Влияние янтарной кислоты на антгельминтную и иммуномодулирующую активность левамизола

Размещено на http://www.allbest.ru//

Размещено на http://www.allbest.ru//

06.02.02.- Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Влияние янтарной кислоты на антгельминтную и иммуномодулирующую активность левамизола

Карачевцева Евгения Владимировна

Курск - 2013

Работа выполнена в лаборатории «Ветеринарная медицина» ГНУ «Курский НИИ агропромышленного производства» Россельхозакадемии

Научный руководитель

доктор ветеринарных наук, профессор

Евглевский Алексей Алексеевич

Научный консультант

доктор ветеринарных наук, профессор

Скира Василий Николаевич

Официальные оппоненты:

Мищенко Владимир Александрович,

доктор ветеринарных наук, профессор,

ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», заведующий отделом болезней рогатого скота и свиней

Лебедева Марина Георгиевна,

кандидат ветеринарных наук,

ОБУ «Станция по борьбе с болезнями животных» Курского района Курской области, руководитель

Ведущая организация

ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии» Россельхозакадемии

Защита состоится «19» ноября 2013 года в «13-00» часов на заседании диссертационного совета Д 240.040.03 при ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И.Иванова» по адресу: 305021, г. Курск, ул. К.Маркса,70, КГСХА

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И.Иванова»

Автореферат диссертации опубликован на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академии имени профессора И.И.Иванова и на Интернет - сайте ВАК: http://vak2.ed.gov. ru

Автореферат разослан «18» октября 2013 года

Ученый секретарь диссертационного совета Рыжкова Галина Федоровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время для профилактики и лечения иммунодефицитных состояний у животных предложено огромное количество иммуностимулирующих препаратов. Сфера применения иммуностимуляторов в ветеринарной практики постоянно расширяется. Об этом свидетельствуют многочисленные исследования и публикации.Придавая важное значение проблеме стимуляции иммунной системы, зачастую в стороне остаются вопросы нормализации обменных процессов. Между тем обменные и иммунные процессы тесно взаимосвязаны. Именно это обстоятельство выдвигает перед исследованиями задачу поиска и разработки нового поколения препаратов, обладающих иммунометаболическим действием. В решении этой теоретически и практически важной задачи особое значение приобретает не только поиск новых оригинальных композиций, но и вопросы оптимизации лечебно-профилактических схем их применения, обеспечивающих максимальную биодоступность препаратов для клеток-мишеней и специфически направленных эффектов (Даугалиева Э.Х, Филлипов В.В., 1991; Игнатов П.Е., 1995; Федоров Ю.Н. с соавт., 1999; Прудников С.И., Прудникова Т.М., 1997 и др.).

Всё вышеуказанное обусловило цель и задачи диссертационного исследования.

Цель исследования. Теоретическое и экспериментальное обоснование получения композиции на основе сочетания левамизола с янтарной кислотой и изучение ее антгельминтной и иммунометаболической активности.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- теоретически обосновать и клинически оценить разные варианты сочетаний левамизола с янтарной кислотой;

- провести оценку антгельминтной активности сочетаний левамизола и янтарной кислоты;

- изучить влияние разных композиций левамизола и янтарной кислоты на динамику иммунобиохимических и гематологических показателей поросят; левамизол поросенок иммунобиохимический янтарный кислота

- в научно-производственном опыте провести оценку эффективности применения левамизола янтарного в системе мер обеспечения здоровья поросят в подсосный период выращивания.

Научная новизна. Теоретически обосновано и экспериментально доказана возможность сочетаний иммуномодулятора антгельминтика левамизола и метаболика янтарной кислоты. Изучена антгельминтная и иммунометаболическая активность левамизола в комплексе с янтарной кислотой. Авторские научные исследования положены в основу способа получения комплексного препарата с иммунометаболической и антгельминтной активностью (Заявка зарегистрирована под №2012145513 от 25.10.2012г в Роспатенте); способ получения комплексного иммунометаболического препарата с антиинфекционной активностью (Заявка зарегистрирована под №2012145512 от 25.10.2012г. в Роспатенте).

Практическая значимость работы. Авторские научные исследования доказывают эффективность сочетания левамизола с янтарной кислотой для профилактики и лечения нематоцидных болезней свиней. Разработан способ получения комплексного препарата с антгельминтной и иммунометаболической активностью. Разработан способ получения комплексного препарата с иммунометаболической активностью и показана эффективность его применения для коррекции обменных и иммунных процессов, профилактики желудочно-кишечных заболеваний поросят и создания благоприятного иммунобиохимического фона при их вакцинации. Материалы диссертационного исследования вошли составной частью во временные нормативные документы, утвержденные начальником управления ветеринарии Курской области и директором Курского НИИ агропромышленного производства Россельхозакадемии.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. Теоретическое и экспериментальное обоснование сочетания иммуномодулятора антгельминтика левамизола с метаболиком янтарной кислоты.

2. Антгельминтная и иммунометаболическая активность нового варианта комплексного препарата.

3. Результаты научно-производственных опытов по применению левамизола янтарного для профилактики желудочно-кишечных заболеваний, коррекции иммунобиохимических процессов поросят подсосного периода выращивания и создания благоприятного иммунобиохимического фона при их вакцинации.

Апробация и публикация результатов исследования. Основные результаты диссертационного доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ «Курский НИИ агропромышленного производства» Россельхозакадемии (2010-2013 гг.), на заседании отдела животноводства и ветеринарии ГНУ «Курский НИИ агропромышленного производства» (2013 г); на Международной научно-практической конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» - Белгород, 2012.; Международной научно-практической конференции «Агропромышленный комплекс: контуры будущего» - Курск, 2012; Всероссийской научно-практической конференции «Инновационные пути развития агропромышленного комплекса: задачи и перспективы» - Зерноград, 2012.

