Курской ГСХА и частной ветеринарной клиники ИП Григорьева в период 2009-2012 гг.

Лабораторные исследования проводились на кафедре терапии и акушерства и биохимической лаборатории частной ветеринарной клиники ИП Григорьева.

Объектом исследований являлись кролики породы советская шиншилла, беспородные собаки 2-3-летнего возраста, овцы романовской породы.

Экспериментальная часть работы выполнялась по общей схеме, представленной на рисунке 1, и состояла из пяти серий опытов.

В первой серии опытов изучали общеклинический статус и гематологические показатели у подопытных животных до и после введения препарата даларгина и проведения ТЭС, как в отдельности, так и в комплексе.

Препарат даларгин является синтетическим гексапептидом, аналогом лейцинэнкефалина (производитель ФГУП НПО «Микроген», г. Москва). Даларгин вводили в дозах 1,0 и 2,0 мг в расчёте на одно животное.

Для ТЭС использовали аппараты «Трансаир-2» и «Трансаир-3» (производитель «Центр ТЭС» Санкт-Петербург).

Электровоздействие осуществляли через электроды со специальным фиксатором и электроды-зажимы. Располагали электроды на лобной (катод) и затылочной (анод) областях черепа. При проведении ТЭС у кроликов, собак и овец применяли режим, включающий подачу на электроды вначале постоянного тока, нарастающего от 0 до 3,5 мА, с последующим применением прямоугольных импульсов с частотой 70-80 Гц длительностью 3,0 мс, амплитуду которых увеличивали до 3,0 мА. Продолжительность сеанса электровоздействия составляла 30 мин.

Рис.1. Общая схема исследований

Во второй серии опытов изучали влияние даларгина и ТЭС на сократительную функцию желудка у собак и сычуга у овец. Была исследована моторика органов в норме и при их дисфункции. Для искусственного создания гипотонии желудка у собак и сычуга у овец использовали раствор атропина сульфата (0,5 мг/кг). Повышенную перистальтику желудка моделировали путём подкожного введения 0,05% раствора прозерина.

У собак моторику желудка регистрировали с использованием отечественного электрогастрографа ЭГС-4М. Во время оценки полученных электрогастрограмм, учитывали амплитуду сокращений, частоту импульсов в минуту и общую биоэлектрическую активность желудка.

У овец сократительную функцию сычуга исследовали с применением одноканальной баллонной гастрографии. С этой целью проводили хирургическую операцию по фиксации фистулы в сычуге, через которую вводили воспринимающий резиновый баллончик, соединённый через систему воздуховодных трубок с регистрирующим устройством (капсула Марея с писчиком, динамический манометр, спаренные механические кимографы). В этом случае сократительную функцию сычуга у овец оценивали по амплитуде сокращений, продолжительности, частоте, ритму сокращений и контракционному индексу.

В третьей серии опытов исследовали секреторную активность желудка у собак и сычуга у овец после введения даларгина и ТЭС.

У собак желудочное содержимое получали через фистулу, зафиксированную в желудке по классической методике, разработанной В.А. Басовым (1843) в модификации А.А. Алиева (1998).

У овец содержимое сычуга получали через фистулу, используемую для регистрации сократительной активности органа.

Желудочное содержимое собирали в специальные воронки, подвергали пресс-фильтрации и лабораторному анализу.

Четвёртая серия опытов была посвящена разработке способа коррекции функциональной активности желудка у домашних животных с использованием даларгина и ТЭС и его производственной апробации.

В процессе выполнения диссертационной работы использовали комплекс методов, который включал клинические, гематологические, биохимические и биометрические методы.

Клинические методы предусматривали определение у подопытных животных температуры тела, частоты пульса и дыхательных движений.

Общие гематологические методы. Кровь у кроликов брали из латеральной ушной вены, у собак из подкожной вены предплечья, у овец из ярёмной вены. Во всех случаях использовали вакуумные системы получения крови (ЗАО фирма «Домен»).

СОЭ определяли на аппарате Панченкова, гематокрит - на микроцентрифуге Шкляра. Содержание эритроцитов и лейкоцитов - на автоматическом счётчике «Picoscel».

Биохимические методы. Определение содержания в крови гемоглобина проводили на гемометре Сали. Общий белок устанавливали рефрактометрически, белковые фракции определяли методом электрофореза на мембранах «Владипор», сканирование электрофореограмм проводили на денситометре при длине волны 540 нм. Содержание бета-эндорфина в крови кроликов устанавливали иммуноферментным методом. Концентрацию в крови глюкозы, общих липидов, общего кальция, неорганического фосфора, общего магния определяли с использованием наборов «Био-Ла-Тест» фирмы «Лахема» и на полуавтоматическом биохимическом анализаторе «Vitalon-400».

Определение рН в содержимом желудка собак и овец производили электрометрическим методом на рН-метре «РН-150». Общую кислотность, свободную и связанную соляную кислоту устанавливали методом титрования по Тепферу, содержание кислоты при этом выражалось в титрационных единицах. Количественное определение ферментативной активности пепсина проводили по методу Н.П. Пятницкого.

