Размещено на http://www.allbest.ru/

Фармакостимуляция продуктивности животных пробиотическими препаратами

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук

Данилевская Наталья Владимировна

Москва 2007

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Московская государственная академия ветеринарой медицины и биотехнологии им.К.И. Скрябина" (ФГОУ ВПО МГАВМиБ)

Научный консультант: доктор биологических наук,

профессор Ипполитова Татьяна Владимировна.

Официальные оппоненты:

Абрамов В.Е., доктор ветеринарных наук (16.00.04), профессор, ФГУ "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГУ "ВГНКИ");

Михайлов Л.С., доктор ветеринарных наук (16.00.04), профессор, Военно-ветеринарный институт;

Горшков Григорий Иванович, Заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, (16.00.04), профессор, ФГОУ ВПО Белгородская государственная сельскохозяйственная академия;

Ведущая организация - ФГУ "Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии" (ФГУ "ВНИИВСГЭ").

Защита состоится " 14 " июня 2007 в ____ч. на заседании диссертационного совета Д 220.045.05. при ФГОУ ВПО "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им.К.И. Скрябина" (109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, д.23; тел.377 - 93-83)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО МГАВМиБ.

Автореферат разослан______________________2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Волчкова Л.А.

1. Общая характеристика работы*

Исследования проведены в 1981 - 2006 гг в ФГОУ ВПО МГАВМиБ, ГОУ ВПО МГУПБ, ГНУ ВИЭВ, ГУ РОНЦ РАМН, БФ "Компонент". Проведено 35 научно-производственных экспериментов (табл.1). Использованы клинические, гематологические, биохимические, иммунологические, микробиологические, морфологические, фармакоэкономические, статистические и другие методы исследования.

Таблица 1. Перечень экспериментов

Показатели жирности, белка, лактозы в молоке определяли с помощью прибора MILKO-SCAN 605 компании “Фос-электрик”. Гематологические показатели определяли в условиях сертифицированной ветеринарной лаборатории "Шанс" на автоматическом проточном фотометрическом анализаторе Техникон Н 1 по стандартному протоколу по 18 параметрам, биохимические показатели сыворотки крови - на автоматическом биохимическом анализаторе "Hitachi" фирмы Roche с использованием коммерческого набора Roche. Определение концентрации белка и белковых фракций проводили на электрофоретической системе Paragon (Becman, США) с использованием коммерческого набора Paragon. Содержание каротина, общего белка, резервную щелочность - общепринятыми методами (Лебедев П.Т., Усович А.Т., 1976). Патоморфологические и гистологические исследования внутренних органов проводили по стандартному протоколу. Для исследования печени готовили криостатные срезы, которые с целью выявления липидов окрашивали растворами судана 3 и судана черного В. Фагоцитарную активность у телят и КРС определяли с 0,1% раствором зимозана, у цыплят с 1% суспензией латекса, уровень иммуноглобулинов определяли в реакции иммунодиффузии по методу Манчини, количество Т - и В - лимфоцитов определяли методами розеткообразования, непрямой иммунофлуоресценции и иммунопероксидазного окрашивания (Воронин Е.С., Петров А.М. и др., 2002). Напряженность поствакцинального иммунитета птиц исследовали методом ИФА в референтной лаборатории МЭБ ФГУ "ВНИИЗЖ", в ФГУ Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория. Титры поствакцинальных антител к вирусу болезни Ньюкасла определяли в РТГА; титры сальмонеллезных и эшерихиозных антител в сыворотках молозива и крови коров и сыворотках крови телят в развернутой пробирочной РА. Количество микроорганизмов (КОЕ) определяли высевами на плотные питательные среды (И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев, 1962). Идентификацию бактерий осуществляли в соответствии с классификационной системой Берджи (1984). Для видовой идентификации энтеробактерий использовали системы мультимикротестов ММТ Е1 и ММТ Е2. Наличие антибиотиков, токсичных элементов, пестицидов, радионуклеидов, гормонов в продуктах животноводства определяли в сертификационном центре при ФГУ ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. Исследования Na-зависимого транспорта нутриентов проводили на конвенциональных и безмикробных поросятах 2 - 6-суточного возраста. Безмикробных поросят получали путем кесарева сечения и содержали по стандартной методике в гнотобиотических боксах. Активный Na-зависимый транспорт изучали методом измерения тока короткого замыкания (ТКЗ) с помощью непрерывного фиксатора потенциала (Метельский С.Т., 1984). Фармакоэкономические исследования проводили по результатам экспериментов в опытных и контрольных группах. Доклинические испытания БАД Веленол и Веленол-селен проведены в условиях сертифицированного вивария и лаборатории фармакологии и токсикологии ГУ РОНЦ РАМН. Биометрическую обработку результатов проводили с использованием программ Statistica for Windows, v.5.5A (StatSoft, Inc.).