По материалам, представленным к защите диссертации опубликовано 6 статей, в том числе 2 в рецензированных журналах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 146 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений. Иллюстрирована 27 таблицами.

Список использованной литературы содержит 227 источников, из них 24 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в период с 2010 - 2013 гг. в лаборатории «Ветеринарная медицина» Курского НИИ агропромышленного производства Россельхозакадемии по теме 08.02.01.01. «Разработать новые препараты, иммунометаболической коррекции для обеспечения здоровья и управления эпизоотическими процессами при наиболее значимых факторных болезнях продуктивных животных».

Основные научно-производственные опыты проведены в СПК «Содружество» и на свинокомплексе ОАО «Магнитный» Курской области.

Иммунный статус подопытных животных изучали на основании показателей клеточной и гуморальной систем иммунитета.

Состояние клеточного иммунитета изучалось путем определения количества Т- и В-лимфоцитов по методике, разработанной Коромысловым Г. Ф. и Солодовниковым В.Л. (1982).

В-лимфоциты (В-л) определяли в реакции комплементарного розеткообразования с эритроцитами мышей.

Бактерицидную активность по методике Смирновой О.В. и Кузьминой Т.А.

Лизоцимную активность определяли по методике Каграмановой К.А. и Ермольевой З.В. (1966).

Фагоцитарную активность лейкоцитов (ФАЛ) определяли согласно методических указаний ВНИВИПФиТ (2005г.).

Количество гемоглобина в крови определяли с помощью гемометра Сали.

Содержание эритроцитов и лейкоцитов на счетчике частиц Культер-Каунтер (Франция).

Общий белок - рефрактометрическим методом. Щелочной резерв сыворотки крови, содержание общего кальция, содержание фосфора, каротин, уровень кетоновых тел определяли согласно методических указаний, изложенных в учебном пособии Шарабрина И.Г. (1975).

Клиническое исследование проводили общепринятыми методами. Экспериментальные опыты проводились на белых мышах.

В соответствующих разделах диссертационной работы мы более подробно детализируем методические подходы проведения экспериментальных и производственных опытов.

Статистическую обработку полученных данных провели согласно методическим указаниям Баюн Ю.К. (1988).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Теоретическое обоснование получения препаратов иммунометаболической направленности на основе янтарной кислоты и левамизола

Обозначенная концепция по одновременной стимуляции обменных и иммунных процессов нами была реализована при разработке комплексного препарата на основе янтарной кислоты и левамизола.

Янтарная кислота (ЯК) является мощным стимулятором обмена веществ живой клетки. Объектом ее действия являются клетки и ткани, находящиеся в состоянии возбуждения или патологически измененные. Абсолютная безвредность ЯК и ее соединений делают ее весьма привлекательной при разработке нового поколения так называемых «умных» лекарств (Кондрашова М.Н., 1996 г.).

Левамизол - давно известен как антигельминтный препарат. При изучении его антигельминтного действия было обнаружено, что он повышает общую сопротивляемость организма и может быть использован как средство для иммунотерапии различных заболеваний, патогенез которых связан с расстройством иммуногенеза. Однако левамизол обладает выраженным побочным, преимущественно судорожным действием на организм, в связи с чем его неохотно используют в клинике лечения больных животных. Совершенно очевидно, что снижение токсичности левамизола могло бы возродить интерес к нему иммунологов, инфекционистов, паразитологов. Именно эта задача представлялась для нас наиболее приоритетной при проведении собственных научных исследований.

Влияние янтарной кислоты на снижение токсичности фармакопейного левамизола

В предварительных опытах мы установили, что внутрибрюшное введение фармакопейного левамизола 10% и 7,5% концентрации в объеме 0,25 мл вызывало быстрое, в течение одной минуты развитие судорог и гибель мышей. При этом гибель мышей при введении 10% левамизола наступала в течение 40-70 секунд. Введение 7,5% левамизола вызвала гибель мышей в течение 2-3 минут при тех же симптомах.

Первая серия. Первоначально была апробирована схема раздельного применения янтарной кислоты (сукцината натрия) и фармакопейного раствора 7,5% левамизола. Растворы сукцината натрия (рН=5,5-6,0) имели 0,5-1-1,5 и 2,5% концентрацию янтарной кислоты.

С учетом быстроты развития клинических признаков и гибели белых мышей растворы сукцината натрия вводились за 30 и 5 минут до введения левамизола. Оба препарата вводились в объеме 0,25 мл.

Оценку действия препаратов провели визуально. Время гибели подопытных мышей отражено в таблице 1.

Таблица 1 - Влияние сукцината натрия на выживаемость белых мышей при применении левамизола

Сукцинат натрия с активностью ЯК	Гибель мышей спустя (минут)
	2-3	4-5	6-10
0,5% п=5/п=5	2/2	1/2
1% п=5/п=5	1/1
1,5% п=5/п=5	1/1
2,0% п=5/п=5	1/1
Контроль п=3	3

Примечание. Числитель - количество погибших мышей при введении сукцината натрия за 30 минут, знаменатель - количество погибших мышей при введении сукцината натрия за 5 минут до введения левамизола.

На фоне хорошо выраженных судорог у мышей контрольной группы, у особей из других подопытных клинический эффект на введение левамизола проявлялся заметно слабее. Развитие симптомов судорог наблюдали не у всех мышей. У остальных особей наблюдали лишь периодические вздрагивания без проявления судорог.