Биометрические исследования. Полученные в ходе проведения экспериментов данные подвергались биометрической обработке (П.Ф. Рокицкий, 1973) на ПЭВМ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Общие клинические и гематологические показатели

у подопытных животных после введения даларгина и ТЭС

С целью выяснения влияния синтетического аналога опиоидных пептидов даларгина и ТЭС на интерьерное состояние животных, нами была проведена серия экспериментов на кроликах, собаках и овцах. У подопытных животных исследовали общие клинические и гематологические показатели после введения даларгина через 6 и 12 час, после ТЭС - через 60 и 180 мин, а также после комплексного применения даларгина и ТЭС - через 60 и 180 мин.

Результаты исследований показали, что введение даларгина и проведение ТЭС в выбранном режиме не оказывало отрицательного воздействия на организм подопытных животных, как при раздельном их применении, так и в сочетании.

Частота пульса, количество дыхательных движений, температура тела у животных изменялись в пределах физиологических границ. Скорость оседания эритроцитов и гематокритная величина также находились в пределах физиологических норм.

Содержание эритроцитов и лейкоцитов после введения даларгина по сравнению с фоновыми значениями не изменялось и находилось в период эксперимента в следующих границах: у кроликов - 6,2±046-6,8±0,22·1012/л и 7,0±0,16-7,8±0,11·109/л; у собак - 5,8±0,34-6,2±0,27·1012/л и 7,7±0,20-8,9±0,18·109/л; у овец - 7,0±0,4-8,0±0,5·1012/л и 6,8±0,2-7,2±0,3·109/л.

После применения ТЭС содержание эритроцитов и лейкоцитов у всех видов подопытных животных повысилось в среднем у кроликов на 1,2·1012/л и 0,3·109/л; у собак - на 1,1·1012/л и 0,5·109/л; у овец - на 0,8·1012/л и 0,7·109/л. При этом только изменения содержания эритроцитов имели статистически достоверный характер (P<0,05).

После комплексного применения даларгина и ТЭС также отмечалось увеличение в крови подопытных животных содержания эритроцитов и лейкоцитов. Через 180 мин их увеличение в крови соответственно составляло: у кроликов - на 1,3·1012/л и 0,3·109/л; у собак - на 1,1·1012/л и 1,2·109/л; у овец - на 0,5·1012/л и 0,3·109/л.

* - при p<0,05, по сравнению с контрольной группой;

° - при P<0,05, по сравнению с фоновыми показателями.

Рис.2. Содержание в-эндорфина в крови кроликов после введения даларгина и ТЭС

Анализ динамики содержания биохимических показателей крови у подопытных животных показал, что из всех исследуемых компонентов (гемоглобин, общий белок, фракции белка, глюкоза, в-эндорфин, АСТ, АЛТ и ЩФ) достоверные изменения отмечались только со стороны глюкозы, гамма-глобулинов и в-эндорфина. После курса ТЭС и комплексного применения даларгина с ТЭС содержание глюкозы и гамма-глобулинов в крови всех подопытных животных повысилось и через 180 мин соответственно составляло: у кроликов - 3,4±0,11-3,5±0,05 ммоль/л и 19,5±0,16-20,3±0,47%; у собак - 4,0±0,18-4,2±0,10 ммоль/л и 15,3±0,17-15,6±0,15%; у овец - 3,3±0,16-3,4±0,11ммоль/л и 22,3±0,18-22,5±0,46%. Что касается в-эндорфина, то его содержание в крови кроликов после ТЭС и комплексного применения даларгина и ТЭС увеличилось в 3-3,5 раза по сравнению с фоновыми показателями (рис.2). Таким образом можно считать, что ТЭС является «источником» эндогенного опиоидного пептида в-эндорфина.

3.2. Сократительная функция желудка у собак

после введения даларгина

Целью настоящей серии опытов являлось изучение влияния синтетического аналога опиоидных пептидов даларгина на сократительную функцию желудка у собак. Были проведены исследования моторики желудка у собак при различных дозах препарата, до и после приёма корма, при дисфункциях перистальтики желудка, после введения налоксона и даларгина.

Результаты исследований показали, что после введения даларгина в дозе 1,0 мг/гол сократительная функция желудка у собак через 30 мин практически не изменялась. Через 180 мин показатели перистальтики желудка уменьшились. Однако эти изменения были статистически недостоверными (P>0,05). При дозе препарата 2,0мг/гол изменения сократительной активности желудка у собак были более выраженными. Если до введения препарата амплитуда сокращений составляла 6,4±0,15 мВ, частота импульсов - 1,30±0,10 в мин, общая биоэлектрическая активность - 38,0 усл.ед., то через 30 мин эти показатели уменьшились и, соответственно, составляли - 5,8±0,15 мВ; 1,20±0,13 в мин; 32,4±4,8 усл.ед.

Влияние даларгина в дозе 2,0 мг/гол на сократительную функцию собак, не получавших корм, было слабо выраженным, и выявленные изменения являлись недостоверными. У собак, которые принимали корм после введения даларгина, сокращения уменьшились, достигая минимальных значений через 180 мин: амплитуда сокращений составляла 6,1±0,18 мВ (P<0,05), частота импульсов - 1,20±0,14 в мин, общая биоэлектрическая активность - 30,0±2,0 усл.ед. (P<0,05).

У собак с пониженной сократительной функцией желудка после введения даларгина отмечалось незначительное её снижение и выявленные изменения являлись статистически недостоверными.