2.2 Результаты исследований

2.2.1 Фармакологическое действие пробиотика Лактобифадол в

птицеводстве и условия, влияющие на эффективность его применения

Установлена зависимость фармакологического эффекта от длительности курса назначения и дозы пробиотика Лактобифадол при производстве мяса бройлеров. Лактобифадол содержит в 1 г 80 млн. живых клеток бифидобактерий и 1 млн. лактобактерий, которые характерны для микробиоценоза животных. Обладает свойствами синбиотика, штаммы устойчивы к широкому диапазону рН, желчи, имеют выраженную кислотообразующую, антагонистическую, ферментативную активность. В серии экспериментов в условиях ОАО "Птицефабрика Безенчукская" использование пробиотика бройлерам первые 10 суток (опытные группы 32008 голов, контрольные 51173 голов) в дозе 1 кг/т корма обеспечило раннее становление нормобиоза, увеличило сохранность на 1,2%, среднесуточный прирост массы на 4,1% в сравнении с контролем. Дробное введение препарата (суммарно 24 дня с отменой профилактической обработки энрофлоном) увеличило среднесуточный прирост массы на 5,87%, но снизило сохранность на 0,8% по сравнению с контролем (опытные группы 67612 голов, контрольные 67926 голов). Оптимальным было использование пробиотика весь период откорма без отмены антибиотика (Рис.1).

Рис.1. Различие в среднесуточном приросте цыплят на кормодень в зависимости от схемы применения Лактобифадола

Среднесуточный прирост массы увеличился на 7,5%, сохранность на 1,5% в сравнении с контролем (опытные группы 64290 голов, контрольные 64290 голов). Анализ экономической эффективности показал, что отдача на 1 рубль вложений в препарат при 24-дневном и непрерывном курсах составила 1,72 руб. и 2,52 руб., экономический эффект на 10 тыс. голов соответственно 9,2 тыс. руб. и 25,8 тыс. руб.

В условиях ООО "Агрофирма "Луч" показано влияние дозы на степень проявления фармакологических эффектов пробиотика. Его непрерывное введение в рацион цыплят в дозе 1,2 кг/т комбикорма (опытная группа 2) в большей степени увеличило число лакто - и бифидобактерий в ЖКТ на фоне снижения энтеробактерий, кокковой и грибковой флоры по сравнению с дозой 0,8 кг/т корма (табл.2).

Таблица 2. Состав кишечной микрофлоры у цыплят (n = 10)

Примечание: *р<0,1; **р<0,05; ***р<0,01

Результаты получены на фоне циркуляции в хозяйстве энтеропатогенных эшерихий с гемолитической активностью. Их высевали только из материала, полученного от цыплят контрольной группы. Следовательно, показан фармакологический эффект пробиотика по нормализации колонизационной резистентности с вытеснением условно-патогенной микрофлоры. Сохранность при применении Лактобифадола в дозах 0,8 кг/т и 1,2 кг/т корма увеличилась на 2,47% и 4,45%; среднесуточные приросты - на 1,6 г (4,8%) и 5,4 г (16,1%); выход тушек 1-ой категории на 11,6% и 14,6%; конверсия корма - на 10,35% и 17,25%. При ветсанэкспертизе тушек общая микробная обсемененность (количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов) в опытных группах была ниже по сравнению с контролем: (4,3 ± 0,26) х10³ и (9,2 ± 0,38) х10³, р<0,05. В образцах не обнаружены возбудители пищевых токсикозов и токсикоинфекций.

На 10 тыс. поголовья экономический эффект от пробиотика в дозе 0,8 кг/т составил 17,9 тыс. руб., в дозе 1,2 кг/т - 109,7 тыс. руб. (отдача на 1 рубль вложений в препарат соответственно 5,3 руб. и 18,5 руб.). Факторным анализом показано, что экономический эффект обеспечен на 57,4% увеличением привесов птицы, на 22,2% повышением конверсии кормов, на 13,1% повышением сохранности и на 7,3% улучшением качества тушек. Следовательно, при выращивании бройлеров оптимальной схемой является непрерывное использование Лактобифадол я в дозе 1,0-1,2 кг/т. Минимальная профилактическая доза - 0,8 кг/т комбикорма.