Результаты данной серии опытов свидетельствовали о том, что янтарная кислота, представленная сукцинатом натрия, обеспечивает выраженное снижение токсичности фармакопейного левамизола. При этом защитный эффект 1% янтарной кислоты не уступает её более концентрированным растворам.

Во второй серии экспериментальных опытов нами была апробирована композиция единого состава на основе 1% янтарной кислоты и 7,5% левамизола. При смешивании в растворе янтарной кислоты и левамизола выпадения осадка не произошло, что свидетельствовало о совместимости компонентов.

Тестирование на токсичность левамизола янтарного провели в на белых мышах. Опытной группе мышей (п=5) внутрибрюшинно в объеме 0,25 мл ввели комплексный состав левамизола с янтарной кислотой, контрольной группе мышей (п=5) был введен стандартный (7,5% фармакопейный) раствор левамизола в объеме 0,24 мл. Спустя 2-3 минуты у всех контрольных мышей наблюдали бурно выраженные судороги. Все контрольные мыши погибли в течение 3-5 минут после введения левамизола. У мышей опытной группы развитие судорог и гибель мышей наблюдали спустя 10-15 минут.

Практически аналогичные данные были получены на группах мышей, которым вводился раствор левамизола с активностью 7,5 и 5 терапевтических доз. Результаты сравнительного испытания комплексного состава левамизола с янтарной кислотой и стандартного фармакопейного раствора левамизола представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Сравнительная оценка противосудорожного и летального эффекта комплексного препарата на фоне стандартного раствора левамизола

Группа мышей (п=5)	Препарат (количество терапевтических доз-ТД)	Развитие судорог после введения препарата (минут)	Развитие угнетения (минут)	Выживаемость, кол-во/%
		начало	продолжи-тельность	начало	продолжи-тельность
1 опытная	Левамизол+ЯК (10 ТД)	10-25	10-15	10-15	15-20	2(40)
1 контроль	Левамизол 10 ТД	2-3	2-3	-	-	1(20)
2 опытная	Левамизол+ЯК 7,5 (ТД)	15-20	10-15	10-15	10-15	3(60)
2 контроль	Левамизол 7,5 (ТД)	2-3	10-15	-	-	1(20)
3 опытная	Левамизол+ЯК (5 ТД)			10-15	10-15	5(100)
3 контроль	Левамизол (5ТД)	2-3	10-15	5-7	15-20	3(60)

Оценка антгельминтной активности

Опыт проведен на поросятах со средней массой тела 30-35кг, спонтанно инвазированных аскаридозом и трихоцефалёзом.

Поросятам первой опытной группы (п-7) подкожно ввели 7,5% левамизол, а второй группе (п-7) испытуемый комплексный препарат. Оба препарата вводились в терапевтической дозе 1мл на 10кг массы тела (7,5мг/кг по АДВ).

После введения фармакопейного левамизола у животных, спустя 10-15 минут начали проявляться выраженные признаки интоксикации: рвота, затрудненное дыхание, нервные явления. Данные симптомы проявлялись в течение часа, затем постепенно редуцировались. При применении комплексного препарата данные симптомы не зарегистрированы. Однако, у отдельных животных в слабо выраженной степени отмечались признаки беспокойства.

Результаты копрологических исследований представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Антгельминтная активность левамизола и комплексного препарата

К-во жив-х	Количество яиц в 1 г фекалий	Эффективность лечения
	Аскаридоз	Трихоцефалез	Аскаридоз	Трихоцефалез
	До лечения	После лечения	До лечения	После лечения	ЭЭ (%)	ИЭ (%)	ЭЭ (%)	ИЭ (%)
	Группа № 1. Левамизол 7,5%
П-7	ЭИ-71,5	ЭИ-42,9	ЭИ-100	ЭИ-28,6	ЭЭ 40%±0,9	ИЭ 76,7±0,7	ЭЭ 71,4±0,4	ИЭ 71,9%±0,6
	ИИ-39,5±2,2	ИИ-9,2±0,7	ИИ-45,2±2,6	ИИ-12,7±1,2
	Группа № 2. Левамизол 7,5% +1% янтарной кислоты
П-7	ЭИ-71,5	ЭИ-14,3	ЭИ-100,0	ЭИ-38,6	ЭЭ 80%	ИЭ 78%±0,5	ЭЭ 61,4±0,5	ИЭ 71,8%±0,6
	ИИ-37,9±2,2	ИИ-8,2±0,7	ИИ-41,5±2,3	ИИ-11,7±1,2

Примечание: ЭИ (экстенсивность инвазии) - количество зараженных особей из всего обследованного поголовья, выраженное в процентах.

ИИ (интенсивность инвазии) - количество выявленных паразитов определенного вида и оцениваются в экземплярах.

Следующий опыт был проведен на поросятах 2-2,5 месячного возраста, спонтанно инвазированных аскаридами. Животным первой группы внутримышечно инъецировали испытуемый препарат (7,5% левамизол + 1% ЯК+0,1% лимонной кислоты) в дозе 1мл на 10 кг массы тела, поросятам второй группы в той же дозе вводили известный препарат (7,5% левамизол + 1% ЯК). Поросятам третьей группы в аналогичном объеме вводился стандартный раствор 7,5% левамизола.

При клиническом наблюдении за подопытными животными установлено, что включение ЯК, а так же ЯК в сочетании с ЛК, в состав препарата позволило еще более выражено снизить токсическое действие левамизола на нервную систему организма животных.

Результаты копрологических исследований отражены в таблице 4.