После введения даларгина собакам с повышенной перистальтикой желудка уменьшение её показателей по сравнению с фоновыми значениями было достоверным. Через 60 мин её показатели составляли: амплитуда сокращений - 11,8±0,51 мВ, частота импульсов - 3,36±0,10 в мин (P<0,05), общая биоэлектрическая активность - 68,4±5,9 усл.ед. В последующем сокращения желудка у собак продолжали уменьшаться и через 180 мин после введения даларгина они достигали соответственно: 10,0±0,20 мВ, 2,88±0,11 в мин, 65,0±4,0 усл.ед. При этом данные изменения были статистически достоверными (P<0,05-0,01).

Исследование моторики желудка у собак после введения специфического антагониста опиоидных рецепторов налоксона с последующим введением даларгина показало, что в начале эксперимента (до введения препаратов) амплитуда сокращений составляла 6,2±0,20 мВ, частота импульсов - 1,20±0,11 в мин, общая биоэлектрическая активность желудка - 34,3±3,8 усл.ед. В последующие периоды исследований перистальтика желудка изменялась незначительно, и её показатели находились соответственно в следующих пределах: 6,0±0,18-6,3±0,27 мВ, 1,17±0,17-1,20±0,15 в мин, 34,0±3,8-38,0±3,0 усл.ед.

Сократительная функция желудка у собак после ТЭС

В настоящее время в источниках литературы встречается большое количество работ, посвящённых исследованию моторики желудочно-кишечного тракта у животных в норме, при патологии, а также при воздействии на неё различных факторов и фармакологических средств. В то же время в доступной литературе мы обнаружили лишь единичные сведения о влиянии ТЭС на перистальтику желудка у домашних животных. Учитывая это, нами были проведены эксперименты по изучению моторики желудка у собак до и после ТЭС.

Результаты исследований показали, что у собак, не получавших корм, действие ТЭС было маловыраженным. Сократительная активность желудка в течение первых 60 мин незначительно повысилась, а через 180 мин понизилась. У этих же собак (после 3-суточного уравнительного периода), но получивших корм, перистальтика желудка после ТЭС усилилась. Так, если до электростимуляции амплитуда и частота сокращений составляли соответственно 7,30±0,11 мВ и 1,14±0,06 имп/мин, то через 60 мин после ТЭС эти показатели достигали 8,0±0,18 мВ и 1,31±0,09 имп/мин.

У собак с пониженной сократительной функцией желудка до начала эксперимента амплитуда сокращений составляла 1,0±0,09 мВ, частота импульсов - 0,83±0,15 имп/мин, общая биоэлектрическая активность - 20,0±2,7 усл.ед. (рис.3). Однако уже через 30 мин после окончания ТЭС эти параметры значительно (P<0,05) увеличились и соответственно составляли 2,8±0,11 мВ, 1,31±0,24 имп/мин и 41,4±3,4 усл.ед. Через 60 мин сократительная активность желудка ещё больше активизировалась, о чём свидетельствуют изучаемые показатели: амплитуда сокращений достигала 3,7±0,12 мВ, частота - 1,34±0,18 имп/мин, общая биоэлектрическая активность - 54,0±5,8 усл.ед. Через 180 мин сократительная активность желудка у подопытных собак уменьшилась, однако по сравнению с фоновыми значениями она оставалась достоверно (P<0,05) высокой: амплитуда сокращений достигала 2,9±0,10 мВ, частота импульсов - 1,25 имп/мин, общая биоэлектрическая активность - 40,5±4,7 усл.ед.

У собак с повышенной моторикой желудка (рис.4) уже через 30 мин после ТЭС сократительная активность желудка уменьшилась: амплитуда сокращений в среднем на 1,4 мВ, частота импульсов на 1,11 имп/мин, общая биоэлектрическая активность на 16,9 усл.ед. В последующем сократительная активность желудка продолжала уменьшаться и через 180 мин после окончания сеанса электровоздействия изучаемые параметры составляли: амплитуда - 9,0±0,29 мВ, частота импульсов - 1,54±0,26 имп/мин, общая биоэлектрическая активность - 31,6±7,0 усл.ед.

Для подтверждения влияния ТЭС на сократительную функцию желудка собак нами был проведён эксперимент. С этой целью собакам (опытная группа) с повышенной моторикой желудка, которую моделировали путём введения раствора прозерина, проводили ТЭС. При этом за 5 мин перед электростимуляцией подопытным животным подкожно вводили 1мл (0,4 мг) налоксона, через 2 часа инъекцию повторяли. Контролем служили собаки с повышенной моторикой желудка, которые подвергались ТЭС, но налоксон им не вводили.

Рис. 3. Влияние ТЭС на моторику желудка у собак с её пониженной

Активностью

Рис.4. Влияние ТЭС на моторику желудка у собак с её повышенной активностью

Было установлено, что моторика желудка у подопытных собак в течение всего периода наблюдения оставалась на относительно высоком уровне, хотя имела незначительную тенденцию к снижению с приближением окончания эксперимента. Так, до проведения ТЭС амплитуда сокращений составляла 14,1±0,37 мВ, частота импульсов 3,74±0,23 имп/мин, общая биоэлектрическая активность 74,6±5,6 усл.ед. В течение 60 мин после окончания сеанса электростимуляции сократительная активность желудка изменилась незначительно и изучаемые показатели находились в пределах соответственно 13,7±0,34-14,0±0,48 мВ, 3,42±0,24-3,52±0,18 имп/мин, 70,5±6,5-72,2±5,6 усл.ед. Через 180 мин после окончания ТЭС сократительная активность желудка несколько уменьшилась: амплитуда составляла 13,8±0,51 мВ, частота импульсов - 3,40±0,28 имп/мин, общая биоэлектрическая активность - 68,8±4,8 усл.ед.