Установлено, что фармакостимуляция продуктивности птицы пробиотиком зависит от ее генетических характеристик. При непрерывном применении Лактобифадола с 1 суток (ФГУП "Племптица" РАСХН) перепела мясного направления продуктивности породы "Фараон" к 45 дню жизни имели живую массу на 8,87%, а выход товарного яйца с 45 по 75 сутки на 50,7% больше, чем в контроле. Аналогичные показатели у гибридной птицы яичного направления - соответственно на 6,3% и 9,38% (рис.2). После отмены пробиотика на 65 сутки его стимулирующий эффект на яйценоскость сохранялся 10 дней. Рентабельность применения препарата при работе с перепелами "Фараон" составила 67%, а с помесной птицей 15%.

а) перепела породы "Фараон"

б) гибридные перепела

Рис.2. Яйценоскость перепелов на фоне применения Лактобифадола (стрелка - отмена препарата)

Установлено, что важным является возраст начала использования пробиотика. Лактобифадол в дозе 1,5 кг/т комбикорма применяли с 1 суток и с 16 недель цыплятам прародителей исходных линий ПК1, ПК2, ПК3, ПК4 кросса "Птичное". Применение пробиотика с 1 суток на 80% снизило проявление энтероколита в первые дни жизни, исключило запоры, повысило аппетит и активность, увеличило до нормы к 28 суткам живую массу и однородность цыплят. Важно, что стимуляция пробиотиком роста цыплят не привела к избыточной массе в продуктивный период. Нормализовалось половое созревание, которое было более равномерным по линиям. Применение Лактобифадола с 1 суток повысило яйценоскость за 36 недель на 19,39%, за 40 недель - на 11,99%, с 16 недель - соответственно на 11,61% и 6,01% по сравнению с контролем без снижения массы яйца (рис.3).

Рис.3. Сроки полового созревания, сутки (А), яйценоскость (штук) за 36 (Б), масса яйца (г) в 26 недель (Г).

При индивидуальной оценке несушек по сумме показателей от числа птиц, которым Лактобифадол давали с 1 суток, было отобрано в гнезда 21,6+4,70%, из группы, получавшей препарат с 16 недель - 11,48+3,25%. Следовательно, применение пробиотика Лактобифадол обеспечивает лучшую реализацию генетического потенциала, эффективную селекцию. Оптимальная доза - 1,5 кг/т комбикорма при ежедневном введении с 1 суток. Фармакостимуляция продуктивности в начальный период яйцекладки подтверждена на двух видах птиц (перепела, куры), что может быть объяснено способностью нормофлоры обеспечивать деконъюгацию и рециркуляцию стероидных гормонов (включая половые), снижая их потери с фекалиями.

На 4-х птицеводческих предприятиях яичного и бройлерного направления показан иммуномодулирующий эффект пробиотика. При плановых вакцинациях против инфекционного энцефаломиелита, инфекционной анемии цыплят, инфекционного бронхита кур, микоплазмоза (микоплазма синовиа), инфекционного ларинготрахеита, реовирусной инфекции, пневмовируса птиц, синдрома снижения яйценоскости, болезни Ньюкасла, инфекционной бурсальной болезни определяли средние арифметические (САТ), средние геометрические титры (СГТ) поствакцинальных антител, коэффициент вариабельности (СV). У птиц, получавших Лактобифадол в дозе 1,0-1,5 кг/т комбикорма, установлено увеличение титров специфических антител, уменьшение коэффициента вариабельности, что указывает на большую однородность иммунного статуса, является необходимым условием благополучия по инфекционным болезням и сопровождается повышением сохранности (рис.4).

Рис.4 а. Распределение птицы по титрам антител после вакцинации против ССЯ, ОАО "Красная поляна+", n=10

Рис.4 б. Титры поствакцинальных антител к вирусу болезни Ньюкасло в РНГА, ОНО ХО ППЗ "Птичное", n=15

Рис.4. Поствакцинальный иммунитет птиц на фоне скармливания пробиотика

Показано, что доза пробиотика, обеспечивающая фармакостимуляцию продуктивности, может быть не достаточна для получения иммуномодулирующего эффекта. Так, при применении пробиотика Лактобифадол с L-лизином (ООО "Агрофирма "ЛУЧ") дозу постоянно вводимого пробиотика снизили до 0,8 кг/т, увеличив ее на 12-17, 25-30, 37-42 сутки до 1 кг/т при одновременном увеличении введения L-лизина на 10% от нормы (опытная группа 1). При этом сохранность составила 94,82%, среднесуточный прирост 41,3 г (в контроле 92,83% и 37,3 г). Получено на 16,37% больше мяса. Убойный выход в контрольной группе составил 67,09%, в опытной 68,9% при выходе тушек 1-ой категории соответственно 73,5% и 64,3%. Дробное увеличение ввода пробиотика и L-лизина соответственно до 1,2 кг/т корма и 15% к нормативу (опытная группа 2) не привело к дальнейшему росту продуктивности. Но при анализе напряженности поствакцинального иммунитета к ИББ установлено, что в контрольной группе на 17 сутки у 70% птицы он отсутствовал, CV составил 51,1 (табл.3). В опытной группе 1 на 17 сутки отмечен выраженный иммунный ответ, но на 30 сутки СГТ приблизился к уровню контроля, а в 43 дня стал равным ему. В опытной группе 2 напряженность иммунной защиты была высокой весь период откорма. Следовательно, иммуномодулирующий эффект проявляется при достаточно высоких дозах применения пробиотика (1-1,2 кг/т корма).