Таблица 4 - Антгельминтная активность 7,5% левамизола + ЯК, 7.5% левамизола+ЯК+ЛК и стандартного 7,5% левамизола при аскаридозе

препарат	количество животных	инвазированность	Эффективность лечения
		до введения	через 18 дней	ЭЭ (%)	ИЭ (%)
левамизол + ЯК	10	ЭИ-8(80%)	ИИ-68,3±2,7	ЭИ-3 (30%)	ИИ-31,3±1,9	ЭЭ - 62,5%	ИЭ - 54,2%
левамизол + ЯК+ЛК	10	ЭИ-8 (80 %)	ИИ-65,4±2,2	ЭИ-3 (30%)	ИИ-30,2±1,7	ЭЭ - 62,5%	ИЭ - 53,8%
левамизол	10	ЭИ-10(100%)	ИИ-69,1±3,4	ЭИ-4 (40%)	ИИ-45,3±2,2	ЭЭ - 60%	ИЭ - 34,5%

Примечание: ЭИ (экстенсивность инвазии) - количество зараженных особей из всего обследованного поголовья, выраженное в процентах.

ИИ (интенсивность инвазии) - количество выявленных паразитов определенного вида и оцениваются в экземплярах.

Проведённые опыты убедительно свидетельствовали о том, что полученный комплексный препарат по сравнению с фармакопейным левамизолом, обладал более высокой антгельминтной активностью и не проявлял токсического действия на организм животных.

Антгельминтная активность левамизола янтарного при снижении действующего вещества

Принимая во внимание, что добавление к фармакопейному левамизолу янтарной кислоты позволило усилить его антгельминтую активность на 27%. Это обстоятельство делало вполне возможным снизить содержание действующего вещества в рекомендованной терапевтической дозе не менее чем на 25%. С учетом вышеизложенного нами были изготовлены экспериментальные образцы инъекционного левамизола с 5% содержанием действующего вещества. При этом одна серия препарата дополнительно включала 1% янтарной кислоты.

Научно-производственный опыт был проведен на подсвинках 3-3,5 месячного возраста, спонтанно инвазированных нематодами. Опытной группе поросят (п=9) применили комплексный препарат (5% левамизола + 1% янтарной кислота) из расчета 10 мл на введение. Другой группе (п=8) был введен 5% левамизола в аналогичном объеме. Третьей группе (п=8) был введен фармакопейной 7,5% левамизол.

Еще на двух группах (четвертая п=7 и пятая п=8) мы апробировали схему сочетанного применения 1% сукцината натрия и левамизола 5 и 7,5% активности по действующему веществу. Сукцинат натрия вводился в объеме 5,0 мл внутримышечно.

По результатам клинических наблюдений установлено, что в ответ на введение фармакопейного 7,5% левамизола на 10-15 минуте у поросят начали проявляться вполне характерные симптомы выраженного тремора мышц, беспокойства, слюнотечения. У отдельных поросят позывы к рвоте. Побочное действие левамизола наблюдалась в течение 30-40 минут, после чего вышеуказанные симптомы начали постепенно редуцироваться.

Менее выраженные, симптомы побочного действия наблюдали на группе поросят, которым был введен 5% левамизол. Развитие симптомов отмечали на 10-15 минутах, а затухание спустя 20-25 минут.

Каких либо признаков беспокойства мы не отметили у поросят которым вводился левамизол янтарный (первая группа) и у животных 4-й группы (левамизол в сочетании с 1% сукцинатом натрия).

Слабовыраженные признаки незначительного беспокойства (без тремора и слюнотечения) были отмечены у 2 из 8 поросят пятой группы, которым был введен фармакопейный 7,5% левамизол в сочетании с 1% сукцинатом натрия.

По результатам копрологических исследований фецес установлено, что 5% левамизол янтарный не уступает по антгельминтной активности 7,5% фармакопейному. В то же время нематоцидная активность 5% левамизола без добавления янтарной кислоты была на 10-15% ниже 7,5% фармакопейного.

Влияние композиций левамизола с янтарной кислотой на иммунометаболическое состояние поросят

Опыт был проведен на клинически здоровых поросятах 1,5 месячного возраста. Первой группе был введен 7,5% левамизол в комплексе с 1% янтарной кислотой. Второй группе - 7,5% фармакопейный левамизол. Данная группа выступала в качестве контрольной по отношению к первой. Третьей группе вводился 5% левамизол в комплексе с 1% янтарной кислотой. Четвертой - 5% левамизол. Данная группа являлась контрольной по отношению к третьей.

Результаты исследований представлены в таблицах 5 и 6.

Таблица 5 - Влияние левамизола и янтарной кислоты на уровень

лимфоцитов (%)

Группа	Периоды исследований (сутки)
	В начале опыта	7	14	21
1	38,52±7,14	42,53±5,27	45,56±5,46	49,6±6,12
2	39,83±5,37	36,36±5,16	38,73±4,82	42,74±5,29
3	39,62±5,84	44,84±5,22	47,74±5,18	50,32±4,34
4	40,59±5,68	39,75±5,26	41,20±,57	43,54±4,68

Примечание: разница в показателях статистически достоверна по отношению к контролю (*р<0,05).