3.4. Влияние даларгина на сократительную функцию сычуга у овец

С использованием баллонной гастрографии было установлено, что даларгин оказывал определённое влияние на сократительную функцию сычуга у овец, хотя она была менее выраженной, чем сокращения желудка у собак.

Сравнительный анализ полученных данных показал, что до введения препарата у овец, не получавших корм, амплитуда сокращений составляла 12,3 ±0,5 мм рт.ст., продолжительность сокращений - 11,0±0,48 мин, частота сокращений - 1,2±0,10, контракционный индекс - 135,3±5,7. Через 30 минут после введения препарата данные показатели находились на уровне фоновых значений, однако в последующем они имели определённую тенденцию к уменьшению. Так, через 180 минут после введения даларгина амплитуда сокращений составляла 11,4±0,50 мм рт.ст., продолжительность сокращений - 10,8±0,55 мин, частота сокращений - 1,19±0,10, контракционный индекс - 123,1±6,0. Однако выявленные изменения являлись статистически недостоверными (P>0,05).

Сокращения сычуга у овец после кормления значительно активизировались: амплитуда составляла 14,0±0,60 мм рт.ст., продолжительность - 17,5±0,35 мин, частота - 1,46, контракционный индекс - 245,0±7,3. После введения даларгина моторика сычуга у овец несколько уменьшилась и через 180 мин её показатели составляли соответственно - 13,4±0,40 мм рт.ст., 17,3±0,37 мин, 1,55±0,17 и 231,8±9,5.

Введение раствора атропина сульфата позволило создать модель гипотонии сычуга у овец. При этом амплитуда сокращений составила 6,0±0,48 мм рт.ст., продолжительность сокращений - 6,4±0,50 мин., частота сокращений - 1,0±0,09, контракционный индекс - 38,4±3,7. После введения даларгина существенных сдвигов в моторике сычуга у овец выявлено не было и её показатели находились соответственно в пределах: 5,8±0,65 - 6,1±0,54 мм рт.ст.; 6,2 ±0,55 - 6,4±0,42 мин.; 1,05±0,10 - 1,12±0,12; 37,1±4,4 - 38,4±4,3.

При изучении влияния даларгина на моторику сычуга у овец с её повышенной активностью было установлено, что после введения раствора прозерина сократительная активность сычуга у овец резко увеличилась и составляла: амплитуда сокращений - 18,0±0,38 мм рт.ст.; продолжительность сокращений - 21,0±0,62 мин; частота сокращений - 4,5±0,15; контракционный индекс - 378,0 ±8,3. Через 30 минут после введения даларгина показатели сократительной активности сычуга у овец оставались примерно на том же уровне. Однако через 60 минут они уменьшились и соответственно составляли: 17,8±0,55 мм рт.ст.; 18,5±0,66 мин; 3,5±0,18 (Р<0,05); 310,8±8,0 (Р<0,05). Через 180 минут все исследуемые параметры моторики сычуга достигли минимального значения: 16,5±0,25 мм рт.ст.; 17,5±0,49 мин; 3,3±0,12; 288,8±7,8. Данные изменения являлись статистически достоверными (Р<0,05).

С целью изучения сократительной активности сычуга у овец после введения прозерина, налоксона и даларгина нами были проведены эксперименты, результаты которых показали, что через 30 мин после введения препаратов активность сокращений сычуга у овец практически не изменялась и находилась на относительно высоком уровне. Через 60 мин она незначительно уменьшилась (P>0,05), а через 180 мин показатели моторики сычуга приблизились к фоновым значениям и составляли: амплитуда сокращений - 16,8±0,20 мм рт.ст.; продолжительность - 18,8±0,41 мин; частота - 3,9±0,13; контракционный индекс - 315,8±9,0.

3.5. Влияние ТЭС на сократительную функцию сычуга у овец

Результаты баллонной гастрографии показали, что у овец, не получавших корм, сокращения сычуга были менее активными по сравнению с животными, которых перед экспериментом кормили. Что касается влияния ТЭС на моторику сычуга у овец с её пониженной активностью, то уже через 30 мин после электростимуляции показатели сократительной активности сычуга у овец значительно повысились и составляли соответственно: амплитуда сокращений - 6,7±0,19 мм рт.ст.; продолжительность сокращений - 8,3±0,11 в мин; частота сокращений - 1,0±0,09; контракционный индекс - 55, ±4,7. В последующем сокращения сычуга у овец, получавших корм, усилились и находились соответственно в пределах: 10,6±0,15 - 11,4±0,18 мм рт.ст.; 9,2±0,11 - 9,4±0,12 в мин; 1,10±0,08 - 1,12±0,07; 99,6±6,8 - 104,9±7,3.