Табл. 3. Напряженность поствакцинального иммунитета к вирусу ИББ при разных схемах сочетания Лактобифадола и L-лизина (разведение 1/401).

Примечание: *р<0,1; **р<0,05; ***р<0,01

Показана целесообразность применения пробиотика при дегельминтизации (рис.5).

Рис.5. Сохранность и яйценоскости птицы при дегельминтизации на фоне пробиотика.

При лечении аскаридоза (ЗАО "Щелковская п/ф") куры породы "Родонит" получали пиперазина адипинат (0,4 г/гол) в течение 2 дней на фоне Лактобифадола (0,5 г/ гол.), далее пробиотик давали 8 дней. Применение пробиотика уменьшило негативные последствия гельминтоза и дегельминтизации, что согласуется с выявленным нами in vitro отрицательным влиянием ряда антигельминтных препаратов на кишечную микрофлору. В контрольной группе, где антигельминтик применяли без пробиотика, была на 10,3% выше выбраковка птицы, ниже ее яйценоскость.

Изучены комбинации пробиотика Лактобифадол и антибактериальных препаратов в условиях ООО "Агрофирма "Луч" (табл.4).

Табл. 4 Влияние различных схем применения пробиотика Лактобифадол и энрофлона

Первые 10 суток откорма наименьшая сохранность была при отмене профилактической обработки энрофлоном, причем при микробиологических исследованиях павшей и вынуждено убитой с симптомами энтероколита птицы выявили энтеропатогенные E. coli. При использовании энрофлона на фоне пробиотика сохранность составила 95,2% (на 5% выше, чем при схеме пробиотик вместо антибиотика). Среднесуточный прирост в опытных группах, где Лактобифадол применяли с 0 суток, был на 13,10% и 8,06% выше контроля.

В группе 1, где отсутствовало стимулирующее влияние нормофлоры на пищеварение в первую неделю, низкие стартовые темпы роста уменьшили продуктивность всего откорма и рентабельность производства. Оптимальным оказалось использование антибиотика на фоне пробиотика (табл.5). Сходный результат получен в эксперименте по откорму бройлеров кросса "Иза-15" (п/ф "Безенчукская").

Табл.5 Результаты откорма бройлеров при разных схемах профилактического применения Лактобифадола и энрофлона.

Следовательно, наиболее эффективен метод селективной деконтаминации: обра-

ботка антибиотиком на фоне Лактобифадола при посадке бройлеров с дальнейшим применением пробиотика в течение всего откорма. Использование этой схемы всему поголовью в течение нескольких циклов улучшает продуктивное здоровье, уменьшает контаминацию помещений бактериальными патогенами, что позволяет снизить применение антибиотиков по индивидуальной для каждого предприятия программе (в зависимости от эпизоотической ситуации, технологии производства).

Предлагаемый метод эффективен при сальмонеллезе голубей. При бактериологических исследованиях от декоративных голубей с клиническими признаками заболевания были выделены культуры Salmonella typhimurium в 14 голубятнях. Определение чувствительности к 30 антибактериальным препаратам показало высокий уровень антибиотикорезистентности (рис.6).

Рис.6. Степень чувствительности к антибиотикам изолятов S. typhimurium. **

Антибиотики: 1 - имипенем; 2 - байтрил; 3 - фурагин; 4 - левомицетин; 5 - цефотаксим (клафоран); 6 - ампициллин; 7 - офлоксацин; 8 - амоксиклав; 9 - гентамицин; 10 - норфлоксацин; 12 - норфлоксацин; 13 - тобрамицин клотримазол; 14 - цефазолин; 15 - флубактин; 16 - цефалексин; 17 - флубактин; 18 - тилозин; 19 - рифампицин; 20 - сумамед; 21 - карбенициллин; 22 - колистин; 23 - эритромицин; 24 - метронидазол; 25 - неомицина сульфат; 26 - белкаспира; 27 - стрептомицин; 28 - доксициклин, 29 - тетрациклин; 30 - линкомицин