Таблица 6 - Влияние левамизола и янтарной кислоты на уровень Т-и В - лимфоцитов

группа	Периоды исследований (сутки)
	В начале опыта	7	14	21
	Т-лимфоциты (109/л)
1	33,6±2,8	35,2±3,4	38,4±4,1	39,1±3,8
2	34,2±2,7	31,4±2,3	33,6±2,7	34,5±2,6
3	35,1±3,4	39,1±3,6	41,6±4,2	42,0±3,8
4	33,8±2,9	34,5±3,2	37,3±3,4	37,8±3,2
	Т-хелперы (%)
1	14,7±1,8	16,8±2,1	20,9±2,6	22,2±2,3
2	15,1±1,6	12,3±2,4	14,9±2,2	15,2±2,1
3	15,7±2,1	19,2±2,9	22,8±2,8	26,7±2,5
4	15,2±2,3	14,9±2,1	15,1±2,3	16,9±2,4
	Т-супрессоры (%)
1	9,8±0,7	11,1±0,6	10,7±0,4	11,6±0,5
2	10,1±0,6	10,8±0,4	10,2±0,2	9,7±0,4
3	10,2±0,9	11,3±0,7	11,9±1,4	11,5±1,2
4	10,3±0,8	10,6±0,5	11,2±0,8	11,2±1,1
В-лимфоциты (%)
1опытная	1,98±0,25	2,32±0,22	2,54±0,23	2,46±0,32
2контрольная	2,04±0,26	2,02±0,18	2,16±0,24	2,24±0,28
3опытная	1,94±0,22	2,49±0,31	2,92±0,27	2,78±0,34
4контрольная	2,18±0,26	2,29±0,31	2,63±0,24	2,74±0,28

Примечание: * разница в показателях достоверно по отношению к контролю (*р<0,05).

Влияние левамизола и янтарной кислоты на гематологические и биохимические показатели крови представлены в таблице 7.

Таблица 7 - Влияние левамизола и янтарной кислоты на гематологические и биохимические показатели крови

группа	Периоды исследований (сутки)
	В начале опыта	7	14	21
	Эритроциты, млн/мкл
1	4,86±0,21	4,92±0,23	6,94±0,42	5,96±0,38
2	4,52±0,27	4,38±0,18	4,86±0,23	4,72±0,19
3	4,58±0,25	6,25±0,22	6,29±0,23	6,08±0,26
4	4,71±0,32	4,68±0,21	5,24±0,38	5,31±0,23
	Гемоглобин, г/л
1	9,26±0,45	9,84±0,92	11,86±0,87	11,5±0,74
2	9,82±0,76	9,26±0,54	9,74±0,68	9,75±0,26
3	9,43±0,62	11,46±1,02	11,22±0,98	11,23±0,29
4	9,34±0,73	9,28±0,84	9,86±0,84	9,74±0,56
	Общий кальций, ммоль/л
1	2,43±0,18	2,96±0,24	3,21±0,29	2,84±0,17
2	2,56±0,24	2,64±0,18	2,68±0,262,7	2,63±0,19
3	2,47±0,26	3,12±0,29	3,34±0,244,2	3,12±0,18
4	2,36±0,18	2,44±0,22	2,51±0,18	2,46±0,28
	Неорганический фосфор, ммоль/л
1	1,78±0,12	1,76±0,15	1,72±0,15	1,74±0,17
2	1,82±0,14	1,85±0,11	1,85±0,11	1,88±0,12
3	1,69±0,17	1,77±0,18	1,77±0,18	1,76±0,18
4	1,74±0,11	1,86±0,17	1,86±0,17	1,82±0,15
	Резервная щелочность, об % СО2
1	29,8±2,1	49,6±3,1	40,8±3,1	34,8±2,7
2	30,2±2,7	27,6±2,3	29,8±2,9	31,4±3,1
3	30,5±2,3	45,2±2,9	42,6±2,7	37,5±2,9
4	29,6±2,9	28,4±2,3	30,6±3,1	32,5±2,4

Примечание: разница в показателях статистически достоверна по отношению к контролю (*р<0,05).

Теоретическое и экспериментальное обоснование получения комплексного иммунометаболического препарата

В практике ветеринарии 10% и 7,5% фармакопейные растворы левамизола для иммуностимуляции не применяют. Для проведения научно-экспериментальных опытов нами были изготовлены экспериментальные серии препаратов с 1,0-2,0 и 3,0% концентрации левамизола и 1% янтарной кислоты. В качестве контроля были приготовлены испытуемые образцы левамизола аналогичной концентрации, но без янтарной кислоты.

Испытание на токсичность провели на 4-х группах белых мышей (по п=7 в каждой группе) массой 19-20г. При этом одной группе мышей внутрибрюшинно вводился 1% левамизол в комплексе с 1% янтарной кислотой, другой 3% левамизол с 1% янтарной кислотой. Соответственно еще двум группам мышей( 3 и 4) вводился 1 и 3% левамизол, без янтарной кислоты (контрольные группы).

Испытуемые растворы левамизола и комплексного препарата вводили внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл. В перерасчете на действующее вещество (ДВ) это составляло 0,25 мг и 0,75 мг на одну мышь со средней массой тела 20 г. В перерасчете на 1 кг массы тела это составляло 12,5 мг (1% левамизола) и 37,5 мг (3% левамизола).

В ходе предварительных опытов нами было установлено, что LD100 при внутрибрюшинном введении левамизола составила 2 мг на одну мышь с массой тела 20 г., в перерасчете на 1 кг массы тела это составляло 100 мг. По литературным данным, LD50 при подкожном введении левамизола белым мышам составляет 200-210 мг на 1 кг массы тела. Исходя из этого, LD100 должна быть в пределах 400-420 мг/мл. Следовательно, токсичность левамизола при внутрибрюшинном введении в 4 раза выше, чем при подкожным.

При первом введении комплексных препаратов мы не отметили видимых изменений в поведении подопытных мышей. Напротив, у 2-х из 7 мышей, которым был введен испытуемый 3% раствор левамизола спустя 20-30 минут, отмечались редкие вздрагивания тела. Через 20-30 минут эти симптомы полностью редуцировались.

Собственно аналогичная картина повторилась и при повторном, спустя 24 часа, введении образцов комплексного препарата и контрольных растворов левамизола.