а) до проведения ТЭС

б) через 30 мин после проведения ТЭС

в) через 60 мин после проведения ТЭС

г) через 180 мин после проведения ТЭС

Рис. 5. Фрагменты гастрограмм у овцы №4 с повышенной моторикой

сычуга после проведения ТЭС

Повышенную перистальтику сычуга мы моделировали путём подкожного введения 0,05% раствора прозерина. Исследования показали, что через 30 минут после введения препарата моторика сычуга у овец повысилась (рис.5) и перед началом эксперимента составляла: амплитуда сокращений - 17,68±0,74 мм рт.ст.; продолжительность сокращений 20,0±1,5 в мин; частота сокращений - 4,44±0,09; контракционный индекс - 364,0±8,4. Через 30 минут после ТЭС сократительная активность сычуга уменьшилась, однако, установленные изменения в моторике органа были недостоверными (Р>0,05). Через 60 минут снижение перистальтики сычуга было существенным (Р<0,05), а через 180 минут показатели достигли минимальных значений: амплитуда сокращений - 12,8±0,94 мм рт.ст.; продолжительность сокращений 12,5±1,75 в мин; частота сокращений - 1,35±0,12; контракционный индекс - 160,0±6,0.

При проведении ТЭС у овец с повышенной моторикой сычуга и после введения налоксона эффекты электростимуляции были слабо выраженными. Показатели её активности составляли: амплитуда сокращений - 17,4±0,10 мм рт.ст.; продолжительность сокращений 19,8±0,7 в мин.; частота сокращений - 4,10±0,10; контракционный индекс - 344,0±7,7.

3.6. Влияние даларгина на секреторную функцию желудка у собак

В содержимом желудка у собак определяли рН, общую кислотность, содержание свободной и связанной кислоты, а также активность пепсина до введения даларгина, через 2 и 6 часов после его введения.

Результаты проведённых исследований показали, что после введения даларгина секреторная функция желудка у собак как до, так и после кормления снижалась. Так, у собак, не получавших корм, через 2 часа после введения препарата уровень общей кислотности понизился с 68,0±3,2 до 52,5±3,0 ед. титра (Р<0,05), свободной кислоты - с 25,0±0,55 до 20,6±0,87 ед. титра (Р<0,05), связанной кислоты - с 24,0±0,77 до 18,5±0,86 (Р<0,05), ферментативная активность пепсина - с 13,0±0,54 до 11,4±0,66 ед. Через 6 часов данные показатели изменились до более низких величин и соответственно составляли - 4,0±0,14; 39,0±3,7 ед. титра, 12,6±0,50 ед. титра; 11,5±0,54 ед. титра; 9,7±0,44 усл.ед.

После введения даларгина у собак, получавших корм, интенсивность снижения секреторной активности желудка была более выраженной, чем до введения препарата и составляла рН 2,6±0,29 усл.ед.; общая кислотность - 107,0±5,6 ед. титра; свободная кислота - 40,5±2,0, связанная кислота - 42,4±3,6 ед. титра; ферментативная активность пепсина - 15,8±0,66 усл.ед. Через 6 часов данные показатели достоверно (Р<0,05) уменьшились и соответственно составляли - 4,2±0,25 усл.ед.; 35,8±3,8 ед. титра; 28,8±2,5 ед.тира;10,0±0,50 усл.ед.

Исследования секреторной активности желудка у собак после комплексного применения даларгина и налоксона показали, что до введения препаратов рН составляла 3,1±0,45 усл.ед.; общая кислотность - 20,1±1,8 ед. титра; связанная кислота - 20,5±1,0 ед. титра; ферментативная активность пепсина - 10,8±0,48 усл.ед. В последующие периоды исследования данные параметры существенно не изменялись и находились в пределах следующих границ: 3,2±0,35 - 3,3±0,54 усл.ед.; 62,3±4,0 - 63,0±3,5 ед. титра; 19,5±1,4 - 20,5±1,6 ед. титра; 21,7±1,5 - 22,0±1,8 ед. титра; 11,5±0,59 - 12,0±0,66 усл.ед.

3.7. Влияние ТЭС на секреторную функцию желудка собак

Проведённые исследования позволили установить, что до сеанса ТЭС и после него параметры оценки секреторной активности желудка у собак, как получавших, так и не получавших корм, достоверных различий не имели и находились в следующих пределах: рН - 2,3±0,16 - 3,4±0,40 усл.ед.; общая кислотность - 70,8±3,4 - 108,4±4,0 ед. титра; свободная кислота - 27,6±2,84 - 45,0±2,05 ед. титра, связанная кислота - 26,0±0,59 - 46,7±2,8 ед. титра; ферментативная активность пепсина - 12,7±0,23 - 18,8±0,80 усл.ед.

В то же время у собак с пониженной секреторной активностью после ТЭС она повысилась (табл.) и через 6 часов её показатели были следующими: рН - 3,0±0,18 усл.ед.; общая кислотность - 60,7±3,2 ед. титра; свободная кислота - 20,1±1,2 ед. титра, связанная кислота - 21,6±0,70 ед. титра; ферментативная активность пепсина - 8,7±0,40 усл.ед. (Р<0,05).