Только 6 из 30 препаратов имели в сумме высокую и среднюю активность более 50 % (имипенем, байтрил, фурагин, левомицетин, тобрамицин, клафоран). В большинстве голубятен высоко активными были 2 - 4 препарата. В трех голубятнях, где бессистемно давали байтрил и сультеприм, высокой чувствительности не было ни к одному из 30 антибиотиков. Применение эффективных антибиотиков (по результатам определения антибиотикограммы), бактериофагов на фоне Лактобифадола в комплексе противоэпизоотических мероприятий с последующим длительным применением пробиотика (до 2 лет) позволило добиться оздоровления голубятен от персистенции возбудителя. Это имеет важное экологическое значение: домашние голуби - звено в распространении сальмонеллеза и антибиотикорезистентных штаммов S. typhimurium диким, домашним животным, человеку.

2.2.2 Фармакологическое действие пробиотика Лактобифадола в скотоводстве и условия, влияющие на эффективность его применения

В АОЗТ "Новый быт" при применении пробиотика телятам в 1-ый месяц жизни (доза 0,1 г/кг массы) снизило заболеваемость до 20%, летальность до 15% (в контроле соответственно 80% и 30%). У телят опытной группы с 5 суток в ЖКТ доминировала бифидо - и лактофлора, в контрольной группе до 20-дневного возраста - эшерихии, включая гемолитические и слабо ферментирующие лактозу. У здоровых телят на фоне пробиотика активность фагоцитоза в 30 дней составила (75,6 4,17) % при индексе фагоцитоза 17,03,05 (в контрольной группе соответственно (58,51,16) % и 12,72,5). Следовательно, на млекопитающих подтвержден фармакологический эффект Лактобифадола по вытеснению условно-патогенной микрофлоры с ранним формированием колонизационной резистентности, установленный ранее на птице. Отмечена статистически значимая стимуляция фагоцитоза (р<0,05).

Показана эффективность сочетанного применения пробиотика Лактобифадол и поливалентной гипериммунной сыворотки в хозяйстве Нижегородской области, неблагополучном по респираторной патологии телят (заболеваемость до 80%, летальность до 18% на фоне циркуляции вирусов ПГ-3, ИРТ, ВД-БС и бактериальной микрофлоры: стрептококков, диплококков, стафилококков, пневмококков, сальмонелл, пастерелл). Телятам опытных групп подкожно до выздоровления вводили гипериммунную сыворотку (2 мл/кг живой массы через 24-48 час.) с антигемагглютининами к вирусам ПГ-3, ИРТ и ВД-БС в титрах 1: 1280, 1: 256 и 1: 1024 соответственно и Лактобифадол в дозах 30, 40 и 50 г на голову в сутки (табл.6).

Табл.6. Эффект разных доз Лактобифадола при лечении телят с респираторной патологией.

*Р< 0,05; **Р< 0,01

Бактерицидная активность сыворотки крови у телят 2 и 3 опытных групп повысилась в результате лечения на 70,1% и 81,0% против 24,6% в контроле; лизоцимная активность - на 142,9% и 166,7% против 84,6% в контроле; в-лизинная активность - на 85,8% и 80,6% против 53,5% в контроле. Функциональная активность нейтрофилов в спонтанном НСТ-тесте на фоне применения 40 и 50 г Лактобифадола повысилась на 118,2% и 132,3% против 75,8% в контроле, в индуцированном - на 137,7% и 140,9% против 76,5% в контроле. Результаты исследований свидетельствуют о статистически значимом (р< 0,01) повышении уровня естественной резистентности по всем изучаемым показателям при использовании Лактобифадола в дозах 40 и 50 г.

Применение гипериммунной сыворотки в сочетании с Лактобифадолом в дозе 40 г сократило срок лечения до 15 дней, при 100% -ной сохранности без рецидивов. При использовании сыворотки без пробиотика сохранность была на 8,33% ниже, срок лечения составил в среднем 18 дней, у 16,6% животных отмечены рецидивы. Традиционная схема (сыворотка реконвалесцентов в дозе 2 мл/кг массы и гентамицин) была наименее эффективной (продолжительность болезни в среднем 20 дней, рецидивы, сохранность 91,66%). Таким образом, применение телятам с респираторной патологией сложной этиологической структуры гипериммунной сыворотки и пробиотика Лактобифадол способствует нормализации показателей естественной резистентности и обеспечивает высокую терапевтическую эффективность.

