Актуальность. Неманифестирующие микобактериальные патологии сельскохозяйственной птицы в субклинической форме, содержащейся в индивидуальном пользовании граждан, могут представлять серьезную медико-биологическую и ветеринарно-санитарную проблему в области гуманной и ветеринарной медицины [5, 11]. Это обусловлено тем, что в силу специфики условий продуктивной эксплуатации и ветеринарного обслуживания, сельскохозяйственные животные и птица, находящиеся в пользовании граждан при подворном содержании, нередко являются носителями и резервентами возбудителей антропонозных микобактериальных возбудителей при невыраженном, неярком, часто атипичном и субклиническом течении инфекционного процесса. В результате жизнедеятельности, условно-здоровые инфицированные животные рассеивают возбудителя во внешней среде с нативными секретами и экскретами, а также распространяют его с продукцией животноводства, которая в рутинном сознании граждан ассоциируется с экологически безупречной и считается диетической, так как получена природными, экстенсивными методами, по традиционной для сельской местности технологии, без использования химических средств стимуляции продуктивности и мер современного контроля биобезопасности и потребительского качества сырья, животного происхождения [2, 6, 9].

Из многочисленных, потенциально возможных бактериозов, представляющих микробиальную опасность для здоровья человека, особенно детей, при потреблении такой диетической продукции птицеводства, как яйцо и мясо, является МАС-инфекция [3, 7, 10]. Микобактерии обуславливают длительное, в субклинической форме, резервирование носительство и выделение возбудителя в окружающую среду, без манифестирующих клинических и эпизоотических проявлений инфекционногенеза на чувствительном птицепоголовье. При этом микобактерии длительно, до 11 и более лет, сохраняют биологическую активность в объектах неживой природы и способны приживаться в организме птиц, млекопитающих животных и человека, вызывая микобактериозы [4, 8].

Цель работы - проведение эпизоотологического мониторинга микобактериальной инфекции с использованием комплексного метода исследований для определения санитарного состояния здоровья курей разного возраста и биобезопасности получаемой от них продукции, при их некоммерческом содержании небольшими группами по традиционной экстенсивной технологии в индивидуальных хозяйствах граждан, для удовлетворения личных потребностей в продукции птицеводства.

Материалы и методы исследования. Клинико-эпизоотологическое обследование на МАС-инфекцию птицепоголовья в индивидуальном пользовании населения Днепропетровской области проводили при подворном обходе и осмотре. Внутрикожную аллергическую пробу PPD-туберкулином для птиц производства Сумской биофабрики, проводили согласно наставления.

Предпосевную обработку биоматериала для индикации микобактериальной инфекции проводили по методу Аликаевой А.П. [ВИЭВ, 1940]. Детекцию культур микобактерий от исследуемых кур осуществляли на элективно-селективной среде Левенштейна-Йенсена [Харьков, Украина].

У выделенных культур микобактерий изучали скорость и характер роста на яичной питательной среде при температурах 25°С, 37°С и 45°С, каталазную (Middlebrook С., 1954), никотинамидазную, пиразинамидазную (Bonike R., 1962) активность, фотохромогенность (Kubica G., 1973), реакцию с теллуритом калия (Kielburn J. е. а., 1969) и реакцию гидролиза Твин-80 (Wayne G., 1962), резистентность к 5 % хлористому натрию, а также рост на МПБ.

Для гистологического исследования материал отбирали от вынужденно забитой птицы непосредственно после вскрытия из органов и тканей, которые имели макроскопические изменения. Кусочки органов фиксировали в 10 % нейтральном забуференном формалине. Обезвоживание и уплотнение образцов проводили по общепринятой в гистологии методике [1]. Срезы с парафиновых блоков толщиной 3-5 мкм изготавливали на санном микротоме с последующей покраской гематоксилин-эозином. Анализ срезов проводили с помощью световых микроскопов Olimpus CH-20 и Leica DM 1000 Гистологические срезы фотографировали цифровой камерой Leica DFC 295 и сохраняли изображения в формате рисунков на электронных носителях.

Результаты исследований. Эпизоотологический мониторинг микобактериальной инфекции курей, при подворном содержащихся в личном пользовании населения Днепропетровской области, провели в нескольких небольших населенных пунктах пригородного и дачного типов, находящихся в непосредственной близости от города, что дает возможность собственникам животноводческой продукции реализовывать незначительные ее излишки на стихийных рынках или иным способом без надлежащего ветеринарно-санитарного контроля качества продукции и ее биобезопасности.