Таблица. Влияние ТЭС на секреторную активность желудка у собак

с её пониженной активностью

Время исследования	рН, усл.ед.	Общая кислотность, ед.титра	Свободная НСl, ед.титра	Связанная НCl, ед.титра	Пепсин, усл.ед.
До ТЭС	3,8±0,21	44,3±3,1	16,4±1,0	18,3±0,78	8,7±0,40
После ТЭС, через 2 часа	3,2±0,25	57,4±3,0	19,0±1,3	20,5±1,08	9,3±0,64
После ТЭС, через 6 часов	3,0±0,18	60,7±3,2	20,1±1,2	21,6±0,70	10,5±0,30

В ходе проведённых экспериментов было установлено, что налоксон снижал эффекты ТЭС. При комплексном применении ТЭС с налоксоном показатели секреции желудка до электростимуляции и после неё не имели существенных различий и в период эксперимента находились в пределах: рН - 3,7±0,36 - 3,9±0,47 усл.ед.; общая кислотность - 115,9±7,9 - 120,7±8,8 ед. титра; свободная кислота - 45,5±3,84 - 47,6±3,2 ед. титра, связанная кислота - 40,0±3,5 - 45,9±2,7 ед. титра; ферментативная активность пепсина - 13,7±0,86 - 14,8±0,93 усл.ед.

3.8. Влияние даларгина на секреторную функцию сычуга у овец

Результаты исследований показали, что до введения препарата овцам, не получавшим корм, секреторная активность сычуга находилась на относительно высоком уровне: рН составляла 2,84±0,10 усл.ед.; общая кислотность - 70,0±4,6 ед. титра; свободная кислота - 20,3±1,7 ед. титра, связанная кислота - 33,0±1,9 ед. титра; перевариваемость - 3,5±0,15 мм. После введения даларгина секреторная активность сычуга у овец постепенно снижалась, достигая минимума через 6 часов: 3,2±0,12 усл.ед (Р<0,05); 63,0±4,7 ед. титра; 19,4±1,5 ед. титра; 30,7±1,7 ед. титра; 2,8±0,18 мм (Р<0,05).

После приёма корма секреторная активность сычуга у овец повысилась и перед введением даларгина её показатели были следующими: рН 2,10±0,14 усл.ед.; общая кислотность - 98,0±5,2 ед. титра; свободная кислота - 35,6±1,6 ед. титра, связанная кислота - 46,0±2,3 ед. титра; перевариваемость - 2,8±0,08 мм. Через 2 часа после введения даларгина секреторная активность сычуга у овец уменьшилась, однако, эти изменения были статистически недостоверными (Р>0,05). Через 6 часов снижение показателей секреторной активности сычуга были более выраженными (Р<0,05) и, соответственно, достигали следующих значений: 3,00±0,17 усл.ед (Р<0,05); 76,6±5,8 ед. титра; 21,1±1,4 ед. титра; 35,2±2,7 ед. титра; 3,0±0,06 мм.

У овец, как и у собак, налоксон снижал эффекты даларгина. В ходе исследований было установлено, что до введения препаратов рН сычужного содержимого составляла- 2,75±0,17 усл.ед.; общая кислотность - 68,7±3,8 ед. титра; свободная кислота - 20,0±1,9 ед. титра, связанная кислота - 31,7±1,5 ед. титра; перевариваемость - 3,0±0,09 мм. После введения препаратов секреторная активность сычуга несколько уменьшилась, и её показатели находились в следующих пределах соответственно: 2,65±0,18 - 2,7±0,20 усл.ед.; 65,0±3,5 - 66,8±4,0 ед. титра; 18,8±1,7 - 19,7±1,0 ед. титра; 30,0±0,9 - 30,5±1,8 ед. титра; 2,7±0,08 - 2,8±1,0 мм. При этом выявленные изменения были статистически недостоверными (Р>0,05).

3.9. Влияние ТЭС на секреторную функцию сычуга у овец

Лабораторный анализ сычужного содержимого показал, что у овец, не получавших корм, и которые не подвергались электростимуляции, секреторная активность сычуга была относительно не высокой. После сеанса ТЭС она повысилась и её показатели составляли: рН - 2,64±0,54 усл.ед.; общая кислотность - 74,0±4,5 ед. титра; свободная кислота - 22,0±2,5 ед. титра; связанная кислота - 39,3±3,8 ед. титра; перевариваемость - 3,1±0,15 мм. Через 6 часов после электровоздействия секреторная активность сычуга у овец вновь незначительно понизилась, соответственно, до: 2,78±0,70 усл.ед.; 67,6±3,6 ед. титра; 21,1±2,0 ед. титра; 33,1±3,0 ед. титра; 3,0±0,10 мм.

Секреция сычуга у овец после кормления, по сравнению с животными, не получавшими корм, была значительно выше и рН составляла 2,0±0,46 усл.ед.; общая кислотность - 93,5±7,6 ед. титра; свободная кислота - 37,5±2,0 ед. титра; связанная кислота - 48,6±3,0 ед. титра; перевариваемость - 3,0±0,12 мм. В последующие периоды исследований показатели секреции сычуга уменьшились и соответственно находились в пределах: 2,08±0,38 - 2,45±0,50 усл.ед.; 77,0±9,3 - 89,5±8,8 ед. титра; 26,5±2,7 - 30,5±3,4 ед. титра; 38,8±2,5 - 43,5±2,6 ед. титра; 2,8±0,11 мм. При этом уменьшение свободной и связанной кислоты через 6 часов после ТЭС носило достоверный характер (Р<0,05).