При последующих введениях препаратов отмечено нарастание интенсивности и продолжительности симптомов тремора у мышей контрольных групп. После четвертого введения у мышей контрольных групп были зарегистрированы судороги и их гибель.

Это указывало на то, что компенсаторные возможности их организма были уже исчерпаны.

Эффективность применения комплексного препарата для стимуляции иммунометаболических процессов в опытах на поросятах

Результаты испытания на поросятах гипотрофиках

В опыт включали поросят-гипотрофиков в возрасте 7-8 дней, имевших массу тела в пределах 1100-1200г. Поросятам первой группы внутримышечно вводился испытуемый комплексный иммунометаболический препарат (1% левамизол+1% янтарная кислота). Поросятам второй группы (она была контрольной по отношению к первой) вводили 1% левамизол. Поросятам третьей группы вводили комплексный препарат с 1,5% активностью по левамизолу и 1% по янтарной кислоте. Соответственно, поросятам четвёртой группы вводили 1,5% левамизол. Поросятам пятой группы (она была контрольной по отношению к первой, второй, третьей и четвёртой группам) в качестве плацебо вводился изотонический раствор хлорида натрия.

Препараты вводили внутримышечно, трёхкратно, раз в пять дней, с дозы 1,0мл. При каждом последующем введении объём увеличивали на 0,5мл.

Влияние испытуемых препаратов на динамику гематологических и биохимических показателей представлено в таблицах 8 и 9.

Таблица 8 - Влияние комплексного препарата, в сравнении с левамизолом на гематологические и биохимические показатели

Сроки исследований	Группы Эритроциты (10 12/л)
	Первая 1% як+1%л	Вторая 1%л	Третья 1%як+1,5л	Четвертая 1,5%л	Пятая изот. раствор
фон	4,18±0,15	4,03±0,16	4,07±0,12	4,02±0,25	4,27±0,17
7	4,94±0,39	4,21±0,14	4,92±0,44	4,17±0,23	4,36±0,24
14	6,02±0,28	4,37±0,29	5,84±0,23	4,36±0,28	4,29±0,19
21	6,56±0,34	4,52±0,23	6,48±0,29	4,49±0,21	4,36±0,22
28	6,58±0,26	4,75±0,28	6,45±0,26	4,51±0,32	4,42±0,27
	Гемоглобин (г/л)
фон	7,8±0,2	7,9±0,5	8,2±0,3	7,9±0,2	7,9±0,2
7	9,0±0,2	8,9±0,3	8,9±0,5	8,2±0,5	8,2±0,2
14	10,8±0,5	8,7±0,4	10,2±0,3	8,6±0,5	8,2±0,3
21	10,8±0,3	8,8±0,5	10,6±0,1	8,4±0,3	8,2±0,4
28	10,9±0,2	8,9±0,4	10,7±0,2	8,7±0,2	8,3±0,2

Примечание:*разница достоверна (р-0,05)

Результаты биохимических исследований сыворотки крови представлены в таблице 9.

Таблица 9 - Влияние комплексного препарата в сравнении с левамизолом на биохимические показатели подопытных поросят

Сроки исследований	Белок, г/л
	Первая 1% як+1%л	Вторая 1%л	Третья 1%як+1,5л	Четвертая 1,5%л	Пятая изот. раствор
фон	49,3±2,1	50,0±2,7	49,8±1,9	51,3±1,7	50,6±1,8
7	53,8±2,6	52,1±2,5	55,4±2,3	54,8±2,1	49,7±2,9
14	59,6±3,2*	53,5±1,9	59,7±3,1*	55,3±2,8	50,1±2,7
21	62,2±2,1*	54,8±2,6	62,2±2,7*	56,7±2,2	49,8±2,4
28	64,4±2,7*	56,4±2,3	65,1±3,1*	55,9±2,9	50,6±2,1
	Общий кальций, ммоль/л
фон	1,52±0,11	1,54±0,18	1,54±0,16	1,56±0,12	1,53±0,14
7	1,72±0,15	1,52±0,14	1,75±0,19	1,54±0,18	1,51±0,19
14	2,14±0,12	1,65±0,12	2,17±0,16	1,67±0,14	1,56±0,15
21	2,21±0,10	1,72±0,16	2,23±0,18	1,72±0,15	1,48±0,17
28	2,17±0,15	1,76±0,18	2,20±0,19	1,75±0,16	1,55±0,11
	Неорганический фосфор, ммоль/л
фон	1,19±0,11	1,21±0,14	1,17±0,16	1,20±0,10	1,19±0,12
7	1,24±0,15	1,26±0,16	1,28±0,13	1,28±0,11	1,21±0,17
14	1,27±0,16	1,29±0,12	1,26±0,14	1,30±0,16	1,22±0,14
21	1,32±0,17	1,31±0,15	1,35±0,17	1,32±0,14	1,24±0,18
28	1,34±0,10	1,32±0,12	1,34±0,16	1,31±0,12	1,26±0,15

Влияние комплексного препарата в сравнении с левамизолом

на щелочной баланс (об/СО2)

Сроки исследований	Группы (препарат)
	Первая 1% як+1%л	Вторая 1%л	Третья 1%як+1,5л	Четвертая 1,5%л	Пятая изот. раствор
фон	27,9±2,1	29,8±2,3	28,1±2,1	29,3±2,2	28,2±2,6
7	39,4±2,9*	29,2±2,7	37,6±2,9*	28,9±2,2	28,3±2,1
14	37,3±3,1*	29,0±3,1	36,4±2,0*	28,2±2,7	28,1±2,7
21	32,6±2,9*	30,2±2,7	32,2±2,1*	29,5±2,3	29,0±2,3

Примечание:* разница достоверна по отношению к контролю (р-0,05)

Влияние испытуемых препаратов на состояние неспецифической резистентности представлено в таблице 10.