Впервые изучено влияние разных доз пробиотика на стельных коров и их приплод. В условиях СХПК "Верещаки" Брянской области применение в течение 40 дней до отела Лактобифадола коровам швицкой породы в дозах 10,20 и 30 г увеличило до нормы массу телят при рождении (на 5,86%, 7,14% и 14,29% соответственно). У телят опытных групп 1, 2 и 3, которые получали пробиотик до 6-месяцев в одинаковых дозах, среднесуточный прирост с 1-го по 6-ой месяц составил 449 г, 576 г и 688 г (на 2,04%, 30,9% и 56,4% выше контроля). Сохранность в опытных группах составила 100%, в контрольной 71,4%. При применении пробиотика установлено увеличение иммуноглобулинов в сыворотке молозива у коров, которое было существенно снижено в связи с тем, что территория загрязнена радионуклеидами, а также условиями кормления и содержания в период отелов (март-апрель). При использовании дозы 10 г/гол общее количество IgM, IgG и IgA не отличалось от контроля, а при использовании доз 20 и 30 г/гол было выше контроля на 10,86% и 36,65%. Только на фоне дозы 30 г/гол в сутки показатель достиг уровня нижней границы нормы. В 30-дневном возрасте у контрольных телят как сумма основных изотипов иммуноглобулинов, так и количество IgG было наибольшим, что объясняется высокой заболеваемостью в группе. Однако в 4 месяца у телят опытных групп установлено статистически значимое (р0,05) увеличение иммуноглобулинов в сравнении с контролем. Это касается как суммы изотипов M, G, A (на 33,4-37,25%) так и их количеств по отдельности (на 31-32% IgG, на 41,6-95,37% IgM и на 127,41-153,64% IgA). Доза 10 г в сутки оказалась для этих целей не эффективной. Дополнительный доход в группе, где стельные коровы получали Лактобифадол в дозе 10 г, составил 1076,22 руб. на голову. При увеличении дозы до 20 и 30 г он увеличился до 1934,92 и 2741,21, то есть на 79,78% и 154,7%. Рентабельность составила соответственно 269%, 419% и 505%. В условиях ЗАО "Симоново" показано, что увеличение дозы препарата стельным сухостойным коровам до 50 г/гол. в сутки не ведет к росту эффекта.

В молочном комплексе "Кузнецовский" Московской области изучено влияние Лактобифадола на продуктивное здоровье коров разных стадий лактации, их продуктивность, качество молока. Удои на фоне пробиотика и в течение месяца после его отмены были выше по сравнению с животными контрольной группы (рис.7). Через 15 дней после начала применения препарата (25 г на голову в сутки) у коров первой половины лактации среднесуточные удои увеличились на 4,5 л (на 16,4 %), у стельных коров второй половины лактации - на 3,4 л (21,5%). В контрольной группе удои у коров - аналогов снизились на 0,5 л (2,7%) и 1,4 л (4,1%).

Рис.7. Динамика удоя на фоне пробиотика Лактобифадол*

* левая стрелка - начало применения препарата, правая - отмена

При длительном применении пробиотика отмечено положительное влияние на некоторые гематологические и биохимические показатели: тенденция к повышению уровня эритроцитов и гемоглобина (на 6,5% и 7,1% по сравнению с контрольной группой), нормализация уровней мочевины, глюкозы, каротина в сыворотке крови (табл.7). Мы объясняем это высокой биохимической активностью входящих в пробиотик штаммов: бифидобактерии используют аммиак для синтеза полноценных по составу микробных белков, целлюлолитическая активность бифидо - и лактобактерий повышает биодоступность клетчатки, продукция органических кислот подавляет гниение. Улучшение конверсии корма было отмечено ранее у птиц. Вместе с тем, использование с середины опыта силоса низкого качества с повышенным уровнем нитритов привело к росту уровней ферментов - маркеров гибели гепатоцитов (АлАТ и АСТ превысили в обеих группах фоновые показатели и норму). Следовательно, применение пробиотика - не альтернатива качественному кормлению животных. В молоке коров опытной группы статистически значимых изменений содержания жира, белка, лактозы не выявлено. Дополнительная прибыль составила 959,64 руб. на голову, рентабельность затрат на пробиотик - 451,60%.

Табл.7. Гематологические и биохимические показатели сыворотки крови коров (n=14)

* - разница по сравнению с фоновым исследованием достоверна (p< 0,05)

При применении Лактобифадола на постоянной основе коровам-первотелокам ч. - п. породы средний удой в опытной группы повысился по сравнению с контролем на 3%, содержание жира в молоке на 2,5%, белка на 4,4% (табл.8). Рентабельность затрат на пробиотик составила в среднем 137,66%.

Табл.8. Показатели удоя и качества молока у коров-первотелок (опыт, n=27; контр. n=26).