С использованием атропина сульфата нам удалось уменьшить секреторную активность сычуга у овец. После проведённого сеанса ТЭС секреция желёз сычуга существенно (Р<0,05) повысилась и уже через 2 часа исследуемые показатели составляли: рН - 2,83±0,60 усл.ед.; общая кислотность - 53,5±3,3 ед. титра; свободная кислота - 18,3±0,75 ед. титра; связанная кислота - 22,4±0,84 ед. титра; перевариваемость - 2,6±0,17 мм. Через 6 часов после ТЭС данные показатели достоверно (Р<0,05) увеличились соответственно до 2,74±0,55 усл.ед.; 64,1±3,8 ед. титра; 21,0±0,61 ед. титра; 30,7±0,69 ед. титр;, 2,8±0,11 мм.

При исследовании секреторной функции сычуга у овец с пониженной активностью после введения налоксона и ТЭС было установлено, что до начала эксперимента секреторная функция сычуга овец была относительно низкой, о чем свидетельствуют изучаемые показатели: рН - 3,25±0,70 усл.ед.; общая кислотность - 40,5±2,8 ед. титра; свободная кислота - 13,0±0,95 ед. титра; связанная кислота - 17,0±0,84 ед. титра; перевариваемость - 3,0±0,18 мм. Через 2 часа секреция сычуга повысилась, а затем вновь уменьшилась и через 6 часов после окончания сеанса электростимуляции её показатели соответственно составляли: 3,20±0,64 усл.ед.; 47,0±4,0 ед. титра; 12,7±0,80 ед. титра; 17,0±0,92 ед. титра, 3,0±0,16 мм.

3.10. Способ коррекции функционального состояния желудка у животных с использованием даларгина и ТЭС

На основании результатов проведённых исследований был разработан способ коррекции функционального состояния желудка у животных.

Принцип данного способа основан на гомеостатическом действии опиоидных пептидов и заключается в том, что животным после хирургической операции на желудке во время реабилитационной терапии применяют даларгин в комплексе с ТЭС.

Способ был апробирован на собаках разных пород, перенёсших операцию на желудке. С этой целью собакам опытной группы (5 голов) на 3 день после операции вводили внутримышечно раствор даларгина в дозе 2 мг/гол в течение 3 дней подряд. Затем на 7 день после операции проводили ТЭС в следующем режиме: вначале на электроды, расположенные сагиттально на голове животного (анод - в затылочной области, катод - в лобной области) подавался постоянный ток, плавно нарастающий в течение двух минут от 0 до 3,5 мА. После этого на электроды в той же полярности подавался импульсивный ток с частотой 70-80 Гц и длительностью импульса 3,5 мс, что в соотношении с постоянным током составляло 2:1. Электровоздействие осуществляли с использованием аппарата «Трансаир-2». Продолжительность электросеанса - 30 мин в течение 3 дней подряд.

Собакам второй группы, после операции на желудке, даларгин и электростимуляцию не применяли, они являлись первым контролем. Собакам третьей группы операцию не проводили, они были вторым контролем.

У собак всех групп до начала и после эксперимента регистрировали сократительную функцию желудка с использованием электрогастрографа ЭГС-4м.

Клинические наблюдения показали, что собаки опытной группы вели себя спокойно, во время ТЭС у них наблюдалась вначале повышенная двигательная активность, а затем наступало сонливое состояние, некоторые животные принимали лежачее положение. Дальнейшие наблюдения показали, что после комплексного воздействия даларгина и ТЭС у собак опытной группы повышался аппетит, и их переводили со щадящей диеты на обычную диету.

У собак второй группы общее состояние было угнетённым, полноценный аппетит у них проявлялся только на 10-15 сутки.

Результаты электрогастрографии показали, что у собак первой и второй групп до начала эксперимента сократительная активность желудка была слабой и её показатели находились практически на одинаковом уровне. У собак третьей группы перистальтика желудка была хорошо выраженной и соответствовала здоровым животным.

После комплексного применения даларгина и ТЭС у собак первой группы сократительная функция желудка нормализовалась и её показатели по своим значениям приближались к таковым у здоровых собак. У собак второй группы моторика желудка восстанавливалась только к 10-15 суткам после операции.

Таким образом, комплексное применение даларгина и ТЭС позволяет ускорить нормализацию функционального состояния желудка у собак после хирургических операций.

ВЫВОДЫ

Введение синтетического аналога опиоидных пептидов даларгина не оказывало отрицательного влияния на организм кроликов, собак и овец. Общие клинические и гематологические показатели после введения препарата у всех подопытных животных находились в пределах физиологических границ и не имели достоверных различий по сравнению с фоновыми показателями.

После проведения ТЭС у кроликов, собак и овец достоверно (P<0,05) повышалось содержание в крови эритроцитов, глюкозы и гамма-глобулинов. Изменения лейкоцитов, гемоглобина, общего белка, альбуминов, альфа- и бета-глобулинов, АСТ, АЛТ и ЩФ после электростимуляции имели недостоверный (P>0,05) характер.

При комплексном применении даларгина и ТЭС у подопытных животных достоверно (P<0,05-0,01) повышалось содержание лейкоцитов, глюкозы и гамма-глобулинов. Содержание эритроцитов, гемоглобина, общего белка, альбуминов, альфа- и бета-глобулинов, АСТ, АЛТ и ЩФ по сравнению с фоновыми значениями достоверных (P>0,05) различий не имели и находились в пределах физиологических норм.