Таблица 10 - Влияние комплексного препарата в сравнении с левамизолом на бактерицидную (БАСК) и лизоцимную активность сыворотки крови (ЛАСК)

Сроки исследований	БАСК,%
	Первая 1% як+1%л	Вторая 1%л	Третья 1%як+1,5л	Четвертая 1,5%л	Пятая изот. раствор
фон	46,3±1,3	47,1±2,4	48,3±1,9	47,8±2,1	47,3±2,6
7	49,4±2,7	49,8±2,1	52,1±1,7	50,2±2,3	48,1±2,4
14	59,4±2,5*	54,2±2,7	60,8±3,1*	55,2±2,9	48,1±2,6
21	61,8±2,3*	55,7±2,8	61,4±2,7*	57,2±1,8	47,5±2,6
28	63,5±3,1*	56,0±2,4	63,8,±2,1*	57,5±2,6	46,1±2,8
	ЛАСК,%
Сроки исследований	Группы (препарат)
	Первая 1% як+1%л	Вторая 1%л	Третья 1%як+1,5л	Четвертая 1,5%л	Пятая изот. раствор
фон	5,34±0,89	5,28±0,23	5,95±0,18	5,22±0,48	5,41±0,02
7	6,14±0,23	6,08±0,94	6,45±0,47	6,95±0,18	5,22±0,10
14	6,18±0,57	6,11±0,57	6,98±0,92	7,01±0,27	5,17±0,94
21	6,39±0,73	6,15±0,29	7,05±0,52	7,04±0,26	5,32±0.48

Примечание: разница достоверна по отношению к контрольной группе (р<0,05).

На основании гематологических и иммунобиохимических исследований можно сделать заключение о том, что испытуемый состав препарата на основе янтарной кислоты и левамизола обеспечивает выраженную стимуляцию обменных и иммунных процессов. Это в полной мере соответствует тому, что данный препарат обладает иммунометаболическим действием.

Эффективность применения левамизола янтарного в системе мер обеспечения здоровья и сохранности подсосных поросят

Объектом для проведения опытов являлись подсосные поросята левамизол янтарный применяли 5-10-17 и 24 сутки. Поросятам контрольных групп применяли в основном витаминные и железосодержащие препараты, практикующие в данном хозяйстве. Опытным животным они также применялись.

Сводные результаты производственного испытания препарата представлены в таблице 11.

Таблица 11 - Результаты производственного испытания левамизола янтарного

Группы поросят	Производственный статус свиноматок	Выявлено случаев заболевания диарей	Общее кол-во павших	Сохранность, %
		До отъема	В течение 1 дней после отъема
		Кол-во	%	Кол-во	%
1 Опытная (п=78)	Проверяемые	23	20,9	14	19,2	8	89,8
2 Контрольная (п=75)	Проверяемые	39	52,0	32	40,2	17	78,3
3 Опытная (п=94)	Основные	19	20,2	12	12,7	6	93,6
4 Контрольная (п=92)	Основные	28	30,4	27	29,3	11	87,0

Эффективность применения левамизола янтарного при вакцинации поросят против сальмонеллёза

Для проведения опыта мы ограничились живой вакциной против сальмонеллеза из шт. ТС-177. Следует отметить, что ветеринарные специалисты весьма осторожно подходят к применению вакцины из шт. ТС-177. Это связано с высокой реактогенностью вакцины. Именно это обстоятельство предопределило возможность использования данной вакцины в качестве модельной при изучении возможности применения левамизола янтарного для создания благоприятного фона при вакцинации.

Научно-производственный опыт был проведен на 2-х группах поросят 30-35 дневного возраста с массой тела 10-11 кг. Одну группу поросят привили вакциной из шт. ТС-177; другую вакциной из шт. ТС-177 в сочетании с одновременным введением левамизола янтарного.

Вакцину применили однократно в дозировке, регламентированной инструкцией. Комплексный препарат (1% левамизол с 1% янтарной кислотой) вводили внутримышечно в дозе 2,0 мл. Титр противосальмонеллезных агглютининов в сыворотки крови определяли в реакции агглютинации классическим пробирочным методом.

Контроль за изменением биохимического состояния и выработкой специфических антител против сальмонелл провели на 7 и 14 сутки после вакцинации.

Результаты проведенных исследований представлены в таблицах 12 и 13.

Таблица 12 - Динамика биохимических показателей крови при вакцинации живой вакциной из шт. ТС-177 в сочетании с левамизолом янтарным

Показатели	Периоды исследований
	фон	7 сутки	14 сутки
Белок, г/л	52,4±3,06 51,8±2,75	47,8±2,14 54,7±3,04	55,7±2,95 57,3±2,94
Резервная щелочность, Об/СО2	34,2±1,9 33,9±2,14	41,4±2,3* 34,2±2,12	49,6±2,1* 34,1±2,74
Кальций, ммоль/л	1,46±0,14 1,49±0,16	1,72±0,18 1,57±0,18	1,92±0,16 1,53±0,16
Фосфор, ммоль/л	1,21±0,12 1,24±0,11	1,27±0,14 1,29±0,12	1,24±0,12 1,25±0,18

Примечание: верхняя строка - показатели контрольной группы; нижняя строка - показатели опытной группы; *разница достоверна по отношению к контролю (р<0,05).Улучшение обменных процессов позитивно отразилось и на синтезе специфических антител (таблица 12).