В ООО "Ямской" при использовании Лактобифадола на фоне кормления по нормам ВИЖ коровам ч. - п. породы (n = 48) при пересчете на молоко базисного жира и белка в опытной группе получено 28,6 л в сутки при 24,1 л в контроле (плюс 18,6%). Число соматических клеток в молоке коров опытной группы снизилось на 32,8%. Получено дополнительно продукции на животное на 31,5 руб. /сут., рентабельность применения пробиотика составила 530%. Разный уровень рентабельности в значительной степени зависит от закупочных цен на молоко в регионах.

В СПК “ПЗ Раменское" испытаны дозы пробиотика 25 и 50 г на голову в сутки при адаптации к зимне-стойловому содержанию высокопродуктивных коров ч. - п. породы. Препарат использовали 10 дней, далее интервал 12 дней и повторно в течение 12 дней. По результатам первого цикла отмечено увеличение продуктивности при дозах 25 и 50 г пробиотика на 8,3% и 8,5% и снижение удоя в контрольной группе на 13,7% (плюс к контролю 27,7%, p<0,05). При повторном применении Лактобифадола рост удоя составил 11,7% и 15,17% при дальнейшем снижении показателя в контроле на 8,3%. Животные, получавшие пробиотик, были клинически здоровы, активны, имели хороший аппетит, эффективную жвачку. В контрольной группе у 15% коров наблюдали гипо - и атонию рубца. По результатам гематологических и биохимических исследований сыворотки крови, качеству молока статистически значимых различий у коров опытной и контрольной групп не было. Методами регрессионного анализа установлено приращение среднесуточных удоев на фоне Лактобифадола на 4,78 л без различий в эффекте доз 25 и 50 г.

Показана эффективность применения пробиотика животным основных пород, типичных для РФ. При сезонном снижении молочной продуктивности в зимнее - весенний период (коровы ч. - п. породы, Оренбургская обл.), на фоне Лактобифадола среднесуточные удои были стабильны и превышали контроль на 23,3%. У коров айширской породы (Татарстан) рост удоев на фоне Лактобифадола составил 29,1%, у коров симментальской породы (Оренбургская обл.) - 15,2%. В ТНВ "Рассвет" Оренбургской области все поголовье (550 голов, ч. - п. скот) с августа 2004 г. получает Лактобифадол. Среднегодовые удои до начала эксперимента составляли 3200 л (2003 год). В 2004 г. отмечен рост удоев на 20%, срока продуктивной эксплуатации коров на 1,5 года. Живая масса телят при рождении увеличилась с 29 кг до 31-32 кг, сохранность молодняка - на 11,6%. В 2005 г. среднегодовой удой на дойную корову составил 4550 л (на 42,2% выше 2003 г.). Подтвержден положительный эффект пробиотика при многолетнем применении в условиях фермерских хозяйств.

Установлено, что Лактобифадол в дозе 25 г в сутки стимулирует мясную продуктивность. При его применении бычкам симментальской породы в течение 30 дней в ЗАО им. Калинина Оренбургской обл. среднесуточный прирост живой массы составил 1050 г (плюс к контролю 23,5%). Результаты подтверждены в СПК "Матвеевский", где на фоне пробиотика в течение 28 дней (в расчете на 100 голов) дополнительно получено 1346,8 кг продукции стоимостью 40404 рублей. При закупочной цене 30 руб. за 1 кг в живой массе чистая прибыль составила 30354,8 руб., рентабельность 302,1%. В СПК "Новая жизнь" Самарской обл. среднесуточный прирост бычков ч. - п. породы на фоне пробиотика составил 1215,8 г. Результаты получены на фоне традиционного для указанных регионов типа кормления (в основном, зернофураж, сено). По почти полном отсутствии применения фармакологических препаратов и премиксов в течение многих лет такое производство фактически приблизилось к органическому. Наши результаты свидетельствуют о целесообразности использования пробиотика при интенсивном, традиционном, а в дальнейшем и органическом животноводстве, наиболее популярном сейчас в ЕЭС.

Показано, Лактобифадол (150-200 г/т) при внесении в зеленую массу растений повышает качество силоса. Оба штамма в составе пробиотика гомоферментативны, активно продуцируют молочную кислоту, повышая ее уровень 5-6,6% за счет уксусной и масляной кислот. Уровень протеина повышается на 10-13% при снижении содержания нитритов за счет антагонизма к гнилостной микрофлоре.