На первоначальном этапе мониторингового процесса провели внешний осмотр птицепоголовья и клинико-эпизоотологическое обследование условий содержания. При этом установили, что целенаправленных исследований на выявление микобактериальных инфекций раньше не проводилось и куры считались условно-здоровыми, так как острых инфекционных заболеваний не регистрировалось.

Всего было осмотрено 412 курей различного возрастного диапазона. Наибольшее количество составляли куры 6-36 месяцев, хотя изредка встречались 3-5 летние птицы (4 %). При клиническом осмотре у 6 курей (1,5 %) обнаружили снижение аппетита, загрязнения оперения, сухость слизистых оболочек, синюшность гребешка и сморщивание сережек, вялость при движении. Остальные куры 406 (98,5%) были клинически здоровы, активно питались, имели удовлетворительный внешний вид. При аллергическом исследования 412 кур содержащихся в личном пользовании населения Днепропетровской области было выделено 67 (16,3 %) реагирующих

При диагностическом убое 16 реагирующих на туберкулин кур в печени, селезенке, легких и кишечника наблюдали образование узелков желто-серого цвета разного размера, располагавшиеся на поверхности и в глубине тканей. Чаще поражалась печень, она содержала множественные милиарные очага.

При бактериологическом исследовании 16 проб патологического материала выделено 5 культур микобактерий.

При микроскопии мазков из первично-выделенных культур окрашенных по методу Цель-Нильсена в поле зрения было видно короткие и длинные с закругленными краями красного цвета палочки с незначительной зернистостью, которые располагались в поле зрения отдельно или группами.

При культуральном исследовании - первичный рост колоний микобактерий на яичном питательной среде отмечали на 17-33 сутки после посева. При пересеве выделенных культур на яичное среду в первой генерации, две культуры хорошо выросли на 12 и 15, три культуры 16-19 сутки при температуре 37 оС в виде гладких, блестящих округлой формы, маслянистой консистенции колоний светло-серого цвета. Все пять изолированных культур микобактерий хорошо суспензувались в физиологическом растворе, росли в S-форме и при температуре 45°С, не образовывали пигмента в темноте и на свету, имели положительную реакцию с теллурита калия, никотинамидом и пиразинамидом. В пробирках с МПБ наблюдался придонный рост. На яичной среде с добавлением 5 % хлористого натрия не росли и имели отрицательную каталазную активность, реакцию с мочевиной и Твин-80.

При изучении аллергических свойств изолированных микобактерий, суспензию каждой культуры вводили подкожно 1 мг/см3 пяти морским свинкам. Через 30 суток проводили внутрикожную аллергическую пробу с использованием ППД-туберкулина для птиц. Животные реагировали на аллерген (покраснение, утолщение кожи, диаметр припухлости в среднем по группе составил 24 Ч 32 мм).

Биологические свойства изолированных культур микобактерий изучали при внутривенном заражении кроликов в дозе 1,0 мг/см3. У зараженных кроликов проявлялась септическая форма микобактериоза, их гибель наблюдалась на 16, 24, 26, 31 и 35 сутки.

При патолого-анатомическом вскрытии вынужденно убитой птицы установили наличие в паренхиме печени и селезенке участков воспаления и дистрофии. Кроме того, в печени, селезенке и легких, на поверхности и в глубине тканей находились небольшие узелки, серого цвета, размером с просяное зерно (множественные милиарные очажки).

Гистологическими исследованиями было выявлено характерное поражение участков печени - гранулематозное воспаление органов (рис.1). В центре микобактериального узелка расположен тканевый детрит с зоной некроза вокруг которого формируется активная лимфоидно-макрофагальная реакция (рис.2). В состав которой входили три типа клеток - лимфоциты, эпителиоидные и многоядерные гигантские клетки Пирогова-Лангхаанса. В центральной части гранулемы находились макрофаги и многоядерные гигантские клетки Пирогова-Лангхаанса. У активных макрофагов размер увеличивался и они принимали вид эпителиоидных клеток.

микобактериальная инфекция птица

Рис.1. Гистопрепарат печени. Гематоксилин-эозин.

Рис.2. Гистопрепарат селезенки. Гематоксилин-эозин.

Эти клетки имели большую розовую, мелкогранулированную цитоплазму, в которой располагались интактные микобактерии или их фрагменты.