Следует отметить, что наличие специфических антител к сальмонеллезному антигену было выявлено у подопытных поросят еще до вакцинации. Это указывало на инфицирование организма полевыми штаммами сальмонелл, в результате чего был запущен синтез специфических антител.

Таблица 13 - Влияние живой вакцины из шт. ТС-177 и комплексного препарата на синтез специфических антител против сальмонелл

Группа	Препарат	Периоды исследований
		фон	7 сутки	14 сутки
Первая	Вакцина	1:28	1:54	1:108
Вторая	Вакцина + комплексный препарат	1:16	1:102*	1:203*

Примечание: *разница достоверна по отношению к контролю (р<0,05).

ВЫВОДЫ

1. Янтарная кислота является эффективным средством для снижения токсичности левамизола. Включение в состав левамизола 1-1,5% янтарной кислоты позволяет повысить LD100 для белых мышей не менее чем в 5 раз.

2. Пятикратное с интервалом 24 часа внутрибрюшинное введение белым мышам 1-1,5% левамизола в сочетании с 1-1,5 % янтарной кислотой не приводит к гибели подопытных животных.

3. Комплексный препарат, включающий в своем составе 7,5% левамизола и 1-1,5% янтарной кислоты обеспечивает:

-повышение антгельминтной активности не менее чем на 25%;

-умеренное стимулирование гемопоэза;

-полную нормализацию обменных процессов;

-улучшение индекса Т-хелперов и Т-супрессоров с 1,6 до 2,2

-усиление синтеза иммуноглобулинов класса M с 2,32 до 2,76 +0,2мг/мл и G с 8,95 + 0,45 до 9,04+0,42 мг/мл.

4. Комплексный препарат на основе 5% и 1-1,5% янтарной кислоты обладает равной, что и 7,5% фармакопейный левамизол, антгельминтной активностью при фактически полном отсутствии побочного действия на организм животных.

5. В опытах на поросятах-гипотрофиках установлено, что применение 1% левамизола в комплексе с 1% янтарной кислотой оказывает более выраженное стимулирующее действие на гемопоэз, обменные и иммунные процессы по отношению к составу, имеющему 1,5% концентрацию левамизола и янтарной кислоты и обеспечивает: увеличение количества эритроцитов с 4,18 до 6,56; гемоглобина с 7,9+0,2 до 10,8 +0,5 г/л; лейкоцитов с 7,13 +0,26 до 10,20+0,67 109/л; повышает уровень белка с 49,3 +2,1 до 62,2+2,3 г/л; щелочной баланс с 27,9+2,1 до 39,4+2,9; кальция с 1,52+0,11 до 2,20+0,10 ммоль/л; усиливает БАСК с 46,3+1,3 до 61,8+2,3%; ЛАСК с 5,34+0,89 до 6,39 +0,73%.

6. Применение комплексного препарата на основе 1% левамизола и 1% янтарной кислоты на клинически здоровых поросятах обеспечивает нормализацию основных биохимических процессов, что является благоприятным фоном для проведения вакцинации животных.

7. Применение 1% левамизола в комплексе с 1% янтарной кислотой на поросятах подсосного периода выращивания обеспечивает снижение случаев заболевания диареей с 30,4 -52,0 до 20,2 - 20,9% и повышает сохранность с 78,3 -87,0 до 89,8- 93,6% соответственно.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Янтарная кислота является эффективным средством для снижения токсичности антгельминтика - иммуномодулятора левамизола, что предопределяет перспективу получения препаратов с улучшенной фармакологической характеристикой, в том числе обладающих иммунометаболическим действием.

2. Результаты проведенных научных исследований вошли в нормативную техническую документацию на способ получения комплексного иммунометаболического препарата с антгельминтной активностью.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.* Карачевцева Е.В. Новый подход к терапии инфекционных заболеваний животных / Ал.А. Евглевский, Е.В. Карачевцева, В.Н. Скира, О.М.Швец, Е.П. Евглевская, Ж.Г. Петрова, О.Н. Михайлова // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - № 2.- 2013.- С.-71-72.

2.*Карачевцева Е.В. Теоретические основы конструирования средств иммунометаболической направленности и эффективность их применения / Ал.А. Евглевский, О.М. Швец, Е.П Евглевская, В.Ю. Тарасов, Е.В. Карачевцева, О.Н. Михайлова // Вестник Курской ГСХА. - №7.- 2013. - С.-71-72.

3. Карачевцева Е.В. Инновационные разработки иммунометаболических препаратов и эффективность их применения в ветеринарии / А.А. Евглевский, О.М. Швец, Е.В. Карачевцева, Ж.Г. Петрова, О.Н. Михайлова, В.С. Попов, Е.П. Евглевская, // Материалы Международной Донской аграрной научно-практической конференции «Инновационные пути развития агропромышленного комплекса: задачи и перспективы» - Зерноград,2012.- С.- 99-103.

4. Карачевцева Е.В. Влияние янтарной кислоты на снижение токсичности фармакопейного левамизола / Е.В. Карачевцева, Ж.Г. Петрова, О.Н. Михайлова // Материалы Международной научно - практической конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» - Белгород, 2012.- С.57-59.

5. Карачевцева Е.В. Иммунотерапия при инфекционных болезнях: известное и новое / С.Н. Кретова, Ж.Г. Петрова, Е.В. Карачевцева, О.Н. Михайлова // Материалы Международной научно - практической конференции «Агропромышленный комплекс: контуры будущего», Курск-2012. - С. 138-140.

6. Карачевцева Е.В. Влияние янтарной кислоты на антгельминтную активность левамизола/ Е.В. Карачевцева // Материалы научно - практической конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения»- Белгород, 2012.- С.59-62.

Размещено на Allbest.ru