2.2.3 Фармакологическое действие пробиотика Лактобифадола в свиноводстве и условия, влияющие на эффективность его применения

В ЗАО "Тропарево" Лактобифадол ввели в рацион супоросных свиноматок опытных групп (породы ландрас, дюрок и йоркшир) за 2 и 3 недели до опороса и далее до отъема поросят (в 18 суток) в дозе 15 г на голову. Поросятам опытных групп с момента приучения к концентратам пробиотик давали в дозе 5 кг/т, после отъема на участке доращивания - в дозе 2 кг/т. Данная схема применения препарата не привела к крупноплодности и затруднению родового процесса. Молочность опытных свиноматок повысилась на 21 и 26% по сравнению с контролем. Среднесуточные приросты поросят за подсосный период составили 345,0 и 409,4 г (в контроле 282,2 г). Живая масса при переводе на откорм у них достигла 32,37 и 33,3 кг (в контроле - 27,98 кг, ниже на 18,11%), среднесуточные приросты за период доращивания (52 дня) составили 482,1 и 500,0 г (в контроле 394,4 г, ниже на 24,5%, р< 0,05). При использовании Лактобифадола супоросным свиноматкам за 3 недели до опороса и далее поросятам постоянно до убоя на мясо точка окупаемости затрат - 3 кг дополнительно живой массы на одну голову. В данном эксперименте уже на участке доращивания получен дополнительный доход (плюс 4,39-5,32 кг живой массы на голову в сравнении с контролем). Показан фармакостимулирующий эффект Лактобифадола, обеспечивающий повышение молочности свиноматок, прироста живой массы поросят специализированных мясных пород, что высоко рентабельно.

Результаты исследований Na-зависимого транспорта глюкозы, галактозы, метионина, триптофана, глицина и гидролиз-зависимой абсорбции лактозы в тонкой кишке конвенциональных и безмикробных поросят методом регистрации тока короткого замыкания (ТКЗ) показали, что у конвенциональных животных в низких концентрациях перечисленные субстраты всасываются более эффективно. Так, при добавлении 1 и 2 мМ глюкозы величины ответа ТКЗ у конвенциональных поросят на 78,7% и 77,3% выше, чем у безмикробных. У безмикробных поросят Кт для лактозы составляет 9,52, для смеси глюкозы и галактозы - 8,69 мМ, у конвенциональных животных - соответственно 1,96 и 1,66 мМ. Na-зависимая абсорбция лизина не отличалась и была низкой у животных обеих групп.

2.2.4 Фармакологическое действие пробиотика Лактобифадола в коневодстве и условия, влияющие на эффективность его применения

Установлено (КСК Измайлово), что Лактобифадол в дозе 12,5 г на голову при его применении в течение 10 дней нормализует аппетит, переваривание корма, газообразование у лошадей. Исчезает копрофагия, улучшается упитанность, работоспособность, экстерьер. Шерсть приобретает блеск и насыщенный окрас, нормализуется сезонная линька. При биохимических исследованиях отмечена нормализация уровеней альбумина и глюкозы (табл.9), остальные показатели при низкой дисперсии приближались к середине физиологической нормы.

Табл. 9. Биохимические показатели сыворотки крови на фоне Лактобифадола (n=20, М+m)

*р< 0,05

2.2.5 Применение пробиотика Лактобифадол при стрессе.

В АСХО "Богослово" при завозе кур (возраст 90-100 суток) для производства товарного яйца на фоне транспортного стресса наблюдали заболевания ЖКТ с гибелью 10-20% поголовья. При патологоанатомических и бактериологических исследованиях диагностировали колибактериоз. Применение пробиотика обеспечило нормализацию колонизационной резистентности: увеличило количество высеваемых бифидо - и лактобактерий при одновременном снижении потенциально патогенных микроорганизмов (эшерихий со слабой лактазной активностью, гемолитических эшерихий, лактозонегативных энтеробактерий, в т. ч. Proteus). Отмечено статистически значимое влияние Лактобифадола на сохранность и некоторые показатели гомеостаза кур (табл.10). На фоне пробиотика нормализовались СОЭ (Р0,001), уровень гемоглобина. В контрольной группе кросса Hisex содержание альбумина в сыворотке крови было очень низким. Обе дозы пробиотика увеличили его на 112-114%. У кур кросса Loman Brawn уровень альбумина был снижен и увеличился в меньшей степени (на 8-24,6%). Содержание глобулинов у кур кросса Hisex увеличилось на фоне дозы 1 г/кг/сутки на 102%, у кур кросса Loman Brawn на 72,73%. Уровень общего белка в сыворотке крови птиц обеих групп повысился в одинаковой степени (на 48-53%), содержание кальция - на 10-17% по сравнению с контролем (р0,01). Следовательно, эффект Лактобифадола более выражен при значительных изменениях в результате воздействия стрессовых факторов. Оптимальной у кур является доза Лактобифадола 1 г/кг живой массы в сутки.