Долевое строение печени нарушено, печеночные дольки без четких границ. Местами выявляли дискомплексацию гепатоцитов. Клетки паренхимы, со слабо выраженной зернистостью, были неплотно расположены. Некоторые клетки были умеренно набухшие и содержали базофильную непрозрачную цитоплазму. Отдельные ядра гепатоцитов имели признаки пикноза или рексиса. В печени наблюдались циркуляторные расстройства, проявляющиеся венозной гиперемией ацинусов.

Селезенка увеличена, на разрезе пульпа теряет упругость. Гистологическими исследованиями обнаружили гиперпластические процессы лимфоидной ткани, размножения клеток ретикуло-гистиоцитарной системы и формирование специфических гранулем.

На основании комплексного исследования изолированных культур, с учетом данных микроскопии, культурального, биохимического, аллергического, биологического, патолого-анатомического и гистологического исследований, они были отнесены к Мycobacterium avium complex.

Выводы

1. В результате эпизоотического мониторинга условно-здоровых кур, содержащихся в индивидуальном пользовании населения по традиционной сельской технологии, установили инфицирование микобактериями 1,2 % особей без наличия клинических признаков инфекционной патологии и развития у 16,3 % птиц изменения иммунореактивности организма в виде развития повышенной чувствительности замедленного типа к микобактериальным антигенам.

2. При патогистологическом исследовании биоматериала от реагирующей на PPD-туберкулин птицы установили развитие специфического пролиферативного, доброкачественно протекающего, воспаления микобактериальной этиологии в виде развития гранулем с деструктивно-казеозным некротическим центром, наличием гигантских многоядерных клеток Лангхаанса и лимфоцитарно-макрофагальной клеточно-опосредованной реакции макроорганизма в очаге интродукции возбудителя.

3. Теоретическое обобщение литературных источников и экспериментальные данные собственных исследований и наблюдений подтверждают правомерность официнального требования и эпизоотологическую необходимость перманентного мониторинга инфекционной ситуации по микобактериозам условно-здоровой птицы в индивидуальных хозяйствах населения.

Список литературы

1. Горальський Л.П. Основи гістологічної техніки і морфофункціональні методи досліджень у нормі та при патології. Навчальний посібник / Л.П. Горальський, В.Т. Хомич, О.І. Кононський. - Житомир: ”Полісся”, 2005. - 288 с.

2. Литвинов, В.И. Нетуберкулезные микобактерии [Текст] / В.И. Литвинов, Макаров М.В., Краснова М.А. // М.: МНПЦБТ. - 2008. - 256 с.

3. Макарова, М.В. Выделение и идентификация нетуберкулезных микобактерий у пациентов фтизиатрических учреждений: Автореф. дис. … д-ра биол. наук. - 2010.48 с.

4. Новожилова, И.А. Микобактериозы: прошлое, настоящее и будущее [Текст] / И.А. Новожилова // Проблемы туберкулеза: журнал. - 2004. - №4. - С.3-9.

5. Оттен, Т.Ф. Микобактериоз. [Текст] / Т.Ф. Оттен, А.В. Васильев // СПб.: Мед. пресса, 2005. - 224 с.

6. Bottger, E. C. Mycobacterium genavense sp. nov. [Text] / E. C. Bottger, B. Hirschel, M. B. Coyle // Int. J. Syst. Bacteriol. - 1993. - Vol.43. - P.841-843.

7. Cassidy, P. Nontuberculosous mycobacteral disease prevalence and risk factors: a changing epidemiology [Text] / P. Cassidy et al. // Clin. Infect. Dis. - 2009. - Vol.49, №12. - P.124-129.

8. Jarsembowski, J. Nontuberculosous mycobacteral infections [Text] / J. Jarsembowski, M. Young // Arch. Pathol. Lab. Med. - 2008. - Vol.132, №8. - P.1333-1341.

9. Kobashi, Y. A double-blend randomized study of aminoglycoside infusion with combined therapy for pulmonary [Text] / Y. Kobashi, T. Matsushima, M. Oka // Mycobacterium avium complex disease. Respire. Med. - 2007. - Vol.101. - P.130-138.

10. Kobashi, Y. Relationship between clinical efficacy of treatment of pulmonary Mycobacterium avium complex disease and drug-sensitivity testing of Mycobacterium avium complex isolates [Text] / Y. Kobashi, K, Yoshida, N. Miyashita et al. // J. Infect. Chemother. - 2006. Vol.12. - P. 195-202.

11. Moran, J. Long-term results of pulmonary resection for atypical mycobacteial disease [Text] / J. Moran [et al.] // Am. Thorac. Surg. - 1983. - Vol.35. - P.597-604.

Размещено на Allbest.ru