После введения даларгина в дозе 1 мг/гол сократительная активность желудка у собак уменьшалась незначительно. При введении препарата в дозе 2 мг/гол изменения сократительной активности желудка были более выраженными и через 180 мин её показатели достигали минимальных значений.

Даларгин оказывал слабо выраженное влияние на сократительную функцию желудка у собак и сычуга у овец с нормальной и пониженной моторикой желудка, после введения препарата показатели перистальтики желудка и сычуга достоверно уменьшались и через 180 мин достигали фоновых значений.

Оптимальный режим ТЭС для собак и овец включает применение постоянного тока, нарастающего от 0 до 3,5 мА с последующей подачей на электроды прямоугольных импульсов с частотой 70-80 Гц и длительностью 3-4 мс. Применение ТЭС с данными параметрами не оказывает отрицательного влияния на организм подопытных животных: после электростимуляции основные клинические и гематологические показатели изменялись в пределах физиологических границ.

ТЭС оказывает гомеостатическое действие на сократительную функцию желудка у собак и сычуга у овец. После курса электростимуляции у животных, как с пониженной, так и с повышенной перистальтикой органов показатели сократительной активности нормализовались и возвращались к фоновым значениям.

Эффекты даларгина и ТЭС блокировались антагонистом опиоидных пептидов налоксоном. У собак и овец после введения налоксона изменения показателей сократительной активности желудка и сычуга имели недостоверный характер.

Даларгин оказывает блокирующее действие на секреторную функцию желудка собак. Через 2-6 часов показатели общей кислотности, свободной и связанной соляной кислоты и ферментативной активности пепсина достоверно (P<0,05-0,01) снижались, достигая минимальных значений через 6 часов. У овец даларгин оказывал слабо выраженное влияние на секреторную функцию сычуга, за исключением ферментативной активности пепсина, снижение которой через 6 часов после введения препарата имело достоверный (P<0,05) характер.

ТЭС не оказывала существенного влияния на секреторную функцию желудка и сычуга у овец, как до приёма корма, так и после кормления. У животных с пониженной секреторной активностью после ТЭС её показатели повышались и приближались к физиологическим величинам.

Введение налоксона блокировало эффекты ТЭС. Показатели секреторной функции желудка у собак и сычуга у овец при комплексном применении налоксона и электростимуляции, по сравнению с фоновыми показателями, достоверных различий не имели.

Применение разработанного способа коррекции функционального состояния желудка с использованием даларгина и ТЭС позволяет сократить реабилитационный период у животных после хирургических операций на желудке.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для коррекции функционального состояния желудка и сокращения реабилитационного периода у собак после хирургических операций на желудке рекомендуется комплексное применение даларгина и ТЭС. С этой целью животным на третий день после операции вводят даларгин в дозе 2 мг/гол в течение 3 дней подряд. Затем проводят ТЭС в следующем режиме: вначале на электроды, расположенные сагиттально на голове животного (анод - в затылочной области, катод - в лобной области), подаётся постоянный ток, плавно нарастающий в течение двух минут от 0 до 3,5 мА. После этого на электроды в той же полярности подаётся импульсный ток с частотой 70-80 Гц и длительностью импульса 3,5 мс. Продолжительность электросеанса 30 мин в течение 3 дней подряд.

Полученные результаты экспериментальных исследований могут быть использованы в учебном процессе при преподавании курса физиологии животных на факультетах ветеринарной медицины.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Григорьев Д.А. Ответная реакция антиноцицептивной системы мозга животных при различных режимах транскраниальной электростимуляции / О.Б. Сеин, Д.А. Григорьев, Д.О. Сеин // Вестник Курской ГСХА. - 2011. - №6. - С.68-71.

Григорьев Д.А. Биохимический статус у собак при транскраниальной электростимуляции / Д.А. Григорьев, М.А. Соловьёва // Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства. - Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Новочеркасск: ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии, 2011. - С.216-217.

Григорьев Д.А. Влияние синтетического опиоидного пептида даларгина на гистологическую структуру желудочно-кишечного тракта животных / Д.А. Григорьев, А.В. Найденков, М.А. Соловьёва // Молодёжь и аграрная наука XXI века: проблемы и перспективы: материалы Международной научно-практической конференции студентов и аспирантов. - Курск, 2011. - С.8-10.

Григорьев Д.А. Моторика желудка у собак и сычуга у овец при введении экзогенного опиоидного пептида / Д.А. Григорьев, А.В. Найденков, М.А. Соловьёва // Научное обеспечение агропромышленного производства: материалы Международной научно-практической конференции. - Курск, 2012. - Часть 3. - С.33-35.

Григорьев Д.А. Поведенческие реакции у животных при транскраниальной стимуляции / Д.А. Григорьев, М.А. Соловьёва, А.В. Найденков // Инновационные пути развития АПК на современном этапе: материалы 16-й Международной научно-производственной конференции. - Белгород, 2012. - С.64.

Григорьев Д.А. Содержание в-эндорфина в крови животных при использовании разных режимов транскраниальной электростимуляции / А.А. Аксёнов, С.А. Кизилов, Д.А. Григорьев // Интегративные процессы в образовании и науке: материалы Международной научно-практической конференции. - Москва, 2012. - С.6-8.

Размещено на Allbest.ru